亞麻酸醯基乙醇胺的聯合醫用和保健用藥物的製作方法
2023-10-23 09:36:52 1
亞麻酸醯基乙醇胺的聯合醫用和保健用藥物的製作方法
【專利摘要】本發明提供了天然芸苔素內酯類似物和亞麻酸醯基乙醇胺在製備用於預防或治療哺乳動物（尤其是雄性哺乳動物）疾病的藥物中的應用，或者在製備用於保健哺乳動物的保健品中的應用。另外，本發明還提供了相應的藥物或保健品組合物及其製備方法。
【專利說明】亞麻酸醯基乙醇胺的聯合醫用和保健用藥物
【技術領域】
[0001]本發明是中國專利第201310086548.8號的繼續申請，屬於用於哺乳動物(如，人)的醫藥【技術領域】，具體而言，本發明涉及天然芸苔素內酯類似物和亞麻酸醯基乙醇胺的聯用及其哺乳動物用藥物組合物，用於製備治療或預防哺乳動物疾病的藥物中。
[0002]
【背景技術】
[0003]芸苔素內酯被稱為世界第六大類植物激素，是用於植物的生長調節劑。其中，化學合成的芸苔素內酯，如中國專利申請CN1217337A、CN1217338A等所述的，雖然產品較為均一，但是種類少，主要是28-表聞芸苔素內酯。
[0004]從植物(如，花粉)或其他天然來源(如，蜂蠟)中提取的芸苔素內酯，其通常是含有多種芸苔素內酯結構類似物的混合物，容易產生產品質量不穩定的情況，即使對於用於植物的生長調節劑這樣對穩定性較為寬容的項目來說，也比較難獲得穩定的效果，更無法用於要求更高的項目(如用於哺乳動物身體)；如果進一步提純，則製備成本上升較大，不利於產業化實施，因而阻礙了人們進一步大量純化，並阻礙了人們去研究其中各芸苔素內酯類似物是否具有芸苔素內酯的活性，更無法想像出對哺乳動物的藥物應用。
[0005]本發明人通過長期而艱苦的努力，摸索出了從植物中提取(純化)芸苔素內酯類似物的穩定流程，精心研究了其中的各種提取溶劑，儘管其中需要一定的提純過程，但是只需要一次提取過程，最終可以收集到多種分離的高純度的天然芸苔素內酯類似物，因而攤薄了提純的成本，有利於產業化推廣實施；這些分離的天然芸苔素內酯類似物可以單獨使用，也可以配比混和使用，因而產品質量穩定而容易控制。令人意想不到的是，在獲得了大量分離的高純度的天然芸苔素內酯類似物的基礎上，本發明人偶然發現，這些天然芸苔素內酯類似物中的一些，能夠用於作為哺乳動`物用藥物或保健品，例如用於預防或治療雄性哺乳動物前列腺增生疾病，或用於改善雄性哺乳動物前列腺增生狀況。
[0006]更令人意想不到的是，本發明人從浩如煙海的現有化合物中，偶然發現，天然芸苔素內酯能夠與亞麻酸醯基乙醇胺協同起效，從而能夠更好地用於預防或治療雄性哺乳動物前列腺增生疾病，或用於改善雄性哺乳動物前列腺增生狀況。
[0007]
【發明內容】
[0008]本發明要解決的技術問題在於提供了新的藥物或保健品的應用，能用於哺乳動物(如，人)的治療、預防或改善。另外，本發明還提供了配比穩定的藥物組合物或保健品，以及製備它們的方法。
[0009]具體而言，在第一方面，本發明提供了天然芸苔素內酯類似物和亞麻酸醯基乙醇胺聯合在製備用於預防或治療哺乳動物疾病的藥物中的應用；另外，本發明也提供了天然芸苔素內酯類似物和亞麻酸醯基乙醇胺聯合在製備用於改善哺乳動物狀況的保健品中的應用。
[0010]在本文中，亞麻酸酸基乙醇胺(LinolenoylEthanolamide ;N_9, 12, 15-Octadecatrienoylethanolamine)具有如圖14所示結構，其CAS登記號為57086-93-8，是花生四烯醯基乙醇醯胺的類似物，具有抗菌、止喘、止吐、抗偏頭痛和鎮痛以及治療青光眼和緩解硬化症狀等作用(參見中國專利申請CN1097735A)。到目前為止，沒有報導認為亞麻酸醯基乙醇胺，尤其是低濃度的亞麻酸醯基乙醇胺，能與本發明的天然芸苔素內酯類似物協同起效，用於預防或治療雄性哺乳動物前列腺增生疾病，或用於改善雄性哺乳動物前列腺增生狀況。本發明的亞麻酸醯基乙醇胺可以是化學合成的，也可以是從植物中提取的。
[0011]由於亞麻酸醯基乙醇胺，尤其是低濃度的亞麻酸醯基乙醇胺，儘管單獨給藥幾乎沒有針對前列腺增生的作用，但是仍舊保留了增強天然芸苔素內酯類似物的功效的作用，所以優選在本發明的第一方面的的應用中，所述藥物中的亞麻酸醯基乙醇胺無法單獨預防或治療哺乳動物(尤其是雄性哺乳動物)疾病；或者，所述保健品中的亞麻酸醯基乙醇胺無法單獨改善哺乳動物(尤其是雄性哺乳動物)狀況。無法單獨起效可以是亞麻酸醯基乙醇胺的濃度或含量低至無法單獨起效。[0012]在本文中，藥物或保健品，指的是針對哺乳動物(尤其是人)施用的藥物或保健品，而不是針對植物施用的組合物。顯然，針對哺乳動物(尤其是人)施用的藥物或保健品的要求比針對植物施用的組合物的要求高得多，前者需要配比穩定，而後者可以較不穩定；前者需要無菌，而後者可以有些菌；前者雜質含量低，而後者可以含有較多雜質，所以，即使前者與後者的主要組分相同，但是兩者是不同的，或者前者只是後者範疇中不會按後者要求而選擇卻精選出的一部分。
[0013]另外，藥物和保健品的差異是本領域技術人員所熟悉的，主要是行政審批標準的差異，藥物的要求比保健品更高。
[0014]在本發明的第一方面的應用中，哺乳動物可以是人、家畜、寵物等，優選是人。優選其中，哺乳動物是雄性哺乳動物，如男人。
[0015]在本文中，「天然」指的是從所限定的物質是從天然來源(如花粉、蜂蠟等)中提取的。在本發明的【具體實施方式】中，所提供的芸苔素內酯類似物是從油菜花粉中。當然，由於已經解析了這些天然芸苔素內酯類似物，因此它們不限於從天然來源(如花粉、蜂蠟等)中提取，也可以是化學合成的。
[0016]在本發明的第一方面的應用中，天然芸苔素內酯類似物優選是分離的天然芸苔素內酯類似物。在本文中，「分離的」指的是天然芸苔素內酯類似物脫離了或者曾經脫離了天然存在的環境而以高於50%的純度存在或者存在過。儘管天然芸苔素內酯類似物可以重新混合入混合物中從而降低了它本身的純度，但是曾經的高純度，便於使得各批次產品穩定，這對於製備藥物或保健品等涉及人身安全的領域來說，是尤為重要而且比要的優點。因此，在本發明的第一方面的應用中，天然芸苔素內酯類似物優選是配比穩定的天然芸苔素內酯類似物。在本文中，「配比穩定」指的是不同批次產品中天然芸苔素內酯類似物的組成和含量是相同的。由於本發明第一方面的提取方法能夠將天然芸苔素內酯類似物分離，因此可以單獨使用或者重新配比使用，完全能夠做到配比穩定。
[0017]優選在本發明的第一方面的應用中，所述疾病是前列腺疾病，更優選是前列腺增生疾病。這一疾病尤其困擾中老年男性。相應地，也優選在本發明的第一方面的應用中，所述狀況是前列腺狀況，優選是前列腺增生狀況。
[0018]經本發明人深入研究，發現有許多天然芸苔素內酯類似物能夠用於哺乳動物用藥物或保健品，尤其在與亞麻酸醯基乙醇胺聯合給藥時，能夠增強效果，從而能夠實際藥用或保健使用。優選在本發明的第一方面的應用中，所述天然芸苔素內酯類似物是BR6、BRUBR2、BR3、BR4和/或BR5，或它們之任意幾種的混合物。在本文中，BRl的結構式如圖8所示，BR2的結構式如圖9所示，BR3的結構式如圖10所示，BR4的結構式如圖11所示，BR5的結構式如圖12所示，BR6的結構式如圖13所示。
[0019]BR3單獨用藥效果已經能夠達到極限，儘管聯用時未顯示出協同效應，但是預計與亞麻酸醯基乙醇胺聯用，能在不影響極限藥效的情況下可以降低它們的用量，所以BR3也是優選的。另外優選在本發明的第一方面的應用中，所述天然芸苔素內酯類似物是BR6、BR1、BR2、BR4和/或BR5，或它們之任意幾種的混合物。[0020]另外也優選在本發明的第一方面的應用中，所述藥物或保健品是本發明的第二方面的組合物。
[0021]在第二方面，本發明提供了用於預防或治療哺乳動物(尤其是雄性哺乳動物)疾病的藥物組合物，其包括天然芸苔素內酯類似物和亞麻酸醯基乙醇胺，以及藥物上可接受的載體；另外，本發明也提供了用於改善哺乳動物(尤其是雄性哺乳動物)狀況的保健品組合物，其包括天然芸苔素內酯類似物和亞麻酸醯基乙醇胺，以及保健品上可接受的載體。
[0022]在本文中，藥物上可接受的載體和保健品上可接受的載體分別具有醫藥和保健品領域技術人員所熟知的含義，分別指不影響(甚至能增強)活性成分發揮功效的、對人或其他哺乳動物安全無毒的藥物輔料或保健品輔料。藥物上可接受的載體和保健品上可接受的載體往往可以通用，包括賦形劑、增溶劑、填充劑、pH調節劑和/或矯味劑。它們比常規施用於植物的輔料的雜質含量低得多，均一性更好。
[0023]在本發明的第二方面的組合物中，天然芸苔素內酯類似物優選是分離的天然芸苔素內酯類似物。另外，在本發明的第二方面的組合物中，天然芸苔素內酯類似物優選是配比穩定的天然芸苔素內酯類似物。
[0024]優選在本發明的第二方面的組合物中，所述疾病是前列腺疾病，更優選是前列腺增生疾病。相應地，也優選在本發明的第二方面的組合物中，所述狀況是前列腺狀況，優選是前列腺增生狀況。
[0025]優選在本發明的第二方面的組合物中，所述天然芸苔素內酯類似物和亞麻酸醯基乙醇胺的重量比為0.2~20:0.1~10，更優選為0.6~6:0.3~3，更加優選為1~4:0.5~2，如1.5~2.5:0.8~1.3，最優選為2:1。
[0026]本發明第二方面的組合物可以是各種製劑(劑型)，優選為固體製劑和液體製劑。本發明的製劑可以為單位劑量形式，如片劑、丸劑、膠囊(包括持續釋放或延遲釋釋放形式)、粉劑、混懸劑、顆粒劑、酊劑、糖漿劑、乳液劑、懸浮液、針劑、等劑型以及各種緩釋劑型，從而適合各種給藥方式，例如口服、非腸道注射、黏膜、肌肉、靜脈內、皮下、眼內、皮內或經過皮膚等的給藥形式。優選本發明的第二方面的組合物是口服製劑，更優選是口服液體製劑，如水溶液或含醇的水溶液。
[0027]根據本發明人的深入的研究，優選在本發明的第二方面的組合物中，所述天然芸苔素內酯類似物是BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5，或它們之任意幾種的混合物。[0028]另外也優選本發明的第二方面的組合物是通過本發明的第三方面的方法製備的。
[0029]在第三方面，本發明提供了製備包含天然芸苔素內酯類似物和亞麻酸醯基乙醇胺的哺乳動物用藥物或保健品的方法，其包括，
(1)用8(T100%(V/V)乙醇水溶液提取破碎的油菜花粉，固液分離後保留濾液(任選其中濾液進一步濃縮)，獲得醇溶性提取液；
(2)將醇溶性提取液與(T60%(V/V)乙醇水溶液混合，然後加入乙酸乙酯萃取，保留乙酸乙酯層並加入酯酶進行不完全反應，然後乾燥，獲得酯溶性提取物；
(3)酯溶性提取物上樣於矽膠色譜柱，用甲醇和乙酸乙酯的混和液洗脫，收集含有天然芸苔素內酯類似物的洗脫液，乾燥並溶解於甲醇中，獲得矽膠柱純化液；
(4)和將矽膠柱純化液上樣於C18反相色譜柱，用乙腈和水的混和液洗脫，分別收集含有BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5的洗脫液；和
(5)將洗脫液乾燥後，與亞麻酸醯基乙醇胺混合，以及與藥物上可接受的載體或保健品上可接受的載體混合。
[0030]BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5等天然芸苔素內酯類似物可以通過本發明的【具體實施方式】所述的提取方法依次洗脫，其鑑定圖譜分別如圖2~7所示。
[0031]在本發明第三方面的方法中，在步驟(1)中，可以使用100% (V/V)乙醇水溶液(SP，純乙醇)，但優選乙醇水溶液的濃度為85~98%(V/V)，優選為90~97%(V/V)，更優選為93~96%(V/V)，最優選為 95% (V/V)0
[0032]在本發明第三方面的方法中，在步驟(1)中，破碎油菜花粉的方式一般是用物理破碎方式，包括超聲破碎、碾磨破碎等。
[0033]在本發明第三方面的方法中，在步驟(1)中，油菜花粉和乙醇水溶液的比例可以優化，比例過低，將使用過量乙醇，需要更高成本的濃縮；比例過高，則提取不充分。經本發明人研究，優選在步驟(1)中，油菜花粉:乙醇水溶液的重量體積比為50-200克:20(T500mL，優選為80~150克:25(T450mL，更優選為90~120克:28(T350mL，最優選為100克:300mL。
[0034]在步驟(1)中，為了提取完全，可以對提取後的濾渣進一步提取，並如此反覆提取濾渣，合併濾液。因此優選在本發明第三方面的方法中，步驟(1)進一步包括，固液分離後得到的濾渣用8(T100% (V/V)乙醇水溶液提取，然後進行固液分離，保留濾液並與步驟(1)中獲得的濾液合併。該步驟可以步驟(1)的其他提取步驟採用相同的條件，而且該步驟固液分離後得到的濾渣可以進一步採用與該步驟相同的步驟提取0-5次，只要最後將所有濾液合併即可。
[0035]在步驟(1)中，濾液或者合併的濾液，體積過大，則不利於以後步驟的萃取效率。因此優選在本發明第三方面的方法中，在步驟(1)中，濾液進一步濃縮。濃縮是減壓乾燥濃縮，優選為以65~80°C和0.08^0.09Mpa的真空度乾燥濃縮，最優選為以75°C和0.085Mpa的真空度乾燥濃縮。濃縮後，優選醇溶性提取液:步驟(2)中的乙醇水溶液的體積比為0.5^2:1-3，優選為0.8~1.5:1.5~2.5，最優選為1:2。
[0036]在本發明第三方面的方法中，在步驟(2)中，可以使用0% (V/V)乙醇水溶液(SP，純水)，但優選乙醇水溶液的濃度為30~55% (V/V)，優選為40~53% (V/V)，更優選為45~52%(V/V),最優選為 50% (V/V)0
[0037]在本發明第三方面的方法中，在步驟(2)中，加入的乙酸乙酯的量可以優化。經本發明人研究，優選在步驟(2)中，乙醇水溶液:乙酸乙酯的體積比為廣3:3~8，優選為
1.5^2.5:4飛，最優選為2:5。
[0038]為了萃取完全，可以對萃取後的非乙酸乙酯層(B卩，分離了乙酸乙酯層後剩餘的層)進一步提取，並如此反覆萃取非乙酸乙酯層，合併乙酸乙酯層。因此優選在本發明第三方面的方法中，步驟(2)進一步包括，萃取後得到的非乙酸乙酯層加入乙酸乙酯萃取，保留乙酸乙酯層並與步驟(2)中獲得的乙酸乙酯層合併。萃取可以進行f 8次，優選為2飛次。
[0039]優選在本發明第三方面的方法中，在步驟(2)中，酯酶，也稱脂肪酶，能水解甘油三酯或脂肪酸脂產生單或雙甘油酯和游離脂肪酸。這樣的酶本身已經在食品領域廣泛應用。脂肪酶優選是提取自細菌的酯酶，如可以是能夠從市場購買獲取的脂肪酶，也可以是直接從細菌(如，螢光假單胞菌，優選是CGMCC N0.1.867 (即AS 1.867)菌株)中提取的酯酶(如參見中國專利申請200810046182.0)。
[0040]優選在本發明第三方面的方法中，在步驟(2)中，糖化酶，也稱葡萄糖澱粉酶，能將澱粉鏈轉化為葡萄糖。這樣的酶本身已經在釀造領域廣泛應用。糖化酶優選是提取自真菌的糖化酶，如可以是能夠從市場購買獲取的糖化酶，也可以是直接從真菌(如黑麴黴)中提取的糖化酶。
[0041]在本文中，「不完全反應」指的是使酶反應的底物在全部轉化前終止反應，由此保持天然芸苔素內酯類似物的多樣性。通常完全反應要進行3小時以上，因此優選在本發明第三方面的方法中，在步驟(2)中，不完全反應是在35~42°C反應0.5^2小時，優選是在37~41°C反應0.75~1.5小時，最優選在40°C反應I小時。 [0042]優選在本發明第三方面的方法中，在步驟(2)中，乾燥是減壓乾燥，優選為以65~80°C和0.08~0.09Mpa的真空度乾燥，最優選為以75°C和0.085Mpa的真空度乾燥。
[0043]本發明人發現，初步的提純以矽膠色譜柱為宜，只需要根據洗脫速度來設置收集的起始和終止時間即可全面收集多種天然芸苔素內酯類似物，簡便易行。優選在本發明第三方面的方法中，在步驟(3)中，矽膠色譜柱中的填料是200-300目矽膠，最優選是300目矽膠。
[0044]在步驟(3)中，潛在可以選擇的洗脫液種類繁多，經本發明人研究，發現用甲醇和乙酸乙酯的混和液洗脫，產物較穩定。優選在本發明第三方面的方法中，在步驟(3)中，混和液中甲醇:乙酸乙酯的體積比為3~8:0.5^1.5，優選為1~7:0.8^1.3，最優選為5:1。
[0045]優選在本發明第三方面的方法中，在步驟(3)中，乾燥是減壓乾燥，優選為以65~80°C和0.08~0.09Mpa的真空度乾燥，最優選為以75°C和0.085Mpa的真空度乾燥。
[0046]在步驟(4)中，潛在可以選擇的洗脫液種類繁多，經本發明人研究，發現用乙腈和水的混和液洗脫，可以有效分離各種天然芸苔素內酯類似物。優選在本發明第三方面的方法中，在步驟(4)中，混和液中乙腈:水的體積比為60~90:10~40，優選為70~80:20~30，最優選為75:25。
[0047]用本發明第三方面的方法中的步驟提取得到的天然芸苔素內酯類似物是高純度的。優選在本發明第三方面的方法中，在步驟(4)中，如式BR6、BRl、BR2、BR3、BR4和/或BR5所示的天然芸苔素內酯類似物的純度大於90%，優選大於95%，更優選大於98%，最優選大於99%。
[0048]本發明取得的優異效果在於，一次提取，最終可以收集到多種分離的高純度的天然芸苔素內酯類似物，因而攤薄了成本；提取(純化)流程穩定，多種分離的天然芸苔素內酯類似物可以單獨施用，也可以配比混和施用，產品質量穩定而容易控制，達到人用藥物或保健品的要求；突破現有技術中芸苔素用於植物的限制，拓寬了其更高附加值的用途，能夠用於治療或預防哺乳動物疾病，尤其是前列腺(增生)疾病，或者能夠用於改善哺乳動物狀況，尤其是前列腺(增生)狀況；天然芸苔素內酯類似物和亞麻酸醯基乙醇胺協同增效，不但提高了效果，可以降低給藥量，更可以使得原來不具備成藥價值的天然芸苔素內酯類似物(如，BR5)也能具有聯合成藥的價值。
[0049]為了便於理解，以下將通過具體的附圖和實施例對本發明進行詳細地描述。需要特別指出的是，具體實例和附圖僅是為了說明，並不構成對本發明範圍的限制。顯然本領域的普通技術人員可以根據本文說明，在本發明的範圍內對本發明做出各種各樣的修正和改變，這些修正和改變也納入本發明的範圍內。另外，本發明引用了現有技術文獻，這些文獻也是為了更清楚地描述本發明，它們的全文內容均納入本發明進行參考，就好像它們的全文已經在本發明說明書中重複敘述過一樣。[0050]【專利附圖】
【附圖說明】
[0051]圖1顯示了天然芸苔素內酯類似物的純化圖譜。
[0052]圖2~7顯示了各天然芸苔素內酯類似物的質譜鑑定圖譜，其中，BRl的質譜圖譜如圖2所示，BR2的如圖3所示，BR3的如圖4所示，BR4的如圖5所示，BR5的如圖6所示，BR6的如圖7所示。
[0053]圖8~13顯示了各天然芸苔素內酯類似物的結構式，其中BRl如圖8所示，BR2如圖9所示，BR3如圖10所示，BR4如圖11所示，BR5如圖12所示，BR6如圖13所示。
[0054]圖14顯示了亞麻酸醯基乙醇胺的結構式。
[0055]【具體實施方式】
[0056]實施例1天然芸苔素內酯類似物的提取和鑑定
取油菜花粉100克，加入95% (V/V)乙醇300mL，超聲破碎，過濾，保留濾液；濾渣加入95% (V/V)乙醇300mL，超聲破碎，過濾，保留濾液。合併濾液，於75°C、0.085Mpa的真空度乾燥濃縮至體積為IOOmL,得花粉醇提液。
[0057]將50% (V/V)乙醇200mL加到花粉醇提液中，混合均勻，然後加入500mL乙酸乙酯萃取，保留上層(乙酸乙酯層);下層繼續加入500mL乙酸乙酯萃取，保留上層(乙酸乙酯層)。合併乙酸乙酯層，加入300mL濃縮酶液(2500U/L ;參見中國專利申請200810046182.0)於40°C攪拌(45rpm)處理I小時，然後於75°C、0.085Mpa的真空度乾燥，得酯溶性提取物。
[0058]取酯溶性提取物上樣於矽膠色譜柱(2.6cmX 40cm, 300目矽膠)，加流動相(即，甲醇和乙酸乙酯的混和液，甲醇:乙酸乙酯的體積比為5:1)洗脫，控制流速為4ml/分鐘，收集第40分鐘至第150分鐘流出的洗脫液，合併後於75°C、0.085Mpa的真空度乾燥完全，溶解於IOmL甲醇中，得矽膠柱純化液。
[0059]然後,將矽膠柱純化液上樣於C18反相色譜柱(柱參數為50mmX 25cm，5μπι),加流動相(即，乙腈和水的混和液，乙腈:水的體積比為75:25)洗脫，控制流速為10ml/min，洗脫圖譜如圖1所示，其中標明了各天然芸苔素內酯類似物的峰及其洗脫時間，可以在各洗脫時間分別收集相應的天然芸苔素內酯類似物(BR6、BRl、BR2、BR3、BR4、BR5 )。上述提取流程的穩定性好，綜合效率高，能夠一次獲得上述6種天然芸苔素內酯類似物。
[0060]收集天然芸苔素內酯類似物BR1、BR2、BR3、BR4、BR5和BR6，用高解析度質譜驗證(BRl的質譜圖譜如圖2所示，BR2的如圖3所示，BR3的如圖4所示，BR4的如圖5所示，BR5的如圖6所示，BR6的如圖7所示)正確，各類似物純度均高於99%，然後委託四川大學分析測試中心根據標準方法(質譜分析(GB/T 6041-2002)、紅外光譜分析(GB/T6040-2002)、超導脈衝傅立葉變換核磁共振譜(JY/T 007-1996)和分子吸收分光光度分析(GB/T 9721-2006))進行測試，解析出各天然芸苔素內酯類似物的化學結構，其中BRl如圖8所示，BR2如圖9所示，BR3如圖10所示，BR4如圖11所示，BR5如圖12所示，BR6如圖13所示。
[0061]另外將上述提純的化合物混和成芸苔素類似物(簡稱為「BR混」或「BR混合物」;其中 BRl:BR2:BR3:BR4:BR5 和 BR6 的重量比為 0.4:0.4:0.4:0.4:0.4:98)
實施例2動物安全性測試 分別取實施例1製備的天然芸苔素內酯類似物BR1、BR2、BR3、BR4、BR5和BR6，以及BR混合物，分別用少量的無水乙醇溶解，然後加蒸餾水稀釋至藥物濃度為:0.005mg/mL，其中無水乙醇體積濃度為:0.0125% ;另外取少量無水乙醇用蒸餾水配製成體積濃度為0.0125%的乙醇水溶液作為對照。
[0062]用購自成都達碩生物科技有限公司的SPF級NIH同日齡斷乳小鼠(雌雄各半)和SPF級同日齡SD幼年大鼠(雌雄各半)進行試驗。試驗過程為:將小鼠或大鼠隨機分成8組(其中BR單體6組，BR混合物I組，空白對照I組)，每組10隻，雌雄各半，BR各組以0.1mg/kg灌胃，空白對照組每日灌胃等體積的上述乙醇水溶液I次，每周3次，共給藥4周，期間稱量體重並觀察動物生理狀態。試驗期間，動物均自由攝食SPF級大、小鼠通用普通輻照飼料及飲用純水。
[0063]表1小鼠體重變化結果(，n=10)
【權利要求】
1.天然芸苔素內酯類似物和亞麻酸醯基乙醇胺聯合在製備用於預防或治療哺乳動物(尤其是雄性哺乳動物)疾病的藥物或者用於改善哺乳動物(尤其是雄性哺乳動物)狀況的保健品中的應用。
2.權利要求1所述的應用，其中所述藥物中的亞麻酸醯基乙醇胺無法單獨預防或治療哺乳動物(尤其是雄性哺乳動物)疾病；或者，所述保健品中的亞麻酸醯基乙醇胺無法單獨改善哺乳動物(尤其是雄性哺乳動物)狀況。
3.權利要求1或2所述的應用，其中所述疾病是前列腺疾病，優選是前列腺增生疾病；或者，所述狀況是前列腺狀況，優選是前列腺增生狀況。
4.權利要求1所述的應用，其中所述天然芸苔素內酯類似物是BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5，或它們之任意幾種的混合物。
5.用於預防或治療哺乳動物(尤其是雄性哺乳動物)疾病的藥物組合物，其包括天然芸苔素內酯類似物和亞麻酸醯基乙醇胺，以及藥物上可接受的載體。
6.用於改善哺乳動物(尤其是雄性哺乳動物)狀況的保健品組合物，其包括天然芸苔素內酯類似物和亞麻酸醯基乙醇胺，以及保健品上可接受的載體。
7.權利要求5或6所述的組合物，其中所述天然芸苔素內酯類似物是BR6、BRUBR2、BR3、BR4和/或BR5，或它們之任意幾種的混合物。
8.權利要求5或6所述的組合物，其是口服製劑，優選是口服液體製劑。
9.權利要求5或6所述的組合物，其中所述疾病是前列腺疾病，優選是前列腺增生疾病；或者，所述狀況是前列腺狀況，優選是前列腺增生狀況。
10.製備包含天然芸苔素內酯類似`物和亞麻酸醯基乙醇胺的哺乳動物用藥物或保健品的方法，其包括， (1)用8(T100%(V/V)乙醇水溶液提取破碎的油菜花粉，固液分離後保留濾液(任選其中濾液進一步濃縮)，獲得醇溶性提取液； (2)將醇溶性提取液與(T60%(V/V)乙醇水溶液混合，然後加入乙酸乙酯萃取，保留乙酸乙酯層並加入酯酶進行不完全反應，然後乾燥，獲得酯溶性提取物； (3)酯溶性提取物上樣於矽膠色譜柱，用甲醇和乙酸乙酯的混和液洗脫，收集含有天然芸苔素內酯類似物的洗脫液，乾燥並溶解於甲醇中，獲得矽膠柱純化液； (4)將矽膠柱純化液上樣於C18反相色譜柱，用乙腈和水的混和液洗脫，分別收集含有BR6、BR1、BR2、BR3、BR4 和 / 或 BR5 的洗脫液；和 (5)將洗脫液乾燥後，與亞麻酸醯基乙醇胺混合，以及與藥物上可接受的載體或保健品上可接受的載體混合。
【文檔編號】A61K31/164GK103877100SQ201310187134
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2013年5月21日 優先權日:2013年5月21日
【發明者】何其明, 國錦琳 申請人:成都旗美生物科技有限公司