依諾肝素鈉的脫色方法
2023-10-23 09:28:57 1
專利名稱：依諾肝素鈉的脫色方法
技術領域：
本發明涉及一種脫色方法，具體涉及一種依諾肝素鈉的脫色方法。
背景技術：
依諾肝素鈉是由來源於豬腸黏膜的肝素鈉經成鹽、酯化後得到肝素-苄索氯銨鹽的苄基酯衍生物，然後在鹼性條件下發生beta-消除反應裂解生成低分子量肝素鈉，再經脫色得到成品。其主要特徵為在糖鏈的非還原末端具有4-烯醇吡喃糖酸，在糖鏈的還原末端具有1，6-脫水結構，後者佔全部糖的15wt% 25wt%。依諾肝素鈉主要用於預防深靜脈血栓形成及肺栓塞；治療已形成的靜脈血栓；預防血液透析時體外循環中血栓的形成等。 肝素鈉原料藥經成鹽、酯化、降解後得到的產物，即為未經過脫色純化處理的依諾肝素鈉中間體。衡量依諾肝素鈉成品質量的一個重要的指標就是其溶液顏色，藥物溶液的顏色在一定程度上能反映藥物的純度。《歐洲藥典7.O》中對於依諾肝素鈉的質量標準規定其溶液顏色不得比最接近色調的6號比色液更深。中國專利文獻CN1850865A公開了一種依諾肝素鈉的純化生產方法，其中公開了對依諾肝素鈉粗品進行脫色的方法，該脫色方法是將大孔樹脂脫色與活性炭脫色結合起來，即先將依諾肝素鈉加水溶解後，經活性炭脫色，再上樹脂柱，凍幹後即可；或者先將依諾肝素鈉樣品先上樹脂柱，經收集目標組分、沉澱、過濾後，再經活性炭脫色，經沉澱凍幹後即可。該脫色方法得到的成品比色優於歐洲藥典4. 0規定的黃色5號色。該文獻公開的脫色方法存在以下不足(I)採用活性炭脫色容易產生無法過濾的微晶，使產品存在一定安全風險，且活性炭在吸附色素的同時也會吸附一定的有效成分，降低收率。(2)採用某些大孔樹脂脫色則可能會殘留苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯等雜質，也存在一定安全風險。
發明內容
本發明的目的在於解決上述問題，提供一種脫色效果好、安全性高的依諾肝素鈉的脫色方法。實現本發明目的的技術方案是一種依諾肝素鈉的脫色方法，具有以下步驟①將待脫色的依諾肝素鈉中間體溶解於硫酸銨溶液中得到依諾肝素鈉溶解液；疏水層析柱以硫酸銨溶液平衡後，將所述的依諾肝素鈉溶解液上樣至疏水層析柱，收集穿透液；②陰離子交換層析柱以純化水平衡後，將步驟①的穿透液用純化水稀釋後上樣至陰離子交換層析柱，上樣結束後先以純化水洗滌柱體，再以濃度為0. 02mol/L 0. 2mmol/L的氯化鈉溶液洗漆柱體直至鋇鹽溶液檢測無白色渾池，最後以濃度為0. 5mol/L 5mol/L的氯化鈉溶液洗脫，收集洗脫液；③將步驟②收集的洗脫液進行納濾脫鹽濃縮，直至濃縮液中依諾肝素鈉的濃度為5wt% 20wt% 將步驟③得到的濃縮液沉澱、乾燥即得依諾肝素鈉成品。上述步驟①中所述的依諾肝素鈉溶解液中硫酸銨的濃度為2mol/L 4mol/L ;所述用以平衡疏水層析柱的硫酸銨溶液的濃度為2mol/L 4mol/L。上述步驟①中所述的疏水層析柱中採用的疏水樹脂可以為GE healthcare公司生產的 Phenyl FF/HP 系列(如 Phenyl Sepharose FF、Phenyl Sepharose HP)、Octyl FF/HP 系列(如 Octyl Sepharose FF、Octyl Sepharose HP)或者 Butyl FF/HP 系列(如 ButylSepharose FF、Butyl Sepharose HP)。也可以為 TOSOH 公司生產的 Phenyl 650 系列(如Toyopearl Phenyl 650M)或者 Butyl 650 系列(如 Toyopearl Butyl 650M)。優選 GEhealthcare 公司生產的 Phenyl Sepharose FF0上述步驟②中所述的穿透液用純化水稀釋至依諾肝素鈉能吸附於疏水層析柱柱體。上述步驟②中所述的陰離子交換層析柱中採用的陰離子交換樹脂可以為GEhealthcare 公司生產的 Q FF/HP 系列(如 Q Sepharose FF、Q Sepharose HP)或者 TOSOH 公司生產的SuperQ-650系列等強陰離子交換樹脂。也可以為GE healthcare公司生產的DEAE FF/HP 系列(如 DEAE Sepharose FF,DEAE Sepharose HP)或者 TOSOH 公司生產的 DEAE-650系列等弱陰離子交換樹脂。優選GE healthcare公司生產的Q Sepharose FF。上述步驟③中所述的納濾採用的納濾膜的孔徑截留分子量< 1000道爾頓。本發明具有的積極效果(I)肝素鈉原料藥經成鹽、酯化、降解得到依諾肝素鈉中間體含有較多有色雜質，而本發明的方法根據在高濃度硫酸銨條件下有色雜質和依諾肝素鈉疏水性的差異，採用疏水層析色譜將有色雜質除去，脫色效果好。(2)本發明的方法採用陰離子交換層析法將收集的依諾肝素鈉溶液中的高濃度硫酸銨去除，同時該步驟還具有進一步除去依諾肝素鈉中色素的作用，進一步提高脫色效果。(3)本發明的方法採用納濾脫除依諾肝素鈉中的一部分氯化鈉，達到脫鹽和濃縮的作用。(4)本發明的脫色方法脫色效果好，所得到的依諾肝素鈉成品的顏色淺於BY6號比色液，符合《歐洲藥典7. O》的規定，而且通過《歐洲藥典7. O》與《中國藥典》標準比色液藉助色差計進行比較並轉換後，成品顏色淺於《中國藥典》的黃色2號色。(5)本發明得到的依諾肝素鈉成品雜質含量少，安全性高，可控性好。
具體實施例方式(實施例I)
本實施例的依諾肝素鈉的脫色方法具有以下步驟
①稱取依諾肝素鈉中間體75g和分析純硫酸銨297. 3g溶解於600mL純化水中，並用純化水定容至750mL，攪拌均勻後靜置30min，得到依諾肝素鈉溶解液，該溶解液中硫酸銨的濃度為3mol/L。將GE healthcare公司生產的苯基疏水層析柱(疏水樹脂為Phenyl SepharoseFF，柱體積為375ml)以I. 5L濃度為3mol/L的硫酸銨溶液平衡後，將上述依諾肝素鈉溶解液上樣至該層析柱，監測A232nm紫外吸收，至232nm紫外吸收降至基線平穩時停止收集，收集I. 6L穿透液。Phenyl Sepharose FF樹脂的各項技術參數見表I。表I樹脂PhenylSepharoseFF
配基_苯基_
Sm6%交聯瓊脂糖—
平均粒徑 9011 m_
配體密度 40 u mol/mL_
權利要求
1.一種依諾肝素鈉的脫色方法，其特徵在於具有以下步驟 ①將待脫色的依諾肝素鈉中間體溶解於硫酸銨溶液中得到依諾肝素鈉溶解液；疏水層析柱以硫酸銨溶液平衡後，將所述的依諾肝素鈉溶解液上樣至疏水層析柱，收集穿透液； ②陰離子交換層析柱以純化水平衡後，將步驟①的穿透液用純化水稀釋後上樣至陰離子交換層析柱，上樣結束後先以 純化水洗滌柱體，再以濃度為0. 02mol/L 0. 2mmol/L的氯化鈉溶液洗漆柱體直至鋇鹽溶液檢測無白色渾池，最後以濃度為0. 5mol/L 5mol/L的氯化鈉溶液洗脫，收集洗脫液； ③將步驟②收集的洗脫液進行納濾脫鹽濃縮，直至濃縮液中依諾肝素鈉的濃度為5wt% 20wt% ； ④將步驟③得到的濃縮液沉澱、乾燥即得依諾肝素鈉成品。
2.根據權利要求I所述的依諾肝素鈉的脫色方法，其特徵在於步驟①中所述的依諾肝素鈉溶解液中硫酸銨的濃度為2mol/L 4mol/L ;所述用以平衡疏水層析柱的硫酸銨溶液的濃度為2mol/L 4mol/L。
3.根據權利要求I或2所述的依諾肝素鈉的脫色方法，其特徵在於步驟①中所述的疏水層析柱採用的疏水樹脂為Phenyl FF/HP系列、Octyl FF/HP系列、Butyl FF/HP系列、Phenyl 650系列、Butyl 650系列中的一種。
4.根據權利要求3所述的依諾肝素鈉的脫色方法，其特徵在於步驟①中所述的疏水層析柱中的疏水樹脂為Phenyl FF/HP系列中的Phenyl Sepharose FF。
5.根據權利要求I所述的依諾肝素鈉的脫色方法，其特徵在於步驟②中所述的穿透液用純化水稀釋至依諾肝素鈉能吸附於疏水層析柱柱體。
6.根據權利要求I或5所述的依諾肝素鈉的脫色方法，其特徵在於步驟②中所述的陰離子交換層析柱中的陰離子交換樹脂為Q FF/HP系列、DEAE FF/HP系列、SuperQ-650系列、DEAE-650系列中的一種。
7.根據權利要求6所述的依諾肝素鈉的脫色方法，其特徵在於步驟②中所述的陰離子交換層析柱中的陰離子交換樹脂為Q FF/HP系列中的Q Sepharose FF。
8.根據權利要求I所述的依諾肝素鈉的脫色方法，其特徵在於步驟③中所述的納濾採用的納濾膜的孔徑截留分子量< 1000道爾頓。
全文摘要
本發明公開了一種依諾肝素鈉的脫色方法①將待脫色的依諾肝素鈉中間體溶解於硫酸銨溶液中得到依諾肝素鈉溶解液；疏水層析柱以硫酸銨溶液平衡後，將依諾肝素鈉溶解液上樣至疏水層析柱，收集穿透液；②陰離子交換層析柱以純化水平衡後，將穿透液用純化水稀釋後上樣至陰離子交換層析柱，上樣結束後依次以純化水和低濃度氯化鈉溶液洗滌柱體，再以高濃度氯化鈉溶液洗脫，收集洗脫液；③洗脫液進行納濾脫鹽濃縮，直至濃縮液中依諾肝素鈉的濃度為5wt%～20wt%；④濃縮液沉澱、乾燥即得依諾肝素鈉成品。本發明的脫色方法脫色效果好，所得成品的顏色淺於BY6號比色液，符合《歐洲藥典7.0》的規定，且此法安全性高，可控性好。
文檔編號C08B37/10GK102757516SQ20121027449
公開日2012年10月31日 申請日期2012年8月3日 優先權日2012年8月3日
發明者吳明, 惲冬傑 申請人:常州千紅生化製藥股份有限公司