用於治療雌激素敏感性疾病的聯合療法的製作方法

2023-10-10 01:16:44 3

專利名稱：用於治療雌激素敏感性疾病的聯合療法的製作方法
相關申請的交叉引用本申請根據35 U.S.C.ξ119(e)要求2000年10月6日提交的申請序列號60/238,772的優先權，該文獻的內容引入本文作為參考。
使用這類Labrie專利中確定的乳腺癌聯合療法的一個關鍵問題在於一種藥物或一類藥物對該聯合方案中所用的其它藥物或其它類藥物之一的吸收、分布、排洩或代謝(或其某些組合)產生不利作用的可能性。當手術或放療可能不再切實可行而藥物療法為主要維持療法選擇時在患有原發性或復發性轉移性疾病的絕經後女性中該問題尤為顯著。這種類型的難題在臨床上將抗雌激素與諸如芳香酶抑制劑這樣的性類固醇激素合成抑制劑組合的嘗試部分或完全失敗的情況下變得尤為突出。近來臨床前期研究和臨床研究已經顯示不可能選擇任意的抗雌激素和將其與任意的芳香酶抑制劑配對來獲得所需作用。這類非制導的配對導致治療結果低於預計，抗腫瘤作用較小或甚至可能產生腫瘤刺激作用，其結果可能證實對患者有害。。
仍然需要控制有害激素(即那些可能刺激腫瘤生長的激素)和潛在地阻斷這些激素可能在體內形成的多種途徑。然而，現有技術的聯合療法忽略了這樣一種可能性，即用作單一療法時可能阻斷一種激素途徑的藥物，當另一種(幹擾性)藥物也存在於體內時可能不再如此有效。這種未認識到的問題產生的效應是留下了對於形成不需要的腫瘤刺激激素完全或部分可利用的途徑，由此減少或消除了所述組合的預期有益作用。
當考慮將抗雌激素作為治療乳腺癌的聯合方案的組成部分時，現有技術強調了選擇具有相對較小的內在雌激素興奮劑活性的″純″雌激素拮抗劑的重要性而排除其它潛在重要因素。如果所述抗雌激素活性的純度是選擇作為聯合用藥方案組成部分的抗雌激素中唯一重要的因素，那麼基於活性純度的選擇會產生一致的可預測的和有益的臨床效果。這顯然是不正確的。然而，即使純的抗雌激素也可與其它藥物發生不利相互作用。類似的論證缺陷使得有關選擇例如性類固醇激素合成抑制劑如芳香酶抑制劑的已有建議具有一定特徵。現有技術集中在純度和選擇性上而相對排除了選擇過程中其它基本因素，即對該方案中其它藥物的共同選擇和該方案中一種藥物對任意其它藥物的吸收、分布、代謝或排洩的不利作用的可能性方面。
例如，在抗雌激素與芳香酶抑制劑的組合情況中，現有技術對建立給藥方案的建議忽略了組合中一種藥物可能對該組合中的第二種或第三種藥物的吸收產生不利影響的可能性，從而導致低血漿水平且同時使功效降低或導致增加毒性危險的令人意外的高血漿水平。例如，Labrie的美國專利US 5,550,107給出了聯用藥物的建議劑量範圍，但並沒有說明有關可能的不利相互作用、它們對靶劑量範圍的可能作用、如何在一種或多種不利相互作用情況下獲得靶範圍和(最重要的是)如何首先避免這類不利相互作用。參見Labrie專利中的第22-24欄。
現有技術還忽略了組合中一種藥物可能對該組合中的第二種或第三種藥物分布產生不利影響。分布改變可以因體內的區室化改變、區室間轉移率的改變、一種或多種藥物與可以用作循環″儲存″的蛋白質結合上的改變或由於這些因素的組合而發生。如果分布發生改變，那麼一種或多種藥物可能無法以足夠濃度到達腫瘤或腫瘤內濃度可能降低。這類作用會降低所述組合的功效且潛在地降低其安全性。Labrie專利沒有提及這些可確定聯合用藥方案的效用和安全性的重要因素。
此外，儘管現有技術概括地警告了一種藥物對另一種藥物代謝的可能不利作用，但是現有技術始終沒有提供關於如何以最佳方式避免或減輕這類幹擾的指導。Labrie也沒有對這種不利相互作用提供教導。這類代謝上的改變可能是對涉及處理配對藥物之一的一種或多種器官或組織的作用的結果。
最後，在這種抗雌激素-芳香酶抑制劑配對的設定中，現有技術關於給藥方案的建議在根本上忽略了對排洩途徑的藥物-藥物相互作用的可能性。排洩上的改變也可能導致血漿或組織水平上的改變，這種改變可能對安全性或有效性或它們兩者均產生不利影響。現有技朮忽略了多種相互作用同時影響吸收、分布、排洩和代謝中兩種或多種因素的可能性。最後幹擾程度可以隨給藥時間選擇和時間遷移、現有技術所忽略的作用而改變，特別是在包括抗雌激素和芳香酶抑制劑的聯合療法中。
此外，現有技術還趨向於強調測定雌激素血漿水平以評價治療有效性的(唯一)應用。然而，雌激素血漿水平最多是雌激素受體上存在的雌激素水平的替代且血漿水平可能低於腫瘤自身內的水平、基本上與之相同或高於其水平。此外，內源性雌激素水平可能因應用阻斷雌激素受體的抗雌激素而升高(導致雌激素產生的反饋刺激)，同時雌激素水平可能因芳香酶抑制劑的應用而下降。當將兩類藥物共同使用時，對血漿水平的確切解釋變得不確定。當使用其中一種藥物幹擾另一種藥物的活性的方案、特別是當這種幹擾隨時間發生改變時這種解釋上的困難顯著加大。此外，腫瘤細胞對雌激素或雌激素類似物的敏感性也可以隨時間發生改變，使得雌激素血漿水平逐步下降可能仍然與顯著的腫瘤刺激作用相關。
我們現已發現在給予所述藥物組合之前考慮方案中每一種藥物的全部特徵而不只是活性純度或相對受體選擇性，會使得對雌激素敏感性疾病進行聯合藥物療法成為可能或得到明顯改善。這些特徵包括該方案中各藥物的吸收、分布、代謝和排洩，和對另一種藥物(或多種藥物)的潛在作用，以及可能存在的某些內分泌效應。解釋″抗雌激素療法″的僅有生化標記諸如血漿標記中的困難強調要適當選擇方案的重要性，從而使得吸收、分布、代謝和/或排洩中不希望發生的改變減少到最低限度或消除。
現有技術的缺陷不可避免地降低了治療有效性、增加了有效治療的成本、增加了毒副作用的危險並增加了治療這類副作用的成本。
本發明的另一個方面是治療患者的乳腺癌的方法或在易患乳腺癌的動物(優選人類女性)中預防乳腺癌的方法。該方法包括下列步驟對所述動物給予治療有效量的抗雌激素藥物且同時給予治療有效量的性類固醇酶抑制劑藥物，其中對所述的抗雌激素和酶抑制劑及其各自的劑量範圍進行選擇，使得對另一種藥物的吸收、分布、代謝和排洩(ADME)的物質幹擾最小。
本發明的另一個方面是優化對乳腺癌患者的治療的方法或優化對易患這類癌症的動物的癌症預防方案的方法。該方法包括下列步驟鑑定抗雌激素藥物和由此鑑定的抗雌激素的治療有效劑量範圍；測定所述抗雌激素在患者體內的ADME特徵的相關方面；鑑定性類固醇酶抑制劑藥物和由此鑑定的酶抑制劑的治療有效劑量範圍；測定由此鑑定的酶抑制劑的ADME特徵的相關方面；選擇抗雌激素和酶抑制劑及其各自的劑量範圍，使得一種藥物對另一種藥物在ADME特徵方面的物質幹擾最小；和對所述患者以適宜劑量共同給予所選擇的抗雌激素和酶抑制劑。
本發明的另一個方面是用於在需要治療的患者中治療乳腺癌或用於在易患癌症的患者中預防乳腺癌的藥盒，該藥盒包括提供治療有效量抗雌激素的一定劑型的抗雌激素藥物和治療有效量的性類固醇酶抑制劑藥物，其中對所述的劑型和各藥物的量進行選擇以使一種藥物對另一種藥物的ADME特徵的物質幹擾減到最小。
本發明的另一個方面是用於治療或預防乳腺癌的藥物組合物。該組合物包括治療有效量的抗雌激素藥劑和治療有效量的性類固醇酶抑制劑藥物，其中對各藥物的量進行選擇以使在患者體內一種藥物的ADME特徵與另一種藥物的ADME特徵之間的物質幹擾最小。
在閱讀本發明的詳細描述後其它方面將顯而易見。
詳細描述和目前優選的實施方案本發明部分基於對如何通過避免某些藥物-藥物相互作用或將其減到最小來鑑定某些有效的聯合用藥方案或使治療或預防癌症特別是乳腺癌的其它聯合用藥方案的有效性達到最大的發現。過去廣泛教導可以通過給予任意抗雌激素和任意其它激素類藥劑來治療乳腺癌和子宮內膜癌，所述的任意其它激素類藥劑諸如雄激素類藥劑、孕激素或催化由外周組織中的其前體通過非腎上腺機制合成性類固醇中步驟的酶的抑制劑(參見Labrie的美國專利No.5,550,107)。還可以使用其它藥劑。隨機組合因″發明背景″中所述的原因而不太可能產生有用的方案，因此研發在治療上有效的組合和劑量難以捉摸。我們認為預防或治療男性或女性患者中的乳腺癌可以通過考慮作為所述組合組成部分的抗雌激素與抑制劑(和其它藥劑)之間的相互作用而成為可能或得到優化。
乳腺癌的″治療″指的是施用本發明的聯合療法以減少癌症的存在(例如減小腫瘤大小)、預防癌症擴散(例如預防癌症蔓延)或使癌保持穩定。
乳腺癌的″預防″指的是施用本發明的聯合療法以預防易患這種疾病或處於這種疾病危險中的對象體內癌性疾病的發病或復發。
可以將本發明的一個方面看作鑑定對溫血動物中乳腺癌的聯合療法的方法。儘管本發明可用於可能發生乳腺癌的任何溫血動物，由於所治療的絕大多數病例是人類女性，所以本發明對人類女性患者最為有用。該方法包括鑑定抗雌激素和該抗雌激素的治療有效劑量範圍即表現出抗癌活性的劑量範圍。測定抗雌激素在患者體內的吸收、分布、代謝和排洩特徵的相關方面。鑑定至少一種具有腫瘤抑制活性的其它藥劑即性類固醇生物合成的抑制劑以及該另一種藥劑的劑量範圍。測定各藥劑幹擾另一種藥劑吸收、分布、代謝和排洩的程度並調整被選擇進行組合的兩種藥劑的劑量以使兩種藥劑的治療有效抗腫瘤活性最大，同時對所述藥劑的吸收、分布、代謝或排洩功能的物質幹擾程度最小。優選對所述的抗雌激素和另一種藥劑進行選擇從而對各藥劑的吸收、分布、代謝和排洩(ADME)沒有幹擾。所述的組合還可以包括雄激素、孕激素、糖皮質激素或生長激素分泌抑制劑、催乳素分泌抑制劑或ACTH分泌抑制劑，對其也進行選擇使得對ADME特徵的物質幹擾最小。
結合如何製備和應用本發明的教導，討論目前了解的使用腫瘤抑制性化合物(即表現出抗癌活性的化合物)治療乳腺癌背後的背景是有用的。
許多乳腺癌腫瘤是雌激素依賴性的，即存在激活發送腫瘤細胞增殖信號的受體的雌激素有助於這種腫瘤的生長。在抗雌激素存在的情況下，腫瘤生長得不會如此之快，可能根本不生長或可能縮小。抗雌激素是能夠例如通過與雌激素在細胞水平上競爭雌激素受體並阻斷該受體來阻止雌激素類激素對效應組織的生物學效應完全表達的物質。這類″抗雌激素″是阻斷靶細胞中雌激素受體的化合物且可以稱作雌激素受體阻斷劑或ERB。然而，雌激素可能仍然在患者組織中產生且某些雌激素可找到受體並仍然發送生長信號。因此，使用另一種腫瘤抑制劑的想法產生了，所述的另一種腫瘤抑制劑例如是催化產生可能適合於雌激素受體的性類固醇的酶的抑制劑(例如，參見美國專利US5,550,107)。如上所述，我們認識到的問題是抗雌激素與另一種藥劑會或可能干擾彼此的吸收、分布、代謝和排洩特徵且由此對組合中的各藥劑的有效性產生不利影響。我們對該問題的解決產生了保持有效性的非幹擾性組合，縮寫為″NCE″組合物。


圖1是可能在哺乳動物體內類固醇產生中起作用的實體的某些作用部位的示意圖。
在圖1中使用了下列縮寫ER雌激素受體AR雄激素受體PR孕酮受體GR糖皮質激素受體DHEAS硫酸脫氫表雄酮DHEA脫氫表雄酮DELTA.5-diol雄-5-烯-3β，17β-二醇DELTA.4-dione雄烯二酮E雌激素E1雌酮E217β-雌二醇T睪酮DHT二氫睪酮E2 S硫酸E2E1 S硫酸E1(1)LHRH-A促黃體生成素釋放激素興奮劑或拮抗劑；(2)ANTI-E抗雌激素(3)AND雄激素(4)PROG孕激素(5)17β-HSD17β-雌二醇類固醇脫氫酶或17β-羥基類固醇脫氫酶的抑制劑(6)ARO芳香酶活性抑制劑(7)3β-HSD3β-羥基類固醇，.DELTA.5-.DELTA.4異構酶抑制劑(8)INH腎上腺類固醇生成抑制劑(9)IPRL催乳素分泌抑制劑(10)IGH生長激素分泌抑制劑(11)IACTHACTH分泌抑制劑(12)NCE保持有效性的非幹擾性組合(13)LTED長期雌激素剝奪參照圖1，與各標出的受體相鄰的″+″和″-″表示該受體的活化是有助於腫瘤生長還是阻礙腫瘤生長。正如可以從圖1中觀察到的，雌激素受體的活化會刺激腫瘤生長並由此應進行阻止。然而，重要的是繼續激活其它受體，其活化可抑制腫瘤生長，例如雄激素受體、孕酮受體和糖皮質激素受體。
雌激素可通過多種途徑產生，所有這些途徑均可以受到垂體的影響。(1)促黃體生成素(LH)刺激卵巢釋放E2，然後E2藉助於芳香酶而代謝成雌激素；(2)LH刺激卵巢釋放DELTA 4-二酮，它隨後代謝成E1且進一步代謝為雌激素；(3)分泌促腎上腺皮質激素(ACTH)以刺激腎上腺產生DHEAS，它可以被代謝成為雌激素；(4)催乳素的分泌可以刺激腎上腺產生DHEAS且進一步代謝為雌激素。由此可見，存在多種阻斷雌激素產生以將雌激素受體可利用的量減到最小的途徑。
抑制雌激素受體活化的一種方法是用適合於包含在NCE方案中的有效的和適當選擇的抗雌激素化合物治療，所述的化合物對受體位點具有親和力從而其結合該受體位點並阻斷雌激素結合併活化該位點。選擇趨向於純拮抗劑且沒有興奮劑活性的抗雌激素可能有用，而條件是這種選擇保留建立NCE方案的有益效果。另外，純度和相對缺乏雌激素興奮劑活性可以如下所述由其它因素如一種或多種同時給予的藥物的ADME特徵或內分泌特徵上的改變來克服。抗雌激素的實例在下文詳細討論。
因為極難阻斷所有受體位點，所以需要同時降低可激活雌激素受體的雌激素濃度，即減少卵巢激素分泌。因此，需要抑制卵巢產生雌激素。在絕經後的女性中，卵巢功能實際上已經停止且因此一般不需要抗卵巢療法。然而，在絕經前的女性中，通過化學或手術方式抑制卵巢功能可能是有用的。可以通過給予諸如下文所述的適宜的促黃體生成素釋放激素(″LHRH″、也稱作GnRH或促性腺素釋放激素)興奮劑或拮抗劑而以化學方法實現。可以通過經卵巢切除術摘除卵巢而以手術方式實現。本發明的所有方面在絕經後的女性中特別有用。
正如可以從圖1的圖解所觀察到的，可以通過多種非腎上腺生物途徑將多種腎上腺釋放的性激素前體轉化成外周組織中的雌激素。在由此產生的激素前體中有17β-雌二醇和雄-5-烯-3β，17β-二醇。因此，非常需要包括催化由這類前體合成性類固醇中的步驟的酶的抑制劑。這類酶包括例如17β-雌二醇脫氫酶或17β-羥基類固醇脫氫酶。這類抑制劑會關閉圖1上垂直線5經過的表示為″17β-HSD″的合成途徑。由此實質上阻止了圖1上所示的兩種主要形式雌激素的合成。在治療中還優選包括諸如3β-羥基類固醇抑制劑或芳香酶活性抑制劑這樣的其它性類固醇形成抑制劑以關閉兩條水平線6和7分別經過的表示為″ARO″和″3β-HSD″的合成途徑。芳香酶是有助於使基本類固醇結構中的A環芳香化的酶。
從圖1中注意到芳香酶抑制劑的應用具有降低雌激素水平的作用，同時潛在地維持或甚至增加雄激素水平(雄激素前體不被轉化成相應的雌激素且由此保留為″可利用的″雄激素)。與雄激素分泌也受到抑制的情況相比，芳香酶抑制劑的應用(除抗雌激素之外)具有潛在地簡化該方案的附加有益作用，因為不需要給予外源性雄激素。通過選擇抗雌激素與適宜的酶抑制劑的組合而將不利的ADME相互作用減少到最低限度，可以獲得最佳組合物。
概括地說，鑑定動物乳腺癌聯合療法的方法包括下列步驟鑑定抗雌激素藥物和由此鑑定的抗雌激素的治療有效劑量範圍；測定對於動物所述抗雌激素的吸收、分布、代謝和排洩特徵的相關方面；鑑定性類固醇酶抑制劑藥物和由此鑑定的酶抑制劑的治療有效劑量範圍；測定由此鑑定的酶抑制劑在動物體內的吸收、分布、代謝和排洩特徵的相關方面；選擇各藥物和各藥物的劑量範圍，使得各藥物表現出有用的治療活性，而對另一種藥物的吸收、分布、代謝和排洩的幹擾最小。
根據我們對鑑定乳腺癌聯合療法的方式的發現，可以看到本發明的另一個方面。本發明的該方面是乳腺癌的治療方法。該方法特別用於激素分泌減少的女性患者，例如絕經後的女性、已經手術摘除卵巢的女性或已經通過化學方式抑制了卵巢功能的女性。該方法包括下列步驟給予治療有效量的抗雌激素藥物且同時給予治療有效量的具有腫瘤抑制活性的至少一種其它藥劑，其中對所述的藥劑和劑量範圍進行選擇以使一種藥劑的ADME特徵受另一種藥劑的物質幹擾最小。優選所述的另一種藥劑是性類固醇酶抑制劑。所述的另一種藥劑特別是芳香酶抑制劑。
一旦確定了這前兩種藥劑的組合，則使用如本文所述的ADME分析可包括其它藥劑。
可以包括在該治療方法中的其它藥劑包括適合適宜受體以輔助抑制癌生長的雄激素、孕激素或糖皮質激素。其它藥劑是生長激素分泌抑制劑、催乳素分泌抑制劑和促腎上腺皮質激素(ACTH)分泌抑制劑。後者具有阻止ACTH到達腎上腺且由此阻止腎上腺合成和分泌諸如雌激素合成中的前體DHEAS這樣的化合物的作用。可供選擇地，關閉腎上腺中合成途徑的抑制劑會產生相同的效果。當腎上腺分泌受到抑制或終止時，應加回基本必需的糖皮質激素作為該療法的組成部分。然而，所有這類添加必須考慮到在整體上實現NCE方案的要求，即將實體ADME特徵之中不利相互作用減少到最低限度的最優化組合。優化治療的方法或治療乳腺癌的方法至少採用兩種藥劑且可包括多種藥劑。
在本發明的另一個方面中，即在卵巢功能中斷(通過絕經自然發生、通過手術或通過其它方式)的人類女性中的乳腺癌治療中，該方法包括下列步驟對所述女性給予治療有效量的適當選擇的抗雌激素和適當選擇的另一種藥劑(例如抑制催化性類固醇形成的酶的抑制劑，諸如芳香酶抑制劑)以提供NCE方案。除在該治療方法中包括抗雌激素和酶抑制劑的實例外，可以加入至少一種其它化合物，包括雄激素、孕激素、糖皮質激素、催乳素分泌抑制劑、生長激素抑制劑或ACTH分泌抑制劑。還可以使用這類化合物的混合物。
在選擇NCE方案中的候選藥物並確定如何判定該治療方案中成分的水平的過程中，確定一種成分對另一種成分的ADME特徵的作用及選擇性地對內分泌譜的作用。評價候選藥物並按照表I中所示的等級進行選擇，優選較小數目和水平的幹擾。
評價各藥物對另一種藥物的ADME特徵的作用及選擇性地對內分泌譜的作用目的在於避免兩種藥物之間的物質幹擾。物質幹擾指的是一種藥物幹擾另一種藥物的ADME特徵或內分泌功能其程度足以顯著降低另一種藥物的功效和/或顯著增加另一種藥物的毒性。可以通過遵循以下討論中所列的分析避免物質幹擾。這種分析包括作為分析組成部分的內分泌譜。這是優選的但並非絕對需要。此外，還需要考慮在方案中聯用的分子的化學結構上的相似性或相異性和基礎藥物動力學參數(包括但不限於達到最高血漿水平的時間、吸收/分布/消除半衰期、器官清除途徑和程度、達到穩態的總時間)。吸收的相關方面包括諸如以下因素吸收途徑(例如口服)、定時的影響和可能影響血漿水平的食物或熱量攝入的量和類型。分布的相關方面尤其包括血漿蛋白結合的程度和特徵，而排洩的相關方面包括消除的主要途徑和是否存在腸肝循環。代謝的相關方面包括代謝或清除中涉及的主要酶、一種藥物的代謝酶是否被另一種藥物所誘導且處於何種劑量水平上、其它酶誘導物的作用、代謝物是否具有活性且處於何種相對水平上以及顯著的在進入全身之前的代謝的存在。內分泌作用的相關方面包括主要內分泌機制、反饋刺激或抑制是否發生以及主要內分泌機制的方向抑制是否有效。其它考慮因素包括器官(例如肝或腎)功能不全對ADME參數的影響、人口統計學因素(例如種族、性別、年齡)、諸如單核苷酸多態性或單元型或等位基因或染色體分布這樣的基因組因素。其它因素對本領域技術人員而言是顯而易見的。
正如表II中所示，存在5類可能的幹擾，包括幹擾吸收、分布、代謝、排洩或幹擾內分泌功能。幹擾可以單獨或以組合方式發生。以下代表可能的幹擾組合數，這對本領域技術人員而言是顯而易見的表I不同幹擾組合數
表II中顯示了可能的幹擾類別的更為詳細的描述。在表II中，相對方案中的一種其它候選藥物來考慮藥物。這是″一級″分級過程。一般來說，相對較大的等級順序，優選較小的等級順序，因為較小的數表示較小的幹擾類別數，但是不必對任意一種類別的幹擾程度進行定量。
表II幹擾組合
對考慮作為組合組成部分的單一藥物而言，優選相對分級為1的特徵對其它藥物的重要特徵沒有幹擾。因此，它是NCE方案成員的良好候選分子。就在所有類別均有幹擾的分級為6的藥物而言，該藥物不是NCE方案成員的好候選分子。
對各候選藥物重複分級過程。對兩種具有相同一級相對分級(2、3、4或5)的不同藥物而言，二級分級過程可能是必需的。
例如，考慮表III中的5種可能性，其中陽性類別數等於1(為清楚地在該類別之中進行比較，還用字母A-E標註每一類別)。
表III實例一種陽性幹擾類別
在每種情況中，均存在對5種類別之一的幹擾。在類別1-A中的相互作用可能導致抗腫瘤活性降低，這可能是不完全可糾正的，即使給予更高劑量的關注藥物，因為一種藥物因受到另一種藥物的物質幹擾而不被吸收。類別1-B可能與較低或較高的生物利用度(因體內分布不適當)且由此獲得藥物作用的成本分別較高或較低有關。是較低還是較高必須以合理的精確度進行測定或估計。幹擾分布的類別1-B最好通過活性藥物[或該活性藥物的活性代謝產物]的血漿或組織水平來判定。在類別1-C中，如果代謝加速，那麼1-C與1-A相似(可利用的母體藥物較少)，而如果代謝延遲，那麼1-C與如下所述的1-D更為相似。然而，如果代謝產物是活性部分，那麼加速的代謝也可產生與1-D中所述更為相似的結果。類別1-D通常與較高的生物利用度相關(即排洩的藥物較少，由此更多的藥物停留在系統中)且由此潛在地可給予較少量的藥物而獲得相同的作用。幹擾內分泌作用的類別1-E可能與1-A、1-B或1-C相似，其中對1-C而言活性部分的代謝加速。
一般來說，目標是在給予最少(且由此是最有成本效益的)量的藥物而獲得指定治療作用的類別中選擇藥物。在一個類別中的作用並不總是表示該類別中作用的大小，如果可能需要進行定量。
表IV實例兩種陽性幹擾類別
如果兩種類別受一種藥物影響，則分析變得更為複雜。在這些方案中，幹擾作用可能是附加的、協同的或拮抗的。例如，在2-A中，吸收減少和分布減少可能是不利的附加或協同性的(即更少的藥物到達靶部位)。然而，分布改變可能抗衡吸收減少。在2-B和2-C中，也可能因對代謝或排洩的幹擾而對抗吸收減少。在2-D中，所述的作用最有可能是不利的附加或協同性的(吸收較少和內分泌作用較少會″累加″以減少有益作用)。在2-E和2-F中，所述的作用可彼此發生相互抵消，不過，在某些情況下分布的改變可以與對代謝的幹擾累加。在2-G中，所述幹擾可能是相抵抗的或可能是附加或協同的以減少藥物作用，而在2-H中，附加或協同作用可實際上強化藥物作用。在2-I和2-J中，作用可以相互抵消。這種複雜性強調了本發明以最佳方式選擇藥物組合的基本性質。
如果來自標記為″幹擾組合″表II的各類別用數字和字母表示，那麼可以賦予各種幹擾組合一個可能的定性總體相互作用值，其中幹擾組合對作為相互作用對象的藥物的藥理活性具有總體上增加或正向(POS)的作用或總體上降低或負向(NEG)作用。然而，正如所注意到的，藥理活性的改變還可能伴隨毒理活性的改變。一種幹擾可以抵消即拮抗(ANT)另一種幹擾的作用也是可能的，從而使得總體POS作用或NEG作用在沒有對單一和組合形式的兩種藥劑的廣泛和定量的ADME數據的情況下變得更難以預計。參見表V。
表V相互作用組合對靶藥物的可能作用
儘管上表中所述的正向、負向或拮抗性相互作用在性質上是確切的，但是可能的情況是，一種幹擾在總體生物作用中佔優勢，使得潛在的拮抗作用可能難以僅基於定性來確定。如上所述，類別1或類別2藥物的總體幹擾作用可以大於類別3、4或5藥物的幹擾作用也是可能的，儘管後面的類別具有較大″數目″的幹擾作用。在這種情況下，更重要的是幹擾的淨量級和方向而非幹擾數目。這些相互作用的複雜性和潛在相互作用因素的數目進一步突顯了在乳腺癌聯合療法領域中如果已經如上所述對一種藥物進行了這類一種或多種藥物-藥物分析，那麼可以類似地分析考慮用於NCE方案中的下一種藥物。然後可以將在這種NCE方案分析框架內考慮的一種藥物的相對有益作用與也在同一分析框架內考慮的第二種藥物的相對有益作用進行比較。隨後可以進行相對危險評估、相對功效評價和相對物質成本評價並選擇最適宜的藥物組合。
任意兩種藥物之間的ADME和內分泌幹擾可以通過研究來自文獻或來自資料庫來源的信息或通過經驗方式即根據來自體外或體內試驗的信息來確定。
考慮用於測定ADME幹擾的工具包括在動物或人體內的藥物動力學和/或藥效學分析，其中使用對血液、血漿、組織或腫瘤水平的標準單一或多區室藥物動力學分析。在標準教科書中解釋了體內方法-然而，本領域技術人員會認識到雌激素的血漿水平(有時是藥物的血漿水平)僅是最終評價相對有效性和相對安全性的替代。
一旦收集了感興趣組合的定性和/或定量數據，則調整劑量以消除一種藥劑受到的來自另一種藥劑的幹擾或將這種幹擾減少到最低限度。
證實NCE算法應用的實際實例可見於將抗雌激素和芳香酶抑制劑組合用作晚期絕經後乳腺癌一線療法的觀念中。由於這些患者已經絕經，即她們的卵巢激素分泌減少，所以不會將與LH-RH興奮劑的聯用看作是對這種組合添加有益作用。Santen等在近來的公開文獻(Yue W，Berstein L，Wang J P，Santen R J，「長期雌激素剝奪(LTED)提高了乳腺癌細胞中的芳香酶活性」(Long term estrogen deprivation(LTED)enhances aromatase activity in breast cancer cells.)美國癌症研究協會第91屆年會會議錄(Proceedings，91st Annual Meeting of theAmerican Association for Cancer Research)，第41卷，摘要2376，2000)中使用在剝奪雌激素的培養基中培養的雌激素敏感性MCF-7乳腺癌細胞體外模型證實了這些細胞最初停止生長，而隨後表現出與在含雌激素的培養基中相當的生長率。這種模型模擬了臨床上使用的抗雌激素產生的生長抑制作用且提示剝奪雌激素的細胞保持對雌激素有反應，但可能需要低得多的量的雌激素用於增殖。由於作者發現LTED細胞中的芳香酶活性高於野生型MCF-7細胞中的芳香酶活性3-4倍，所以他們推斷LTED增量調節芳香酶。增強的芳香酶活性由此可能部分導致乳腺癌細胞適應低雌激素環境。
因此，在臨床前期支持了所提出的阻斷雌激素受體功能的抗雌激素與降低腫瘤芳香酶活性的芳香酶抑制劑的組合。如果嘗試鑑定最適合的藥物組合，則會迅速認識到目前臨床上存在兩種可得到的抗雌激素即他莫昔芬和託瑞米芬，以及包括來曲唑在內的4種芳香酶抑制劑。各藥物類別中的其它代表正處於臨床測試中。考慮這些化合物的組合有助於舉例說明NCE方案。
當單獨給予他莫昔芬和當將他莫昔芬與芳香酶抑制劑聯合給藥時觀察到了他莫昔芬對子宮興奮劑作用，這一結果表明由他莫昔芬產生的殘留興奮性雌激素信號既是可測定的和相關的而又不受添加芳香酶抑制劑所控制(Brodie A，Lu Q，Liu Y，Long B，Wang JP，Yue W.「使用腫瘤內芳香酶模型對絕經後乳腺癌的臨床前期研究」(Preclinicalstudies using the intratumoral aromatase model for postmenopausalbreast cancer.)-《腫瘤學》(Oncology(Hunting))；12(3增刊5)36-40，1998)。如果考慮的抗雌激素是託瑞米芬，那麼在臨床使用劑量下的殘留興奮性雌激素信號會如Di Salle等所證實(Di Salle E，Zaccheo T，Ornati G等「新型三苯乙烯衍生物託瑞米芬在大鼠體內的抗雌激素和抗腫瘤特性」(Antiestrogenic and antitumor properties ofthe new triphenethylene derivative toremifene in the rat.)-《類固醇生物化學雜誌》(Journal of Steroid Biochemistry.)36203-206，1990)比他莫昔芬低多達40倍。
他莫昔芬和來曲唑代表一種抗雌激素和芳香酶抑制劑的可能組合。然而，已經顯示並公開雌激素抑制作用沒有因這種組合而得到增強，結果他莫昔芬加上來曲唑的抗腫瘤作用低於預計。(Ingle JN，Suman VJ，Johnson PA，Krook JE，Mailliard JA，Wheeler RH，Loprinzi CL，Perez EA，Jordan VC，Dowsett M.「評價他莫昔芬+來曲唑，評估在患有轉移性乳腺癌的絕經後女性體內的藥物動力學相互作用」(Evaluation of tamoxifen plus letrozole with assessment ofpharmacokinetic interaction in postmenopausal women withmetastatic breast cancer.)-《臨床癌症研究》(Clin Cancer Res.)7月；5(7)1642-9，1999)。
此外，在與他莫昔芬的聯合療法過程中，來曲唑的血漿水平與單獨使用來曲唑的單一藥劑療法相比可平均下降37％且這種下降會在數月的聯合療法期間持續存在。(Dowsett M，Pfister C，Johnston SR等，「在患有乳腺癌的絕經後女性中他莫昔芬對芳香酶抑制劑來曲唑的藥物動力學和內分泌作用的影響」(Impact of tamoxifen on thepharmacokinetics and endocrine effects of the aromatase inhibitorletrozole in postmenopausal women with breast cancer.)-《臨床癌症研究》(Clin Cancer Res.)；5(9)2338-43，1999)。他莫昔芬和來曲唑共有多種已經證實受他莫昔芬所誘導的細胞色素p450同工酶(Nuwaysir E，Dragan YP，Jefcoate CR等「施用他莫昔芬對大鼠肝臟內異生素代謝酶表達的作用」(Effects of tamoxifen administration on theexpression of xenobiotic metabolizing enzymes in the rat liver.)-《癌症研究》(Cancer Res)；551780-89，1995)。與他莫昔芬的聯合療法可導致代謝增加。這種組合因幹擾代謝而是不利的。這種令人意外的他莫昔芬與另一種藥物的相互作用可能影響其它抗癌劑的功效。
上述實例還解釋了有關可能干擾的信息並非必須依賴於新產生的臨床前期或臨床數據而可能易於從公開的參考文獻中獲得。然而，為了使這類數據得到最佳應用，有必要使用本發明所述的方法。作為NCE方法的組成部分，要經深思熟慮來收集、查閱和應用可獲得的有用數據以改善對乳腺癌患者的療法。
在選擇用於NCE方案的組成藥物過程中，考慮和平衡被考慮包括在內的各藥物的下列特徵也是有用的蛋白質結合和賦形劑的濃度或量以及(如果有的話)賦形劑的活性。
在選擇用於本發明各方面中的活性劑的過程中，應考慮下文所列種類中的特定藥劑。抗雌激素用於本發明各方面中的抗雌激素化合物包括本領域中眾所周知的許多化合物。兩種優選的化合物是他莫昔芬和託瑞米芬以及這些化合物的可藥用鹽。目前這些化合物可以購得Astra ZenecaPharmaceuticals的Novaldex和Shire Pharmaceuticals的Fareston。
他莫昔芬的化學名是(Z)-2-[4-(1，2-二苯基-l-丁烯基)-苯氧基]-N，N-二甲基乙胺或1-對-β-二甲氨基乙氧基苯基-反式-1，2-二苯基丁-1-烯。其化學式為 託瑞米芬的化學名是(Z)-2-[4-(4-氯-1，2-二苯基-l-丁烯基)苯氧基]-N，N-二甲基乙胺。其化學式為 其它藥劑列在Labrie的美國專利No.5,550,107中，將該文獻引入本文作為參考。典型的合適抗雌激素包括那些甾類和非甾類抗雌激素，諸如(1RS，2RS)-4，4′-二乙醯氧基-5，5′-二氟-(1-乙基-2-亞甲基)二-間-亞苯基雙乙酸鹽(酯)，它可購自Biorex，商品名為Acefluranol；6α-氯-16α-甲基-孕-4-烯-3，20-二酮，它可購自Eli Lilly Co.，Indianapolis，Ind.，商品名為Clometherone；6-氯-17-羥基孕-1，4，6-三烯-3，20-二酮，可得到其乙酸鹽形式乙酸地馬孕酮；17-羥基-6-甲基-19-去甲孕-4，6-二烯-3，20-二酮，它可購自Theramex，商品名為Lutenyl；1-[2-[4-[1-(4-甲氧基苯基)-2-硝基-2-苯基乙烯基]苯氧基]乙基]-吡咯烷，其檸檬酸鹽可購自Warner-Lambert Co.的Parke-Davis Div.，Morris Plains，NJ.，商品名為檸檬酸硝米芬；取代的氨基烷氧基苯基烯類，諸如來自Stuart Pharmaceutical，Wilmington，Del.的他莫昔芬檸檬酸鹽(另外參見比利時專利No.637,389，1964 3月)；3，4-二氫-2-(對甲氧基苯基)-1-萘基-對-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]苯基酮，其甲烷磺酸鹽可購自EliLilly Co.，商品名為甲磺酸曲沃昔芬；1-[4′-(2-苯基)-bl-(3′-羥基苯基)-2-苯基-丁-1-烯，它可購自Klinge Pharma；[6-羥基-2-(對羥基苯基)-苯並(b)噻吩-3-基]-[2-(1-吡咯烷基)-乙氧基苯基]酮，它可購自Eli Lilly Co.(LY 117018)；[6-羥基-2-(4-羥基苯基)苯並(b)噻吩-3-基]-[4-(2-(1-哌啶基)乙氧基)苯基]甲酮，其鹽酸鹽可購自Eli Lilly Co.(LY156758)；美國專利No.4,094,994中所述的中-3，4-雙(3′-羥基苯基)己烷以及二甲基、二丙基和3′-乙醯氧基苯基類似物；和一系列1-苯基-烷烴和1-苯基-烯烴類，例如(E)-3-環戊基-1-(4-羥基苯基)-1-苯基-1-丁烯和2-環戊基-1-[4-羥基或甲氧基苯基]-3-苯基-2-丙烯-1-醇和FC-1157，其檸檬酸鹽可購自Farmos Group，Ltd.，Turku，Finland(另外參見歐洲專利申請EP.No.78,158)。優選使用表現出最小的部分雌激素興奮作用的抗雌激素。託瑞米芬和他莫昔芬是具有一定興奮劑活性的類別中優選的抗雌激素。
其它合適的抗雌激素還包括7α-取代的雌二醇(歐洲專利No.0138504)和帶有相似脂族側鏈的非甾類化合物(美國專利No.4,732,912)，將這兩篇文獻引入本文作為參考。
其它合適的抗雌激素可以通過進入PHARMAPROJECTS資料庫找到。例如PHARMAPROJECTS登錄號(PAN)28929指的是由Schering Plough研發的抗雌激素。其它化合物包括下列化合物PAN 24611其化學名為4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-7-(新戊醯氧基)-3-[4-(新戊醯氧基)苯基]-2H-1-苯並吡喃(編號EM-800)。其化學式為 PAN28952正由Schering AG研發的SH-646。PAN18136Ligand發明的Lasofoxifene。其化學名為5，6，7，8-四氫-6-苯基-5-(4-(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)苯基-(5R-順式)-2-萘醇，(S-(R*，R*))-2，3-二羥基丁二酸酯。其化學式為 PAN25625EntreMed正研發2-甲氧基雌二醇。其化學式為 PAN25983在Eli Lilly發明的LY-326391。其化學名為2-(4-甲氧基苯基)-3-(4-(2-(1-哌啶基)乙氧基)苯氧基)-苯並(b)噻吩-6-醇鹽酸鹽。其化學結構為 PAN13172由Dekk-Tec發明的A-007。其化學名為4，4′-二羥基二苯酮-2，4-二硝基苯基腙。其化學結構為 PAN28528由American Home Products發明且授權給Ligand的ERA 923。PAN15322由AstraZeneca發明的Fluvestront。其化學名為(7α，17β)-7-[9-[(4，4，5，5，5-五氟戊基)亞硫醯基]壬基]-雌-1，3，5(10)-三烯-3，17-二醇。其化學結構為 酶抑制劑用於本發明治療方案的性類固醇酶抑制藥物包括本領域中眾所周知的許多化合物。
可以將這些藥劑看作性類固醇生物合成的抑制劑且在本文中稱作性類固醇酶抑制劑。這類化合物是那些抑制由腎上腺和/或卵巢來源優選來源於卵巢和腎上腺兩者的前體類固醇生物合成性類固醇的化合物。其作用優選在外周組織中發揮，尤其是在乳腺和子宮內膜，且優選抑制芳香酶活性。後面這些化合物是芳香酶抑制劑。
性類固醇生物合成的抑制劑包括但不限於(i)通常稱作氨魯米特的3-(4-氨基苯基)-3-乙基-2，6-哌啶二酮，它是既是腎上腺來源又是卵巢和睪丸來源的性類固醇生物合成的抑制劑，可購自CibaPharmaceutical Co.，Summit N.J.，商品名為Cytadren；和(ii)既是睪丸又是腎上腺性類固醇生物合成的有效抑制劑-酮康唑，它可購自Janssen Pharmaceuticals，Piscataway，N.J.，商品名為Nizoral。其它抑制劑包括4-羥基雄烯二酮和FCE 34304。其它示例性化合物包括阿他美坦、依西美坦、安曲唑(anastrozole)、法倔唑、芬羅唑(finrozole)、來曲唑、伏氯唑或YM-511。這些化合物的化學名和結構如下阿他美坦1-甲基雄-1，4-二烯-3，17-二酮。 依西美坦6-亞甲基雄-1，4-二烯-3，17-二酮。 安曲唑(Anastrazole)α，α，α，α′-四甲基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基甲基)-1，3-苯二乙腈。 法倔唑4-(5，6，7，8-四氫咪唑並[1，5-a]吡啶-5-基)-苄腈一鹽酸鹽。 芬羅唑(Finrozole)4-(3-(4-氟苯基)-2-羥基-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-丙基)-苄腈。 來曲唑4，4′-(1H-1，2，4-三唑-1-基亞甲基)雙-苄腈。 伏氯唑6-[(4-氯苯基)-1H-1，2，4-三唑-1-基甲基]-1-甲基-1H-苯並三唑。 PAN 19816YM-511正由Yamanouchi研發。其化學名為4-[N-(4-溴苄基)-N-(4-氰基苯基)氨基]-4H-1，2，4-三唑。 當給予例如氨魯米特這樣的腎上腺性類固醇生物合成的抑制劑時，阻斷了皮質醇的生物合成。因此，優選給予足以維持正常糖皮質激素活性的生理量的糖皮質激素例如氫化可的松。還可以使用諸如地塞米松這樣的合成糖皮質激素。
3β-羥基類固醇或DELTA.5-.DELTA.4-同工酶活性的抑制劑諸如曲洛司坦、環氧司坦或4-MA也是有用的。諸如16-亞甲基雌酮和16-亞甲基雌二醇這樣的其它化合物作為17β-雌二醇脫氫酶的特異性抑制劑起作用(Thomas等，《生物學與化學雜誌》(J.Biol.Chem.)25811500-11504，1983)。雄激素雄激素是特別刺激雄性副性器官的活性和促進雄性性徵發育的激素。用於本發明治療方案的雄激素類藥劑包括本領域中眾所周知的許多化合物。
典型的合適雄激素尤其包括6-α-甲基，17-α-乙醯氧基孕酮或醋酸甲羥孕酮，可購自Upjohn和Farmitalia Carlo Erba，S.p.A，商品名為Provera和Farlutal，縮寫為MPA。
其它合適的雄激素包括可以描述為合成孕激素的某些化合物[參見Labria等(《生殖與不育》(Fertil.Steril.)3129-34，1979)]和促蛋白合成甾類(Raynaud和Ojasoo，《藥物研究中的創新手段》(Innovative Approaches in Drug Research.)Elsevier Sc.Publishers，Amsterdam，47-72頁，1986；Sandberg和Kirdoni，《藥物療法》(Pharmac.Ther.)36263-307，1988；以及Vincens，Simard和DeLignieres，Les Androgenes.在《臨床藥理學療法基礎》(Pharmacologie Clinique，Base de Therapeutique)中所述，第2版，Expansion Scientifique(Paris)，2139-2158頁，1988)、促蛋白合成甾類(Lamb，《美國運動醫學雜誌》(Am.J.Sports Medicine)12，31-38，1984；Hilf， R.「促蛋白合成雄激素甾類和實驗型腫瘤」(Anabolicandrogenicsteroids and experimental tumors.)，在(Kochachian，C.D.編輯)《實驗藥理學手冊》(Handbook of Experimental Pharmacology)中，第43卷，「促蛋白合成雄激素甾類」(Anabolic-Androgenic Steroids)，Springer-Verlag，Berlin，725頁，1976)。促蛋白合成甾類的實例包括卡普睪酮(7β，17α-二甲基睪酮)、氟甲睪酮(9α-氟-11β-羥基-17α-甲基睪酮)、17β-cyprionate睪酮、17α-甲基睪酮、Pantestone(十一酸睪酮)、DELTA.1-睪內酯(testololactone)和Andractim。某些雄激素也具有孕激素活性。孕激素孕激素是實現由孕酮產生的某些或全部改變的物質。通常合適的孕激素包括可購自Roussel-UCLAF的17，21-二甲基-19-去甲-4，9-孕二烯-3，20-二酮(″R5020，普美孕酮″)；可購自Schering Ag.的乙酸環丙孕酮(Androcur)；可特別購自Upjohn和Farmitalia，Calbo Erba的6-α-甲基，17-α乙醯氧基孕酮或醋酸甲羥孕酮(MPA)；可購自Shering的孕二烯酮；可購自Mead Johnson Co.，Evansville，Ind.商品名為Megace的醋酸甲地孕酮(magestrol)(17α-乙醯氧基-6-甲基-孕-4，6-二烯-3，20-二酮)。其它孕激素包括左炔諾孕酮(Levolorgestrel)、孕二烯酮、炔雌醇、3-酮基-炔雌醇、炔諾酮、炔諾酮、13α-乙基-17-羥基-18，19-二去甲-17β-孕-4，9，11-三烯-20-基-3-酮(R2323)、地美孕酮、三烯炔諾酮、孕二烯酮(gastrinone)、孕酮自身和下列文獻中所述的其它孕激素Raynaud和Ojasoo《類固醇生物化學雜誌》(J.SteroidBiochem.)25811-833，1986；Raynaud等，《類固醇生物化學雜誌》(J.Steroid Biochem.)12143-157，1980；Raynaud，Ojasoo和Labrie，「類固醇激素，興奮劑和拮抗劑」(Steroid Hormones，Agonists andAntagonists)，《類固醇作用機制》(Mechanisms of Steroid Action)(G.P.Lewis和M.Ginsburg，eds)，McMillan Press，London，145-158頁(1981)。催乳素分泌抑制劑催乳素分泌抑制劑是減少蛋白質激素催乳素從垂體腺產生的藥劑。實例是可購自Novartis的溴隱亭(Parlodel)。生長激素分泌抑制劑生長激素分泌抑制劑是減少蛋白質生長激素(也稱作促生長素)從垂體腺分泌的藥劑。實例包括生長抑素(可購自Novartis的Sandostatin)、溴隱亭和奧曲肽。ACTH分泌抑制劑ACTH分泌抑制劑是減少肽激素ACTH從垂體腺分泌的藥劑。實例是可購自Pharmacia/Upjohn的Solucortet。減少卵巢激素分泌如先前所述，本發明的各個方面對卵巢激素分泌減少的女性特別有用。本發明在卵巢激素分泌自然減少的絕經後女性中特別具有價值。另外可以通過手術摘除卵巢(卵巢切除術)或經給予有效量的可以是LHRH興奮劑或拮抗劑的LHRH類似物而以化學方式阻斷分泌來減少卵巢激素分泌。本發明在一個方面提供了治療溫血動物乳腺癌的方法，該方法包括下列步驟給需要這種治療的動物施用(作為NCE方案的組成部分)足以治療乳腺癌的用量的適當選擇的LHRH類似物、適當選擇的抗雌激素、至少一種適當選擇的性類固醇形成的抑制劑和任選地適當選擇的雄激素、孕激素、糖皮質激素或者催乳素分泌、生長激素分泌或ACTH分泌的抑制劑。
儘管LHRH類似物可以是LHRH興奮劑或LHRH拮抗劑，但是更優選應用LHRH興奮劑。LHRH類似物的實例包括亮丙瑞林、那法瑞林、戈舍瑞林、布舍瑞林等。
術語″LHRH興奮劑″指的是天然促黃體生成素釋放激素(LHRH)的合成類似物，例如下列結構的十肽L-焦穀氨醯基-L-組氨醯基-L-色氨醯基-L-絲氨醯基-L-酪氨醯基-甘氨醯基-L-亮氨醯基-L-精氨醯基-L-丙基甘氨醯基-NH2。合適的LHRH興奮劑包括由下列通式代表的九肽和十肽L-焦穀氨醯基-L-組氨醯基-L-色氨醯基-L-絲氨醯基-L-酪氨醯基-X-Y-精氨醯基-L-脯氨醯基-Z，其中X是D-色氨醯基、D-亮氨醯基、D-丙氨醯基、亞氨基苄基-D-組氨醯基、3-(2-萘基)-D-丙氨醯基、O-叔丁基-D-絲氨醯基、D-酪氨醯基、D-賴氨醯基、D-苯丙氨醯基或N-甲基-D-丙氨醯基且Y是L-亮氨醯基、D-亮氨醯基、Nα-甲基D-亮氨醯基、Nα-甲基-L-亮氨醯基或D-丙氨醯基且其中Z是甘氨醯基-NHR1或NHR1，其中R1是H、低級烷基或低級滷代烷基。低級烷基包括具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、戊基或己基、異丁基、新戊基等。低級滷代烷基包括含有滷素取代基的具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如--CF3、--CH2CF3、--CF2CH3。滷素指的是F、Cl、Br、I，優選Cl。
在優選的九肽中，Y是L-亮氨醯基，X是光活性D-型的色氨酸、絲氨酸(t-BuO)、亮氨酸、組氨酸(亞氨基苄基)和丙氨酸。
優選的十肽包括[D-Trp6]-LHRH，其中X-D-Trp、Y-L-亮氨醯基、Z-甘氨醯基-NH2；[D-Phe6]LHRH，其中X-D-苯丙氨醯基、Y-L-亮氨醯基且Z-甘氨醯基-HN3)；或[D-Nal(2)6]LHRH，它是[(3-(2-萘基)-D-Ala6]LH-RH，其中X-3-(2-萘基)-D-丙氨醯基、Y-L-亮氨醯基且Z-甘氨醯基-NH3)。
本發明範圍內有用的其它LHRH興奮劑是天然LH-RH的α-氮雜類似物，尤其是A.S.Dutta等在《藥物化學雜誌》(J.Med.Chem.)21，1018(1978)和美國專利No.4,100,274中公開的[D-Phe6，Azgly10]-LHRH、[D-Tyr(Me)6，Azgly10]-LHRH和[D-Ser-(t-BuO)6，Azgly10]-LHRH以及美國專利No.4,024,248和No.4,118,483中公開的那些化合物。
通常合適的LHRH拮抗劑包括J.Ercheggi等在《生物化學和生物物理學研究通訊》(Biochem.Biophys.Res.Commun.)100，915-920，(1981)中公開的[N-Ac-D-p-Cl-Phel，3，D-Phe3，D-Arg6，D-Ala10]LHRH；D.H.Coy等在《內分泌學》(Endocrinology)，1101445-1447，(1982)中公開的[N-Ac-D-p-Cl-Phe1，2，D-Trp3，D-Arg6，D-Ala10]LHRH；J.J.Nestor等在《類固醇生物化學雜誌志》(J.Steroid Biochem.)，20(No.6B)，1366(1984)中公開的[N-Ac-D-(3-(2-萘基)-Ala)1，D-p-Cl-Phe2，DTrp3，D-hArg(Et2)6，D-Ala10]-LHRH和[N-Ac-Pro1，D-p-F-Phe2，(D-(3-(2-萘基)Ala3，6]-LHRH；美國專利No.4,481,190(J.J.Nestor等)中公開的用作LHRH拮抗劑的LHRH的九肽和十肽類似物、高度限制的環狀拮抗劑類似物，J.Rivier在《類固醇生物化學雜誌》(J.SteroidBiochem.)，20，(No.6B)，1365(1984)中公開的環[.DELTA.3Pro1，D-p-Cl-Phe2，D-Trp3，5，N-Me-Leu7，β-Ala10]LHRH和A.Corbin等在《類固醇生物化學雜誌》(J.Steroid Biochem.)20(No.6B)1369(1984)中公開的[N-Ac-D-(3-(2-萘基)-Ala1，D-p-F-Phe2，D-Trp3，D-Arg6]-LHRH。
其它LHRH興奮劑和拮抗劑類似物公開在《LHRH及其類似物》(LHRH and its Analogues)中(B.H.Vickery等編輯，3-10頁(J.J.Nestor)，11-22頁(J.Rivier等)和23-33頁(J.J.Nestor等)。
可以通過Stewart等在「固相肽合成」(″Solid Phase PeptideSynthesis″)(1969年由Freeman Co.出版，San Francisco，第1頁)中所述的方法便利地製備用於本發明的LHRH興奮劑和拮抗劑，不過，也可以使用溶液合成法。
通過使用自動肽合成儀在諸如1％交聯Pro-Merrifield樹脂這樣的固體樹脂支持物上便利地裝配用於本發明的九肽和十肽。一般來說，在二環己基碳二亞胺催化的叔丁氧基羰基胺基酸與附在二苯甲基胺樹脂上的生長的肽偶聯的過程中使用肽領域中眾所周知的側鏈保護基。在每一階段使用三氟乙酸除去叔丁氧基羰基保護基。從所述樹脂上裂解九肽或十肽並通過使用HF脫保護。通過常用技術、例如凝膠過濾、HPLC和分配層析法和可選的凍幹法來純化粗肽。另外參見D.H.Coy等，《藥物化學雜誌》(J.Med.Chem.)19，423-452頁(1976)。
為了減少卵巢激素分泌，經非腸道(例如皮下、鼻內、肌內)給予適當選擇的LHRH興奮劑且各通過口服給予適當選擇的雄激素、適當選擇的抗雌激素和至少一種適當選擇的性類固醇形成的抑制劑。
除用於鑑定聯合療法的方法和治療乳腺癌的方法外，本發明的其它方面涉及使用相同ADME評價的預防方面。因此，一個方面是用於鑑定在易患乳腺癌的動物中預防乳腺癌的藥物組合的方法，該方法包括下列步驟鑑定抗雌激素藥物和由此鑑定的抗雌激素的治療有效劑量範圍；測定所述抗雌激素的吸收、分布、代謝和排洩特徵；鑑定性類固醇酶抑制劑藥物和由此鑑定的酶抑制劑的治療有效劑量範圍；測定由此鑑定的酶抑制劑的吸收、分布、代謝和排洩特徵；選擇各藥物和各藥物的劑量範圍，使得各藥物表現出有用的治療活性，而各藥物表現出對另一種藥物的吸收、分布、代謝和排洩的幹擾最小。
另一個方面是在易患乳腺癌的動物中預防乳腺癌的方法，該方法包括下列步驟
對所述動物給予治療有效量的抗雌激素藥物；和同時給予治療有效量的性類固醇酶抑制劑藥物，其中對所述的抗雌激素和所述的酶抑制劑及其各自的劑量進行選擇以使一種藥物對另一種藥物的吸收、分布、代謝和排洩的物質幹擾最小。
本發明的其它方面涉及優化對乳腺癌患者的治療的方法和優化對易患乳腺癌的動物的癌症預防方案的方法。在每種情況下，所述方法均包括下列步驟鑑定抗雌激素和由此鑑定的抗雌激素的治療有效劑量範圍；測定所述抗雌激素在患者體內的吸收、分布、代謝和排洩特徵；鑑定性類固醇酶抑制劑和由此鑑定的酶抑制劑的治療有效劑量範圍；測定由此鑑定的酶抑制劑的吸收、分布、代謝和排洩特徵；選擇抗雌激素和酶抑制劑及其各自的劑量範圍，使得一種藥物對另一種藥物在吸收、分布、代謝和排洩特徵方面的物質幹擾降到最小；和對所述患者以所選擇劑量共同給予所選擇的抗雌激素和酶抑制劑。
可以如前所述使用本文此前所述的其它藥劑(即雄激素、孕激素、糖皮質激素或者催乳素、ACTH或生長激素分泌的抑制劑)。
本發明的另一個方面涉及用於治療或預防乳腺癌方法中的藥盒。該藥盒包括提供治療有效量抗雌激素的一定劑型的抗雌激素藥物和治療有效量的性類固醇酶抑制劑藥物，其中對所述的劑型和各藥物的量進行選擇以使一種藥物對另一種藥物的吸收、分布、代謝和排洩特徵的物質幹擾最小。該藥盒還可以包括按照本發明方法使用所述組合治療患者的乳腺癌或在易患乳腺癌患者中預防這種癌症的標籤說明書。上文所述的其它藥劑可以以不幹擾存在的活性劑的ADME特徵的劑型和用量包括在該藥盒中。
本發明的另一個方面是用於治療或預防乳腺癌的藥物組合物，它包括治療有效量的抗雌激素藥物和治療有效量的性類固醇酶抑制劑藥物，其中對各藥物的量進行選擇以使患者體內一種藥物的吸收、分布、代謝和排洩特徵與另一種藥劑的吸收、分布、代謝和排洩特徵之間的物質幹擾最小。
因此，本發明提供了使用NCE方案有效治療乳腺癌的機制並提供了明顯不同於現有技術的教導，在現有技術中表面上相似的藥物類別組合可能且實際上已經產生了不最理想的功效或過度的副作用。
通過結合最佳阻斷雌激素形成和/或作用以及其它藥劑對乳腺和子宮內膜癌細胞生長的抑制作用，本發明提供了最大限度地抑制乳腺癌和子宮內膜癌生長的方法。
為了有助於確定治療效應，可以測量腎上腺和卵巢來源的性類固醇即前體類固醇、雄激素和雌激素的血漿濃度以及腫瘤大小。然而，適當選擇NCE方案(可預計結果更好)可能比應用雌激素血漿水平的替代標記更為有用。性類固醇濃度降低和腫瘤體積減小可表示成功的治療，例如根據本發明使用本文所述的活性化合物抑制腫瘤生長，不過，如果使用非NCE方案，那麼可以預計其水平相對升高。通過本領域技術人員眾所周知的標準方法測定腎上腺雄激素和雌激素諸如脫氫表雄酮(DHEA)、DHEA-S硫酸鹽(DHEAS)、雄-5-烯-3β，17β-二醇(.DELTA.′-二醇)和卵巢雌激素17β-雌二醇(E2)的濃度，參見例如F.Labrie等，《前列腺》(The Prostate)4，579-584，1983；Luthy等，《婦科學和內分泌學雜誌》(J.Gynecol.Endocrinol.)，1，151-158，1987)。
通過本領域技術人員眾所周知的標準物理方法測量腫瘤大小的改變，例如骨掃描、胸部X線、骨骼探查、超聲波檢查、核醫學掃描、計算機體層攝影、磁共振成象、正電子發射體層攝影、體格檢查等。
下列實施例提供了用於本發明的方法、過程、藥盒和組合物方面的代表性組合。
通過回顧上表中的ADME特徵可以觀察到阿他美坦(芳香酶抑制劑)和託瑞米芬(抗雌激素)之間存在最小的物質幹擾。就吸收而言，兩種藥物均通過口服吸收而僅阿他美坦受到食物影響，即高脂飲食增加其血漿水平。就分布而言，兩者均結合血漿蛋白，但各自結合不同的蛋白質。各藥物主要通過不同的途徑排洩，且託瑞米芬經歷腸肝循環，而阿他美坦並不經過這一循環。各藥物的主要酶促代謝如上所示有所不同且其它因素確定如果存在任何幹擾，那麼也應極小。就內分泌作用而言，阿他美坦的主要機制是酶抑制作用，而託瑞米芬的主要機制是受體阻斷。
該組合的有用方案是每天口服一次標準劑量的託瑞米芬和每天給予500mg的阿他美坦，優選在早晨給予300mg而在約12小時後的晚上給予200mg。
本領域技術人員還會認識到適當選擇的NCE方案也可用於治療或預防諸如子宮內膜癌這樣的其它類型癌症。本領域技術人員還將認識到必須使用本發明的一個或多個方面採用適宜藥物的合理組合以最佳方式治療或預防疾病(特別是絕經後女性的轉移性乳腺癌)。
本文所用的術語和描述是僅通過舉例說明列出的優選實施方案而並不用來限定本領域技術人員在實施本發明過程中認識到的可能進行的許多改變，本發明如以下權利要求所限定。
權利要求
1.鑑定用於治療動物乳腺癌的藥物組合的方法，該方法包括下列步驟鑑定抗雌激素藥物和由此鑑定的抗雌激素的治療有效劑量範圍；測定所述抗雌激素的吸收、分布、代謝和排洩特徵的相關方面；鑑定性類固醇酶抑制劑藥物和由此鑑定的酶抑制劑的治療有效劑量範圍；測定由此鑑定的酶抑制劑的吸收、分布、代謝和排洩特徵的相關方面；選擇各藥物和各藥物的劑量範圍，使得各藥物表現出有用的治療活性，而各藥物表現出對另一種藥物的吸收、分布、代謝和排洩的幹擾最小。
2.權利要求1所述的方法，其中所述的動物是人類女性。
3.權利要求2所述的方法，其中所述的人類女性表現出卵巢激素分泌減少。
4.權利要求3所述的方法，其中所述的人類女性是絕經後的女性。
5.權利要求2所述的方法，其中所述的聯合療法是用於預先未使用化學方法治療過乳腺癌的人類女性。
6.權利要求2所述的方法，其中所述的聯合療法是用於預先通過施用單獨的抗雌激素或單獨的酶抑制劑治療過乳腺癌的人類女性。
7.權利要求1所述的方法，其中所述的抗雌激素是他莫昔芬、託瑞米芬或EM-800。
8.權利要求1所述的方法，其中所述的酶抑制劑是芳香酶抑制劑。
9.權利要求8所述的方法，其中所述的芳香酶抑制劑是阿他美坦且所述的抗雌激素是託瑞米芬。
10.治療動物乳腺癌的方法，該方法包括下列步驟對所述動物給予治療有效量的抗雌激素藥物；和同時給予治療有效量的性類固醇酶抑制劑藥物，其中對所述的抗雌激素和酶抑制劑及其各自的劑量範圍進行選擇以使一種藥物對另一種藥物的吸收、分布、代謝和排洩(ADME)的物質幹擾最小。
11.權利要求10所述的方法，其中所述的動物是人類女性。
12.權利要求11所述的方法，其中所述的人類女性表現出卵巢激素分泌減少。
13.權利要求12所述的方法，其中所述的人類女性是絕經後的女性。
14.權利要求11所述的方法，其中所述的人類女性預先未使用化學方法治療過乳腺癌。
15.權利要求11所述的方法，其中所述的人類女性預先通過給予單獨的抗雌激素或單獨的酶抑制劑治療過乳腺癌。
16.權利要求10所述的方法，其中所述的抗雌激素是他莫昔芬、託瑞米芬或EM-800。
17.權利要求10所述的方法，其中所述的酶抑制劑是芳香酶抑制劑。
18.權利要求17所述的方法，其中所述的芳香酶抑制劑是阿他美坦
19.權利要求18所述的方法，其中所述的抗雌激素是託瑞米芬。
20.鑑定用於在易患乳腺癌的動物中預防乳腺癌的藥物組合的方法，該方法包括下列步驟鑑定抗雌激素藥物和由此鑑定的抗雌激素的治療有效劑量範圍；測定所述抗雌激素的吸收、分布、代謝和排洩特徵的相關方面；鑑定性類固醇酶抑制劑藥物和由此鑑定的酶抑制劑的治療有效劑量範圍；測定由此鑑定的酶抑制劑的吸收、分布、代謝和排洩特徵的相關方面；選擇各藥物和各藥物的劑量範圍，使得各藥物表現出有用的治療活性，而各藥物表現出對另一種藥物的吸收、分布、代謝和排洩的幹擾最小。
21.權利要求20所述的方法，其中所述的動物是人類女性。
22.權利要求21所述的方法，其中所述的人類女性表現出卵巢激素分泌減少。
23.權利要求22所述的方法，其中所述的人類女性是絕經後的女性。
24.權利要求21所述的方法，其中所述的組合是用於預先未使用化學方法治療過乳腺癌的人類女性。
25.權利要求21所述的方法，其中所述的人類女性預先通過給予單獨的抗雌激素或單獨的酶抑制劑治療過乳腺癌。
26.權利要求20所述的方法，其中所述的抗雌激素是他莫昔芬、託瑞米芬或EM-800。
27.權利要求20所述的方法，其中所述的酶抑制劑是芳香酶抑制劑。
28.權利要求27所述的方法，其中所述的芳香酶抑制劑是阿他美坦。
29.權利要求28所述的方法，其中所述的抗雌激素是託瑞米芬。
30.在易患乳腺癌的動物中預防乳腺癌的方法，該方法包括下列步驟對所述動物給予治療有效量的抗雌激素藥物；和同時給予治療有效量的性類固醇酶抑制劑藥物，其中對所述的抗雌激素和酶抑制劑及其各自的劑量進行選擇以使一種藥物對另一種藥物的吸收、分布、代謝和排洩的物質幹擾最小。
31.權利要求30所述的方法，其中所述的動物是人類女性。
32.權利要求31所述的方法，其中所述的人類女性表現出卵巢激素分泌減少。
33.權利要求32所述的方法，其中所述的人類女性是絕經後的女性。
34.權利要求31所述的方法，其中所述的組合是用於預先未使用化學方法治療過乳腺癌的人類女性。
35.權利要求31所述的方法，其中所述的組合是用於預先通過給予單獨的抗雌激素或單獨的酶抑制劑治療過乳腺癌的人類女性。
36.權利要求30所述的方法，其中所述的抗雌激素是他莫昔芬、託瑞米芬或EM-800。
37.權利要求30所述的方法，其中所述的酶抑制劑是芳香酶抑制劑。
38.權利要求36所述的方法，其中所述的芳香酶抑制劑是阿他美坦
39.權利要求37所述的方法，其中所述的抗雌激素是託瑞米芬。
40.優化對乳腺癌患者的治療的方法，該方法包括下列步驟鑑定抗雌激素和由此鑑定的抗雌激素的治療有效劑量範圍；測定所述抗雌激素在患者體內的吸收、分布、代謝和排洩特徵的相關方面；鑑定性類固醇酶抑制劑和由此鑑定的酶抑制劑的治療有效劑量範圍；測定由此鑑定的酶抑制劑的吸收、分布、代謝和排洩特徵的相關方面；選擇抗雌激素和酶抑制劑及其各自的劑量範圍，使得一種藥物對另一種藥物在吸收、分布、代謝和排洩特徵方面的物質幹擾降到最小；和對所述患者以所選擇劑量共同給予所選擇的抗雌激素和酶抑制劑。
41.權利要求40所述的方法，其中所述的動物是人類女性。
42.權利要求41所述的方法，其中所述的人類女性表現出卵巢激素分泌減少。
43.權利要求42所述的方法，其中所述的人類女性是絕經後的女性。
44.權利要求40所述的方法，其中優化的療法是用於預先未使用化學方法治療過乳腺癌的患者。
45.權利要求40所述的方法，其中優化的療法是用於預先通過給予單獨的抗雌激素或單獨的酶抑制劑治療過乳腺癌的患者。
46.權利要求40所述的方法，其中所述的抗雌激素是他莫昔芬、託瑞米芬或EM-800。
47.權利要求40所述的方法，其中所述的酶抑制劑是芳香酶抑制劑。
48.權利要求47所述的方法，其中所述的芳香酶抑制劑是阿他美坦。
49.權利要求48所述的方法，其中所述的抗雌激素是託瑞米芬。
50.優化在易患乳腺癌的動物中癌症預防方案的方法，該方法包括下列步驟鑑定抗雌激素和由此鑑定的抗雌激素的治療有效劑量範圍；測定所述抗雌激素在動物體內的吸收、分布、代謝和排洩特徵的相關方面；鑑定性類固醇酶抑制劑藥物和由此鑑定的酶抑制劑的治療有效劑量範圍；測定由此鑑定的酶抑制劑的吸收、分布、代謝和排洩特徵的相關方面；選擇抗雌激素和酶抑制劑及其各自的劑量範圍，使得一種藥物對另一種藥物在吸收、分布、代謝和排洩特徵方面的物質幹擾降到最小；和對所述動物以所選擇劑量共同給予所選擇的抗雌激素和酶抑制劑。
51.權利要求50所述的方法，其中所述的動物是人類女性。
52.權利要求51所述的方法，其中所述的人類女性表現出卵巢激素分泌減少。
53.權利要求52所述的方法，其中所述的人類女性是絕經後的女性。
54.權利要求51所述的方法，其中所述的女性預先未使用化學方法治療過乳腺癌。
55.權利要求51所述的方法，其中所述的女性預先通過給予單獨的抗雌激素或單獨的酶抑制劑治療過乳腺癌。
56.權利要求51所述的方法，其中所述的抗雌激素是他莫昔芬、託瑞米芬或EM-800。
57.權利要求50所述的方法，其中所述的酶抑制劑是芳香酶抑制劑。
58.權利要求57所述的方法，其中所述的芳香酶抑制劑是阿他美坦。
59.權利要求58所述的方法，其中所述的抗雌激素是託瑞米芬。
60.權利要求1、20、40或50所述的方法，進一步包括下列步驟鑑定選自雄激素、孕激素、糖皮質激素、催乳素分泌抑制劑、生長激素分泌抑制劑和ACTH分泌抑制劑的另一種藥劑；測定所述的另一種藥劑在動物體內的ADME特徵的相關方面；選擇所述的另一種藥劑及其治療有效劑量範圍，以將各藥劑之間ADME特徵的物質幹擾減到最小的方式將其與所述抗雌激素和酶抑制劑組合。
61.權利要求10或30所述的方法，進一步包括下列步驟同時給予治療有效量的選自雄激素、孕激素、糖皮質激素、催乳素分泌抑制劑、生長激素分泌抑制劑和ACTH分泌抑制劑的另一種藥劑；其中對所述的另一種藥劑及其劑量範圍進行選擇以將各藥劑之間ADME特徵的物質幹擾減到最小。
62.用於在需要治療的患者中治療乳腺癌的藥盒，該藥盒包括提供治療有效量的抗雌激素的一定劑型的抗雌激素藥物和治療有效量的性類固醇酶抑制劑藥物，其中對所述的劑型和各藥物的量進行選擇以使一種藥物對另一種藥物在吸收、分布、代謝和排洩特徵方面的物質幹擾最小。
63.權利要求62所述的藥盒，其中所述的抗雌激素是他莫昔芬、託瑞米芬或EM-800。
64.權利要求62所述的藥盒，其中所述的酶抑制劑是芳香酶抑制劑。
65.權利要求64所述的藥盒，其中所述的芳香酶抑制劑是阿他美坦。
66.權利要求65所述的藥盒，其中所述的抗雌激素是託瑞米芬。
67.權利要求62所述的藥盒，進一步包括治療有效量的另一種藥物，對其進行選擇使得其給藥量對所述抗雌激素和酶抑制劑的吸收、分布、代謝和排洩特徵的物質幹擾最小，且所述抗雌激素和酶抑制劑對該另一種藥物的吸收、分布、代謝和排洩特徵具有最小的物質幹擾；其中所述的另一種藥物是雄激素、孕激素、糖皮質激素、催乳素分泌抑制劑、ACTH分泌抑制劑或生長激素分泌抑制劑。
68.用於在易患乳腺癌的患者中預防乳腺癌的藥盒，該藥盒包括提供治療有效量的抗雌激素的一定劑型的抗雌激素藥物；和治療有效量的性類固醇酶抑制劑藥物，其中對所述的劑型和各藥物的量進行選擇以使一種藥物對另一種藥物在吸收、分布、代謝和排洩特徵方面的物質幹擾減到最小。
69.權利要求68所述的藥盒，其中所述的抗雌激素是他莫昔芬、託瑞米芬或EM-800。
70.權利要求68所述的藥盒，其中所述的酶抑制劑是芳香酶抑制劑。
71.權利要求70所述的藥盒，其中所述的芳香酶抑制劑是阿他美坦。
72.權利要求71所述的方法，其中所述的抗雌激素是託瑞米芬。
73.權利要求62所述的藥盒，進一步包括治療有效量的另一種藥物，對其進行選擇使得其給藥量對所述抗雌激素和酶抑制劑的ADME特徵具有最小的物質幹擾，且所述抗雌激素和酶抑制劑對該另一種藥劑的吸收、分布、代謝和排洩特徵具有最小的物質幹擾；其中所述的另一種藥劑是雄激素、孕激素、糖皮質激素、催乳素分泌抑制劑、ACTH分泌抑制劑或生長激素分泌抑制劑。
74.用於治療或預防乳腺癌的藥物組合物，它包括治療有效量的抗雌激素藥物和治療有效量的性類固醇酶抑制劑藥物，其中對各藥物的量進行選擇以使患者體內一種藥物的吸收、分布、代謝和排洩特徵與另一種藥劑的ADME特徵之間存在最小的物質幹擾。
75.權利要求74所述的組合物，其中所述的酶抑制劑是芳香酶抑制劑。
76.權利要求75所述的組合物，其中所述的芳香酶抑制劑選自阿他美坦、依西美坦、安曲唑、法倔唑、芬羅唑、來曲唑、伏氯唑或YM-511。
77.權利要求76所述的組合物，其中所述的芳香酶抑制劑是阿他美坦。
78.權利要求75所述的組合物，其中所述的抗雌激素是他莫昔芬、託瑞米芬或EM-800。
79.權利要求77所述的組合物，其中所述的抗雌激素是託瑞米芬。
全文摘要
本發明提供了增加用於治療雌激素敏感性疾病如乳腺癌的聯合藥物療法的有效性的方法以及用於治療這類疾病的新組合。
文檔編號A61P43/00GK1471400SQ01818171
公開日2004年1月28日 申請日期2001年10月3日 優先權日2000年10月6日
發明者M·S·莫蘭, P·蘭格科克, M S 莫蘭, 窨瓶 申請人:生物醫學公司