一種飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法
2023-10-24 10:52:32 4
專利名稱：一種飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法
技術領域：
本發明涉及一種生物酶製劑，具體的涉及一種飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法。
背景技術：
我國是一個農業大國，養殖業非常發達，因此，生產製造含各種生物酶製劑的複合型飼料應用於畜牧業，對於促進動物生長、節約糧食、減少汙染、保護環境具有深遠的意義。現有技術中，生物酶製劑種類一般包括1.內源性酶，與消化道分泌的消化酶相似的酶(澱粉酶，蛋白酶，脂肪酶等)；2.外源性酶，消化道不能分泌的類似酶(如纖維素酶，果膠酶，半乳糖苷酶，β-葡聚糖酶，木聚糖酶和植酸酶等)。其中最重要的酶製劑，目前已得到充分肯定的酶製劑主要是阿拉伯木聚糖酶(戊聚糖酶)，β-葡聚糖酶和植酸酶。這三種酶製劑是通過消除日糧中的某些抗營養因子而改善動物的生產性能。阿拉伯木聚糖酶是研究最充分，並在當前已被廣泛地商業性用於飼養系統的酶製劑。飼料原料的非澱粉多糖小麥，燕麥，稻穀，麩皮，米糠，統糠等都含有較多的木聚糖。大麥，黑麥，啤酒糟等含有較多的β-葡聚糖酶.這類多聚糖統稱為水溶性非澱粉多糖(NSP)。
現有技術中，對複合酶製劑酶特性的測定往往僅限於對其組成成分的單酶活性(簡稱酶活)的測定，而缺乏對其綜合特性的複合測定。現有技術中，也僅公開了對部分單酶酶活特性的測定方法，例如對木聚糖酶的酶活特性的測定方法，而沒有對組配後的生物酶複合製劑特性的測定方法，實踐中也不能全面地了解組配後的複合酶製劑綜合特性，尤其是不能準確了解其組配、及其與底物混合後的加工特性，因此無法為篩選畜禽、魚蝦等飼料用複合酶製劑的配方，及其生產加工提供科學有效的依據。
發明內容
本發明的目的在於，針對現有生物酶特性測定技術的不足，提供一種由簡到繁、用來優化篩選複合酶製劑的飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法，為畜禽、魚蝦等飼料用複合酶製劑的配方及其生產提供科學有效的依據。
本發明為實現上述目的所採用的技術方案是一種飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法，其包括如下步驟1)測試擬組成複合酶的各單酶製劑的特性，並根據測試結果繪製圖表；2)將擬組成複合酶的各單酶製劑中的兩種或多種進行分組後混合，測試該組配後該各單酶活性、能量及蛋白價值的變化，並根據測試結果繪製圖表；3)比較步驟1)及2)的結果，選擇相對特性數值變化較小的組配，將其加入到不同底物中測試，並根據測試結果繪製圖表；4)變換底物的濃度，並根據測試結果繪製圖表；5)採用圖表對比法比較步驟1)～4)的測試結果，選擇適合加工的單酶製劑、組配及其濃度。
前述的飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法，其特徵在於，所述的步驟1)，還包括如下步驟11)製備單酶溶液；12)測試並記錄單酶溶液的熱穩定性，根據測試結果繪製圖表；13)測試並記錄單酶溶液的PH穩定性，根據測試結果繪製圖表；14)測試並記錄底物濃度變化對單酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；15)測試並記錄加工工藝對單酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；所述步驟12)～15)的順序不分先後。
前述的飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法，其特徵在於，所述的步驟2)，還包括如下步驟21)測試並記錄該組配酶溶液的熱穩定性，根據測試結果繪製圖表；22)測試並記錄該組配酶溶液的PH穩定性，根據測試結果繪製圖表；23)測試並記錄底物濃度變化對該組配酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；24)測試並記錄加工工藝對該組配酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；所述步驟21)～24)的順序不分先後。
本發明的有點在於本發明提供的方法，可以通過對各種單酶組分及配比的複合酶製劑的能量和蛋白價值等產品特性進行檢測，特別是通過測試、對比，可以準確了解複合酶製劑的組配、及其與底物混合後的加工特性，從而作為針對性地設計和篩選飼料用複合酶組合的科學依據，達到節約生物酶材料、提高飼料利潤率的目的。
圖1是本發明實施例1提供的飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法的流程圖；圖2是本發明實施例1中，溫度對木聚糖酶活性的影響圖。
圖3pH對木聚糖酶活性影響圖；圖4底物濃度對木聚糖酶活性的影響；圖5是經不同溫度處理後木聚糖酶活性存留情況圖；圖6是木聚糖酶貯存期間酶活存留情況圖；圖7是木聚糖酶在不同加工階段酶活變化情況圖；圖8是本發明實施例2中，溫度對蛋白酶活性的影響圖；圖9是pH對中性蛋白酶活性的影響圖；圖10是底物濃度對中性蛋白酶活性的影響圖；圖11是中性蛋白酶經不同溫度處理後酶活變化圖；圖12是中性蛋白酶貯存期間酶活存留情況圖；圖13是加工工藝對中性蛋白酶活性的影響圖。
具體實施例方式
參見圖1，本發明提供的通用飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法，其流程包括如下步驟1)測試擬組成複合酶的各單酶製劑的特性，並根據測試結果繪製圖表；2)將擬組成複合酶的各單酶製劑中的兩種或多種進行分組後混合，測試該組配後該各單酶活性、能量及蛋白價值的變化，根據測試結果繪製圖表；3)比較步驟1)及2)的結果，選擇相對特性數值變化小的組配，將其加入到不同底物中測試，並根據測試結果繪製圖表；4)變換底物的濃度，並根據測試結果繪製圖表；5)採用圖表對比法比較步驟1)～4)的測試結果，選擇適合加工的單酶製劑、組配及其濃度。
前述的飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法，所述的步驟1)，還包括如下步驟11)製備單酶溶液；12)測試並記錄單酶溶液的熱穩定性，根據測試結果繪製圖表；13)測試並記錄單酶溶液的PH穩定性，根據測試結果繪製圖表；14)測試並記錄底物濃度變化對單酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；15)測試並記錄加工工藝對單酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；所述步驟12)～15)的順序不分先後。
前述的飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法，所述的步驟2)，還可以包括如下步驟21)測試並記錄該組配酶溶液的熱穩定性，根據測試結果繪製圖表；22)測試並記錄該組配酶溶液的PH穩定性，根據測試結果繪製圖表；23)測試並記錄底物濃度變化對該組配酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；24)測試並記錄加工工藝對該組配酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；所述步驟21)～24)的順序不分先後。
其優選的實施例1參見圖2～圖7，提供一種禽(雞、鴨等)用系列複合酶製劑酶加工特性的測定方法，其包括如下步驟1)測試擬組成複合酶的各單酶製劑的特性，並根據測試結果繪製圖表，本實施例中，擬組成複合酶的各單酶製劑包括蛋白酶、α-澱粉酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶。
2)將擬組成複合酶的各單酶製劑中，即蛋白酶、α-澱粉酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶中的兩種或多種進行分組後混合，分別測試該組配後該各單酶活性、能量及蛋白價值的變化，根據測試結果繪製圖表；3)比較步驟1)及2)的結果，選擇相對特性數值變化小的組配，本實施例中為蛋白酶、α-澱粉酶、木聚糖酶兩兩之間的組配，將其加入到不同底物中測試，並根據測試結果繪製圖表；參見表1，本實施例中，底物分別為玉米型日糧、玉米型日糧(高濃度)、小麥型日糧、小麥型日糧(高濃度)、小麥/玉米混合型日糧、小麥/玉米混合型日糧(高濃度)。
4)變換底物的濃度，並根據測試結果繪製圖表；5)採用圖表對比法比較步驟1)～4)的測試結果，選擇適合加工的單酶製劑、組配及其濃度，本實施例中優選的單酶製劑、組配結果為蛋白酶、α-澱粉酶、木聚糖酶，如表2所示。
前述的步驟1)，還包括如下步驟11)製備蛋白酶、α-澱粉酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶的單酶溶液；12)測試並記錄前述各單酶溶液的熱穩定性，根據測試結果繪製圖表；
13)測試並記錄前述各單酶溶液的PH穩定性，根據測試結果繪製圖表；14)測試並記錄底物濃度變化對前述各單酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；15)測試並記錄加工工藝對前述各單酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；所述步驟12)～15)的順序不分先後。
前述的步驟2)，還可以包括如下步驟21)測試並記錄該蛋白酶、α-澱粉酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶中的兩種或多種組配酶溶液的熱穩定性，根據測試結果繪製圖表；22)測試並記錄前述各組配酶溶液的PH穩定性，根據測試結果繪製圖表；23)測試並記錄底物濃度變化對前述各組配酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；24)測試並記錄加工工藝對前述各組配酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；所述步驟21)～24)的順序不分先後。
表1產品名稱、產品代號、適用動物及生長階段
表2禽用複合酶製劑系列產品酶組配及其酶活性指標單位U/g
注表4中蛋白酶活性系酸性蛋白酶和中性蛋白酶活性之和。
本實施例所使用的內切阿拉伯木聚糖酶(EC 3.2.1.8)是由Trichoderma longibrachiatum經液體深層發酵，分離、提純、濃縮、乾燥後製成的飼料專用單酶製品。為了更有效地應用該木聚糖酶，現分別對其pH穩定性、熱穩定性、底物濃度等酶學性質進行研究。
首先製備待測內切阿拉伯木聚糖酶溶液，然後進行下列測試並記錄測試結果、繪製圖表。
首先測試並記錄該單酶溶液的熱穩定性，根據測試結果繪製圖表，所得圖表見附圖2。經測試，溫度對酶反應速度有很大的影響，並且每種酶都有自己的最適溫度。因此，在不同溫度(20℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃、70℃、80℃和90℃)其它條件相同的情況下(pH5.3、底物濃度1％)，測定木聚糖酶的活性。
由圖2看到木聚糖酶在不同的反應溫度下測定的酶活，其活性變化較大，40℃時酶活大於82％，在30℃時酶活仍然大於55％，反應溫度在高於60℃後，酶活急劇下降，在60℃到70℃之間酶活從94％下降到60％，這說明，木聚糖酶的活性對反應溫度的變化有些敏感。因此，此產品提供的酶活的最適範圍溫度在40～60℃間，最佳反應溫度為55℃，本試驗的測定結果基本反應了此產品的的酶活隨溫度變化的特性。
在實際應用中，由於動物胃腸道內的溫度在38～40℃間，從結果來看，此時木聚糖酶活性在80％左右。一方面，雖然動物胃腸道內酶的作用效果可因酶的作用時間較長從而可彌補酶活低的不足，另一方面，可以通過適當提高木聚糖酶在飼料中的添加量來解決這一問題。
再來測試pH對木聚糖酶活性的影響pH也對酶反應速度有很大影響。分別將底物和對應的緩衝稀釋液的pH調整到3.0、4.0、5.0、5.3、6.0、6.5、7.0、8.0和9.0，然後在其它條件相同的情況下(溫度55℃、底物濃度1％)分別測其酶活，所得圖表見附圖3。
由圖3看出，木聚糖酶在pH＝4～6之間保持較高的活性，平均90％以上，在之外的範圍酶活急劇下降，pH＝4的時候，酶活接近80％，但pH＝3時酶活僅為15％，在pH＝6.5時，酶活為55％，在pH＝7時，酶活為23％左右，當pH＝9時，基本上檢不出酶的活性。
此酶的酶活最適的pH範圍在4～6之間，最佳反應pH的為5.3，本試驗的測定結果反應了此酶的酶活隨pH變化的特性，說明此酶在偏酸性的條件下有較好的表現。在實際應用中，由於動物胃腸道內的pH偏酸性，所以此木聚糖酶在動物胃腸道內的條件下能夠發揮較好的作用。
第三步測試底物濃度對木聚糖酶活性的影響將木聚糖底物分別配製成0.2％、0.4％、0.6％、0.8％和1.0％五個濃度，在保證底物過飽和其它條件相同的情況下(溫度55℃、pH5.3)，加入相應量的酶稀釋液測定酶活，所得圖表見附圖4。
由圖4可以看出，木聚糖酶的活性隨底物濃度的提高活性逐漸增強，在底物濃度達到0.6％(相當於最高活性時底物濃度的60％)時，木聚糖酶的活性基本穩定，並接近了酶活的最高值。這說明，木聚糖酶實際應用中，底物濃度較低時就有可能發揮出最高的活性。
第四步測試經不同溫度加工處理後酶活存留情況將固體木聚糖酶在從55℃～100℃(水分含量≤8％)，每間隔5℃的條件下分別處理5分鐘，然後測定(pH5.3、溫度55℃、底物濃度1％)其酶活，所得圖表見附圖5。
由圖5可以看到，木聚糖酶在乾燥的狀態下經過累積溫度處理後，在不同溫度下的酶活表現是先升高後下降，在70℃以前木聚糖酶的活性基本沒有損失，70℃以後酶活開始損失，到85℃時酶活存留大於88％，100℃時酶活存留在75％左右。酶活在60-70℃間有升高的現象待進一步驗證。
第五步測試其它酶製劑相互混合後對木聚糖酶的影響將木聚糖酶(X1222)分別與蛋白酶(P1222)和澱粉酶(A1222)按表1體積比混合後，常溫下放置一個月後測定(pH5.3、溫度55℃、底物濃度1％)其中木聚糖酶活性，結果表明蛋白酶和澱粉酶對木聚糖酶的活性並無影響。測試木聚糖酶在貯存期間酶活存留情況將固體木聚糖酶產品(水分含量≤8％)常溫下保存，然後每隔兩個月取樣測定(pH5.3、溫度55℃、底物濃度1％)其酶活，結果如圖6。
由圖6可看出，木聚糖酶在一年內酶活下降不到15％，尤其在前4個月內，酶活下降緩慢不到7.0％，隨著時間的延長，酶活會逐漸下降，但速度較平緩。
表1其它酶製劑與木聚糖酶混合後木聚糖酶活性表
注1、表中X1222為固體木聚糖酶，P1222為固體蛋白酶，A1222為固體澱粉酶。2、水分含量小於8％。
第六步測試加工工藝對木聚糖酶活性的影響按照設計標準將1.0公斤活性為25,000U/g的木聚糖酶按1kg/噸的添加量加入小豬飼料後制粒，制粒的條件及溫度(75℃左右)與商業飼料廠一致，在不同生產階段(混合後、調製後、制粒後及打包口)分別取樣並測定(pH5.3、溫度55℃、底物濃度1％)木聚糖酶的活性，其測試結果見圖7。
該木聚糖酶與飼料原料混合後其活性與設計標準相比有明顯的下降，只有45％的活性保留下來，但此時並沒有經過高溫及壓力的處理，說明此木聚糖酶與飼料混合後有55％的活性是在實驗室的條件下不能檢出的。經過高溫(75℃左右)調製後，與設計標準相比，此木聚糖酶在飼料中的活性保留率只有37％左右，下降幅度較大，但與混合後相比，此木聚糖酶的活性保留率為82％(45.2對37.2％)，下降幅度僅為18％左右，說明高溫(75℃左右)調製對此木聚糖酶的影響不大。制粒過程是高溫及壓力的結合，此過程對一般的木聚糖酶的活性影響巨大，但此木聚糖酶經過高溫及高壓的制粒過程後，與調製後相比，酶活的保留率僅下降了12％左右(37.2對32.8％)，與混合後相比，酶活在飼料中的保留率也只下降了27％左右(45.2對32.8％)。打包口的酶活保留率與制粒後的保留率基本一致(32.8對33.5％)。
採用圖表對比法進行對比圖2～圖7分析，說明本實驗飼料加工過程中的高溫及高壓的制粒過程對該木聚糖酶的影響是有限的，整個調製、制粒過程對此木聚糖酶酶活保留率的影響不大於26％(45.2對33.5％)，但此木聚糖酶與飼料原料混合的過程會影響在實驗室用現有的方法測定酶活保留率(100對45.2％)，影響酶活測定的原因有諸多，如金屬離子的幹擾、酶與底物的作用、測定方法的靈敏度等因素。
最後分別對圖2～圖7進行兩兩或多幅對比分析阿拉伯木聚糖酶的綜合特性；本發明實施例1所使用的內切阿拉伯木聚糖酶(EC 3.2.1.8)的酶學特性具有以下特點(1)酶活反應的最適溫度在40～60℃間，最佳溫度為55℃，在實際應用中，由於動物胃腸道內的溫度在38～40℃間，從結果來看，此時木聚糖酶活性在80％左右；(2)pH在4～6之間，酶活平均在90％以上，最佳反應pH為5.3，在實際應用中，由於動物胃腸道內的pH偏酸性，所以此酶在動物胃腸道內能夠發揮較好的作用；(3)酶的活性在底物濃度達到0.6％時活性已基本穩定，並接近最高值，說明此酶在底物濃度較低時就可能發揮出最高的活性；(4)此酶在乾燥的狀態下經過累積溫度處理後，在70℃以前活性沒有損失，到85℃時酶活存留大於88％，100℃時酶活存留在75％左右；(5)此木聚糖酶與蛋白酶和澱粉酶按比例混合後儲存，測其樣品中的木聚糖酶活性，結果表明蛋白酶和澱粉酶對木聚糖酶的活性沒有影響；(6)在室溫條件下儲存半年，其酶活比較穩定，但隨著時間的延長，酶活會逐漸下降，酶活平均月下降率為7.3％；(7)此木聚糖酶與飼料原料混合後其活性有明顯的下降(100對45.2％)，但飼料加工過程中的制粒過程對該酶酶活的影響有限(45.2對33.5％)，說明此木聚糖酶具有耐高溫抗高壓，並能在體溫下良好發揮作用等特點。影響酶活測定的原因有諸多，如金屬離子的幹擾、酶與底物的作用、測定方法的靈敏度等因素。
再提供本實施例中採用的中性蛋白酶的加工特性的測試方法。
首先測試溫度對中性蛋白酶活性的影響分別在30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、60℃、70℃和80℃，而其它條件相同(pH7.5、底物濃度1％)的情況下測中性蛋白酶的酶活，結果作圖如圖8所示。
由圖8看出，中性蛋白酶的隨反應溫度的變化其酶活變化較大，反應溫度在40℃左右時，酶活表現最好，反應溫度在35～45℃之間酶活表現達到了90％左右，反應溫度超過50℃後，其酶活呈現直線下降趨勢，且下降幅度較大。這說明，此中性蛋白酶的最適反應溫度在35～45℃之間，且反應活性對反應溫度的變化較為敏感。
其次測試pH對中性蛋白酶活性的影響分別配製pH3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、7.5、8.0和9.0的底物及相應的緩衝液，在其它條件相同(溫度40℃、底物濃度1％)的情況下分別測定中性蛋白酶的活性，其結果如圖9所示。
由圖9看出，中性蛋白酶的活性在pH＝5～8間較好，pH＝6～7.5間最好。pH≤4時，中性蛋白酶活下降較快，pH≤3時已檢測不出酶的活性。因此，此中性蛋白酶的最適pH為6～7.5。
第三步測試底物濃度對蛋白酶活性的影響將底物酪素分別配製成0.2％、0.4％、0.6％、0.8％和1.0％五個濃度，在保證底物過飽和並且其它條件相同的情況下(pH7.5、溫度40℃)，加入酶稀釋液測定酶活；測試結果如圖10所示。
由圖10看出，蛋白酶的活性隨著底物濃度的升高逐漸增強，在底物濃度為0.4％時活性就已達到了最高活性的80％，0.6％時就基本接近了最高活性，這說明蛋白酶對底物的濃度比較敏感，在較低的濃度下就可以表現現較高的活性。
第四步測試經不同溫度處理後中性蛋白酶活存留情況將固體蛋白酶(水分含量≤8％)從55℃～100℃，每間隔5℃的條件下分別處理5分鐘後，測定(pH7.5、溫度40℃、底物濃度1％)其酶活，結果如圖11所示。
由圖11可以看到，中性蛋白酶分別經過55℃到90℃處理後，酶活均處於較穩定狀態，平均酶活在90％以上，90℃以後才急劇下降，酶活降到20％左右。
第五步測試中性蛋白酶在貯存期間酶活存留情況將固體中性蛋白酶產品(水分含量≤8％)常溫下保存，然後每隔兩個月取樣測定(pH7.5、溫度40℃、底物濃度1％)其酶活，結果如圖12所示，中性蛋白酶產品在貯存的前6個月內酶活下降非常少，不到5％；隨著時間延長酶活會逐漸降低，一年左右酶活下降約10％。說明此中性蛋白酶在常溫下非常穩定。
第六步測試加工工藝對中性蛋白酶活性的影響按照設計標準，將2.5千克活性為40，000U/g的中性蛋白酶按2.5kg/噸的添加量加入小豬飼料後制粒，制粒的條件及溫度(75℃左右)與商業飼料廠一致，在不同生產階段(混合後、調製後、制粒後及打包口)分別取樣並測定(pH7.5、溫度40℃、底物濃度1％)中性蛋白酶的活性，其結果見圖13。
與前述木聚糖酶有相似的結果，採用圖表對比法對比圖8與圖13，此中性蛋白酶與飼料原料混合後其活性與設計標準相比有明顯的下降(100對65％)，在實驗室的條件下，此中性蛋白酶只有65％的活性能測定，即在沒有經過高溫及壓力處理的情況下，45％的酶活已測不到，說明混合過程會影響酶活的測定，影響酶活測定的原因有很多，未來應注重這方面的研究。經過高溫調製後，與設計標準相比，此中性蛋白酶在飼料中的活性保留率只有47％左右，下降幅度較大，但與混合後相比，此中性蛋白酶的活性保留率為68％(65對47％)，下降幅度為30％左右，說明高溫調製對此中性蛋白酶的一定的影響，但不大。此中性蛋白酶經過高溫及高壓的制粒過程後，與調製後相比，酶活的保留率僅下降了19％左右(47對38％)，與混合後相比，酶活在飼料中的保留率也只下降了41％左右(65對38％)。打包口的酶活保留率與制粒後的保留率都為38％。
本實驗說明飼料加工過程中的高溫及高壓的制粒過程對該中性蛋白酶的影響是有限的，整個調製、制粒過程對此中性蛋白酶活保留率的影響在40％左右，但此中性蛋白酶與飼料原料混合的過程會影響酶活保留率。
最後分別對圖8～圖13進行兩兩或多幅對比分析中性蛋白酶酶學特性，可以得到如下總結本實施例使用的內切中性蛋白酶(EC 3.4.21.62)的酶學特性具有以下特點(1)此酶酶活隨反應溫度的變化而變化，在40℃時，酶活表現最好，在35-45℃間酶活表現可達90％左右，說明此酶在動物胃腸道內的溫度下能表現良好；(2)中性蛋白酶的活性在pH＝5～8間較好，pH＝6～7.5間最好。pH≤4時，中性蛋白酶活下降較快，此酶在偏酸性由於動物胃腸道內能夠發揮較好的作用；(3)此酶在底物濃度為0.4％時即可達到最高活性的80％，0.6％時接近最高活性，說明此酶對底物的濃度比較敏感，在較低的濃度下可以表現較高的活性；(4)中性蛋白酶在乾燥的狀態下分別經過55℃到90℃處理後，平均酶活在90％以上，90℃以後急劇下降，90℃時酶活降底到20％左右；(5)中性蛋白酶在常溫下貯存非常穩定，前3個月酶活下降不到5％；半年後酶活的保存率仍大於65％；(6)與木聚糖酶的結果相似，此酶與飼料混合後其活性有明顯的下降(100對65％)，即在沒有經過高溫及壓力處理的情況下，35％的酶活已測不到，說明混合過程會影響酶活的測定。經過高溫調製後，與混合後相比，此酶的活性保留率為72％(65對47％)，經過高溫高壓制粒後，酶活在飼料中的保留率在60％左右(65對38％)。高溫高壓的制粒加工過程對該酶酶活的影響有限，說明此酶具有耐高溫抗高壓，並能在體溫下良好發揮作用等特點。
綜上所述，內切阿拉伯木聚糖酶和內切中性蛋白酶具有活性高，抗逆性強，底物專一性等特點，是符合飼料專用單酶要求的製品。
對本實施例中α-澱粉酶及其他單酶的測定，及對木聚糖酶、α-澱粉酶、蛋白酶等組配後的加工特性的測定，與對木聚糖酶單酶的測定方法相似。
實施例2提供一種畜(豬等)用系列複合酶製劑酶加工特性的測定方法，其基本步驟與實施例1相同，其不同之處在於，其底物的選擇如表3所示，其選擇的適合加工的單酶製劑、組配結果為蛋白酶、α-澱粉酶、木聚糖酶及β-葡聚糖酶，如表4所示。
表3產品名稱、產品代號、適用動物及生長階段
表4豬用系列酶製劑產品酶活性指標單位U/g
注表5中蛋白酶活性系酸性蛋白酶和中性蛋白酶活性之和。
實施例3供一種水產(魚、蝦等)系列複合酶製劑酶加工特性的測定方法，其基本步驟與實施例1及2相同，其不同之處在於，其底物的選擇如表5所示，其選擇的適合加工的單酶製劑、組配結果為蛋白酶、α-澱粉酶、木聚糖酶及β-葡聚糖酶，如表6所示。
表5產品名稱、產品代號、適用動物及生長階段
表6水產類飼用酶製劑系列產品酶活性指標單位U/g
注表2中蛋白酶活性系酸性蛋白酶和中性蛋白酶活性之和如本發明上述實施例所述的相同或近似方法，而的得到的其他複合酶製劑酶加工特性的測定方法，及採用本發明相同或近似方法的直接啟示所得到其他複合酶製劑酶加工特性的測定方法，均在本發明保護範圍之內。
權利要求
1.一種飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法，其特徵在於，其包括如下步驟1)測試擬組成複合酶的各單酶製劑的特性，並根據測試結果繪製圖表；2)將擬組成複合酶的各單酶製劑中的兩種或多種進行分組後混合，測試該組配後該各單酶活性、能量及蛋白價值的變化，根據測試結果繪製圖表；3)比較步驟1)及2)的結果，選擇相對特性數值變化較小的組配，將其加入到不同底物中測試，並根據測試結果繪製圖表；4)變換底物的濃度，並根據測試結果繪製圖表；5)採用圖表對比法比較步驟1)～4)的測試結果，選擇適合加工的單酶製劑、組配及其濃度。
2.如權利要求1所述的飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法，其特徵在於，所述的步驟1)，還包括如下步驟11)製備單酶溶液；12)測試並記錄單酶溶液的熱穩定性，根據測試結果繪製圖表；13)測試並記錄單酶溶液的PH穩定性，根據測試結果繪製圖表；14)測試並記錄底物濃度變化對單酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；15)測試並記錄加工工藝對單酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；所述步驟12)～15)的順序不分先後。
3.如權利要求1或2所述的飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法，其特徵在於，所述的步驟2)，還包括如下步驟21)測試並記錄該組配酶溶液的熱穩定性，根據測試結果繪製圖表；22)測試並記錄該組配酶溶液的PH穩定性，根據測試結果繪製圖表；23)測試並記錄底物濃度變化對該組配酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；24)測試並記錄加工工藝對該組配酶活性的影響，根據測試結果繪製圖表；所述步驟21)～24)的順序不分先後。
全文摘要
本發明公開了一種飼用複合酶製劑酶加工特性的測定方法，其包括如下步驟1)測試擬組成複合酶的各單酶製劑的特性，並根據測試結果繪製圖表；2)將擬組成複合酶的各單酶製劑中的兩種或多種進行分組後混合，測試該組配後該各單酶活性、能量及蛋白價值的變化，根據測試結果繪製圖表；3)比較步驟1)及2)的結果，選擇相對特性數值變化較小的組配，將其加入到不同底物中測試，並根據測試結果繪製圖表；4)變換底物的濃度，並根據測試結果繪製圖表；5)採用圖表對比法比較步驟1)～4)的測試結果，選擇適合加工的單酶製劑、組配及其濃度。本發明主要用來優化篩選複合酶製劑，為畜禽、魚蝦等飼料用複合酶製劑配方及其生產提供科學有效的依據。
文檔編號C12Q1/25GK1974787SQ200610123888
公開日2007年6月6日 申請日期2006年12月1日 優先權日2006年12月1日
發明者於鋒, 段紅偉 申請人:東莞泛亞太生物科技有限公司