香雪蘭體外簡化培養的方法
2023-10-24 01:23:22 1
專利名稱：香雪蘭體外簡化培養的方法
技術領域：
本發明屬花卉栽培繁殖方法特別涉及香雪蘭組織培養簡化的方法。
背景技術：
植物組織培養既植物無菌培養技術，是根據植物細胞具有全能性的理論利用植物體離體 的器官、組織、細胞作為外植體，在無菌和適宜的人工培養基及光照和溫度條件下，能誘 導出愈傷組織、不定芽、不定根，最後形成完整的植株。組織培養是在無性繁殖、花卉育 種、植株脫病毒和種質保存等方面廣泛採用的一種技術。植物組織培養技術發明以來已經
取得了很大的進展，自上世紀60年代法國的Morel用莖尖培養的方法大量繁殖蘭花獲得成 功以後，植物組織培養已經從實驗室研究階段一躍而成為一種大規模成批量的工廠化生產 方法。無性繁殖系快速繁殖的生產、試管品種的商品化，是目前植物組織和細胞培養技術 在應用上的主流之一。而組織培養產業化的關鍵是培養成本的降低。近20年，人們在組 織培養的成本和經濟效益方面做了許多研究，並取得了一定的成果。
香雪蘭(Freesia)又名小蒼蘭，鳶尾科香雪蘭屬多年生球根草本花卉植物，原產於非 洲南部好望角，現世界各地都有種植，是世界十大名貴切花之一。香雪蘭由於其花期較早， 花色豔麗，花宜宜人，插花期長而越來越受到世人的喜愛，其需求量也逐年上升。種子繁 殖和種球繁殖是香雪蘭的傳統繁殖方式種子繁殖所需要的周期時間長；種球繁殖繁殖率 低且存在退化現象，這兩種方法都不適合香雪蘭的大量生產。長期以來，世界各地不斷嘗 試各種手段進行香雪蘭的快速繁殖，以滿足人們日益增長的市場需求，而在短時間內培養 出大量優質香雪蘭的唯一途徑就是組織培養。王麗發明的香雪蘭的快速繁殖技術(專利號 ZL: 031270573)在一定程度上解決了香雪蘭常規繁殖存在的問題，達到了在短時間內大量 繁殖優質香雪蘭種球的要求。利用組織培養方法培育香雪蘭具有不受季節、環境限制和繁 殖係數高、繁殖速度快等優點，因此更符合工廠化規模化生產的需求。然而，香雪蘭的快速 繁殖目前還是停留在實驗室研究階段，沒有真正用於商業化生產。如何降低香雪蘭的生產 成本，是香雪蘭體外快速繁殖產業化的關鍵。本發明即通過實現香雪蘭體外簡化培養的方
法，從而達到低成本快速繁殖的目的，為香雪蘭組培產業化創造了條件。
發明內容
本發明目的是在香雪蘭組織培養技術的基礎上，提供一種香雪蘭體外簡化培養的方法， 促進香雪蘭產業化。
香雪蘭體外簡化培養的方法具體內容
本發明使用的外植體為未成熟的香雪蘭(常規栽培種)幼花序，叢生芽誘導時所使用的
基本培養基為N6+l 2mg/L 2， 4 - 二氯苯氧乙酸(2， 4_D) +2 4mg/L 6-苄基氨基嘌 呤(6-BA)，生根時所用的基本培養基為1/2MS + 0. 1 1 mg /L萘乙酸(NAA)，誘導成球時 1/2MS培養基(含0. 2%的活性炭)作為基本培養基[來源香雪蘭的快速繁殖技術(專利號 ZL: 031270573)]。在此基礎上主要從培養基的簡化，培養條件的簡化，培養容器簡化三 個方面對香雪蘭的組織培養技術進行研究，降低生產成本，促進香雪蘭工廠化生產和大面 積推廣。
1. 培養基方面的簡化
瓊脂、分析蔗糖、蒸餾水是培養基中價格較高的成分，約佔培養基成本的95%。如在瓊 脂、分析蔗糖、蒸餾水三者上加以簡化，則培養基的成本就能顯著降低。
香雪蘭體外簡化培養中我們採用的是簡化的培養基以價格低廉的自來水和食用白糖替 代傳統培養基中價格較高的蒸餾水和分析蔗糖(蒸餾水的價格是自來水的100倍，分析純蔗 糖的價格是普通白糖的5倍)，同時降低了瓊脂的濃度。與正常的培養基相比，本發明所 使用的簡化培養基可以使生產成本減低60%以上。
2. 培養容器的簡化
香雪蘭組織培養不宜選用普通的三角瓶。與一些組織培養材料不同，香雪蘭的叢生芽經 過3-4個月的培養後有的可以長到8-9釐米高，接種在容積小的三角瓶不利於叢生芽的生 長，如用容積較大的三角瓶，其價格比較昂貴。為了降低培養成本，在單位面積裡得到更 多的組培苗，我們選用可以反覆利用的透廣度好的ZP300帶蓋廣口瓶(購於上海稼豐園藝 用品有限公司)。ZP300帶蓋廣口瓶一方面比大容積的三角瓶便宜，另一方面省去了常規組 織培養時用棉塞封口的麻煩，操作起來比三角瓶方便，在一定程度上節省了勞動時間，減 低了勞動成本。
3. 培養條件的簡化
香雪蘭組織培養時要求溫度在24-27°C，光照為10-12小時/天，實驗室研究階段是通
過植物光照培養箱來調控這些因素的。在本發明中採用培養室培養節能白熾燈作為光源, 並通過人工調控光周期以達到降低成本的目的。 本發明包括如下幾個步驟；
(1) 取生長旺盛的香雪蘭未成熟的幼花序，在超淨工作檯上按常規無菌方法接種到含 有l 2mg/L 2,4-D和2 4mg/L 6_BA簡化培養基上，以誘導叢生芽。誘導條件為溫度 24-27。C，光照10-12小時/天。
(2) 將步驟(1)中誘導出的無菌叢生芽再分割後移植在營養成分減半的MS培養基(簡 稱1/2MS培養基)上。植物生長調節物質為0.1 1 mg /L萘乙酸(NAA)，常規培養基中 的蒸餾水和蔗糖分別被自來水和白糖所取代，瓊脂濃度為0.55%。生根條件為溫度 24-27X,光照10-12小時/天。
(3) 待根系發達後，將無菌苗轉入誘導成球的簡化培養基進行成球培養。培養條件為 溫度12-14。C，光照10-12小時/天。也可以將根系發達的無菌苗經煉苗後移栽至土壤中， 進行室內盆栽。
使用香雪蘭體外簡化培養得到的組培苗，與正常培養基培養得到的香雪蘭組培苗沒有 明顯差別。由於本發明是在香雪蘭組織培養上進行的成本簡化，它既具有常規植物組織培 養不受季節、環境限制和繁殖係數高、繁殖速度快等的優勢，又從不同層次，不同方面對 香雪蘭的快速繁殖進行了簡化。與正常的培養基相比，香雪蘭體外簡化培養的方法可以使 生產成本減低65-70%，具有重大的現實意義，同時為香雪蘭工廠^:生產和大面積推廣打下 了基礎。如果將本發明應用到生產領域，由於降低成本所帶來的增益是可觀的。
具體實施例方式
下面將結合實施例對本發明做進一步說明，但本發明的範圍並不局限於以下的實施例。
實施例
l.叢生芽誘導的簡化
從生長旺盛的香雪蘭植株上剪下沒有成熟的幼花序後，在超淨工作檯上用70%乙醇浸
泡約30秒，再用0. 1。/。HgCl2滅菌1分鐘，無菌水洗4遍，用無菌濾紙將殘留的水吸乾，並 切成0.2釐米左右的莖段，接種於含有2mg/L 2, 4 - 二氯苯氧乙酸，3呢/L 6-苄基氨 基嘌呤的簡化培養基上。培養條件為溫度26T，光照ll小時/天。
一周以後便可以看見外植體的微小膨大後產生叢生芽，約2個月後叢生芽可達4釐米。 繼續繼代培養，有些叢生芽可以在此培養基上生根。
香雪蘭叢生芽誘導的簡化培養基為N6+2mg/L 2,4-D +4mg/L 6-BA +30g/L白糖(配 置培養基時選用自來水代替蒸餾水)。
2. 生根方面的簡化
待叢生芽生長至6釐米時，將其轉入簡化的生根培養基，生根條件為溫度26T，光照 11小時/天。經過約一周的生根誘導，隨著原來生根的叢生芽根逐漸粗壯，沒有生根的叢 生芽也都陸續有根形成，在簡化培養基上香雪蘭叢生芽的生根率可以達到98%。生根簡化 培養基1/2MS + 0. 1 1 mg /L NAA +30g/L白糖(配置培養基時選用自來水代替蒸餾水)。
3. 誘導成球的簡化
將已生根的再生植株轉入成球簡化培養基中，誘導香雪蘭產生種球。此培養過程不需要 更換培養基便可在數月後得到香雪蘭的種球。簡化培養基為1/2MS十2g/L活性炭+30g/L 白糖。(配置培養基時選用自來水代替蒸餾水)
4. 其他條件的簡化
在香雪蘭組織培養時，我們採用能反覆利用的成本低的ZP300帶蓋廣口瓶代替三角瓶， 白熾燈及人工控制光周期代替植物組織培養箱，這樣可以進一步降低香雪蘭的組織培養成 本。
權利要求
1、香雪蘭體外簡化培養的方法，其特徵是包括如下幾個步驟(1)取生長旺盛的香雪蘭未成熟的幼花序，在超淨工作檯上按常規無菌方法接種到含有1～2mg/L 2，4-D和2～4mg/L 6-BA簡化培養基上，常規培養基中的蒸餾水和蔗糖分別被自來水和白糖所取代，以誘導叢生芽，誘導條件為溫度24-27℃，光照10-12小時/天；(2)將步驟(1)中誘導出的無菌叢生芽再分割後移植在營養成分減半的MS培養基上，植物生長調節物質為0.1～1mg/L萘乙酸，常規培養基中的蒸餾水和蔗糖分別被自來水和白糖所取代，瓊脂濃度為0.55％，生根條件為 溫度24-27℃，光照10-12小時/天；(3)待根系發達後，將無菌苗轉入誘導成球的簡化培養基進行成球培養，生根簡化培養基1/2MS+0.1～1mg/L NAA+30g/L白糖，常規培養基中的蒸餾水和蔗糖分別被自來水和白糖所取代，培養條件為溫度12-14℃，光照10-12小時/天，也可以將根系發達的無菌苗經煉苗後移栽至土壤中，進行室內盆栽。
2、按權利要求1所述的香雪蘭體外簡化培養的方法，其特徵是在香雪蘭組織培養過 程中，反覆利用的成本低的帶蓋廣口瓶代替三角瓶，白熾燈及人工控制光周期代替植物組織 培養箱。
全文摘要
本發明屬花卉栽培繁殖方法特別涉及香雪蘭組織培養簡化的方法 本發明使用的外植體為未成熟的香雪蘭幼花序，主要從培養基的簡化，培養條件的簡化，培養容器簡化三個方面對香雪蘭的組織培養技術進行研究。以價格低廉的自來水和食用白糖替代傳統培養基中價格較高的蒸餾水和分析蔗糖，同時降低了瓊脂的濃度。它既具有常規植物組織培養不受季節、環境限制和繁殖係數高、繁殖速度快等的優勢，又從不同層次，不同方面對香雪蘭的快速繁殖進行了簡化。與正常的培養基相比，香雪蘭體外簡化培養的方法可以使生產成本減低65-70％，具有重大的現實意義，為香雪蘭工廠化生產和大面積推廣打下了基礎。
文檔編號A01H4/00GK101099450SQ200710055920
公開日2008年1月9日 申請日期2007年7月30日 優先權日2007年7月30日
發明者曼 敖, 麗 王 申請人:東北師範大學