免疫學診斷蛋白晶片及其製備方法
2023-10-25 03:43:42 1
專利名稱：免疫學診斷蛋白晶片及其製備方法
技術領域：
本發明涉及醫學診斷，尤其涉及一種免疫學診斷蛋白晶片及其製備方法。
現行的生物晶片一般為基因晶片。蛋白質的固定難度大、蛋白晶片的製備工藝複雜、成本昂貴。蛋白晶片目前都是以膜為介質，如PVDF膜，NC膜，不易操作。現有的檢測特異蛋白的技術，如ELISA，放射免疫方法，Westernblot，存在操作繁雜，所需時間長，同位素汙染等。
本發明的目的是提供一種大規模集成化，工藝簡單，準確定位，快速反應，且價格低廉，並能平行，多重分析的免疫學診斷蛋白晶片及其製備方法。
為了達到上述目的，本發明採取下列措施；免疫學診斷蛋白晶片是在玻片、矽片、膜、高分子材料載體上固定特異性單克隆抗體，所說的特異性單克隆抗體為CD1，CD2，CD3，CD4，CD5，CD7，CD8，CD10，CD13，CD14，CD16，CD19，CD22，CD23，CD25，CD34，CD38，CD41，CD56，及陽性和陰性對照Kappa，Lambada，MPO，NSE，NK cell marker，plasma cell marker，β-Tubulin和BSA。
免疫學診斷蛋白晶片的製備方法是將0.1～10ng CD系列單克隆抗體用1～100μl的0.1～1.0M包含羥基和胺基的雙官能團化合物加0.05～0.5M醋酸鹽或磷酸鹽混合液點樣於用戊二醛或多聚賴氨酸或小牛血清蛋白或親和素處理過的玻片、矽片、膜、高分子材料載體上，室溫過夜後，用1～100μl的0.1～1.0M包含羥基和胺基的雙官能團化合物加0.05～0.5M醋酸鹽或磷酸鹽混合液室溫封閉0.5～4小時，用0.01～0.1M PB緩衝液衝洗乾燥，0～4℃保存待用。
本發明的免疫學診斷蛋白晶片是在玻片、矽片、膜、高分子材料載體上用高密度陣列點樣儀形成蛋白微陣列，用螢光標記的蛋白與固定在載片上的抗體發生特異結合反應，用螢光掃描方法檢測免疫信號，因此可同時檢測多種蛋白及蛋白表達(見
圖1)。具有快速，準確，平行，多重分析特點，檢測時間可縮短至2小時內完成。該晶片可用於免疫系統疾病診斷和白血病分型及蛋白表達研究。
下面結合附圖和實施例對本發明作詳細說明。
圖1是免疫學診斷蛋白晶片示意圖；圖2是CD系列單克隆抗體蛋白晶片陣列圖；圖3是免疫學診斷蛋白晶片結果圖。
實施例1材料與方法a.CD系列單克隆抗體CD1，CD2，CD3，CD4，CD5，CD7，CD8，CD10，CD13，CD14，CD16，CD19，CD22，CD23，CD25，CD34，CD38，CD41，CD56，及陽性和陰性對照Kappa，Lambada，MPO，NSE，NK cell marker，plasma cell marker，β-Tubulin和BSA。b.細胞株HL-60，K562，Jurkat，NB4培養細胞的膜蛋白抽提與螢光標記所有培養細胞將細胞數調整到2×107，用2％TritonX-114抽提膜蛋白，用終濃度為5ug/ml FITC(fluorescein isothiocyante)，或終濃度為2.5ug/ml FSE(fluoresceinsuccinimidyl ester)標記膜蛋白，標記反應在室溫為一小時，用透析或離心法去除游離的螢光素。CD系列單克隆抗體的固定將CD系列單克隆抗體1μl(10ng)與1μl的0.5M胺基乙醇加CCB(cyanoborohydride coupling buffer)加0.1M醋酸鉀混合液混合按一定的格式用陣列點樣儀點於胺基或多聚賴胺酸處理的玻璃載片上(見圖2)，40ng的BSA為陰性對照，室溫過夜後，用2μl的0.5M胺基乙醇加CCB(cyanoborohydridecoupling buffer)加0.1M醋酸鉀混合液室溫封閉1小時，0.01M PBS緩衝液衝洗乾燥，4℃保存待用。免疫反應及信號掃描取10μl螢光標記的膜蛋白於CD蛋白晶片上，室溫1小時，水衝洗乾燥。螢光掃描，並採用軟體分析圖像結果。CD系列單克隆抗體陽性為綠色螢光點，陰性無螢光點(見圖3)。
權利要求
1.一種免疫學診斷蛋白晶片，其特徵在於在玻片、矽片、膜、高分子材料載體上固定特異性單克隆抗體，所說的特異性單克隆抗體為CD1，CD2，CD3，CD4，CD5，CD7，CD8，CD10，CD13，CD14，CD16，CD19，CD22，CD23，CD25，CD34，CD38，CD41，CD56，以及陽性和陰性對照Kappa，Lambada，MPO，NSE，NK cell marker，plasma cell marker，β-Tubulin和BSA。
2.根據權利要求1所述的免疫學診斷蛋白晶片，其特徵在於所說的玻片、矽片、膜、高分子材料載體上固定有5～200個針對白細胞表面分化簇類抗原的特異性CD單克隆抗體。
3.一種免疫學診斷蛋白晶片的製備方法，其特徵在於將0.1～10ng CD系列單克隆抗體用1～100μl的0.1～1.0M包含羥基和胺基的雙官能團化合物加0.05～0.5M醋酸鹽或磷酸鹽混合液點樣於用戊二醛或多聚賴氨酸或小牛血清蛋白或親和素處理過的玻片、矽片、膜、高分子材料載體上，室溫過夜後，用1～100μl的0.1～1.0M包含羥基和胺基的雙官能團化合物加0.05～0.5M醋酸鹽或磷酸鹽混合液室溫封閉0.5～4小時，用0.01～0.1M PBS緩衝液衝洗乾燥，0～4℃保存待用。
4.根據權利要求3所述的一種免疫學診斷蛋白晶片的製備方法，其特徵在於將CD系列單克隆抗體0.1～10ng與1～100μl的0.1～1.0M胺基乙醇加cyanoborohydride coupling buffer加0.05～0.5M醋酸鉀混合液混合點樣於用戊二醛或多聚賴氨酸處理過的載體上，室溫過夜後，用1～100μl的0.1～1.0M胺基乙醇加cyanoborohydride coupling buffer加0.05～0.5M醋酸鉀混合液室溫封閉0.5～4小時，用0.01～0.1M PBS緩衝液衝洗乾燥，0～4℃保存待用。
全文摘要
本發明公開了一種免疫學診斷蛋白晶片及其製備方法。蛋白晶片是在玻片、矽片、膜、高分子材料載體上固定CD1,CD2等5～200種特異性單克隆抗體及其陽性和陰性對照,它是將單克隆抗體用化學方法固定於經過戊二醛或多聚賴氨酸或小牛血清蛋白或親和素處理過的載體上。本發明可同時檢測免疫白細胞的表面抗原分型及多種蛋白表達水平。具有快速,準確,平行,多重分析特點,該晶片可用於免疫系統疾病診斷和白血病分型及蛋白表達研究。
文檔編號G01N33/68GK1351259SQ0013379
公開日2002年5月29日 申請日期2000年10月31日 優先權日2000年10月31日
發明者楊夢甦 申請人:楊夢甦