款冬素酯在製備抗癌藥物中的應用的製作方法

2023-10-05 20:43:14 1

本發明涉及中藥活性成分，特別涉及一種款冬素酯的新用途，具體是款冬素酯在製備抗癌藥物中的應用。

背景技術：

肺癌是一種常見的肺部惡性腫瘤，因其發病率和死亡率較高，成為對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。絕大多數肺癌起源於支氣管黏膜上皮。近50年來，隨著吸菸和各種環境因素的影響，世界各國特別是工業發達國家，肺癌的發病率和病死率均迅速上升，死於癌病的男性病人中肺癌已居首位。根據國家癌症中心近日發布《2013年中國惡性腫瘤發病和死亡分析》報告報告顯示，全國惡性腫瘤發病率及全國惡性腫瘤死亡排第1位的是肺癌，並且目前對肺癌的治療並不十分有效。因此，研發針對肺癌的有效治療藥物一直是醫藥界的研究熱點。

順鉑是一種廣泛應用於癌症治療的藥物，是肺癌化學藥物治療的經典藥物之一。但是癌細胞對順鉑可很快產生耐藥性，使後續療效降低。研究發現通過聯合用藥可以降低順鉑的耐藥性，增加其化療敏感性。

款冬素酯(farfaratine)是從中藥款冬花(tussilagofarfaral.)中分離出的一種活性單體成分。研究表明款冬素酯具有抑制血小板聚集的活性，但是未見其抗癌和增加化療藥物敏感性的作用報導。

技術實現要素：

本發明的目的是提供一種款冬素酯的醫藥新用途，以充分發揮款冬素酯的藥用價值。

本發明提供一種以款冬素酯為活性成分在製備抗癌藥物和抗癌輔助藥物中的應用。

所述款冬素酯的結構式如下：

所述款冬素酯採用現有技術製備得到。

本發明以款冬素酯為活性成分，採用llc小鼠肺癌細胞觀察款冬素酯對癌細胞的影響，發現款冬素酯抑制肺癌細胞增殖的ic50值為23.5μmol/l。40μmol/l的順鉑對llc小鼠肺癌細胞的抑制率為53.2％，與濃度為35μmol/l的款冬素酯聯合使用時，其對llc小鼠肺癌細胞的抑制率可提高到65.3％。說明款冬素酯作為活性成分可用於製備抗癌藥物和抗癌輔助藥物。

根據本發明的上述內容，還可將款冬素酯與其它中藥和/或化學藥物，共同組成中藥複方或中西藥複方製劑，並按照常規方法製成口服片劑、膠囊、口服液、注射液、外用洗劑等多種劑型，用於預防或治療癌症等疾病。

本發明的有益效果：本發明將款冬素酯作為活性成分用於製備抗癌和抗癌輔助藥物，具有明顯的抗癌效果。採用llc小鼠肺癌細胞觀察款冬素酯對癌細胞的影響，發現款冬素酯抑制肺癌細胞增殖的ic50值為23.5μmol/l。40μmol/l的順鉑對llc小鼠肺癌細胞的抑制率為53.2％，與濃度為35μmol/l的款冬素酯聯合使用時，其對llc小鼠肺癌細胞的抑制率可提高到65.3％。另外，還可將款冬素酯與其它中藥和/或化學藥物，共同組成中藥複方或中西藥複方製劑，用於預防或治療癌症等疾病。

具體實施方式

以下通過具體實施例，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明，但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實例。

實施例1款冬素酯的製備

取乾燥的款冬花750g粉碎，100％石油醚超聲提取100分鐘，提取液過濾，減壓濃縮得粗提取物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水(10:5:11:3)置於分液漏鬥中，靜置分層，上相為固定相，下相為流動相用泵將固定相灌滿分離柱，取粗提取物溶於上相中上樣，當高速逆流色譜儀主機轉速達到800rpm，以1ml/min流速泵入流動相，當流動相流出時根據檢測器圖譜收集目標成分，濃縮、乾燥。以石油醚-乙酸乙酯(45:1)為流動相對款冬素酯進行純化，即可得到純度98％的款冬素酯。

實施例2款冬素酯體外抑制llc肺癌細胞的實驗

藥品及試劑：款冬素酯按實施例1製備得到，為黃色油狀物；llc小鼠肺癌細胞，購自中國科學院細胞庫。

實驗方法：採用mtt法，款冬素酯用二甲基亞碸(dmso)配成100mmol/l溶液，4℃保存備用，臨用時培養液稀釋成所需濃度。在對數生長期的貼壁腫瘤細胞中加入胰酶，消化後，加入培養液(10％胎牛血清的dmem)，得細胞懸液(100000個/ml)，取96孔培養板，每孔接種100μl，培養24h。按實驗組和對照組分別更換等體積不同藥物濃度的培養液，每組6個平行，相同條件下培養24h。棄去上清液，每孔加入10μl新鮮配製的mtt(5mg/ml)，繼續培養4h後，終止培養，小心吸去孔內培養液，加入100μldmso溶解、振蕩、混勻，酶標法570nm下測定所得溶液光密度值，帶入公式求得不同濃度藥物作用後腫瘤細胞生長抑制率，計算半數抑制濃度ic50。實驗結果見表1。

表1款冬素酯對llc小鼠肺癌細胞的抑制率及半數抑制濃度(ic50，μmol/l)

實驗結果表明，款冬素酯對llc小鼠肺癌細胞有明顯抑制作用。

實施例3款冬素酯、順鉑聯合使用體外抑制llc小鼠肺癌細胞的實驗

藥品及試劑：款冬素酯按實施例1製備得到，為黃色油狀物；llc小鼠肺癌細胞，購自中國科學院細胞庫；順鉑，solarbio公司。

實驗方法：採用mtt法，款冬素酯、順鉑用二甲基亞碸(dmso)配成100mm溶液，4℃保存備用，臨用時培養液稀釋成所需濃度。在對數生長期的貼壁腫瘤細胞中加入胰酶，消化後，加入培養液(10％胎牛血清的dmem)，得細胞懸液(100000個/ml)，取96孔培養板，每孔接種100μl，培養24h。按實驗組和對照組分別更換得等體積的含藥培養液，每組設6個平行，相同條件下培養24h。棄去上清液，每孔加入10μl新鮮配製的mtt(5mg/ml)，繼續培養4h後，終止培養，小心吸去孔內培養液，加入100μldmso溶解、振蕩、混勻，酶標法570nm下測定所得溶液光密度值，帶入公式求得藥物作用後腫瘤細胞生長抑制率。實驗結果如下。

單獨使用濃度為40μmol/l順鉑時，其對llc小鼠肺癌細胞的抑制率為53.2％；將40μmol/l的順鉑與濃度為35μmol/l的款冬素酯聯合使用時，其對llc小鼠肺癌細胞的抑制率為65.3％。

實驗結果表明，款冬素酯與順鉑聯合使用可增強順鉑對llc小鼠肺癌細胞的抑制作用。