一種用酶法使大豆油中生成維生素a的方法
2023-10-18 01:36:24 2
一種用酶法使大豆油中生成維生素a的方法
【專利摘要】本發明提供了一種用酶法使大豆油中生成維生素A的方法。以植物油為載體，強化VA，可避免因食入過量引起中毒，也可達到降低維生素A缺乏症的發病率。由於人體不能直接合成va，e-胡蘿蔔素-15，15'-加氧酶可以將P-胡蘿蔔素裂解生成va，大豆三級油中含有一定量的e-胡蘿蔔素，即可利用此部分e-胡蘿蔔素在酶的催化下生成VA。所採用的酶是P-胡蘿蔔素-15，15'-加氧酶，該酶可以從動物體內提取，是生物酶因此對人體無危害。用e-胡蘿蔔素-15，15'-加氧酶催化大豆油中的e-胡蘿蔔裂解生成VA，為生產VA強化大豆油開闢了新的途徑。
【專利說明】-種用酶法使大豆油中生成維生素 A的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種用酶法使大豆油中生成維生素 A的方法。
【背景技術】
[0002] 維生素 A缺乏（vitamin A deficient, VAD)是世界範圍內，尤其是發展中國家最常 見的微量營養素缺乏症之一，婦女和兒童是最容易受VAD影響的人群。VAD除導致乾眼病 之外，還與機體免疫功能、兒童生長發育、缺鐵性貧血以及孕婦和胎兒健康有關。人體不能 自身合成維生素 A(VA),植物來源的β -胡蘿蔔素及其他胡蘿蔔素可在人體內合成維生素 Α。食品強化是提高人體維生素 A營養水平的理想方法之一。我國人民食用植物油主要用 於烹飪各種菜餚。以植物油為載體，強化VA，可避免因食入過量引起中毒，也不會因攝取不 足而達不到強化的目的。
[0003] 目前生產VA強化油的方法為在一級大豆油中，人工添加視黃醇乙酸酯和抗氧化 齊U。該發明是採用酶法作用於三級大豆油，將三級大豆油中的β_胡蘿蔔素轉化成VA。所 採用的酶是β -胡蘿蔔素_15，15< -加氧酶，該酶可以從動物體內提取，是生物酶對人體 無危害。該發明運用了大豆油的自身成分轉化VA，為生產VA強化油提供了新的途徑。
【發明內容】
[0004] 本發明利用大豆三級油中自有成分β-胡蘿蔔素通過β -胡蘿蔔素-15， 15'-加氧酶催化斷裂生成VA，使其反應直接在油相中進行。用酶法使大豆油中生成維生 素 A的方法通過以下步驟實現：一、β -胡蘿蔔素-15,15'-加氧酶的提取；二、β -胡蘿 卜素-15,15'-加氧酶催化大豆三級油生成VA。
[0005] 利用酶法轉化油中的β -胡蘿蔔素為VA與現有的VA強化油生產方法相比減少 了視黃醇乙酸酯和抗氧化劑添加量。而且β -胡蘿蔔素_15，15'-加氧酶是從動物體內 提取的生物酶，對人體沒有危害。
【具體實施方式】
【具體實施方式】 [0006] 一：一種用酶法使大豆油中生成維生素 A的方法通過以下步驟實 現。一、β -胡蘿蔔素-15,15'-加氧酶的提取：首先選用60日齡三黃雞，屠宰前一天，禁 食12h，自由飲水。取空腸，用冰冷的生理鹽水衝洗乾淨，用剪刀剖開腸道，取蓋玻片輕輕掛 下腸黏膜，將腸黏膜按1:5(W/V)的比例如加入pH7. 4的PBS緩衝液，於(TC勻漿，lOOOr/min 低溫離心30min，取上清。將酶液保存在-70°C下備用；二、β -胡蘿蔔素-15，15'-加氧 酶催化大豆三級油生成VA:取大豆三級油100g，加入一定量的β -胡蘿蔔素-15,15'-加 氧酶，60 r/min機械攪拌，在溫度40°C下加入脫氧膽酸鈉 ，Tween 40,水浴反應一段時間， 3500r/min離心20min，取上清樣測定油中VA含量。
[0007]
【具體實施方式】二：本實施方式與【具體實施方式】一的不同點在於步驟二中將油相中 β -胡蘿蔔素_15，15'-加氧酶添加量為0.59Γ3%，在此條件下進行大豆油生成VA其它步 驟與【具體實施方式】一相同。
【具體實施方式】 [0008] 三：本實施方式與一的不同點在於步驟二中將油相中 β -胡蘿蔔素_15，15'-加氧酶添加量為0.59Γ3%，反應溫度為30°C?50°C，在此條件下進 行大豆油生成VA其它步驟與一相同。
【具體實施方式】 [0009] 四：本實施方式與一的不同點在於步驟二中將油相中 β -胡蘿蔔素-15,15'-加氧酶添加量為0. 59Γ3%，反應溫度為30°C?50°C，反應時間為 4h~7h，在此條件下進行大豆油生成VA其它步驟與一相同。
[0010]
【具體實施方式】五：本實施方式與【具體實施方式】一的不同點在於步驟二中將油相中 β -胡蘿蔔素-15,15'-加氧酶添加量為0. 59Γ3%，反應溫度為30°C?50°C，反應時間為 4h~7h，脫氧膽酸鈉添加量為0. 019Γ0. 05%，在此條件下進行大豆油生成VA其它步驟與具體 實施方式一相同。
[0011]
【具體實施方式】六：本實施方式與【具體實施方式】一的不同點在於步驟二中將油相中 β -胡蘿蔔素-15,15'-加氧酶添加量為0. 59Γ3%，反應溫度為30°C?50°C，反應時間為 4h?7h，脫氧膽酸鈉添加量為0. 019Γ0. 05%，Tween 40添加量為0. 019Γ0. 05%，在此條件下進 行大豆油生成VA其它步驟與【具體實施方式】一相同。
[0012] 【具體實施方式】七：本實施方式與【具體實施方式】一的不同點在於步驟二中將由單因 素確定的結果再進一步優化得到固定化條件，優化的條件為β -胡蘿蔔素 -15，15'-加 氧酶添加量為〇. 59Γ3%，反應溫度為30°C?50°C，反應時間為4h?7h，脫氧膽酸鈉添加量為 0. 019Γ0. 05%，Tween 40添加量為0. 019Γ0. 05%，用優化結果進行大豆三級油中VA生成。在 最優狀態下VA最低含量為2mg/kg。其它步驟與【具體實施方式】一相同。
【權利要求】
1. 一種用酶法使大豆油中生成維生素 A的方法，其特徵在於用大豆油中生成維生素 A 的方法步驟如下： 步驟一 ：β -胡蘿蔔素-15,15'-加氧酶的提取，首先選用60日齡三黃雞，屠宰前一 天，禁食12h，自由飲水，取空腸，用冰冷的生理鹽水衝洗乾淨，用剪刀剖開腸道，取蓋玻片 輕輕掛下腸黏膜，將腸黏膜按1:5 (W/V)的比例如加入pH7. 4的PBS緩衝液，於0°C勻漿， lOOOr/min低溫離心30min，取上清，將酶液保存在-70°C下備用； 步驟二：β -胡蘿蔔素-15,15'-加氧酶催化大豆三級油生成VA:取大豆三級油 IOOg,加入一定量的β -胡蘿蔔素-15,15'-加氧酶，60r/min機械攪拌，在溫度40°C下 加入脫氧膽酸鈉 ，Tween 40,水浴反應一段時間，3500r/min離心20min，取上清樣測定油中 VA含量。
2. 根據權利要求1所述的一種酶法使大豆油中生成維生素 A的方法，其特徵在於步驟 二中油相中β -胡蘿蔔素_15，15'-加氧酶添加量為0.59Γ3%，在此條件下進行大豆油生 成VA其它步驟與【具體實施方式】一相同。
3. 根據權利要求1所述的一種酶法使大豆油中生成維生素 A的方法，其特徵在於步驟 二中油相中β -胡蘿蔔素-15,15'-加氧酶添加量為0. 59Γ3%，反應溫度為30°C?50°C， 在此條件下進行大豆油生成VA其它步驟與【具體實施方式】一相同。
4. 根據權利要求1所述的一種酶法使大豆油中生成維生素 A的方法，其特徵在於步驟 二中油相中β -胡蘿蔔素-15,15'-加氧酶添加量為0. 59Γ3%，反應溫度為30°C?50°C， 反應時間為4h~7h，在此條件下進行大豆油生成VA其它步驟與【具體實施方式】一相同。
5. 根據權利要求1所述的一種酶法使大豆油中生成維生素 A的方法，其特徵在於步驟 二中油相中β -胡蘿蔔素_15，15'-加氧酶添加量為0.59Γ3%，反應溫度為30°C?50°C， 反應時間為4h~7h，脫氧膽酸鈉添加量為0. 019Γ0. 05%，在此條件下進行大豆油生成VA其它 步驟與【具體實施方式】一相同。
6. 根據權利要求1所述的一種酶法使大豆油中生成維生素 A的方法，其特徵在於步驟 二中油相中β -胡蘿蔔素_15，15'-加氧酶添加量為0. 59Γ3%，反應溫度為30°C?50°C， 反應時間為4h?7h，脫氧膽酸鈉添加量為0. ΟΡ/ΓΟ. 05%，Tween 40添加量為0. ΟΡ/ΓΟ. 05%，在 此條件下進行大豆油生成VA其它步驟與【具體實施方式】一相同。
7. 根據權利要求1所述的一種酶法使大豆油中生成維生素 A的方法，其特徵在於步驟 二中將由單因素確定的結果再進一步優化得到條件，結果為β -胡蘿蔔素_15，15'-加 氧酶添加量為〇. 59Γ3%，反應溫度為30°C?50°C，反應時間為4h?7h，脫氧膽酸鈉添加量為 0. 019Γ0. 05%，Tween 40添加量為0. 019Γ0. 05%，用優化結果進行大豆三級油中VA生成。
【文檔編號】C12P23/00GK104212866SQ201410498788
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年9月26日 優先權日:2014年9月26日
【發明者】於殿宇, 劉天一, 孫賀, 江連洲 申請人:東北農業大學