一種從淫羊藿屬植物製備高含量(98％)淫羊藿甙的技術的製作方法

2023-10-11 19:28:24 3

專利名稱：一種從淫羊藿屬植物製備高含量(98％)淫羊藿甙的技術的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種從淫羊藿屬植物中製備含量大於98%的淫羊藿甙的方法。
背景技術：
淫羊藿屬小檗科植物心葉淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim·)、箭葉淫羊藿(Epimedium sagittatum Maxim.)、柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxim·)、或車月鮮淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)的乾燥莖葉。淫羊藿主要含有主要含黃酮類化合物、木脂素、生物鹼、揮髮油等，其中黃酮類主要包括淫羊藿甙(icariin)、淫羊藿次甙(icarisoside)等，；朝鮮淫羊藿含淫羊藿式、淫羊藿新式(epimedoside)A、B、C、D、E等；箭葉淫羊藿含淫羊藿甙、脫水淫羊藿甙元-3-0-α-鼠李糖甙，淫羊藿甙元-3-0-α-鼠李糖甙，槲皮素等。目前主要研究內容是分離純化淫羊藿甙的工藝，淫羊藿甙主要用於改善心腦血管系統功能、增強機體免疫能力、促進DNA合成及預防和治療性功能障礙等，淫羊藿甙還有抗衰老和抗腫瘤作用。 目前，淫羊藿甙提取方法主要有水提醇沉、醇提水沉、酶法提取、超聲波提取、微波助提等，純化方法有絮凝劑純化法、大孔樹脂聯合純化法、矽膠層析柱純化法、聚醯胺層析純化法等。但是現有工藝生產的產品存在以下幾個問題產品含量普遍偏低、產品生產成本較高、產品有毒有機溶劑殘留量較高、提純步驟冗長、生產周期長、生產工藝對環境汙染較嚴重。中國專利文獻公開的「一種製備高純度淫羊藿甙的方法」(申請號01120115)，其特徵在於它是採用高速逆流色譜(HSCCC)法從淫羊藿粗提物中製備高純度的淫羊藿甙，其溶劑體系由A、B、C三個組分組成，A組分可以為氯仿，二氯甲烷，四氯化碳，1，2- 二氯乙烷等氯代物；B組分可以為甲醇，乙醇，乙腈，丙酮等；C組分為水，體積比依次為2-6 1-5 1-4。「從淫羊藿中提取分離淫羊藿苷及總黃酮的方法」(申請號200810196890)，其特徵在於包括如下步驟a.將淫羊藿藥材加至逆流提取罐內，再將20-40%乙醇緩慢倒入提取罐中，乙醇用量為淫羊藿重量的10-30倍，提取2-4次，每次1-1. 5小時；每次按5L/kg藥材量添加新的溶劑；b.合併上述數次提取液，以離心機分離；收集上清液；c.以孔徑為O. 02-0. I μ m的微濾膜除沉過濾，跨膜壓力為O. 1-0. 3Mpa，料液溫度為30-60度，得透過液；d.將所得透過液通過截留分子量為1000-50000的超濾膜分離，跨膜壓力O. 5-lMpa，料液溫度30-50°C，得超濾液；e.將所得超濾液以截留分子量為200-500的納濾膜處理，跨膜壓力為l-2Mpa，料液溫度30-50°C，得截留液；f.將截留液乾燥，乾燥溫度60°C以下，乾燥物水份(5.0%，乾燥物即為淫羊藿有效成分富集物。

發明內容
本發明的目的是為從淫羊藿屬植物中製備高含量(98% )淫羊藿甙開發一種新工藝，以便解決目前市場上生產該產品的技術中所存在的問題，以便得到高回收率和高含量的淫羊藿甙產品。本發明的目的主要通過以下技術過程來實現具體步驟如下I)從淫羊藿中提取淫羊藿甙將淫羊藿葉子粉碎過10目，加其重量12-15倍量的含水有機溶劑(I )加熱回流提取三次，每次提取I. 5小時，過濾提取液，用含水有機溶劑(I )洗滌提取渣，合併提取液及洗滌液，減壓濃縮至一定的比重，就得到淫羊藿甙的粗提液；上述含水有機溶劑(I )中有機溶劑的含量為40-95v% ;上述有機溶劑包括甲醇、乙醇、甘油、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯；2)粗分離淫羊藿甙利用極性或者弱極性的大孔樹脂進行初分離。將非離子型的極性或者弱極性大孔網狀吸附樹脂置於乙醇中浸泡24小時，然後用乙醇、去離子水依次衝 洗樹脂；將經過上述過程活化過的樹脂，用重力沉降法裝柱；將過程I)中得到的粗提液經過濾後，清夜上樣，在採用含水有機溶劑(II )對大孔樹脂進行洗脫，分段收集，用HPLC法檢測洗脫過程，在270nm直到檢測不出淫羊藿甙；減壓濃縮收集的各部分洗脫液，就得到粗分離的淫羊藿甙產物；上述含水有機溶劑(II )中有機溶劑的含量為20-90v% ;上述含水有機溶劑(II )中的有機溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇；3)純化粗分離淫羊藿甙利用溶劑處理法對粗分離淫羊藿甙進行純化。將過程2)得到的粗分離的淫羊藿甙產物，用含水有機溶劑(III)加熱溶解，過濾，不溶物再用含水有機溶劑(III)加熱溶解一次，合併兩次過濾液，減壓濃縮至含有機溶劑至一定濃度，靜置，放涼，析晶，過濾結晶物，用有機溶劑(IV)洗滌結晶物；上述含水有機溶劑(III)中有機溶劑的含量為30-90v% ;上述含水有機溶劑(III)中有機溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇；上述有機溶劑(IV)包括甲醇、乙醇、丙酮；4)重結晶處理利用溶劑處理法對初結晶物進行重結晶處理。將過程3)得到的初結晶物，用含水有機溶劑(V )加熱回流溶解，過濾，清夜濃縮至一定的濃度，靜置，結晶，過濾結晶物，再用含水有機溶劑(VI)對結晶物加熱溶解，過濾，過濾液靜置，結晶，過濾結晶物，就得到含量大於98%的淫羊藿甙產物；上述含水有機溶劑(V )中有機溶劑含量為50-90v% ;上述含水有機溶劑(V )中有機溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇；上述含水有機溶劑(VI)中有機溶劑含量為70-95v% ;上述含水有機溶劑(VI)中有機溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇；所述步驟I)中淫羊藿屬植物包括心葉淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鮮淫羊藿和巫山淫
牛隹ο所述步驟2)中所用的大孔網狀吸附樹脂包括聚丙乙烯樹脂、聚苯乙烯樹脂、聚甲基丙烯酸酯樹脂、丙烯醯胺與苯乙烯共聚物樹脂。所述步驟3)、過程4)中有機溶劑的用量為15-30倍量；所述步驟3)、過程4)中靜置，析晶時間為24_48小時。該發明所述說的一種從淫羊藿屬植物製備高含量(98% )淫羊藿甙的技術優勢在於a)聯合使用大孔樹脂和有機溶劑純化法相結合，使產品的回收率和純度都有明顯的提聞。b)簡化生產工藝，縮短生產周期，使生產成本有所降低。
c)使用了無毒無害的有機溶劑，大大降低了產品中有毒有害溶劑的殘留量，提高了廣品的品質。


圖I為粗分離淫羊藿甙產物的HPLC分析圖譜圖2為初結晶淫羊藿甙產物的HPLC分析圖譜圖3為重結晶淫羊藿甙產物(98% )的HPLC分析圖譜具體實施實例實例I :I)提取將200g淫羊藿甙含量為O. 6%原料經過粉碎，放入3000ml三角瓶中，·加入2000ml、70%含水乙醇溶液，提取三次，一次I. 5H/次，合併三次提取液，減壓濃縮至d=1.08(比重)，約300ml，加去離子水稀釋至500ml，靜置、放涼、過濾，清夜490ml待用，經HPLC檢測，清夜中淫羊藿甙的濃度為2. 4mg/ml，有效成分回收率為98%。2)粗分離將I)中待用的490ml清夜上樣於經過處理的200g大孔樹脂HPD-100 (滄州寶恩)，HPLC檢測上樣過程，上樣結束後，用去離子水洗脫雜質，再用梯度洗脫淫羊藿甙，收集50%含水乙醇洗脫部分，減壓濃縮，得到粗分離產物3. Og,經HPLC檢測，含量為38%，有效成分回收率為94. 8% .3)初結晶將2)中得到的粗分離產物3. Ogj 65%含水丙加熱溶解，回流兩次，合併兩次清夜，濃縮至d = I. 05 (比重)，加丙酮調節濃縮液中丙酮含量為50 %，靜置、結晶、過濾，得到初結晶粉末I. 65g J^HPLC檢測含量為65. 4%，有效成分回收率為90%。4)重結晶將3)中得到的I. 65g初結晶用不含水丙酮熱回流溶解兩次，每次30min，合併兩次清夜，濃縮至1/3體積，冷卻結晶，結晶再用不含水丙酮重結晶一次，得到最終結晶產物O. 98g J^HPLC檢測含量為98. 23%，有效成分回收率為80%。實例2 I)提取將200g淫羊藿甙含量為O. 6%原料經過粉碎，放入3000ml三角瓶中，加入2000ml、70%含水乙醇溶液，提取三次，一次I. 5H/次，合併三次提取液，減壓濃縮至d=1.06(比重)，約350ml，加去離子水稀釋至600ml，靜置、放涼、過濾，清夜580ml待用，經HPLC檢測，清夜中淫羊藿甙的濃度為2. 07mg/ml，有效成分回收率為100%。2)粗分離將I)中待用的580ml清夜上樣於經過處理的200g大孔樹脂DM-130 (山東魯抗)，HPLC檢測上樣過程，上樣結束後，用去離子水洗脫雜質，再用梯度洗脫淫羊藿甙，收集40 %含水乙醇洗脫部分，減壓濃縮，得到粗分離產物2. 45g，經HPLC檢測，含量為47. 2 %，有效成分回收率為96% .3)初結晶將2)中得到的粗分離產物2. 45g，用80%含水丙加熱溶解，回流兩次，合併兩次清夜，濃縮至d= 1.08(比重)，加丙酮調節濃縮液中丙酮含量為70%，靜置、結晶、過濾，得到初結晶粉末I. 58g J^HPLC檢測含量為70. 2%，有效成分回收率為92%。4)重結晶將3)中得到的I. 58g初結晶用乙醇熱回流溶解兩次，每次30min，合併兩次清夜，濃縮至1/4體積，冷卻結晶，結晶再用無水乙醇重結晶一次，得到最終結晶產物1.05g，經HPLC檢測含量為98. 86%，有效成分回收率為87%。實例3
I)提取將200g淫羊藿甙含量為O. 6%原料經過粉碎，放入3000ml三角瓶中，加入2000ml、70%含水乙醇溶液，提取三次，一次I. 5H/次，合併三次提取液，減壓濃縮至d=1.08(比重)，約300ml，加去離子水稀釋至500ml，靜置、放涼、過濾，清夜500ml待用，經HPLC檢測，清夜中淫羊藿甙的濃度為2. 3mg/ml，有效成分回收率為95. 8%。2)粗分離將I)中待用的500ml清夜上樣於經過處理的200g大孔樹脂LX-Il (西安藍曉)，HPLC檢測上樣過程，上樣結束後，用去離子水洗脫雜質，再用梯度洗脫淫羊藿甙，收集50 %含水乙醇洗脫部分，減壓濃縮，得到粗分離產物3. 2g，經HPLC檢測，含量為35. 7 %，有效成分回收率為95% .3)初結晶將2)中得到的粗分離產物3. 2g，用80%含水丙加熱溶解，回流兩次，合併兩次清夜，濃縮至d = I. 08 (比重)，加丙酮調節濃縮液中丙酮含量為60 %，靜置、結晶、過濾，得到初結晶粉末I. 7g J^HPLC檢測含量為63. 9%，有效成分回收率為91%。4)重結晶將3)中得到的I. 7g初結晶用80%熱回流溶解兩次，每次30min，合併兩次清夜，濃縮至1/4體積，調節乙醇含量至50%，冷卻結晶，結晶再用不含水丙酮重結晶 一次，得到最終結晶產物I. 02g J^HPLC檢測含量為98. 67%，有效成分回收率為84%。
權利要求
1.一種從淫羊藿屬植物製備高含量(98% )淫羊藿甙的技術，其特徵在於 1)從淫羊藿中提取淫羊藿甙將淫羊藿葉子粉碎過10目，加其重量12-15倍量的含水有機溶劑(I )加熱回流提取三次，每次提取I. 5小時，過濾提取液，用含水有機溶劑(I )洗滌提取渣，合併提取液及洗滌液，減壓濃縮至一定的比重，就得到淫羊藿甙的粗提液；上述含水有機溶劑(I )中有機溶劑的含量為40-95v% ;上述有機溶劑包括甲醇、乙醇、甘油、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯； 2)粗分離淫羊藿甙利用極性或者弱極性的大孔樹脂進行初分離；將非離子型的極性或者弱極性大孔網狀吸附樹脂置於乙醇中浸泡24小時，然後用乙醇、去離子水依次衝洗樹脂；將經過上述過程活化過的樹脂，用重力沉降法裝柱；將過程I)中得到的粗提液經過濾後，清夜上樣，在採用含水有機溶劑(II )對大孔樹脂進行洗脫，分段收集，用HPLC法檢測洗脫過程，在270nm直到檢測不出淫羊藿甙；減壓濃縮收集的各部分洗脫液，就得到粗分離的淫羊藿甙產物；上述含水有機溶劑(II )中有機溶劑的含量為20-90v% ;上述含水有機溶劑(II )中的有機溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇； 3)純化粗分離淫羊藿甙利用溶劑處理法對粗分離淫羊藿甙進行純化；將過程2)得到的粗分離的淫羊藿甙產物，用含水有機溶劑(III)加熱溶解，過濾，不溶物再用含水有機溶劑(III)加熱溶解一次，合併兩次過濾液，減壓濃縮至含有機溶劑至一定濃度，靜置，放涼，析晶，過濾結晶物，用有機溶劑(IV)洗滌結晶物；上述含水有機溶劑(III)中有機溶劑的含量為30-90v% ;上述含水有機溶劑(III)中有機溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇；上述有機溶劑(IV)包括甲醇、乙醇、丙酮； 4)重結晶處理利用溶劑處理法對初結晶物進行重結晶處理；將過程3)得到的初結晶物，用含水有機溶劑(V )加熱回流溶解，過濾，清夜濃縮至一定的濃度，靜置，結晶，過濾結晶物，再用含水有機溶劑(VI)對結晶物加熱溶解，過濾，過濾液靜置，結晶，過濾結晶物，就得到含量大於98%的淫羊藿甙產物；上述含水有機溶劑(V)中有機溶劑含量為50-90v%;上述含水有機溶劑(V )中有機溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇中的一種或者更多；上述含水有機溶劑(VI)中有機溶劑含量為70-95v%;上述含水有機溶劑(VI)中有機溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇。
2.按權利要求I所述的一種從淫羊藿屬植物製備高含量(98%)淫羊藿甙的技術，其特徵在於所述步驟I)中淫羊藿屬植物包括心葉淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鮮淫羊藿和巫山淫羊藿。
3.按權利要求I所述的一種從淫羊藿屬植物製備高含量(98%)淫羊藿甙的技術，其特徵在於所述步驟2)中所用的大孔網狀吸附樹脂包括聚丙乙烯樹脂、聚苯乙烯樹脂、聚甲基丙烯酸酯樹脂、丙烯醯胺與苯乙烯共聚物樹脂。
4.按權利要求I所述的一種從淫羊藿屬植物製備高含量(98%)淫羊藿甙的技術，其特徵在於所述步驟3)、過程4)中有機溶劑的用量為15-30倍量；所述步驟3)、過程4)中靜置，析晶時間為24-48小時。
全文摘要
本發明涉及一種從淫羊藿屬植物中製備含量大於98％的淫羊藿甙的方法。它是將淫羊藿葉子粉碎過目，從淫羊藿中提取淫羊藿甙，利用極性或者弱極性的大孔樹脂進行初分離，利用溶劑處理法對粗分離淫羊藿甙進行純化，利用溶劑處理法對初結晶物進行重結晶處理；該發明的技術優勢在於a)聯合使用大孔樹脂和有機溶劑純化法相結合，使產品的回收率和純度都有明顯的提高。b)簡化生產工藝，縮短生產周期，使生產成本有所降低。c)使用了無毒無害的有機溶劑，大大降低了產品中有毒有害溶劑的殘留量，提高了產品的品質。
文檔編號C07H1/08GK102807595SQ20111015294
公開日2012年12月5日 申請日期2011年6月2日 優先權日2011年6月2日
發明者王平, 李雪松, 任曉峰, 李建, 盧義德, 苗志宏 申請人:漢中天然谷生物科技有限公司