一種製備高純度鄰氯對硝基苯基-α-L-巖藻糖苷的方法
2023-10-29 13:41:37
專利名稱：一種製備高純度鄰氯對硝基苯基-α-L-巖藻糖苷的方法
技術領域：
本發明涉及用於α-L-巖藻糖苷水解酶底物的製備方法。
α-L-巖藻糖苷水解酶(α-L-fucohydrolase，AFU；EC 3.2.1.51)，是一種存在於生物體內的酸性水解酶。近年來的醫學研究表明，血清α-L-巖藻糖苷酶在診斷肝細胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)方面有重要價值。目前，用於α-L-巖藻糖苷水解酶測定的方法主要有(1)4-甲基傘形酮-α-L-巖藻糖苷(4Mu-α-L-Fuc)為底物的螢光法。(2)對硝基苯基-α-L-巖藻糖苷(PNP-α-L-Fuc)為底物的比色法。(3)鄰氯對硝基苯基-α-L-巖藻糖苷(CNP-α-L-Fuc)為底物的螢光法。方法一檢測靈敏度高，適用於微量生物樣品(如活檢組織、分離細胞、脊液和淚液等)以及極低AFU活性的樣品的分。但此法需要凝膠過濾除去幹擾物質及使用螢光分光光度計，使常規應用受到限制。後兩者為臨床上主要採用的方法，它系以巖藻糖苷為底物，在pH 5.0經AFU水解產生相應的酚(PNP或CNP)。此pH下在可見光區吸收並顯色來判定α-L-巖藻糖苷水解酶的存在(PNP需經鹼性緩衝液處理後顯色)。
Koichi等於1992年(Jpn.Kokai Tokkyo koho Jp 06,179,690)首次公開了鄰氯對硝基苯基-α-L-巖藻糖苷(CNP-α-L-Fuc)的合成。我們發現其合成方法有許多弊端難重複、易製得β-構型、產品純度不高。本發明報導了一種簡便製備高純度鄰氯對硝基苯基-α-L-巖藻糖苷的方法(如圖所示)。
下面結合實施例對本發明進行詳細的說明。
旋光度在25℃用自動旋光儀測得。1HNMR用Bruker ARX-400在CDCl3中測。化學位移以Me4Si為內標，以ppm為單位表示。質譜用時間飛行質譜(MALTI-TOF-MS)測定。薄層色譜(TLC)由HF254矽膠板上用30％(v/v)的硫酸甲醇溶液活紫外檢測器檢測。柱色譜採用100-200目的矽膠，以乙酸乙酯-石油醚為淋洗液。
(1)乙基3，4-二-氧-叔丁基二甲基矽烷基-1-巰-β-L-巖藻糖苷(2)的製備乙基1-巰-β-L-巖藻糖苷1(1.04克，5毫摩爾)溶在5毫升N，N-二甲基甲醯胺(DMF)中，在0℃下，依次加入咪唑(2.04克，30毫摩爾)和叔丁基二甲基氯矽烷(2.26克，15毫摩爾)。室溫下攪拌30分鐘後，加熱至40℃，繼續攪拌12小時。往反應體系中加50毫升水，用乙酸乙酯(3×50毫升)萃取；萃取液用無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑，用矽膠柱色譜純化分離，淋洗液為25/1石油醚/乙酸乙酯，得到漿狀物2(2.08克，78％)。旋光[α]D25+25(c2，CHCl3)；核磁δH(CDCl3)0.09，0.14，0.17(4s，12H，(CH3)2Si)，0.92，0.94(2s，18H，(CH3)3CSi)，1.23(d，3H，J 6.4Hz，H-6)，1.28(t，3H，J 7.4Hz，CH3CH2S)，2.60-2.75(m，2H，CH3CH2S)，3.44(dd，1H，J 9.1，2.7Hz，H-3)，3.56(q，1H，J 6.4，13.1Hz，H-5)，3.64(t，1H，J 9.0Hz，H-2)，3.78(d，1H，J 2.7Hz，H-4)，4.22(d，1H，J 9.1Hz，H-1)。
(2)鄰氯對硝基苯基3，4-二-氧-叔丁基二甲基矽烷基-α-L-巖藻糖苷(3)的製備化合物2(2.0克，3.73毫摩爾)和鄰氯對硝基苯酚(712毫克，4.1毫摩爾)混合，在油泵上減壓抽乾。在氮氣氛圍，-40℃下，此混合物溶於乾燥的二氯甲烷(8毫升)，依次加入N-碘代琥珀醯亞胺(840毫克，3.73毫摩爾)，三甲基矽基三氟甲磺酸酯(13微升，0.075毫摩爾)。上述反應條件下，攪拌約20分鐘，加入三乙胺中和反應至中性。減壓蒸除溶劑，用矽膠柱色譜純化分離，淋洗液為30/1石油醚/乙酸乙酯，得到漿狀物3(1.57克，65％)。旋光[α]D25-131(c 0.5，CHCl3)；核磁δH(CDCl3)0.02，0.11，0.12，0.17(4s，12H，(CH3)2Si)，0.85，0.96(2s，18H，(CH3)3CSi)，1.18(d，3H，J 6.5Hz，H-6)，3.92(br s，1H，H-4)，3.97(q，1H，J 6.5，13.1Hz，H-5)，4.11-4.13(m，2H，H-2，H-3)，5.52(d，1H，J 2.6Hz，H-1)，7.30(d，1H，J 9.2Hz，Ph)，8.13(dd，1H，J 9.2，2.7Hz，Ph)，8.30(d，1H，J 2.7Hz，Ph).
(3)鄰氯對硝基苯基-α-L-巖藻糖苷(4)的製備化合物3(1.0克，1.54毫摩爾)溶於2毫升吡啶和15毫升乙腈，在0℃下，加入15毫升氟化氫/吡啶混合溶液(70％，質量比)，攪拌1小時。然後，室溫攪拌約20小時，反應完全。減壓蒸除溶劑，用矽膠柱色譜純化分離，淋洗液為純乙酸乙酯，得到漿狀物4(334毫克，67.8％)。旋光[α]D25-153(c1，CHCl3)；核磁δH(CDCl3)1.31(d，3H，J 6.6Hz，H-6)，3.94(br s，1H，H-4)，4.01-4.10(m，3H，H-2，H-3，H-5)，5.71(d，1H，J 3.1Hz，H-1)，7.40(d，1H，J 9.2Hz，Ph)，8.18(dd，1H，J 9.2，2.7Hz，Ph)，8.32(d，1H，J 2.7Hz，Ph)；時間飛行質譜(MALTI-TOF-MS)計算值319.51[M]；測量值342.63[M+Na]。
權利要求
1.以矽烷基保護的巖藻糖硫代苷為供體，以三甲基矽基三氟甲磺酸酯(TMSOTf)和N-碘代琥珀醯亞胺(NIS)為催化劑，在二氯甲烷中製備高純度的鄰氯對硝基苯基α-L-巖藻糖苷的方法。特別是巖藻糖硫代苷為乙基3，4-二-氧-叔丁基二甲基矽烷基-1-巰基-β-L-巖藻糖苷。
2.權力要求1中的催化劑也可為單質碘。
3.權力要求1中的溶劑也可為乙腈、硝基甲烷等。
4.權力要求1中的反應溫度為-40℃-10℃。
全文摘要
本發明公開了以矽烷基保護的巖藻糖硫代苷為供體，以三甲基矽基三氟甲磺酸酯和N－碘代琥珀醯亞胺為催化劑、或以單質碘為催化劑，在二氯甲烷中製備高純度的鄰氯對硝基苯基－α－L－巖藻糖苷的方法。
文檔編號C07H15/203GK1521177SQ0310255
公開日2004年8月18日 申請日期2003年2月11日 優先權日2003年2月11日
發明者杜宇國, 顧國鋒 申請人:中國科學院生態環境研究中心