一種電化學發光免疫分析的底物及其應用的製作方法
2023-10-05 14:05:24 2
一種電化學發光免疫分析的底物及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明一種電化學發光免疫分析儀分析的底物及其應用,涉及一種藉助於測定材料的化學或物理性質來分析材料的方法,其目的是為了提供一種製備方法簡單、使用方便,樣品檢測準確性和精密度高,保存時間長的電化學發光免疫分析儀分析的底物及其應用。本發明的電化學發光免疫分析底物包括兩部分:發光緩衝液和清洗液,本發明電化學發光免疫分析底物的應用包括以下步驟:電化學發光免疫底物的製備;將待測樣本、診斷試劑、電化學發光免疫底物置於羅氏電化學發光免疫分析儀中進行檢測。本發明的電化學發光免疫分析底物製備簡單、使用方便;本發明製得的發光底物不僅檢測數據的準確性、精密度和重複性高,且成本低。本發明應用於電化學發光免疫分析領域。
【專利說明】一種電化學發光免疫分析的底物及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種藉助於測定材料的化學或物理性質來分析材料的方法,特別是涉 及一種用電化學發光免疫分析儀分析樣品的方法。
【背景技術】
[0002] 電化學發光分析技術(ECL)是採用三聯吡啶釕[Ru (bpy)3]2+直接標記在抗原或抗 體上作為標記物,在電極表面由電化學引發特異性化學發光反應。其化學發光主要是標記 物中的[Ru(bpy)3]2+和電子供體三丙胺(TPA*)在陽電極表面同時各失去一個電子發生氧 化反應。二價的[Ru (bpy) 3] 2+被氧化成三價,TPA被氧化成陽離子自由基TPA+,並迅速自 發地脫去一個質子(H+),形成自由基TPA:由於[Ru(bpy)3]3+是強氧化劑,自由基TPA?是 強還原劑,兩個高反應基團在電極表面迅速反應,[Ru(bpy)3]3+被還原形成激發態的二價 [Ru(bpy)3]2+,TPA ?自身被氧化成二丙胺和丙醛。激發態的[Ru(bpy)3]2+衰減成基態的 [Ru (bpy) 3]2+時發射一個波長620nm的光子。這一過程在電極表面周而復始地進行,產生許 多光子,光強度與[Ru(bpy)3]2+的濃度呈線性關係,據此測出待配體的含量。但在發光啟動 過程中,其關鍵必須加入發光增強劑,如Triton X-100, CTAC,Tween-20等乳化劑(表面活 性劑)增加百倍級的發光的強度,方可進行儀器計數,才能實用化。
[0003] 德國羅氏(Roche)電化學發光免疫分析法具有快速、敏感性高和穩定強等特點, 已被廣泛應用於我國臨床上的日常醫學檢驗中,羅氏電化學發光免疫分析儀和其配套的診 斷試劑、發光緩衝液(ProCell)和清洗液(CleanCell)在全國各地醫院消耗量巨大,特別是 Roche的ProCell和CleanCell不僅是專利保密,其試劑價格也較貴,一套約需1800元左 右。為此,研製電化學發光免疫分析系統中的ProCell和CleanCell液,替代進口的羅氏的 ProCell和CleanCell液,不僅可替代國外產品,亦可提高我國診斷試劑製備水平;應用於 我國臨床上醫學檢驗中,使之國產化,降低成本,具有一定的現實臨床意義和經濟效益。
【發明內容】
[0004] 本發明要解決的技術問題是提供一種成本低、使用方便的電化學發光免疫分析的 底物及其應用。
[0005] 本發明一種電化學發光免疫分析的底物,包括兩部分:發光緩衝液和清洗液;其 中,發光緩衝液包括:質量濃度為4. 826 %的無水Na2HPO4,體積濃度為2. 6 %的三丙胺,體 積濃度為〇. 1 %的NP-40 ;清洗液包括:質量濃度為0. 953%的K0H,體積濃度為0. 75%的 NP-40。
[0006] 本發明一種電化學發光免疫分析的底物的應用,其作為電化學發光免疫分析儀中 的底物。
[0007] 進一步,本發明一種電化學發光免疫分析的底物的應用,按以下步驟進行:
[0008] -、發光緩衝液的製備:將所述的發光緩衝液中的各成分混勻,即製得發光緩衝 液;
[0009] 二、清洗液的製備:將所述的清洗液中的各成分混勻,即製得清洗液;
[0010] 三、在室溫條件下,將步驟一製得的發光緩衝液(ProCell)和步驟二製得的清洗 液(CleanCell),分別放置在羅氏電化學發光免疫分析儀的ProCell和CleanCell指定位置 上;
[0011] 四、將待測樣本和診斷試劑放在羅氏電化學發光免疫分析儀的指定位置上,啟動 羅氏電化學發光免疫分析儀的自動檢測程序,即可進行檢測;
[0012] 五、檢測完畢,讀取結果。
[0013] 本發明一種用電化學發光免疫分析儀分析樣品的方法中,所述的發光緩衝液和清 洗液為電化學發光免疫分析的底物,所述清洗液中所述的NP-40為乳化劑。
[0014] 本發明一種用電化學發光免疫分析儀分析樣品的方法具有如下有益效果:
[0015] 1、本發明中發光緩衝液(ProCell)和清洗液(CleanCell)是電化學發光免疫分析 系統中的底物,其合成成本低,製備簡便。本發明是一種應用於各種抗原、半抗原、抗體、激 素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術。採用本發明的方法進行檢測分析,與採用 羅氏原裝ProCell與CleanCell液進行測定所得結果無顯著差異,同時降低了成本,從而具 有一定的現實臨床意義和經濟效益。
[0016] 2、本發明中製備的發光緩衝液的三丙胺作為電子供體,清洗液中採用乙基苯基聚 乙二醇(Nonidet P-40,簡稱NP-40)作為發光啟動過程中的發光增強劑,NP-40與三丙胺協 同作用於三聯吡啶釕,得以保證電化學發光反應的高效和穩定,而且避免了本底噪聲幹擾。
[0017] 3、本發明的用電化學發光免疫分析儀分析樣品的方法中的發光緩衝液與清洗液, 保存時間長,可達到12個月以上。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合實施例和驗證試驗對本發明的一種電化學發光免疫分析的底物及其應 用作進一步的說明。
[0019] 實施例
[0020] 本實施例一種電化學發光免疫分析的底物的應用,包括以下步驟:
[0021] 一、發光緩衝液(ProCell)的製備:
[0022]
【權利要求】
1. 一種電化學發光免疫分析的底物,其特徵在於包括兩部分:發光緩衝液和清洗液; 其中,發光緩衝液包括:質量濃度為4. 826%的無水Na2HP04,體積濃度為2. 6%的三丙胺,體 積濃度為〇. 1 %的NP-40 ;清洗液包括:質量濃度為0. 953%的KOH,體積濃度為0. 75%的 NP-40。
2. -種權利要求1所述的一種電化學發光免疫分析的底物的應用,其特徵在於:作為 電化學發光免疫分析儀中的底物。
3. -種權利要求2所述的一種電化學發光免疫分析的底物的應用,其特徵在於:按以 下步驟進行: 一、 發光緩衝液的製備:將所述的發光緩衝液中的各成分混勻,即製得發光緩衝液; 二、 清洗液的製備:將所述的清洗液中的各成分混勻,即製得清洗液; 三、 在室溫條件下,將步驟一製得的發光緩衝液和步驟二製得的清洗液,分別放置在羅 氏電化學發光免疫分析儀的發光緩衝液和清洗液的指定位置上; 四、 將待測樣本和診斷試劑放在羅氏電化學發光免疫分析儀的指定位置上,啟動羅氏 電化學發光免疫分析儀的自動檢測程序,即可進行檢測; 五、 檢測完畢,讀取結果。
【文檔編號】G01N33/53GK104360051SQ201410709517
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年11月28日 優先權日:2014年11月28日
【發明者】劉軍, 田恩江, 張靜, 李小永 申請人:天津華信康達科技有限公司, 張靜, 李小永