一種透明質酸鈉提純優化的方法
2023-10-04 15:36:59
專利名稱:一種透明質酸鈉提純優化的方法
技術領域:
本發明涉及一種透明質酸鈉提純優化的方法。
背景技術:
透明質酸鈉的工業製法已知有純化雞冠提取物的方法,以及純化由鏈球菌屬的菌株得到的發酵液而獲得透明質酸鈉的方法。
作為除去透明質酸鈉中作為雜質存在的熱源物質等高分子量化合物的方法,已知有以下幾種方法用大量的水溶性有機溶劑等有選擇的使透明質酸鈉沉澱的方法;離子交換樹脂處理法;吸附樹脂處理法;十六烷基氯化吡啶鎗等方法。
上述這些方法雖然能夠提供無溶血性、無化學趨化性、熱原試驗呈陰性的透明質酸鈉,但作為除去熱源物質必須要進行繁雜的操作。
因此目前希望開發一種能夠容易地從透明質酸鈉除去熱源物質的純化方法。
本發明的目的在於提供一種容易的獲得熱源物質含量低的高純度透明質酸鈉的純化方法以及由該純化方法獲得的透明質酸鈉。
發明內容
本發明的方法包括如下歩驟
1) 8CTC復溶透明質酸鈉;
2) 添加適量鈉鹽;
3) 然後將含有透明質酸鈉的溶液在8CTC時通過帶正電的尼龍-66聚醯胺樹脂
膜的過濾器;
4) 然後再向濾液中加入鈉鹽及水溶性有機溶劑;5) 析出沉澱;
6) 反覆析沉澱兩次;
7) 真空乾燥得醫用級透明質酸鈉精粉。
本發明中,透明質酸鈉可以是細菌發酵法生產也可以是組織提取的均可,與透明質酸鈉的分子量無關。
透明質酸鈉例如可以是由玻璃體、臍帶、關節液、雞冠等分離得到的物質,以及山馬鏈球菌、釀膿鏈球菌、停乳鏈球菌等微生物生產的物質。
透明質酸鈉溶液優選是含有0.001 1% (W/V)透明質酸鈉的水溶液,用於溶解透
明質酸鈉的水,其中的熱源物質優選低於0.01Eu/ml。
為除去該透明質酸鈉溶液中的雜菌或不溶物,也可用0.2~0.5um的過濾器進行過濾處理。
另外,為除去透明質酸鈉溶液中的熱源物質,也可以使用在特定的pH範圍帶正電的過濾器進行過濾處理。
上述過濾器只要是在pH3 10的水溶液中帶正電的過濾器即可,優選使用膜過濾器。
作為上述的過濾器,優選是由尼龍-66聚醯胺樹脂作為一種成分組成的共聚物形成的膜孔徑為0.2~0.5un的過濾器。
使用該過濾器進行過濾處理時,為提高過濾速度,可以添加鹽或升高透明質酸鈉溶液的液溫。
所說的鹽,其中的鹼成分是由鋰、鈉、鉀等鹼金屬離子,鎂、鈣等金屬離子,其中的酸成分是由氯、溴等滷素離子,硫酸、硝酸等無機酸,以及甲酸、乙酸等有機酸的酸根組成的陰性成分,優選鈉鹽,鹽可以單獨或組合使用。
具體的鹽例如可以舉出氯化鈉、硫酸鈉、醋酸鈉等。
相對於透明質酸溶液,優選加入1~30 (W/V)的鹽。水溶性有機溶劑的添加量是要使透明質酸鈉的最終濃度為30~90% (V/V),這樣可以使透明質酸鈉析出。
作為水溶性的有機溶劑,只要是可溶於水的有機溶劑即可使用,具體可以舉出甲醇、乙醇、丙酮等。另外,使用的水溶性有機溶劑優選熱源物質含量低的。
通過想透明質酸鈉溶液中加入水溶性有機溶劑,從析出、沉降的透明質酸鈉中高效率地除去熱源物質,為使透明質酸鈉充分的沉降,通常在添加水溶性有機溶劑後放置2小時以上,使透明質酸鈉沉降。
從透明質酸鈉沉降後的溶液中除去上清液,從而除去熱源物質。
具體實施例方式
以下給出本發明的實施例,進一歩對本發明進行詳細說明,但本發明並不限於此。
實施例1
. 將熱源物質含量0.1Eu/mg的透明質酸鈉25g溶於熱源物質含量低於0.01Eu/ml的10L水中,加入25gNaCl,升高透明質酸鈉溶液的溫度到80°C ,用0.45um的微孔過濾器進行過濾處理,得到濾液。
在上述濾液中加入氯化鈉是氯化鈉的濃度達到58.5g/L,之後加入乙醇使乙醇的濃度為50% (V/V)。
上述溶液放置5小時,使透明質酸鈉析出、沉降,除去該溶液的上清液,得到透明質酸鈉的沉降物。
用80%的乙醇水溶液洗滌上述沉降物,之後再用100%乙醇洗滌。真空乾燥上述洗滌物,得到20g純化的透明質酸鈉。
實施例2
將熱源物質含量0.1Eu/mg的透明質酸鈉25g溶於熱源物質含量低於0.01Eu/ml的10L水中,加入25gNaCl,升高透明質酸鈉溶液的溫度到80°C ,用0.45um的微孔過濾器進行過濾處理,得到濾液。
在上述濾液中加入氯化鈉是氯化鈉的濃度達到58.5g/L,之後加入丙酮使丙酮的濃 度為44% (V/V)。
上述溶液放置5小時,使透明質酸鈉析出、沉降,除去該溶液的上清液,得到透明 質酸鈉的沉降物。
用80%的丙酮水溶液洗滌上述沉降物,之後再用100%丙酮洗滌。 真空乾燥上述洗滌物,得到20g純化的透明質酸鈉。
實施例3
將熱源物質含量0.1Eu/mg的透明質酸鈉25g溶於熱源物質含量低於0.01Eu/ml的 10L水中,加入25gNaCl,升高透明質酸鈉溶液的溫度到80°C ,用0.45um的微孔過濾 器進行過濾處理,得到濾液。
在上述濾液中加入氯化鈉是氯化鈉的濃度達到58.5g/L,之後加入乙醇使乙醇的濃 度為44% (V/V)。
上述溶液放置5小時,使透明質酸鈉析出、沉降,除去該溶液的上清液,得到透明 質酸鈉的沉降物。
用80%的乙醇水溶液洗滌上述沉降物,之後再用100%乙醇洗滌。 真空乾燥上述洗滌物,得到18g純化的透明質酸鈉。
發明結果
下表給出上述得到的透明質酸鈉中的熱源物質的含量。
析出使有機溶劑濃度(v/v%)熱源物質含量(Eu/mg)
乙醇500,01
丙酮440.25
乙醇440.25
權利要求
1.一種透明質酸鈉提純優化的方法,其特徵在於,包括如下步驟1)80℃復溶透明質酸鈉;2)添加適量鈉鹽;3)然後將含有透明質酸鈉的溶液在80℃時通過帶正電的尼龍-66聚醯胺樹脂膜的過濾器;4)然後再向濾液中加入鈉鹽及水溶性有機溶劑;5)析出沉澱;6)反覆析沉澱兩次;7)真空乾燥得醫用級透明質酸鈉精粉。
2. 根據權利要求1所述的方法,其特徵在於,其中在透明質酸鈉溶液中含有 0.001 1% (W/V)的透明質酸鈉。
3. 根據權利要求1所述的方法,其特徵在於,選用細菌發酵法生產的透明質酸或 組織提取的透明質酸。
4. 根據權利要求3所述的方法,其特徵在於,其中的細菌發酵法利用的微生物足 屬於鏈球菌屬的微生物。
5. 根據權利要求1所述的方法,其特徵在於,其中鈉鹽的添加量是1 30。/。(W/V)。
6. 根據權利要求1所述的方法,其特徵在於,其中鈉鹽可以是氯化鈉、硫酸鈉和醋 酸鈉。
7. 根據權利要求l所述的方法,其特徵在於,其中水溶性有機溶劑是甲醇、乙醇或 丙酮。
8. 根據權利要求1所述的方法,其特徵在於,其中使用的帶正電的尼龍-66聚醯胺 樹脂膜的過濾器,其過濾膜的pH為3~10 。
9. 根據權利要求1所述的方法,其特徵在於,其中製得的醫用透明質酸鈉熱源物 質含量低於0.25Eu/mg。
全文摘要
本發明提供了一種透明質酸鈉提純優化的方法,以及由該方法獲得的透明質酸鈉。本發明的純化方法的特徵在於在含有透明質酸鈉的溶液中及含有透明質酸鈉的溶液通過帶正電的過濾器後的濾液中,加入鹽和水溶性有機溶劑,使透明質酸鈉析出沉降,通過抽出上清液從而除去熱源物質。
文檔編號C08B37/08GK101676307SQ200810200148
公開日2010年3月24日 申請日期2008年9月19日 優先權日2008年9月19日
發明者玲 丁, 任彩霞, 孔淑靜 申請人:上海建華精細生物製品有限公司