螢光檢測系統和供其使用的染料組的製作方法

2023-10-10 03:25:14

專利名稱：：螢光檢測系統和供其使用的染料組的製作方法
技術領域：
：本教示案涉及用於檢測來自螢光染料的螢光的檢測系統，和用於檢測螢光染料的方法。
背景技術：
：為識別生物學和化學樣品組合物，例如螢光染料和能量傳遞螢光染料的各種標記物町添加到樣品中。許多螢光染料具有大的斯託克斯頻移(Stokesshift),也就是說，最大吸光率的波長與最大螢光發射的波長之間的大的差異。大的斯託克斯頻移可使檢測系統能在螢光染料的螢光發射的波長與用以激發螢光染料的激發源發射的波長之間進行區別。
發明內容根據各種實施例，本教示案提供包含兩個或兩個以上的激發源、至少一個檢測器和一組染料的檢測系統。激發源可適於發射多個不同的個別激發束波長範圍，其中各個激發源發射至少一種波長，所述波長在激發源之至少一個其他激發源的激發束波長範圍內不發射。各個激發源可包含各自的個別輻射源或兩個或兩個以上的激發源可包含相同輻射源。舉例而言，各個激發源可包含分離的發光二極體(LED)或雷射源，或兩個或兩個以上的激發源可包含共同的廣譜光源和適當的光學器件、濾光器、光柵等等。在一個示範性實施例中，可提供第一個激發源，其適於發射約460mn到約475nm的第一激發束波長範圍，且可提供第二激發源，其適於發射約480nm到約495nm的第二激發束波長範圍。第二激發束波長範圍可在與第一激發束波長範圍相比不同的時間或不同的方向上發射。在一些實施例中，提供一組激發源，其適於發射2、3、4個或4個以上不同的並且非重疊的激發束波長範圍。在一些實施例中，檢測系統可包含一組染料和序列檢測系統、電泳檢測系統、毛細管電泳系統、凝膠或平板電泳系統、聚合酶鏈反應(PCR)檢測系統、實時PCR檢測系統、其組合等等的一種或一種以上的系統。根據各種實施例，提供供按本文中描述的檢測系統使用的一組染料，其中所述組的至少2種染料具有不同的吸收波長範圍但相同或大體上重疊的發射波長範圍。在一些實施例中，本教示案提供一組染料，其中所述染料組的至少一種染料為能量傳遞染料。在一些實施例中，染料組的至少一種染料可包含供體染料部分、受體染料部分和視需要連接子部分。在一些實施例中，本教示案提供一組包含兩種或兩種以上的能量傳遞染料的染料，其中染料組的各種能量傳遞染料包括不同於所述組中的其他種能量傳遞染料的供體染料部分，並且染料組的各種能量傳遞染料包括具有與所述組的其他種能量傳遞染料的受體染料部分相同的類型或結構和/或具有與其相同的光譜性質和/或發射波長範圍的受體染料部分。在一些實施例中，本教示案提供一組能量傳遞染料，其中所述組的各種能量傳遞染料包括不同於所述組中的其他種染料的供體染料部分，並且所述組的各種能量傳遞染料包括具有與所述組的其他種染料的受體染料部分相同的類型或結構和/或具有與其相同的光譜性質和/或發射波長的受體染料部分。在一些實施例中，提供一組染料，其中染料的至少一種染料包含通過連接部分(在本文中也稱為連接子或連接子部分)彼此共價連接的供體染料部分和受體染料部分。在一些實施例中，通過供體染料部分發射的激發能可通過可依次發螢光的受體染料部分吸收。在一些實施例中，連接子部分可用以促進能量在至少一種能量傳遞染料的供體染料部分與受體染料部分之間的有效轉移。在一些實施例中，供體染料部分與受體染料部分之間的能量傳遞可稱為螢光共振能量傳遞，其為供體染料部分與受體染料部分的電子激發態之間的距離依賴性相互作用，其中激發是從供體染料部分轉移到受體染料部分，而不從供體染料部分發射光子。在一些實施例中，通過在相應能量傳遞染料中包括不同的供體染料部分，可提供一系列具有光譜可分辨激發吸收的能量傳遞螢光染料，並且通過在所述組的各個相應能量傳遞染料中包括相同類型的受體染料部分，能量傳遞染料可在共同的波長範圍內發射，同時在不同的、光譜可分辨波長範圍內吸收。同樣地，所述組可連同按本文中描述的檢測系統一起為有效的。在一些實施例中，本教示案的檢測系統和染料組可適用於(諸如)在核酸序列定序分析中檢測樣品中的多標靶物質。在一些實施例中，本教示案提供一組染料，其中染料組的至少一種染料為能量傳遞染料並且其中染料組的兩種或兩種以上的染料具有大體上重疊的發射波長。在一些實施例中，本教示案提供一組染料，其中染料組的至少一種染料為能量傳遞染料並且其中染料組的至少2個子集包含具有大體上重疊的發射波長的染料的兩種或兩種以上的染料。在一些實施例中，至少一種不為能量傳遞染料的螢光染料包括在一組染料中，所述染料組也包括至少一種能量傳遞染料。在一些實施例中，檢測系統可用以檢測從一個或一個以上的樣品保留區域，例如從一個或一個以上的容器發射的螢光，其中各個容器適於保留相應樣品或樣品的相應等分試樣或部分。在一些實施例中，各個樣品保留區域可包括安置於其中的樣品並且各個樣品可包括根據本教示案的一組染料。在一些實施例中，所述組的各種染料和/或所述組的各種相應能量傳遞染料的各個供體染料部分可在不同於所述組的其他種染料和/或其他供體染料部分的波長下吸收輻射，並且所述組的各種染料和/或所述組的各種相應能量傳遞染料的各個受體染料部分可在與所述組的至少一種其他染料和/或至少一個其他受體染料部分相同波長或與其大體上重疊的波長範圍下發射輻射。在一些實施例中，提供試劑盒，其包括根據本教示案的一組染料。所述組的至少2種染料可在與所述組的至少一種其他染料相同的波長下或大體上重疊的波長範圍內發射輻射。在一些實施例中，提供用於檢測樣品中的分析物的方法，其包括提供具有至少2種可檢測染料的樣品，其中各種可檢測染料在通過可激發染料的適當輻射源的激發後，在與所述組的另一種染料的波長相同的波長下或在大體上重疊的波長範圍內發射輻射。在一些實施例中，方法可包含檢測包括至少一種能量傳遞染料的染料。在一些實施例中，方法包含用兩種或兩種以上的不同激發束照射樣品，其中各個激發束包括落在所述組的至少一種相應染料的峰值吸收波長範圍內的波長。方法可包括檢測從染料由於其激發而發射的輻射。在一些實施例中，從染料發射的輻射可具有相同的發射波長或在大體上重疊的發射波長範圍內。在一些實施例中，樣品可用兩種或兩種以上的不同激發波長範圍來順序地照射。圖1為根據各種實施例的系統的透視圖，其用於檢測在多個空間分離的樣品容器中的不同分析物並且包括具有4種不同激發源和對應於各個樣品容器的一個檢測器的相應群組；圖2說明用於使用毛細管電泳的核酸定序並且包括根據各種實施例的檢測系統的示範性系統；圖3為顯示展示於圖4A-4D中的4種不同螢光能量轉移染料的正規化螢光發射光譜的圖；並且圖4A-4D說明4種不同能量傳遞染料的分子結構，其可個別地用於4個不同的染料組中，並且包括染料5-CFB-DR110-2(圖4A)、5-CFB-DR6G-2(圖4B)、6-CFB-DTMR-2(圖4C)和6-CFB-DROX-2(圖4D)的結構。應了解，上述一般描述和以下詳細描述都僅是示範性和解釋性的，並且欲提供本教示案的各種實施例的解釋。具體實施例方式根據各種實施例，則檢測系統包含兩個或兩個以上的激發源、至少一個檢測器和一組染料。兩個或兩個以上的激發源可適於發射多個不同的個別激發束波長範圍，其中各個激發源發射至少一種波長，所述波長在激發源之至少一個其他激發源的激發束波長範圍內不發射。各個激發源可包含各自的個別輻射源或兩個或兩個以上的激發源可一起通過相同輻射源來提供。舉例而言，各個激發源可包含分離的發光二極體(LED)或雷射源，或兩個或兩個以上的激發源可包含共同的廣譜光源，例如滷素燈或其他光源，和適當的光學器件、濾光器、光柵等等。層化OLED或LED陣列可提供兩個或兩個以上的激發源。在一個示範性實施例中，可提供第一個激發源，其適於發射約460nm到約475nm的第一激發束波長範圍，且可提供第二激發源，其適於發射約480nm到約495nm的第二激發束波長範圍。第二激發束波長範圍可在與第一激發束波長範圍相比不同的時間或不同的方向上發射。在一些實施例中，提供一組激發源，其適於發射2、3、4個或4個以上不同的並且非重疊的激發束波長範圍。在一些實施例中，檢測系統可包含一組染料和序列檢測系統、電泳檢測系統、毛細管電泳系統、凝膠或平板電泳系統、聚合酶鏈反應(PCR)檢測系統、實時PCR檢測系統、其組合等等的一種或一種以上的系統。按本文中所使用，關於非能量傳遞染料和能量傳遞染料的供體染料部分的術語"光譜可分辨"可指具有足夠相異的，也就是說，大體上非重疊的吸光率的不同染料，以便相應染料的吸收光譜可使用例如UV-可見光分光光度計的普通檢測手段來分辨。按本文中所使用，關於激發和發射的術語"峰值波長"可指在激發情況下提供能量的最大吸收，或在發射情況下，提供隨從染料發射的輻射的最大能量釋放的峰值波長或峰值波長範圍。關於激發和發射的術語"相同的波長"可指處於精確相同或大約相同的峰值波長或具有大體上重疊的峰值波長範圍。關於激發和發射的術語"不同波長"可指不精確相同或不處於大約相同的峰值波長或不具有大體上重疊的峰值波長範圍的波長。具有不同激發波長和發射波長的染料之實例為光譜可分辨染料。不同波長之實例可包括相對於用於組中的其他供體染料部分的每個供體染料部分來說，重疊不超過大約50%的對應供體染料部分的激發波長。如果完全存在任何重疊，那麼不同波長的重疊可不超過大約10%，不超過大約5%，或不超過大約1%。在一些實施例中，組中的非(能量傳遞)染料可吸收在不同於其他染料，例如不用於所述組內的能量傳遞染料的波長下的光。然而應了解，組的所有非(能量傳遞)染料和/或所有能量傳遞染料在不同波長範圍中吸收光並非必要的。按本文中所使用，術語"發射濾光器"可指適於提供來自組的一種或一種以上的染料的發射束的分離的任何裝置。發射濾光器可包含濾光器、帶通濾光器、光柵、分束器等等。關於圖示，圖1說明用於使用呈經熱循環的固定體積的PCR的核酸序列檢測的示範性系統。激發源IO、20、30和40可各自提供具有不同峰值波長和/或不同峰值波長範圍的輻射。舉例而言，激發源10可在約540nm的第一波長下發射描述為光束592的輻射，激發源20可在約560nm的第二波長下發射描述為光束594的輻射，激發源30可在約580nm的第三波長下發射描述為光束596的輻射，並且激發源40可在約600nm的第四波長下發射描述為光束598的輻射。從激發源IO、20、30和40發射的激發束可被引導到安置在相應小瓶中的液體樣品部分70。液體樣品部分70可各自包含欲檢測的核酸和一組染料，其中染料組包含可分別通過從激發源10、20、30和40發射的相應激發波長激發的染料。舉例而言，可選擇4種能量傳遞染料，其中每一種包含可通過4種不同激發源10、20、30和40的每一個激發源激發的不同的相應供體染料部分。4種能量傳遞染料的每種染料的受體染料部分可經選擇以對各種能量傳遞染料來說為相同的，(例如)以便各種染料在激發後，在相同波長下發射輻射。(例如)在約620nm的發射波長下，從樣品發射的發射束600可通過檢測器50來檢測。在一些實施例中，使用一組染料，其中所述組的各種染料發射例如620nm的相同峰值發射波長，其可為有益的。在這種情況下，可調整檢測器以用於在620nm處，或在通過所述組的兩種或兩種以上的染料共享的任何發射波長處的最佳檢測。在一些實施例中，展示於圖1中的系統可包括聚焦通過激發源所照射的激發束的一個或一個以上的透鏡(未圖示)，和/或引導激發束的一個或一個以上的鏡子(未圖示)。在按圖1中所示的包含多輻射源作為多激發源的系統中，激發波長和發射波長可經選擇以便其為全部不同的並且彼此光譜間隔或分離的，產生不需要濾光器以降低或消除重疊輻射的系統。在一些實施例中，說明於圖1中的激發源10、20、30和40可包含4個個別的LED。在一些實施例中，激發源可集成在一起，例如呈2層OLED形式，其包含分別具有不同OLED的2個層，其可提供2種不同的並且光譜間隔的相應激發波長。在一些實施例中，本文中描述的各種輻射源的任何輻射源可用作激發源10、20、30和40。在一些實施例中，說明於圖1中的系統可提供用於激發源10、20、30和40的每一個激發源的獨立控制，例如，通過CPU、另一個處理器或通過邏輯來控制。處理器可包含(例如)經編程以每次啟動一個激發源的計算機。處理器可包含在其中的儀器儀表控制電路。處理器可連接於檢測器以使經啟動激發源與通過檢測器來檢測的發射波長、發射波長範圍或發射光譜協調和/或關聯。經啟動的激發源可與用於系統中的染料關聯以檢測核酸序列。圖2說明根據各種實施例的用於使用毛細管電泳的核酸定序的示範性系統。展示於圖2中的激發源10、20、30和40可各自提供具有不同峰值激發波長和/或不同峰值激發波長範圍的激發束798。激發束798可通過聚集透鏡120瞄準並且通過透鏡110聚焦於毛細管60上。毛細管60包括欲檢測的核酸和經選擇以可通過由激發源10、20、30和40提供的波長激發的能量傳遞染料。舉例而言，可選擇4種能量傳遞染料，每一種具有可分別通過激發源IO、20、30和40的不同激發源激發的相應供體染料部分。受體染料部分可經選擇以對4種轉移染料的每一種染料來說為相同的，(例如)以便染料的每一種染料在相同波長下發射發射束。按所說明的，發射束800可通過聚集透鏡80來瞄準並且通過成象透鏡130成象於檢測器50上。在一些實施例中，系統可包含(例如)作為激發源10、20、30和40的分離LED或層化OLED。在一些實施例中，說明於圖2中的系統可提供用於激發源20、20、30和40的每一個激發源的獨立控制，例如，通過CPU或另一個處理器來控制。處理器可包含(例如)經編程以每次啟動一個激發源的計算機。處理器可包含在其中的儀器儀表控制電路。處理器可連接於檢測器以使經啟動激發源與通過檢測器檢測的發射波長、發射波長範圍或發射光譜協調和/或關聯。處理器可控制激發源10、20、30和40的交替或時序操作或循環。經啟動的激發源可與組的特定染料關聯並且用以測定核酸的序列。在一些實施例中，本教示案提供一組染料，其中所述組的至少2種染料具有不同的相應吸收波長和相同或大體上重疊的發射波長。按本文中所使用，術語"染料組"可指2、3、4種或4種以上的包含非(能量傳遞)和/或能量傳遞染料的染料的任何組合。在一些實施例中，本教示案提供一組染料，其中所述染料組的至少一種染料為能量傳遞染料。在一些實施例中，用於染料組的至少一種染料的發射的波長範圍將與用於所述組的至少一種其他其他染料的發射的波長範圍相同，或將大體上與其重疊。在一些實施例中，用於染料組的每一種染料的吸收的波長範圍將相對於用於所述組的其他染料的吸收的波長範圍來說，為光譜可分辨的。'連同本教示案一起使用的適合染料可為所屬領域中已知的各種染料的任何染料，其包括(但不限於)若丹明(rhodamine)，螢光素，對甲氨基酚，派若寧(pyronine)，碳派若寧，香豆素，包括(但不限於)酞菁、金屬H卜啉和鑭系元素複合物的B卜啉，花青，半花青，方形酸，部花青、氟硼熒(bodipy)，包括(但不限於)氧絡寧(oxonine)、resorufamine和試滷靈(resorufin)的吩噁嗪，吖啶，氨吖啶，卡巴嗪(carbazine)，啡噻嗪銨(phenothiazium)、枇喃洋(pyrylium)等等。連同本教示案一起使用的適合染料的實例包括描述於(例如)以下專利中的所述染料的任何染料Menchen等人，第5,188,934號美國專利；Benson等人，第6,020,481號的美國專利；Lee等人，第5,847,162號的美國專利；Benson等人，第6,008,379號的美國專利；Benson等人，第5,936,087號美國專利；Upadhya等人，第6，221，604號美國專利；Lee等人，第6,191,278號美國專利；Yan等人，第6，140，500號美國專利；Mao等人，第6,130,101號美國專利；Glazer等人，第5,853,992號美國專利；Bmsh等人，第5,986,086號美國專利;Hamilton等人，第6,140,494號美國專利;和Hermann等人，第5,750,409號美國專利，其各自關於螢光染料結構、螢光染料合成、結合於生物聚合物的螢光染料、螢光染料在能量傳遞染料中的應用和螢光染料光譜性質而以引用的方式全部併入。連同本教示案一起使用的適合染料的實例包括(但不限於)，5-羧基螢光素、6-羧基螢光素、若丹明綠(R110)、5-羧基若丹明、6-羧基若丹明、N,N'-二乙基-2'，7'-二甲基-5-羧基-若丹明(5-R6G)、N,N'-二乙基-2',7'-二甲基-6-羧基若丹明(6-R6G)、N,N,N'，N'-四甲基-5-羧基若丹明(5-TAMRA)、N，N,N',N'-四甲基-5-羧基若丹明(6-TAMRA)、5-羧基-X-若丹明(5-ROX)、6-羧基-X-若丹明(6-ROX)、5-羧基-2',4'，5',7'，-4,7-六氯螢光素、6-羧基-2'，4',5'，7',4，7-六氯-螢光素、5-羧基-2'，7'-二羧基-4'，5'-二氯螢光素、6-羧基-2',7'-二羧基-4'，5'-二氯螢光素、5-羧基-2'，4'，5',7'-四氯螢光素、1'，2'-苯並-4'-氟-7',4，7-三氯-5-羧基螢光素、1',2'-苯並-4'-氟-7',4,7-三氯-6-羧基-螢光素、1',2'，7',8'-二苯並-4,7-二氯-5-羧基螢光素，以及按下文表1中所展示的其他市售染料。tableseeoriginaldocumentpage13tableseeoriginaldocumentpage14tableseeoriginaldocumentpage15連同本教示案一起使用的適合染料也包括能量傳遞染料。按本文中所使用，"能量傳遞染料"包括任何染料，其包含經由連接子部分共價連接於受體染料的供體染料，以便供體染料能夠在第一波長或波長範圍吸收光並且以發射激發能量作為響應；和能夠吸收通過供體染料發射的激發能量並且以在第二波長或波長範圍發螢光作為響應的受體染料。連同本教示案一起使用的適合能量傳遞染料可包括包含上文所列的具有與上文定義一致的光譜性質的任何染料對的能量傳遞染料。適於連同本教示案一起使用的能量傳遞染料的實例包括(但不限於)描述於(例如)以下專利中的所述能量傳遞染料Mathies等人，第5,728,528號美國專利，Lee等人，第5,863,727號美國專利，Glazer等人，第5,853,992號美國專利，Waggoner等人，第6,008,373號美國專禾U，Nampalli等人，第20040126763Al號美國專利申請公開案，Kumar等人，第WO00/13026A1號的PCT公開案和第WO01/19841A1號PCT公開案，其各自關於能量傳遞染料結構、能量傳遞染料合成、能量傳遞染料連接子、替代性供體染料、替代性受體染料和能量傳遞染料光譜性質而以引用的方式將其所揭示之全部併入本文。能量傳遞染料通常可提供比非能量傳遞螢光染料更大的有效斯託克斯頻移，因為能量傳遞染料的斯託克斯頻移是由供體染料最大限度吸收光所處的波長與受體染料最大限度發射激發能量所處的波長之間的差異決定。所屬領域的技術人員應了解，通過了解各種可能的供體染料和受體染料的斯託克斯頻移，可能製備具有所要求的最大吸收波長、所要求的最大發射波長和所要求的斯託克斯頻移的能量傳遞染料。儘管螢光染料描述為用於檢測分析物的標記，但是應了解，代替所述染料或除所述染料之外，可使用Qdot⑧生物結合物。因此，應了解，在本文中描述螢光染料的使用時，可因此用Qdot⑧生物結合物取代。Qdot⑧生物結合物為可用以描述偶合於可用以直接將量子點結合於所關注的標靶的蛋白質、寡核苷酸、小分子等等的Qdot⑧納米晶體的術語。Qdot⑧生物結合物的實例可包括抗生蛋白鏈菌素、蛋白質A和結合物的生物素家族。關於Qdot⑧生物結合物的其他信息可見於M.P.Bruchez等人，Semiconductornanocrystalsasfluorescentbiologicallabels,Science1998，281，2013和第2005/0141843號美國專利申請公開案中，所述專利是以引用的方式全部併入本文。Qdot⑧生物結合物可從InvitrogenCorporation,1600FaradayAvenue,Carlsbad,California92008獲得。所屬領域的技術人員應了解，螢光染料和螢光能量轉移染料與包括多核苷酸的生物分子的共價連接(也就是說，結合)在所屬領域中是熟知的。舉例而言，染料或能量傳遞染料與生物分子的結合或一種染料或染料部分與另一種染料或染料部分的結合，可通過染料或能量傳遞染料的N-羥基琥珀醯亞胺酯(NHS酯)的形成，接著NHS酯與共價連接於生物分子的連接子或共價連接於另一種染料的連接子上的胺基的後續反應來達到。用於將染料和能量傳遞染料或其部分結合於連接子和生物分子的許多實例和方法在上文引用的參考文獻中給出。在一些實施例中，包括至少一種能量傳遞染料的多種染料可包括在染料組中。所述組的一種或一種以上的能量傳遞染料的每一種能量傳遞染料可包括供體染料部分、受體染料部分和連接子。供體染料部分可能夠在第一波長處或在第一波長範圍內吸收輻射，並且在第二、不同波長處或在第二波長範圍內發射激發能量，而受體染料部分可能夠吸收從供體染料部分發射的激發能量並且發螢光以響應激發。在一些實施例中，可提供一組包含兩種或兩種以上的能量傳遞染料的染料。所述組的各種能量傳遞染料可包括相對於所述組的其他染料來說，光譜可分辨的供體染料部分，和受體染料部分，其與所述組的其他受體染料部分相同或具有與所述組的其他受體染料部分的發射波長或發射波長範圍相同的，或大體上與其重疊的發射波長或發射波長範圍。應了解，通過在所述組的各種能量傳遞染料中包括相同受體染料部分或具有相同或大體上重疊的發射波長的受體染料部分，能量傳遞染料可在共同波長範圍發射但在光譜可分辨的波長範圍中吸收。按本文中所使用，當用以描述螢光染料的重疊發射和/或吸收波長時，術語"大體上重疊"意思是波長範圍重疊至少約50%。在一些實施例中，一組染料可包括一種或一種以上的能量傳遞染料和一種或一種以上的非能量傳遞染料。一種或一種以上的非能量傳遞染料可包含(例如)選自以下染料的一種或一種以上的染料5-羧基螢光素(5-FAM)、6-羧基螢光素(6-FAM)、若丹明綠(R110)、5-羧基若丹明、6-羧基若丹明、N，N'-二乙基-2',7'-二甲基-5-羧基若丹明(5-R6G)、N，N'-二乙基-2'，7'-二甲基-6-羧基若丹明(6-R6G)、N,N，N，N'-四甲基-5-羧基若丹明(5-TAMRA)、N，N,N',N'-四甲基-5-羧基若丹明(6-TAMRA)、5-羧基-X-若丹明(5-ROX)、6-羧基-X-若丹明(6-ROX)、5-羧基-2',4',5',7',-4,7-六氯-螢光素、6-羧基-2',4',5',7'，4，7-六氯螢光素、5-羧基-2',7'-二羧基-4',5'-二氯螢光素、6-羧基-2'，7'-二羧基_4',5'-二氯螢光素、5-羧基-2',4',5',7'-四氯螢光素、1',2'-苯並-4'-氟-7',4,7-三氯-5-羧基-螢光素、l'，2'-苯並-4'-氟-7',4,7-三氯-6-羧基螢光素，r，2',7',8'-二苯並-4,7-二氯-5-羧基螢光素，以及按上文表1中展示的其他市售染料。適合能量傳遞染料可包括(但不限於)展示於圖4A-4D中的所述能量傳遞染料以及包含一些組合的能量傳遞染料，所述組合包括選自以下者的一種或一種以上的供體染料部分5-羧基螢光素(5-FAM)、6-羧基螢光素(6-FAM)、若丹明綠(R110)、5-羧基若丹明、6-羧基若丹明和Cy3，與受體染料N,N'-二乙基-2',7'-二甲基-5-羧基若丹明(5國R6G)、N，N'-二乙基-2',7'-二甲基-6-羧基若丹明(6-R6G)、N,N,N',N'-四甲基-5-羧基若丹明(5-TAMRA)、N，N,N'，N'-四甲基-5-羧基若丹明(6-TAMRA)、5-羧基-X-若丹明(5-ROX)、6-羧基-X-若丹明(6-ROX)、Cy3.5、Cy5、Cy5.5和Cy7。應了解，基於所要求的光譜性質，通過從(例如)表1選擇供體染料部分和受體染料部分，以便染料組的供體染料部分的發射波長範圍與染料組的其他相應受體染料部分的發射波長範圍相同或大體上與其重疊，其他能量傳遞染料組合是可能的。在一些實施例中，一組染料可包括根據本教示案的染料的兩個或兩個以上的不同子集。所述染料組可一起使用以檢測樣品中的甚至更大數量的不同分析物。舉例而言，可提供2種染料的2個組，其中2種染料的各個組包含2種非能量傳遞染料、2種能量傳遞染料，或l種能量傳遞染料加l種非能量傳遞染料。在各組中，所述組的2種染料，無論其包含非能量傳遞染料、能量傳遞染料還是兩種均包含，其可具有相同或大體上重疊的發射波長範圍，並且各組的2種染料可具有光譜可分辨的吸收波長範圍。使用表1中說明的染料作為實例，可產生一組染料，其包含3種能量傳遞染料和1種非能量傳遞染料。在所述組中，3種能量傳遞染料的每一種可具有ROX部分作為受體染料部分，並且每一種能量傳遞染料可分別具有FAM部分、TET部分或TAMRA部分之一作為供體染料部分。所述配置可提供3種能量傳遞染料的一個組，其具有光譜可分辨的吸收波長和相同的發射波長。除3種能量傳遞染料外，所述組也可包括ROX作為非能量傳遞染料，在所述情況下，所述組的全部4種染料將具有光譜可分辨的吸收波長和相同的發射波長。在另一實例中，可產生一組染料，其包含在子集內具有相同發射波長的染料的子集。舉例而言，在一個子集中，Cy5部分可用作能量傳遞染料中的受體染料部分，其中FAM部分為供體染料部分，並且Cy5可用作非能量傳遞染料以提供2種染料的一個組，2種染料各自具有Cy5發射波長但各自具有相對於所述組的另一種染料的光譜可分辨的吸收波長。所述組也可包括子集，其中ROX部分用作分別包含TET部分或TAMRA部分作為供體染料部分的能量傳遞染料的受體染料部分，並且ROX可用作所述組的非能量傳遞染料。因此，可預見5種染料的一個組，其具有2組光譜可分辨的發射波長(例如ROX和Cy5)和5種光譜可分辨的吸收波長的一個組。應了解，除先前實例中的染料的每一種染料外或代替先前實例中的染料的每一種染料，可使用許多其它的染料和能量傳遞染料。此外，具有先前實例中描述的類型的能量傳遞染料可根據Lee等人，第5，800，996、5，863，727和5,945,526號美國專利的教示來製得，所述專利以引用的方式全部併入。在一些實施例中，多種能量傳遞染料可提供於一組能量傳遞染料中，其中多種能量傳遞染料的供體染料部分的每一個供體染料部分在當與所述組的其它染料相比時，在不同波長處或在不同波長範圍內吸收輻射。所述組的相應能量傳遞染料的受體染料部分可全部具有與所述組的其它受體染料部分相同的結構或具有大體上重疊的峰值發射波長範圍。在一些實施例中，所述組的多種能量傳遞染料的各個受體染料部分不同於至少一個其他受體染料部分，但多種能量傳遞染料的各個受體染料部分在相同峰值發射波長範圍內或在重疊用於所述組中的其它受體染料部分的至少一個部分的發射波長範圍的至少約50%的發射波長範圍內發射輻射。在一些實施例中，所述組的相應能量傳遞染料的受體染料部分可在相同發射波長範圍發射輻射，例如，各個受體染料部分可在第一發射波長範圍內發射輻射並且所有峰值發射波長範圍重疊檢測器的一個可檢測的波長範圍，(例如)以便各自發射落在同一20nm寬的帶或10nm寬的帶波長中的峰值波長。儘管例證20nm寬的帶和10nm寬的帶，但是可選擇其它寬度的波長帶。相應發射可發生以響應能量傳遞染料的相應供體染料部分的相應激發。根據本教示案的試劑盒或一組染料可適用於許多應用，並且提供(例如)為經標記的核苷酸或經標記的核酸序列；共價連接於DNA定序反應中的終止基因核苷酸的標記；共價連接於PCR引物的標記；共價連接於PCR探針的標記；其組合；等等。在一些實施例中，染料可提供為所述標記。在一些實施例中，試劑盒可包含所述標記一起在單一管、小瓶或另一容器中的混合物。如果用作連接於核苷酸的標記，那麼標記可(例如)與樣品中的互補核酸序列，例如與DNA分子反應和鍵合。舉例而言，在一些實施例中，本教示案提供視需要包含至少一種能量傳遞染料的一組染料，其中所述組的各種染料共價連接於多核苷酸探針並且多核苷酸探針共價連接於至少一種中止劑部分。各種染料的螢光可大體上通過中止劑部分來中止，而探針為完整的。在一些實施例中，探針可(例如)通過具有5'-核酸外切酶活性的聚合酶來分裂，因此引起中止劑部分從染料的剩餘染料結構的分離並且產生從先前所中止的染料的剩餘染料結構的增強螢光發射。在一些實施例中，中止劑部分可包含可具有低背景值螢光的非螢光中止劑染料的部分。可用於根據各種實施例的各種染料組的示範性中止劑染料、能量傳遞染料、供體染料、受體染料和其部分描述於(例如)Livak等人的第5,876,930號美國專利和Lee等人的第5,863,727號美國專利中，所述專利以引用的方式全部併入本文。可使用其它中止劑部分，例如雜交中止劑，諸如描述於以引用的方式全部併入本文的第6,750,024號美國專利中的所述中止劑。在一些實施例中，提供至少一種輻射源，其可提供至少2種激發源並且在至少2種不同的相應波長下，例如在至少2種不同的、間隔分離和非重疊波長範圍發射輻射。可使用1、2個或2個以上的激發源。至少2種不同的波長或波長範圍可分離地照射於樣品以先檢測第一分析物並且然後第二次檢測第二分析物。在一些實施例中，2種激發源可包含單一光源，例如包括具有不同的可見光顏色的波長的白色光源。如果使用單一光源，那麼一個或一個以上的濾光器、稜鏡、衍射光柵、其它光譜分離裝置或其組合可用以獨立地提供第一峰值波長範圍的輻射和不同的、第二峰值波長範圍的輻射。根據各種實施例，(例如)當2種欲檢測的分析物連接於2種相應染料，並且染料之一在當用處於第一峰值波長範圍的輻射照射時顯示相對增加，而另一種染料在當用處於第二峰值波長範圍的輻射照射時顯示相對增加，就可完成檢測。在所述系統中，單一檢測器可用以檢測來自各種染料的發射並且2種分析物可基於用以引起可檢測發射的激發源而彼此區別。可檢測單個樣品中的多個不同分析物，其取決於所述組的不同染料的數量，並且檢測不限於確定僅l種或2種分析物在樣品中的存在。在一些實施例中，檢測可使用光檢測系統、組件和/或技術來完成，例如使用激發和/或檢測系統和/或基於按核酸序列分析領域中所已知的PCR的序列檢測或定序的組件。在一些實施例中，提供系統，其包括多個各自能夠提供特定波長下的輻射束的激發源，和一組染料，其中所述組的至少一種染料可在通過多個激發源的第一個激發源提供的相同波長下吸收或被激發。在一些實施例中，多個激發源的第二個激發源提供第二特定波長和/或峰值波長範圍，以便第二種染料可通過第二激發源而不是從第一激發源來激發，並且不是從由於第一種染料的激發，通過第一種染料發射的輻射來激發。此外，另外的激發源的至少一個激發源可提供第三激發波長，(例如)同時提供在第一激發源或第二激發源的特定波長中的少量輻射或無輻射。在一些實施例中，能量傳遞染料在樣品中的存在可用以識別存在於樣品中的各種組分或分析物。所述組的能量傳遞染料可經設計或選擇以便各種能量傳遞染料產生(a)在第一波長下的離散吸收，和(b)在第二波長下的離散發射。在一些實施例中，所使用的各ft能量傳遞染料可包含能夠在第一波長下吸收光和在第二波長下發射激發能量的供體染料部分，和能夠在第二波長下吸收通過供體染料部分發射的激發能量和在第三波長下發射輻射的受體染料部分。各種能量傳遞染料可視需要也包含連接子部分，其將供體染料部分和受體染料部分連接在一起。在一些實施例中，多種能量傳遞染料的各個供體染料部分在不同於用於系統中的，例如與樣品混合的其它能量傳遞染料的波長下吸收最高輻射。相應能量傳遞染料的各個受體染料部分可在與樣品中的其它能量傳遞染料相同的波長下發射最高輻射。在一些實施例中，多種能量傳遞染料的各個相應供體染料部分可包括不同的染料部分，並且多種能量傳遞染料的各個相應受體染料部分可包括相同的染料部分或在與所述組的其它受體染料部分相同或大約相同的波長下發射最高輻射的相應染料部分。在一些實施例中，提供系統，其包括兩個或兩個以上的激發源、一個或一個以上的檢測器和染料的一個適當組。染料組可包含一種或一種以上的能量傳遞染料。在一些實施例中，系統可包括一個或一個以上的激發或輻射源，例如，一個或一個以上的雷射器，一個或一個以上固態雷射器，一個或一個以上雷射二極體，一個或一個以上的納米管場發射極光源，一個或一個以上發光二極體("LED")，一個或一個以上的有機發光二極體("OLED")，一個或一個以上的薄膜電熒發光裝置("TFELD")，一個或一個以上的量子點LED和/或一個或一個以上的磷光OLED("PHOLED")。呈各種配置的適合LED、OLED、量子點LED和固態雷射器在螢光測定術領域中為已知的。在一些實施例中，激發源可包括多個可發射具有不同的相應峰值波長和/或峰值波長範圍的最高輻射的激發源。在一些實施例中，系統可包括一個或一個以上的檢測器，例如，單波長檢測器、多波長檢測器、多路檢測器、光電二極體陣列、電荷耦合二極體陣列、照相機、CMOS檢測器和/或其任何組合。一個或一個以上的檢測器可被可操作地排列以接受在不同染料的相應激發後，從所述組的不同染料發射的輻射。在一些實施例中，提供試劑盒，其可包含封裝在一起的包括至少一種按本文中描述的能量傳遞染料的多種染料。試劑盒的各種能量傳遞染料可包括按本文中描述的供體染料部分，按本文中描述的受體染料部分和視需要按本文中描述的連接子部分。在一些實施例中，試劑盒的能量傳遞染料的供體染料部分的每一個供體染料部分可在當與試劑盒的至少一種其他染料的吸光率相比時，在不同峰值波長和/或在不同峰值波長範圍吸收最高輻射。在一些實施例中，試劑盒的能量傳遞染料的受體染料部分的每一個受體染料部分可在當與試劑盒的至少一種其他染料的發射相比時，在相同或大約相同的峰值波長或峰值波長範圍發射最高輻射。在一些實施例中，所述組的各種染料的發射波長範圍大體上與試劑盒中的至少一種其他染料的發射波長範圍重疊。試劑盒可封裝於盒子或另一容器中和/或可被熱密封、熱包裝、收縮包裝或另外包裹或囊封。試劑盒可包括用於保留多種染料或多個例如小瓶的染料容器的系統。舉例而言，試劑盒可包括小瓶架。試劑盒可包括兩種或兩種以上的染料，其包括至少一種能量傳遞染料，其各自含在相同或不同的相應分離容器中。試劑盒可包括3種或3種以上的染料，其各自含在相同或不同的相應分離容器中。試劑盒可含有4種或4種以上的染料，其各自含在相同或不同的相應分離容器中。在一些實施例中，試劑盒的染料的至少一種染料可為按本文中描述的能量傳遞染料。在一些實施例中，試劑盒的染料的至少兩種染料可為按本文中描述的能量傳遞染料。在一些實施例中，試劑盒的多種染料，包括至少一種能量傳遞染料，或試劑盒的所有染料可一起含在單一容器中，例如，含在單管或小瓶中。單管或小瓶可(例如)用標籤來標記。標籤可包含條型碼、二維條型碼或射頻識別標籤。在一些實施例中，標籤可包括在外部封裝中，例如，安置於盒子中或盒子上。在一些實施例中，試劑盒也可包括一個或一個以上的激發源，例如，上文所述的輻射源的一個或一個以上的輻射源，或激發源的陣列。在一些實施例中，試劑盒可包括一個或一個以上的檢測器，例如一個或一個以上的單色或單波長檢測器，一個或一個以上的多波長檢測器，一個或一個以上的多路檢測器，一個或一個以上的光電二極體，一個或一個以上的光電二極體陣列，一個或一個以上的電荷耦合二極體陣列，一個或一個以上的照相機，一個或一個以上的CMOS檢測器或其一個或一個以上的組合。一個或一個以上的檢測器可包括一個或一個以上的雪崩光電二極體。試劑盒可包括光學器件組件，例如、鏡子、聚焦透鏡、菲涅耳透鏡(Fresnellens)等等。試劑盒可用以改進適於與不同於本文中揭示的組的一組染料一起使用的現有系統。在一些實施例中，提供在採樣器中檢測分析物的方法並且所述方法包括提供含有至少2種可檢測染料的樣品；用第一激發束照射樣品；檢測通過樣品中的染料響應用第一激發束照射樣品所發射的第一發射束；用不同於第一激發束的第二激發束照射樣品；和檢測從樣品中的染料響應用第二激發束照射樣品所發射的第二發射束。至少2種可檢測的染料可包含至少2種相應螢光染料的一個組，(例如)其包括按本文中描述的至少一種能量傳遞染料。各種可檢測的染料可適於在當通過包括具有適用於激發相應染料的相應峰值波長的輻射的激發束照射時，發射相應可檢測的發射束。舉例而言，各種染料可在當用落在相應染料的最大吸收波長範圍內的相應峰值波長照射時，發射可檢測的輻射。在一些實施例中，所檢測的第一發射束和所檢測的第二發射束可具有相同波長或大體上相同的或大體上重疊的波長範圍。在一些實施例中，方法可包括用一個或一個以上的按本文中描述的激發源照射樣品，例如，用一個或一個以上的雷射器，一個或一個以上的固態雷射器，一個或一個以上的雷射二極體，一個或一個以上的納米管場發射極光源，或一個或一個以上的LED，一個或一個以上的OLED，一個或一個以上的TFELD，一個或一個以上的基於量子點的LED或一個或一個以上的PHOLED來照射樣品。在一些實施例中，方法可包括用一個或一個以上的檢測器來檢測所發射的輻射，例如，用一個或一個以上的單波長檢測器，一個或一個以上的多波長檢測器，一個或一個以上的多路檢測器，一個或一個以上的光電二極體陣列，一個或一個以上的電荷耦合二極體陣列，一個或一個以上的照相機，一個或一個以上的CMOS檢測器或其一個或一個以上的組合來檢測。實例本教示案現將進一步在以下預言性實例中解釋。以下實例決不意味著限制本教示案，並且所屬領域的技術人員應了解，除下文例證的所述實施例外，許多實施例為可能的。實例l-在一些實施例中，示範性染料組可包括一種或一種以上的能量傳遞染料，並且可(例如)包含具有展示於圖4A-4D中的結構的4種能量傳遞染料之一。用在5'末端處的氨基己基鍵聯將各種示範性能量傳遞染料連接於21鹼基長度引物序列，並且用激發束照射所得複合物。假定消光係數為180,000cm"M—1，基於其在260nm處的相應吸光率將寡核苷酸定量。在0.4uM在8M尿素、1XTris/硼酸鹽/EDTA(TBE)緩衝液中的引物濃度下，使用488nm激發源獲得光譜。說明於圖4A-4D中的4種能量傳遞染料的相應結構分別相應於產生圖3中從左到右展示的4個峰值的結構。圖3展示分別包括圖4A-4D中展示的4種能量傳遞染料的寡核苷酸之正規化螢光發射光譜。展示於圖3中的能量傳遞染料螢光值包括對5-CFB-DR110-2(圖4A)、5-CFB-DR6G-2(圖4B)、6-CFB-DTMR-2(圖4C)禾卩6-CFB-DROX國2(圖4D)來說，表示為分別從左到右所展示的峰值的值。關於所述能量傳遞染料的更多細節可見於Lee等人的第5,945,526號美國專利中，所述專利以引用的方式全部併入本文。按可從圖3中所見，全部4種能量傳遞染料具有光譜不同於其它能量傳遞染料的峰值螢光範圍的個別峰值螢光發射範圍。根據各種實施例，4種染料將不一起用於一組染料中。取而代之，展示於圖4A-4D中的能量傳遞染料的任何一種能量傳遞染料可與一種或一種以上的具有相同或具有大體上重疊的發射波長範圍的其它染料一起使用。實例2-以下實例比較可用作可在根據一些實施例的組中一起使用的3種相應能量傳遞染料的供體染料部分的供體染料的吸收和發射頻率。在0.4ptM在8M尿素、lXTris/硼酸鹽/EDTA(TBE)緩衝液中的引物濃度下，使用分別在500nm、560nm和590nm下發射的3種激發源從各種供體染料獲得發射光譜。3種供體染料的吸收和發射特徵呈現於表2中。按表2中所示，3種供體染料的吸收性質為彼此光譜可分辨的。包含所述3種供體染料的相應部分的一組能量傳遞染料提供具有光譜不同和可分辨吸收特徵的染料。根據一些實施例的一組染料可包含至少一種染料，其是從表2中所列的供體染料的任何一種染料的部分形成並且結合或連接於從第一種染料製得的受體染料部分。所述組也可包含第一種染料和/或至少一種也包括從第一種染料製得的受體染料部分的其它能量傳遞染料。表2tableseeoriginaldocumentpage24在一些實施例中，表2中列出的所說明的供體染料的至少2種供體染料可各自個別地形成部分並且(例如)通過相應連接子部分或通過相應氨基己基鍵聯連接於相應受體染料部分。用於至少2種所說明的染料的每一種染料的受體染料部分可與連接於至少2種所說明的供體染料的另一種供體染料的受體染料部分相同或不同。在一個示範性組中，FAM和若丹明紅-X供體染料部分的各者可經連接子部分連接於相應ROX受體染料部分。所述組也可包括單獨的ROX染料(不連接於供體染料部分)。所例證的染料組中的染料將具有光譜不同的相應峰值吸收波長範圍，和相同的峰值發射波長範圍，也就是說，以在大約610nm處為中心的峰值發射波長範圍。單色檢測器可連同所述組一起使用以在610nm處檢測發射。將FAM和若丹明紅-X染料連接於相應ROX受體染料部分可通過許多連接子部分的任何連接子部分來完成。連接子部分可包括(例如)氨基己基連接子或描述於全部屬於Lee等人的第5,800,996、5,863,727和5,945,526號美國專利中的連接子，所述專利以引用的方式全部併入本文。所屬領域的技術人員可從上述描述了解，本教示案可以各種形式實施。因此，雖然所述教示已經連同特定實施例和其實例一起描述，但是本教示案將不會因此受限制。可在不脫離本教示案時進行各種改變和修改。權利要求1.一種系統，其包含至少兩個激發源，每一個激發源適於提供與所述激發源中的至少一個其他激發源所提供的激發波長範圍不同的激發波長範圍；至少一個檢測器；和多種染料，其中所述多種染料中的每一種染料在與所述多種染料的其它染料相比，大體上非重疊的峰值吸收範圍吸收輻射，所述多種染料中的每一種染料在與所述多種染料中的至少一種其他染料的峰值發射波長範圍大體上重疊的峰值發射波長範圍內發射輻射，至少所述多種染料中的第一種染料具有與所述至少兩個激發源中的第一個激發源的所述激發波長範圍重疊的第一峰值吸收波長範圍，並且至少所述多種染料中的第二種染料具有與所述至少兩個激發源中的第二個激發源的所述激發波長範圍重疊的第二峰值吸收波長範圍。2.根據權利要求1所述的系統，其中所述多種染料包含至少一種能量傳遞染料，其包含供體染料部分，其可在與所述多種染料中的至少一種其他染料的激發波長不同的激發波長下激發；和受體染料部分，其在激發後，在與通過所述多種染料中的至少一種其他染料在激發後所發射的波長相同的波長下發射輻射。3.根據權利要求1所述的系統，其中所述多種染料包含至少兩種能量傳遞染料，其中每一種能量傳遞染料包含供體染料部分，其可在與其它至少兩種能量傳遞染料中至少一種能量傳遞染料的至少一個其他供體染料部分的激發波長不同的激發波長下激發；和受體染料部分，其在激發後，在與其它至少兩種能量傳遞染料中至少一種能量傳遞染料的至少一個其他受體染料部分在激發後的波長相同的波長下發射輻射。4根據權利要求3所述的系統，其中所述至少兩種能量傳遞染料中的至少一種能量傳遞染料的所述供體染料部分包含ROX部分和TAMRA部分中的至少一個部分。5根據權利要求1所述的系統，其中所述系統包含相鄰於所述至少一個檢測器的單一高通濾光器。6根據權利要求1所述的系統，其另外包含用於獨立啟動所述至少兩個激發源的控制器。7根據權利要求1所述的系統，其中所述至少兩個激發源包含發光二極體、固態雷射器、基於量子點的輻射發射二極體、納米管場發射極輻射源、有機LED和其組合中的一個或一個以上激發源。8根據權利要求1所述的系統，其中所述至少一個檢測器包含單波長檢測器、多波長檢測器、多路檢測器、光電二極體、光電二極體陣列、電荷耦合裝置、互補金屬氧化物半導體、光電倍增管、雪崩光電二極體和其組合中的一個或一個以上檢測器。9根據權利要求1所述的系統，其中所述第一峰值吸收波長範圍為20納米(nm)寬，所述第二峰值吸收波長範圍為20nm寬，並且所述第一峰值吸收波長範圍與所述第二峰值吸收波長範圍重疊不超過約10%。10根據權利要求1所述的系統，其中所述第一峰值吸收波長範圍為20納米(nm)寬，所述第二峰值吸收波長範圍為20nm寬，並且所述第一峰值吸收波長範圍與所述第二峰值吸收波長範圍重疊不超過約2%。11根據權利要求1所述的系統，其中所述多種染料中的至少一種染料的所述峰值發射波長範圍為20nm寬的第一範圍，所述多種染料中的至少一種其他染料的所述峰值發射波長範圍為20nm寬的第二範圍，並且所述第一範圍與所述第二範圍重疊至少約50%。12根據權利要求1所述的系統，其中所述多種染料中的至少一種染料的所述峰值發射波長範圍為20nm寬的第一範圍，所述多種染料中的至少一種其他染料的所述峰值發射波長範圍為20nm寬的第二範圍，並且所述第一範圍與所述第二範圍重疊至少約70%。13根據權利要求1所述的系統，其中所述多種染料中的至少一種染料為能量傳遞染料，並且所述能量傳遞染料包含連接於供體染料部分、受體染料部分和連接子部分中的至少一個部分的中止劑染料部分。14一種包含多種螢光染料的試劑盒，其中所述多種螢光染料中的每一種染料在與所述多種染料中的其它染料相比，大體上非重疊的峰值吸收波長範圍內吸收輻射，並且所述多種螢光染料中的每一種染料在與所述多種螢光染料中的至少一種其他染料的峰值發射波長範圍大體上重疊的峰值發射波長範圍內發射輻射。15根據權利要求14所述的試劑盒，其中所述多種螢光染料包含一種或一種以上能量傳遞染料，所述一種或一種以上能量傳遞染料中的每一種能量傳遞染料包含供體染料部分，其適於在第一峰值吸收波長範圍內吸收輻射並且發射激發能量；和受體染料部分，其適於吸收通過所述供體染料部分發射的激發能量並且在第一峰值發射波長範圍內發射輻射。16根據權利要求15所述的試劑盒，其中所述一種或一種以上能量傳遞染料中的至少一種能量傳遞染料另外包含連接子部分，其將所述相應供體染料部分連接於所述相應受體染料部分。17根據權利要求14所述的試劑盒，其另外包含單一容器，並且其中所述多種螢光染料安置於所述單一容器內部。18根據權利要求14所述的試劑盒，其中所述多種螢光染料中的每一種染料包含在與所述多種螢光染料中的至少一種其他染料分離的相應容器中。19根據權利要求14所述的試劑盒，其中所述多種染料包含兩種或兩種以上能量傳遞染料，所述兩種或兩種以上能量傳遞染料中的每一種能量傳遞染料包含相應供體染料部分，其具有與所述兩種或兩種以上能量傳遞染料中的至少一種其他能量傳遞染料的所述供體染料部分的峰值吸收波長範圍不同的峰值吸收波長範圍，並且所述兩種或兩種以上能量傳遞染料中的每一種能量傳遞染料包含具有受體染料部分，其與所述兩種或兩種以上能量傳遞染料中的至少一種其他能量傳遞染料的所述受體染料部分的所述峰值發射波長範圍重疊的相應峰值發射波長範圍的。20根據權利要求14所述的試劑盒，其中所述多種螢光染料中的每一種染料在20nm的相應峰值吸收波長範圍吸收輻射，並且每一個20nm的相應峰值吸收波長範圍其它相應峰值吸收波長範圍中的每一個範圍重疊達到在0%到約10%的範圍內的量。21根據權利要求14所述的試劑盒，其中所述多種螢光染料中的每一種染料在20rnn的相應峰值吸收波長範圍吸收輻射，並且每一個20nm的相應峰值吸收波長範圍與其它相應峰值吸收波長範圍中的每一個範圍重疊達到在0%到約2%的範圍內的量。22根據權利要求14所述的試劑盒，其中每一個相應峰值吸收波長範圍包含20nm的範圍並且不含與所述其它相應峰值吸收波長範圍中的任何範圍的任何重疊。23根據權利要求14所述的試劑盒，其中所述多種螢光染料中的每一種染料在激發後，在20nm的相應峰值發射波長範圍發射輻射，並且每一個20nm的相應峰值發射波長範圍與所述多種螢光染料中的至少一種其他染料的至少一個其他20nm的峰值發射波長範圍重疊至少約50%。24根據權利要求23所述的試劑盒，其中所述多種螢光染料中的每一種染料在激發後，在20nm的峰值發射波長範圍發射輻射，所述20nm的峰值發射波長範圍與所述多種螢光染料中的至少一種其他染料的所述20nm的峰值發射波長範圍重疊至少約70%。25根據權利要求23所述的試劑盒，其中所述多種螢光染料中的每一種染料在激發後，在20mn的峰值發射波長範圍發射輻射，所述20nm的峰值發射波長範圍與所述多種螢光染料中的至少一種其他染料的所述20nm的峰值發射波長範圍重疊至少約95%。26根據權利要求16所述的試劑盒，其中所述一種或一種以上能量傳遞染料中的至少一種能量傳遞染料另外包含連接於所述相應供體染料部分、所述相應受體染料部分和所述相應連接子部分中的至少一個部分的中止劑染料部分。27根據權利要求14所述的試劑盒，其中所述多種螢光染料中的至少一種螢光染料為非(能量傳遞)染料。28根據權利要求14所述的試劑盒，其中所述多種螢光染料中的每一種染料包含經標記核苷酸或經標記核酸序列。29根據權利要求28所述的試劑盒，其中所述多種螢光染料中的所述染料以混合物形式安置在一起。30—種方法，其包含提供包含至少兩種染料與含有核酸序列的樣品的混合物，其中所述多種染料中的每一種染料在與所述多種染料中的其它染料相比，大體上非重疊的峰值吸收波長範圍內吸收輻射，並且所述多種染料中的每一種染料在大體上與所述多種染料中的至少一種其他染料的峰值發射波長範圍重疊的峰值發射波長範圍內發射輻射；用第一激發波長範圍照射所述樣品；檢測在用所述第一激發波長範圍照射所述樣品後從所述至少兩種染料發射的輻射；用不同於所述第一激發波長範圍的第二激發波長範圍照射所述樣品；和檢測在用所述第二激發波長範圍照射所述樣品後從所述至少兩種染料發射的輻射。31.根據權利要求30所述的方法，其另外包含獨立啟動至少兩個激發源以在兩個不同的相應時間提供所述至少兩種不同的激發波長。32.根據權利要求31所述的方法，其另外包含將所述經檢測的所發射的輻射與所述獨立啟動的激發源關聯。33.根據權利要求31所述的方法，其中所述獨立啟動包含獨立啟動至少兩個發光二極體。34.根據權利要求30所述的方法，其另外包含-啟動輻射源；和將來自所述輻射源的發射束光譜分離以形成具有至少兩個不同的相應激發波長範圍的至少兩個激發源。35根據權利要求34所述的方法，其中所述光譜分離包含在兩個不同的相應時間，形成具有至少兩個不同的相應激發波長範圍的至少兩激發源。36根據權利要求34所述的方法，其中所述光譜分離包含在相同時間，形成具有至少兩個不同的相應激發波長範圍的至少兩個激發源。37根據權利要求34所述的方法，其中所述光譜分離包含過濾來自所述輻射源的發射束。38根據權利要求30所述的方法，其中所述多種染料包含至少一種能量傳遞染料，其中每一種能量傳遞染料包含相應供體染料部分和相應受體染料部分，所述供體染料部分在與所述至少兩種染料中的至少一種其他染料的峰值吸收波長範圍相比，不同的相應峰值吸收波長範圍吸收輻射，並且所述受體染料部分在與所述至少兩種染料中的至少一種其他染料的峰值發射波長範圍重疊的峰值發射波長範圍內發射輻射。39根據權利要求30所述的方法，其中所述含核酸序列的樣品包含與所述多種染料中的至少一種染料反應的至少一種核酸序列。40根據權利要求30所述的方法，其中所述含核酸序列的樣品包含與所述多種染料中的至少一種染料反應的至少一種DNA分子。全文摘要本發明提供一種系統，其可包含至少兩個激發源，其每一者適於提供與至少一個其他激發源所提供的激發波長不同的激發波長；至少一個檢測器；和多個光譜可分辨染料。也提供一組染料並且所述染料組可包含一種或一種以上的能量傳遞染料，並且每一種能量傳遞染料可包括兩個或兩個以上連接在一起的螢光共振能量傳遞染料部分。也提供一組能量傳遞染料，其中所述組的每一種能量傳遞染料包含與所述組的其他能量傳遞染料所提供的供體染料部分不同的供體染料部分，和與所述組的其他能量傳遞染料所提供的受體染料部分相同的受體染料部分。也提供使用所述系統的檢測方法。文檔編號G01N33/58GK101189520SQ200680015173公開日2008年5月28日申請日期2006年5月3日優先權日2005年5月3日發明者史蒂文·J·伯格,霍華德·格雷格·金,馬克·F·奧爾德姆申請人:亞佩瑞股份有限公司