一種微生態製劑及其製備方法與應用的製作方法
2023-10-29 00:06:57 2
一種微生態製劑及其製備方法與應用的製作方法
【專利摘要】一種微生態製劑及其製備方法與應用，涉及水產養殖。微生態製劑含有枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌中的至少一種和植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌中的至少一種；枯草芽孢桿菌包括枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis1A05680），短小芽孢桿菌包括短小芽孢桿菌（Bacillus?pumilus1A08151），植物乳桿菌包括植物乳桿菌（Lactobacillus?plantarum1A07806）；嗜酸乳桿菌包括嗜酸乳桿菌（Lactobacillus?acidophilus?PL7）。在製備促進對蝦或石斑魚生長，提高對蝦或石斑魚免疫力和抗病力，防治病害，提高存活率，淨化養殖水質製劑中應用。
【專利說明】—種微生態製劑及其製備方法與應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及水產養殖，尤其是ー種應用於對蝦或石斑魚養殖的製劑，具體是由枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌製成的製劑在促進對蝦或石斑魚生長，提高對蝦或石斑魚免疫力和抗病力，防治對蝦或石斑魚病害尤其是石斑魚黑身病，提高對蝦或石斑魚存活率，淨化養殖水質中的應用。
【背景技術】
[0002]2000年以來，隨著高密度養殖模式的推廣，我國對蝦養殖業進入高速發展時期，2006年，我國對蝦養殖總量124萬噸，佔全球養殖對蝦產量的39.2%，並連續多年保持世界第一。但是，集約化、高密度水產養殖的迅猛發展，使養殖生態環境遭到嚴重破壞，同時也產生了一系列負面的影響，包括飼料資源浪費、環境惡化、病害嚴重、種質退化、藥物殘留等，尤其是病害問題日趨嚴重。對蝦白斑綜合病毒、桃拉病毒以及弧菌病害等造成對蝦大規模死亡，已成為制約對蝦養殖業發展的重要瓶頸。石斑魚作為一種名貴的經濟魚類，自20世紀80年代起，在我國廣東、福建、浙江和臺灣等地區開始養殖。近年來，我國南方省區的石斑魚網箱養殖規模迅速擴大，石斑魚的各種病害也呈現迅速上升的勢頭。在毎年的春末和夏秋高溫季節，常暴發各種急性傳染病，如神經壞死病毒、虹彩病毒、病原細菌等造成的魚苗黑身、打轉等，造成大批石斑魚苗死亡，給養殖業主帶來巨大經濟損失，嚴重製約了石斑魚養殖業的發展。據統計，毎年石斑魚苗的死亡率高達99%。目前，為了保持養殖密度以及防止疾病的爆發，生產上盲目過度投放各類抗生素，如氯黴素、土黴素、呋喃唑酮等，從而造成養殖動物體內藥物殘留嚴重，給養殖動物和人類的健康帶來了潛在的危害。隨著國家全面禁止在動物養殖中應用抗生素，開發無毒、無副作用、無殘留、優質、新型的微生態製劑產品已成為當前市場的需要。
[0003]微生態製劑作為抗生素的替代品，一方面通過有益微生物降解養殖環境的氨氮、亞硝酸鹽、H2S、餌料殘渣、糞便 排洩物等浄化水質，為養殖動物營造ー個良好的養殖環境，防止病原菌滋生；另ー方面，通過有益微生物產生代謝產物和生理活性物質如抗菌肽等來抑制或者殺滅病原，同時提高養殖動物免疫力和抗病力，達到防治病害的目的；再者，有益微生物通過產生多種消化酶，幫助蛋白質、碳水化合物、脂肪的代謝，提高飼料的利用率和轉化率，達到減少資源消耗和增產的目的。
[0004]中國專利CN103005183A公開ー種石斑魚全價配合飼料，採用進ロ魚粉、發酵豆柏、a -澱粉、麵粉、魷魚粉、磷蝦粉、酵母膏、豐年蟲、魚油、大豆磷脂、DHA、EPA、複合礦物鹽、複合維生素、複合酶製劑、複合免疫增強劑、強肝劑和複合微生態製劑為原料製成。考慮石斑魚養成期消化生理特點，在飼料中加入各種添加剤，可以促進石斑魚消化吸收，調節石斑魚腸道菌群穩定，提高石斑魚免疫カ和抗脂肪肝的作用，該配合飼料營養均衡全面，無添加抗生素等藥物，對水體無汙染，屬於高效環保無公害的飼料。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供一種微生態製劑及其製備方法。
[0006]本發明的另一目的是提供ー種微生態製劑的應用，尤其是可促進對蝦或石斑魚生長，提高對蝦或石斑魚免疫力和抗病力，防治對蝦或石斑魚病害尤其是石斑魚黑身病，提高對蝦或石斑魚存活率，淨化養殖水質。
[0007]所述微生態製劑含有:
[0008]枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌中的至少ー種，和植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌中的至少ー種；
[0009]所述枯草芽孢桿菌包括枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilislA05680)保藏編號CCTCC N0:M2013289 ；
[0010]所述短小芽孢桿菌包括短小芽孢桿菌(Bacillus pumiluslA08151)保藏編號CCTCC N0:M2013291 ；
[0011]所述植物乳桿菌包括植物乳桿菌(Lactobacillus plantarumlA07806)保藏編CCTCC N0:M2013293 ；
[0012]所述嗜酸乳桿菌包括嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus PL7)保藏編號CCTCC N0:M2013294o
[0013]所述微生態製劑包括枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌吋，所述枯草芽孢桿菌含量為菌數佔總菌數百分比20%~30% ;所述短小芽孢桿菌含量為菌數佔總菌數百分比20%~30% ;所述植物乳桿菌含量為菌數佔總菌數百分比20%~30% ;所述嗜酸乳酸桿菌含量為菌數佔總菌數百分比20%~30%，總量為100%。
[0014]所述微生態製劑包括獸藥、飼料添加劑或水質淨化劑等。
[0015]所述微生態製劑中，枯草芽孢桿菌發酵液、短小芽孢桿菌發酵液、植物乳桿菌發酵液和嗜酸乳桿菌發酵液均按照本領域常規的深層液體發酵培養的方式獲得，較佳地經過斜面培養、一級種子培養和發酵培養。具體可通過以下方法製備得到:
[0016]枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的培養:將出發菌株按斜面、液體種子、液體發酵的順序培養，斜面和種子培養基為常規的營養瓊脂培養基或肉湯培養基；發酵培養基配方(W/V):豆餅粉 3%，澱粉 1.5%，玉米漿 1%，葡萄糖 0.5%，(NH4)2SO40.1%, NH4Cl0.1%, KH2PO40.05%, NaH2PO40.5%, MgSO40.05%, MnSO40.05%,發酵培養條件為 28 ~37°C，通風培養 36 ~48h，活菌數≤109CFU/mL ；
[0017]植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌的培養:將出發菌株按斜面、液體種子、液體發酵的順序培養，斜面和種子培養基為常規MRS培養基；發酵培 養基配方(W/V):糖蜜3%，紅糖1%，酵母粉0.6%，蛋白腖0.5%，KH2PO40.2%，CaCO30.5%，發酵培養條件為28~37°C，靜置培養36~48h，活菌數≤ 109CFU/mL。
[0018]所述微生態製劑的存在形式較佳的為微生物菌體發酵液，或者微生物菌液與固體輔料的混合物。
[0019]當所述微生態製劑的存在形式為微生物菌液時，製備方法包括將枯草芽孢桿菌發酵液、短小芽孢桿菌發酵液、植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發酵液按比例均勻混合即可；混合後最好進行濃縮處理，並可加入維生素C、低聚果糖、甘露醇等中的至少ー種保護劑，起到協調作用。
[0020]當所述微生態製劑的存在形式為微生物菌液與固體輔料的混合物時，製備方法包括將枯草芽孢桿菌發酵液、短小芽孢桿菌發酵液、紅酵母菌發酵液和乳酸桿菌發酵液按比例混合均勻，作為主要活性成分，按照一定的劑型エ藝，添加固體輔料製成片劑、散剤、粉劑等。所述固體輔料為本領域常規使用固體輔料，包括石灰石、硅藻土、沸石粉、活性碳、微量元素等。
[0021]本發明所述微生態製劑中的上述任ー組合，均具有促進對蝦或石斑魚生長，提高對蝦或石斑魚免疫力和抗病力，防治對蝦或石斑魚病害尤其是石斑魚黑身病，提高對蝦或石斑魚存活率，淨化養殖水質的作用。
[0022]所述微生態製劑可在製備促進對蝦或石斑魚生長，提高對蝦或石斑魚免疫カ和抗病力，防治對蝦或石斑魚病害，提高對蝦或石斑魚存活率，淨化養殖水質，尤其是石斑魚黑身病的製劑中應用。
[0023]本發明所述枯草芽孢桿菌優選但不限於枯草芽孢桿菌1A05680保藏編號CCTCC N0:M2013289 ；短小芽孢桿菌優選但不限於短小芽孢桿菌1A08151保藏編號CCTCC N0:M2013291 ;植物乳桿菌優選但不限於植物乳桿菌1A07806保藏編號CCTCCN0:M2013293 ;嗜酸乳桿菌優選但不限於嗜酸乳桿菌PL7保藏編號CCTCC N0:M2013294。
[0024]本發明選用的菌株特性及功能如下:
[0025]1、枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌:所述枯草芽孢桿菌CCTCC N0:M2013289和短小芽孢桿菌CCTCC N0:M2013291具有產胞外蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶等活性，可以促進養殖動物生長，提高飼料利用率；同時能產生脂肽類抗菌物質，較強抑制各類水產動物致病菌，包括哈維氏弧菌、溶藻弧菌、坎貝氏弧菌、副溶血弧菌、嗜水氣單胞菌等。
[0026]2、植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌:所述植物乳桿菌CCTCC N0:M2013293和嗜酸乳桿菌CCTCC N0:M2013294進入水產動物腸道，可以調節腸道菌群平衡，能產類細菌素和乳酸，抑制病原菌生長，提高養殖動物機體免疫力和抗病カ。
[0027]所述微生態製劑可促進對蝦生長，提高對蝦抗病力，防治對蝦病害發生，提高對蝦存活率，浄化養殖水質。所述微生態製劑應用於對蝦養殖的使用方法和用量如下:
[0028]日常飼養時，取菌劑全池均勻潑酒。每5天使用一次，每畝養殖水體用量為I~2L，水質惡化時可加倍使用。使用後水質改善明顯，水色鮮活、pH穩定、藻類生長穩定；同時水體弧菌含量較低，期間未見病害發生。同時取菌劑用適量水稀釋後均勻噴灑在飼料表面，每IOOkg飼料使用I~2L，每日拌料投喂，連續投餵3天後停用2天，再連用3天。拌料投餵一段時間後，對蝦攝食旺盛、腸道粗實，未見腸炎等發生。
[0029]所述微生態製劑可用於防治石斑魚育苗期間病害的發生，包括神經壞死病毒、虹彩病毒、細菌等引起的「癲」、「黑身」等症狀；有效緩解或預防病害發生，極大地降低病害造成的死亡率；同時能改善養殖水質，増加石斑魚消化吸收功能和抗病抗逆能力，提高石斑魚產量和質量，縮短養殖周期。所述微生態製劑在防治石斑魚苗「黑身病」時的使用方法和用量如下:
[0030]石斑魚苗一旦出現黑身症狀，立即使用菌劑。24m3水體用量為100~200ppm，，全池均勻潑酒。每兩天加一次菌，毎次加菌之前池底清汙，少量換水。2天為ー個周期，連用6天，即可提高石斑魚苗免疫力，有效緩解石斑魚苗黑身症狀，極大提高存活率。
[0031]本發明根據微生物的不同特性，將不同功效的微生物進行配伍使用，發揮協同作用。【具體實施方式】
[0032]以下實施例將對本發明作進ー步的說明。
[0033]製備例說明:上述已經對本發明的微生態製劑的製備進行說明，這裡通過包含枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilislA05680)保藏編號CCTCC N0:M2013289、短小芽孢桿菌(Bacillus pumiluslA08151)保藏編號 CCTCC N0:M2013291、植物乳桿菌(LactobacillusplantarumlA07806)保藏編號 CCTCC N0:M2013293 和嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus PL7)保藏編號CCTCC N0:M2013294四種微生物的液體製劑為例進行說明。製備方法並不局限於本方面實施例所述，公知的能夠達到製備目的的方法均可以。下面通過實施例的方式進ー步說明本發明，但並不因此將本發明限制在所述實施例範圍之中。
[0034]枯草芽孢桿菌(BacillussubtilislA05680)保藏編號 CCTCC N0:M2013289、短小芽孢桿菌(Bacillus pumiluslA08151)保藏編號CCTCC N0:M2013291、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarumlA07806)保藏編號 CCTCC N0:M2013293 和嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus PL7)保藏編號 CCTCC N0:M2013294 四種微生物已於 2013年6月25日保藏於中國典型培養物保藏中心，保藏中心地址為中國，武漢，武漢大學，郵編430072。
[0035]實施例1 一種微生態製劑的製備
[0036]微生態製劑中各組分菌體的培養:
[0037]枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的培養:將出發菌株枯草芽孢桿菌(BacillussubtilislA05680)保藏編號 CCTCC N0:M2013289 和菌株短小芽孢桿菌(BacilluspumiluslA08151)保藏編號CCTCC N0:M2013291按斜面、液體種子、液體發酵的順序培養，斜面和種子培養基為常規的肉湯培養基；發酵培養基配方:豆餅粉3%，澱粉1.5%，玉米漿1%，葡萄糖 0.5%, (NH4)2SO40.1%, NH4Cl0.1%, KH2PO40.05%, NaH2PO40.5%, MgSO40.05%, MnSO40.05%,發酵培養條件為37°C，通風培養36h，活菌數≥109CFU/mL ；
[0038]植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌的培養:將出發菌株植物乳桿菌(LactobaciIIusplantarumlA07806)保藏編號 CCTCC N0:M2013293 和嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus PL7)保藏編號CCTCC N0:M2013294按斜面、液體種子、液體發酵的順序培養，斜面和種子培養基為常規MRS培養基；發酵培養基配方:糖蜜3%，紅糖1%，酵母粉0.6%，蛋白腖0.5%，KH2PO40.2%，CaCO30.5%，發酵培養條件為37°C，靜置培養36h，活菌數≥IO9CFU/
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[0039]將上述製備的枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌按照各組分活菌數等比例混合均勻，混合菌液中添加適量維生素C( 1g/L)得到複合微生態製劑菌液。
[0040]複合菌劑穩定性實驗:
[0041 ] 複合菌劑在常溫下避光保存0個月、1個月、2個月、3個月後，分別取樣檢測菌劑中的芽孢桿菌及乳酸菌含量。芽孢桿菌採用LB平板稀釋塗布法檢測。乳酸菌採用MRS加2%碳酸鈣稀釋倒平板法檢測，計數時只計算周圍有溶鈣圈的菌落。結果見表1:
[0042]表 1
[0043]
【權利要求】
1.一種微生態製劑，其特徵在於含有: 枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌中的至少ー種，和植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌中的至少ー種。
2.如權利要求1所述ー種微生態製劑，其特徵在於所述枯草芽孢桿菌包括枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilislA05680)保藏編號 CCTCC N0:M2013289 ； 所述短小芽孢桿菌包括短小芽孢桿菌(Bacillus pumiluslA08151)保藏編號CCTCCN0:M2013291 ； 所述植物乳桿菌包括植物乳桿菌(Lactobacillus plantarumlA07806)保藏編號CCTCCN0:M2013293 ； 所述嗜酸乳桿菌包括嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus PL7)保藏編號CCTCCN0:M2013294o
3.如權利要求1所述ー種微生態製劑，其特徵在於所述微生態製劑包括枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌時，所述枯草芽孢桿菌含量為菌數佔總菌數百分比20%~30% ;所述短小芽孢桿菌含量為菌數佔總菌數百分比20%~30% ;所述植物乳桿菌含量為菌數佔總菌數百分比20%~30% ;所述嗜酸乳酸桿菌含量為菌數佔總菌數百分比20%~30%,總量為100%o
4.如權利要求1所述ー種微生態製劑，其特徵在於包括獸藥、飼料添加劑或水質淨化劑。
5.如權利要求1所述ー種微生態製劑，其特徵在於所述微生態製劑中，枯草芽孢桿菌發酵液、短小芽孢桿菌發酵液、植物乳桿菌發酵液和嗜酸乳桿菌發酵液均按照本領域常規的深層液體發酵培養的方式獲得，較佳地經過斜面培養、一級種子培養和發酵培養。
6.如權利要求1所述ー種微生態製劑，其特徵在於所述微生態製劑的存在形式為微生物菌體發酵液，或者微生物菌液與固體輔料的混合物。
7.如權利要求1所述ー種微生態製劑的製備方法，其特徵在於其具體步驟如下: 枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的培養:將出發菌株按斜面、液體種子、液體發酵的順序培養，斜面和種子培養基為常規的營養瓊脂培養基或肉湯培養基；發酵培養基配方，W/V:豆餅粉 3%，澱粉 1.5%,玉米漿 1%，葡萄糖 0.5%, (NH4)2SO40.1%, NH4Cl0.1%, KH2PO40.05%,NaH2PO40.5%, MgSO40.05%, MnSO40.05%,發酵培養條件為 28 ~37°C，通風培養 36 ~48h，活菌數≤ 109CFU/mL ； 植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌的培養:將出發菌株按斜面、液體種子、液體發酵的順序培養，斜面和種子培養基為常規MRS培養基；發酵培養基配方，W/V:糖蜜3%，紅糖1%，酵母粉0.6%,蛋白腖0.5%,KH2PO40.2%, CaCO30.5%,發酵培養條件為28~37°C，靜置培養36~48h，活菌數≤109CFU/mL。
8.如權利要求6所述ー種微生態製劑的製備方法，其特徵在於當所述微生態製劑的存在形式為微生物菌液時，製備方法包括將枯草芽孢桿菌發酵液、短小芽孢桿菌發酵液、植物乳桿菌和嗜酸乳桿菌發酵液按比例均勻混合即可； 當所述微生態製劑的存在形式為微生物菌液與固體輔料的混合物時，製備方法包括將枯草芽孢桿菌發酵液、短小芽孢桿菌發酵液、紅酵母菌發酵液和乳酸桿菌發酵液按比例混合均勻，作為主要活性成分，按照劑型要求，添加固體輔料製成片劑、散剤、粉劑中的ー種；所述固體輔料包括石灰石、硅藻土、沸石粉、活性碳、微量元素中的至少ー種。
9.如權利要求8所述ー種微生態製劑的製備方法，其特徵在於所述混合後進行濃縮處理，並加入維生素C、低聚果糖、甘露醇中的至少ー種。
10.如權利要求1所述ー種微生態製劑在製備促進對蝦或石斑魚生長，提高對蝦或石斑魚免疫力和抗病力，防治對蝦或石斑魚病害，提高對蝦或石斑魚存活率，淨化養殖水質，尤其是石斑魚黑身病的製劑中應用。
【文檔編號】C12N1/20GK103497906SQ201310333941
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2013年8月2日 優先權日:2013年8月2日
【發明者】邵宗澤, 王麗萍, 單大鵬, 黃兆斌 申請人:國家海洋局第三海洋研究所