BX43螢光顯微鏡的報價和應用案例
2023-10-23 20:37:02 4
科技聚焦索宏恆業
近年來，對癌症和細胞學領域的研究更多集中在細胞死亡上。但是就在最近，像羅氏這樣的公司對細胞凋亡相關研究很感興趣。這樣的研究已經超出了簡單的細胞死亡的範疇外。無論來自大製藥公司做新藥開發的研究人員，還是科研機構研究阿爾茨海默症的人都在討論細胞死亡的機制，什麼路徑受到影響，死亡的階段何時被發現，甚至是怎樣才能阻止死亡的發生。詳細配置在後面
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目前細胞凋亡的研究的方法很多，研究人員可以分析單一或者群體細胞的凋亡，活體動物和福馬林固定並石蠟切片樣品等。他們用光學或者BX43螢光顯微鏡，流式細胞儀或分光光度計來研究凋亡，還可以通過分析RNA和蛋白表達的參數，組氨酸修飾和質膜的磷脂定位及膜電位進行研究。
死亡或生存
起初，許多研究人員的興趣主要在檢測是否有一個特定的處理會殺死細胞或者阻止它們死亡。甚至對於他們來講，是否所有的細胞都經歷了程序性死亡或者一些經歷簡單的壞死都不重要。他們需要知道的是在仔細研究這條路徑和調整敏感度測定之前是不是發生了什麼反應：他們需要的答案是「是」或「不是」。所有活細胞或死細胞測定——如棉蘭染色或PI染色(碘化丙啶)13810005848張——都會篩選出已經凋亡的細胞和壞死的細胞。但是，還有一些正在凋亡過程中的細胞通過染色並不能區分出來。因此，染色研究凋亡過程需要與其他方法相結合。
細胞膜的結構重組在破裂之前(膜破裂會使PI聚醯亞胺進入膜內)。在很多的凋亡細胞內，膜的結構重組會導致磷脂醯絲氨酸(PS)暴露到細胞質膜的外膜中，這一過程可以用Annexin V染色觀察到。有幾家公司推出了雙染色試劑盒，可以同時分析細胞膜的完整性並檢測PS，幫助科研人員找出細胞是開始進入凋亡還是已經進入到凋亡最後的階段。當然，還有一些類型的細胞可以在表面上持續的表達出PS，所以Annexin V染色可能會出現假陽性。細胞膜出現水泡狀是早期細胞凋亡的重要標誌，但是想要得到典型了泡狀細胞非常困難，因為即使樣本很少也需要很長時間。
其他的分析方法，如末端脫氧核苷酸轉移酶dUTP缺口標記(TUNEL)和瓊脂糖凝膠電泳，利用了凋亡另一個標誌來分析：細胞DNA被切割成大約200bp的片段。當這些方法用於分析凋亡的時候，一般檢測到的都是凋亡晚期階段的細胞，早期的凋亡細胞檢測不到。
更深入
細胞程序性死亡可以由很多不同的路徑誘導，每一個路徑有另外一些途徑引發反應。簡單來說，凋亡在不同的階段都可以被抑制(通常在癌症中)。研究最多的路徑是下面這些內部和外部的途徑：前者是由脅迫或者創傷引起，比如熱激和DNA損傷，這二者可以導致細胞色素C的釋放和線粒體其他因子的釋放，隨後會激活絲氨酸蛋白酶，最終會使細胞損傷得到控制。外部路徑由更直接的半胱氨酸蛋白酶級聯反應激活，是TNF-受體家族成員參與信號轉導途徑的最終反應。內部和外部傳導途徑最終在半胱氨酸蛋白酶3會合，這樣是半胱氨酸蛋白酶3可能是最常見的細胞凋亡分析靶點。
一旦細胞凋亡被確定，研究人員可能會想更深入的研究它的發生機制。現在的研究趨勢是找出為什麼細胞參與到下面的特定途徑中。每天，都有與凋亡相關的基因和蛋白被發現。已經有一些凋亡的抑制劑和誘導劑開發出來，有的是單獨的生物活性試劑，有的是試劑盒的一部分。
還有很多檢測死亡路徑內部組分的手段也已經被開發出來了。在這些方法中最常用的是一些用於檢測特定的半胱氨酸蛋白酶或一系列半胱氨酸蛋白酶。另外還有一些方法通常依賴於靶點切割底物產生的信號，或者抑制物與靶點結合或者靶點免疫反應檢測等。由於半胱氨酸蛋白酶通常在半胱氨酸蛋白酶前體中持續表達，所以這些檢測方法可以區分半胱氨酸蛋白酶前體和半胱氨酸蛋白酶的活性態。
除檢測半胱氨酸蛋白酶之外，也可以檢測許多其他路徑上的成分來判定凋亡狀態。一些製造商提供的試劑盒可以測定細胞色素C的釋放和線粒體膜電位的變化。舉例來講，定量測定如FasL和Bcl-2的蛋白或者其他已知的能影響凋亡組氨酸磷酸化的蛋白。抗體(通常是抗體組)也可以檢測已知的參與細胞凋亡過程中的組分，包括自然產生的誘導物和抑制物。
更寬
通常檢測一個已定問題的其他補充方面需要非常謹慎——檢測凋亡細胞中存在的半胱氨酸蛋白酶，和某些處理是否在半胱氨酸蛋白酶上遊。
與此類似的是，有很多方法已經用於研究一個特定方面的問題，這些方法可能會用於對同一結果不同認證中。或者可能根據價格，設備，操作方便性，組織材料的準備或者歷史條件等因素來選擇合適的方法。最常用的方法一般有多種使用形式。舉例來講，TUNEL，可以用螢光或比色指示劑在BX43Y螢光顯微鏡、普通光學顯微鏡或流式細胞儀上觀察。試劑盒可以用於檢測完整的、冷凍的、固定的和福馬林固定後石蠟切片樣品，有時還可以結合染色的總DNA觀察。進入核小體中的DNA片段也可以通過ELISA或免疫雜交方法對細胞裂解液或上清液檢測。
TUNEL常用於一些測定量較小的基礎研究實驗室中。這種方式比較浪費時間而且逐個細胞檢查，但是並不需要特殊的儀器。另一方面，大的製藥公司需要多功能、自動的高通量的測定方法比如ELISA和流式細胞儀。甚至有一些試劑盒也可以在體外對凋亡細胞染色。在很多有半胱氨酸蛋白酶的檢測系統中，當抑制劑與有活性的半胱氨酸蛋白酶接觸時，這些小分子有細胞透性的抑制劑和螢光基團被切割，使它們不能離開細胞。在FLIVO(ICT製造和銷售)中，這個複合物可以注射到活體動物中，使得細胞凋亡過程可以實時觀察或者在殺死活體動物後通過一些技術可以觀察。
未來研究
對於細胞凋亡領域的檢測和研究仍在進行。半胱氨酸蛋白酶和ELISA方法在將來也可能很普及。但是從整個動物的成像觀察到抑制劑和檢測相結合的試劑盒中，再到實時定量PCR，這些方法將來都會給研究人員更多的選擇。
BX43-32P02 Laboratory Microscope 1
顯微鏡鏡體
BX43TF Microscope frame for transmitted microscopy, including hexagonal driver AB8804, immersion oil 8cc and shield sticker AD4908(2PCs)Corresponded to RoHS, WEEE regulation 1
中性灰度濾色片
45-ND6 Neutral density filter, 45mm dia. 1
45-ND25 Neutral density filter, 45mm dia. 1
三目鏡筒
U-TR30-2 Trinocular tube 1
5孔物鏡轉盤
U-5RE-2 Quintuple Revolving Nosepiece 1
機械式載物臺
U-SVRB-4 Ceramic surface mechanical stage with right-hand low drivecontrol(long type) 1
夾片器
U-HLDT-4 Specimen holder for BX stage, left hand, for two specimens, thick type 1
滷素燈燈室
U-LS100 Lamp socket 1
滷素燈燈泡
6V30WHAL 30W Halogen bulb(Philips No. 5761) 2
濾色片盒
U-FC Filter cassette with 3-filter slots 1
電源線
UYCP Power cord 1
防塵罩
COVER-018 Dust cover Type 018 for BX2(L 510mm x W 320mm x H 530 mm) 1
目鏡
WHN10X Widefield eyepiece 10X 2
濾色片
45-LBD-IF Interference light balance daylight filter, 45mm dia. 1
BX2-PHD-P11 Phase Contrast/Darkfield Attachment 1
相差聚光鏡
U-PCD2 Phase contrast dark field condenser NA1.1 1
平場消色差相差物鏡
PLN4XPH Plan achromat phase objective 10X/0.25, WD 10.6 1
PLN10XPH Plan achromat phase objective 20X/0.4, WD 1.2(spring) 1
PLN20XPH Plan achromat phase objective 40X/0.65, WD 0.6(spring) 1
PLN40XPH Plan achromat phase objective 100X/1.25, WD 0.15(spring, oil) 1
對中望遠鏡
U-CT30 Centering telescope 1
濾色片
43IF550-W45 Interference green contrast filter 45mm dia. 1
