護理皮膚的美容方法

2023-10-19 10:27:07

專利名稱：護理皮膚的美容方法
技術領域：
本發明涉及改進皮膚狀態和外觀的美容方法並涉及在改進皮膚狀態和外觀的局部組合物製備中8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮的使用。
背景技術：
皮膚常隨著皮膚病、環境因素(風、空調、中央暖氣系統等)或正常的老化過程(隨時間的老化)——老化可通過將皮膚暴露在太陽下而加速(光老化)——而遭受破壞。近年來，對於美容產品組合物以及改進皮膚狀態和外觀的美容方法的需求劇增。
消費者日益尋求「抗老化」美容產品，它護理或延緩明顯的隨時間老化和光老化的跡象如皺紋、線紋、鬆弛、嚴重色素沉積和老年斑。
消費者還常常從美容產品中尋求除抗老化之外的其它益處。「敏感皮膚」的概念也提高了消費者對美容產品的要求，他們希望產品可以改進敏感、乾燥和/或易起皮皮膚的外觀和狀態並舒緩發紅和/或受刺激皮膚。消費者還期望治療雀斑、面泡和瑕疵的美容產品。
8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮是一種已知物質。例如，在Journal of Endocrinology Metabolism第83卷第6期中Milligan等人的「 Identification of a potent phytoestrogen in hops andbeer」中，8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮被認為是有效的植物雌激素。8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮的結構在那篇文獻中也有顯示。8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮存在於天然的蛇麻草中，從中它可以被分離並濃縮出來。
現在我們驚訝地發現8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮的更多未公開的特性，它在美容產品組合物中有用，局部地應用於皮膚以提供以前未公開的護膚益處。
現在我們已發現對於正常皮膚隨時間老化和光老化的狀況，如皺紋、線紋、鬆弛、嚴重色素沉積和老年斑的有效護理和預防，可以通過對皮膚使用含8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮或其衍生物的美容產品組合物而實現。我們還發現美容產品組合物中8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮的使用有利地提供了除抗老化之外的更多皮膚益處如舒緩發紅和/或受刺激的皮膚。

發明內容
第一方面，本發明含有應用於人類皮膚的局部組合物，組合物含有效量的8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮。
依照本發明的更進一步方面，是提供至少一種美容產品護膚益處的方法，護膚益處選自治療/預防皺紋、鬆弛、老化和/或光損傷皮膚；促進皮膚的膠原沉積、促進皮膚的核心蛋白聚糖生成；舒緩受刺激、發紅和/或敏感皮膚；改善皮膚肌理、光滑度和緊緻度；此方法包括對皮膚使用含有8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮和/或其衍生物的局部組合物。
本發明還包含在製備提供至少一種護膚益處的局部組合物時，8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮和/或其衍生物的用途，護膚益處選自治療/預防皺紋、鬆弛、老化和/或光損傷皮膚；促進皮膚的膠原沉積、促進皮膚的核心蛋白聚糖生成；舒緩受刺激、發紅和/或敏感皮膚；改進皮膚肌理、光滑度和/或緊緻度。
本發明的另一方面提供8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮，用於治療皺紋、鬆弛、老化和/或光損傷皮膚；促進皮膚的膠原沉積、促進皮膚的核心蛋白聚糖生成；舒緩受刺激、發紅和/或敏感皮膚；改進皮膚肌理、光滑度和/或緊緻度。
從而本發明方法和8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮的使用提供了抗老化益處，結果促進皮膚的光滑和柔軟並改善彈性且減少或延緩皺紋和老化肌膚的出現並改善膚色。可以獲得外觀、肌理和狀態的普遍改善，尤其對於光澤度、明晰度和皮膚通常的年輕外觀而言。本發明方法和使用也利於舒緩和鎮靜敏感和/或受刺激肌膚。因此本發明方法有利地提供了大範圍的護膚益處。
這些益處應包括改進的含水性、肌理/色調、光滑度、柔軟度、緊緻度、強度/彈性和光澤度。
術語「護理」用在此，其範圍包括減少、延緩和/或預防上述皮膚狀況如皺紋、老化、光損傷和/或受刺激皮膚，通常提高皮膚質量並通過預防或減少皺紋且提高皮膚的適應性、緊緻度、光滑度、柔軟度和彈性而改進其外觀和肌理。依照本發明的美容方法和8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮和/或其衍生物的使用可能對護理已處於皺紋、老化、光損傷和受刺激狀態的皮膚有用，或護理年輕皮膚以預防或減少前述因正常老化/光老化過程而引起的不良變化。
本發明還包括含有8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮部分的游離分子衍生物。
依照本發明使用的活性8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮以有效量存在於局部組合物中。通常活性物質的總量以組合物的0.0001重量％-50重量％的量存在。更優選的量為0.001％-10％且為了用最小的花費得到最大的利益，最優選的量是0.01％-1％。
依照本發明使用的組合物還含有皮膚病學/美容可接受的賦形劑，作為活性物質的稀釋劑、分散劑或載體。賦形劑可含有通常用於護膚品的物質，如水、液體或固態潤膚劑、有機矽油、乳化劑、保溼劑、增稠劑、粉、促進劑等。
賦形劑通常佔組合物的5重量％-99.9重量％，優選25重量％-80重量％，且可以在無其它美容助劑時平衡組合物。
除了活性成分8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮外，還可以包括其它特殊的益於皮膚的活性成分如遮光劑、皮膚發光劑和皮膚鞣製劑。賦形劑還可進一步包括助劑如香料、不透明劑、防腐劑、著色劑和緩衝劑。
為製備用於本發明方法的局部組合物，可使用製備護膚品的通常方式。活性成分通常以傳統方式結合在皮膚病學可接受的載體內。活性成分可首先恰當地溶解或分散在一份水或其它溶劑或液體中以結合到組合物中。優選的組合物是水包油或油包水乳液。
組合物可以是傳統的護膚品形式如霜、凝膠或洗液等。組合物也可以是所謂的「洗掉」產品形式例如沐浴或淋浴凝膠，它可能含有活性成分的傳遞系統以提高衝洗過程中對皮膚的粘附。最優選地，產品是「留住」產品；是一種使用到皮膚上後不需馬上進行仔細衝洗的產品。
組合物可以以任意合適的傳統形式包裝如罐裝、瓶裝、管裝、滾球裝等。
本發明的方法可以每天對需要護理的皮膚進行一次或多次。皮膚外觀的改進通常在1-3個月後變得明顯，這依賴於皮膚的狀態、本發明所用活性物質的濃度、所用組合物的量以及使用頻率。通常，從合適的容器或塗藥器中取少量組合物，如0.1-5mL使用到皮膚上並用手或手指或合適的設備覆蓋和/或擦在皮膚上。可附帶衝洗步驟，這依賴於組合物是否按照「留住」或「洗掉」產品配製。
附圖簡述為使本發明更易於理解，僅以示例方式給出下面實施例，並參考附圖，其中-

圖1顯示了8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮對核心蛋白聚糖合成的影響；-圖2顯示了8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮對原膠原合成的影響；和-圖3顯示了8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮對PGE2表達降低的影響。
實施例第一個實施例證實了8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮的抗老化益處。
從我們的共同未決歐洲專利申請99908956.8知道，局部視黃酸處理可引起活生物體內原膠原I和核心蛋白聚糖的上調。最終，那份申請中標題「 Identification of procollagen I and核心蛋白聚糖upregulation in skin in vivo following topical retinoic acidtreatment for comparat ive purposes」下的段落在此總體引入。
實施例1測量人真皮成纖維細胞中原膠原I和核心蛋白聚糖合成的步驟真皮成纖維細胞條件培養液的製備第2代(P2)主要的人包皮成纖維細胞以10000細胞/cm2接種到12孔板中，並在5％二氧化碳和4％氧氣氛圍下於含10％胎牛血清的Dulbeccos Modified Eagles Medium(DMEM)中培養24小時。此時間過後，用不含血清的DMEM漂洗，然後在不含血清的新鮮DMEM中進一步孵育60小時。然後再次用不含血清的DMED漂洗成纖維細胞單層。測試試劑和賦形劑對照分三份加入到細胞中，在最終體積為0.4ml/孔不含血清的新鮮DMEM中進一步培養24小時。立即分析此成纖維細胞條件培養液或是將其在液氮中迅速冷凍並保存在-70℃留待以後分析。然後進行細胞計數並將從斑點印跡分析得來的數據標準化為細胞數。
真皮成纖維細胞條件培養液中原膠原-I和核心蛋白聚糖蛋白的斑點印跡分析從賦形劑(作為對照)或測試試劑處理過的真皮成纖維細胞中得來的條件培養液樣品，其中補充20mM的二硫蘇糖醇(200mM儲備液的1∶10稀釋液)和0.1％十二烷基硫酸鈉(10％儲備液的1∶100稀釋液)，充分混合後在75℃培養2分鐘。通過連續稀釋純的成纖維細胞條件培養液得到分析標準，純的成纖維細胞條件培養液從以10000細胞/cm2密度接種在175cm2培養瓶中並在上述無血清的DMEM中培養的成纖維細胞得來。
然後依照生產商的使用說明，使用Bio-Rad生產的96孔Bio-Dot儀將鑑定樣品分三份施用到Imobilon-P轉移膜的預溼片上。每孔大約施用200μL培養液。培養液在重力作用下通過膜濾過(30分鐘)，然後將膜用PBS洗滌兩次(200μL)。此PBS洗液可允許在重力下通過膜濾過(2×15分鐘)。然後將Bio-Dot儀連接到真空歧管上並在吸力下第三次也是最後一次用PBS洗滌。拆開儀器，取出膜並在置於封存緩衝液中4℃過夜之前根據需要快速切割。
為核心蛋白聚糖分析製備的膜在PBS中用3％(重量/體積)BSA/0.1％(體積/體積)Tween 20阻斷，同時用於原膠原分析的膜在PBS中用5％(重量/體積)乾燥脫脂奶粉/0.05％ Tween 20阻斷。在接下來幾天中，膜用1∶10000抗人原膠原-I(MAB1912；鼠單克隆；Chemicon Int.Inc.，Temecula，CA)或抗人核心蛋白聚糖(兔多克隆；Biogenesis)的一抗稀釋液在室溫下標記2小時。隨後膜用TBS/0.05％ Tween 20(3×5分鐘)淋洗，接著如所需用125I-標記鼠抗或兔抗F(ab』)2片段(Amersham)的1∶1000稀釋液在室溫下孵育1小時。
此後，在允許空氣中室溫乾燥之前，Immobilon帶再次用TBS/Tween 20(3×5分鐘)淋洗。乾燥的膜包裹在玻璃紙中並暴露於Molecular Dynamics的磷光屏(phosphor screen)達16-18小時。然後暴露的磷光屏用ImageQuantTM軟體通過磷顯示計(MolecularDynamics Phosphorimager SF)掃描。點密度通過計算機輔助圖像分析來評估，使用ImageQuantTM中的定量工具，標準化為細胞數，並確定了不同檢測試劑對核心蛋白聚糖和原膠原-I合成的影響與100個隨機單元的賦形劑處理對照值相關。
檢測測試結果圖示於圖1和圖2。為了將測試結果標準化，確定了檢測物質的效用與100個隨機單元的賦形劑處理對照值相關。
作為對照，用視黃酸進行試驗以評估它對人真皮成纖維細胞中核心蛋白聚糖合成的影響。
圖1和圖2的結果表明，與對照樣相比，8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮顯著地促進了人真皮成纖維細胞中原膠原-I和核心蛋白聚糖的合成。
皮膚中核心蛋白聚糖的水平與皮膚改善的狀態和外觀有關。提高皮膚中核心蛋白聚糖的水平對於控制和校正皮膚中膠原沉積很重要，這與許多皮膚益處有關，如光損傷皮膚的除皺和真皮修復。
視黃酸(1μm)對照試驗表明核心蛋白聚糖升高，138 3 14(p＝0.035，n＝4)，經確定與100個隨機單元的賦形劑處理對照值相關。令人驚訝的是，數據進一步表明受影響的人真皮成纖維細胞中核心蛋白聚糖合成的上調程度超過了原有的抗老化真皮修復活性成分，即視黃酸。
使用8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮和其它已知雌激素或植物雌激素進行了進一步的對照檢測，以比較原膠原-I和核心蛋白聚糖的上調。
在檢測中使用與上述相同的程序。
開始，得到含苯酚紅(它本身具有雌激素活性)的培養液中已知雌激素和植物雌激素的結果。然後進行8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮和不含苯酚紅的培養液中已知雌激素和植物雌激素的重複檢測。結果列於下面表1和表2中。
表1用含苯酚紅的培養液培養的人成纖維細胞分泌的原膠原I和核心蛋白聚糖水平的增長百分比。

數據以與賦形劑處理對照值100相關的隨機單元表示。
表2用不含苯酚紅培養液培養的人成纖維細胞分泌的原膠原I和核心蛋白聚糖水平的增長百分比。

數據用與賦形劑處理對照值100相關的隨機單元表示。
上面的檢測結果清楚地表明8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮與其它已知的雌激素和植物雌激素相比是一種更好的原膠原I和核心蛋白聚糖誘導劑。不希望被理論束縛，相信8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮不會像雌激素一樣發揮作用但可以通過另一種分子途徑促進這兩種修復標記物的合成。
實施例2成纖維細胞的PGE2分析下面的實施例表明8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮能有效地降低體外培養成纖維細胞分泌的前列腺素E2(PGE2)的基本水平。
第2代(P2)主要的人包皮成纖維細胞以10000細胞/孔接種到96孔板中，並在5％二氧化碳氣氛下於含10％胎牛血清的DulbeccosModified Eagles Medium(DMEM)中培養24小時。然後將8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮溶於乙醇並加入到新鮮的細胞培養液中(乙醇在含10％胎牛血清的DMEM中的最終濃度為1％)並分三份加入孔內細胞中進一步培養24小時。佛波醇十四(烷)酸酯乙酸鹽(PMA)(Sigma)加入到培養液中並進一步培養細胞24小時。PMA用作引發細胞中氧化應激和發炎反應的應激物。然後立即如下述分析成纖維細胞/培養液或將其在液氮中迅速冷凍並保存在-70℃以進行進一步分析。
前列腺素E2(PGE2)分析輕搖培養板後取50μL體積的培養液進行PGE2分析。培養液中的PGE2水平用Biotrak PGE2免疫測定試劑盒(Amersham，英國)測定。對有限量的固定的PGE2特異性抗體的分析基於樣品中未標記的PGE2與固定量的用山葵過氧化物酶標記的PGE2之間的競爭。未標記的PGE2的濃度根據同時獲得的標準曲線來確定。
通過化合物與對照樣相比降低所分泌PGE2基本水平的能力來測試化合物的抗炎能力。所得結果示於圖3。
PGE2是一種人所熟知的皮膚炎症調節劑，見Greaves等「Prostagludus，leukotriemes，phospholipase，plateletactuating factor and cytokinean intergrated approach toinflammation of human skin」，Arch.Dermatol.Res.(1988)280[supp]533-541。結果表明用8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮處理過的成纖維細胞產生較少的促炎前列腺素PGE2，從而降低皮膚的發炎可能性。
實施例3下面的配方描述了一種適合於本發明方法和用途的水包油霜。百分比為組合物的重量百分比。

*Brij 56是十六烷基醇POE(10)Alfol 16RD是十六烷基醇實施例4下面的配方描述了依照本發明的乳霜。

上述實施例3和4的局部組合物都提供了有效的美容護理以改進皺紋、老化、光損傷和/或受刺激皮膚的外觀，當施用到隨老化或光老化而變壞的皮膚上時或施用到年輕皮膚上以幫助預防或延緩這些變質時。組合物可用傳統方式加工。
權利要求
1.一種局部組合物，包含(a)有效量的8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮；和(b)皮膚病學可接受的賦形劑。
2.依照權利要求1的局部組合物，其中8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮以組合物的0.001-1.0重量％存在。
3.一種提供了至少一種美容護膚益處的美容方法，益處選自護理/預防皺紋、鬆弛、乾燥、老化和/或光老化皮膚；促進/保持皮膚的膠原水平；促進/保持皮膚的核心蛋白聚糖水平；改善皮膚的肌理、光滑度和/或緊緻度；並舒緩受刺激的、發紅的和/或敏感皮膚；此方法包括給皮膚施用如權利要求1或2的局部組合物。
4.權利要求1或2之一的局部組合物用於提供至少一種護膚益處的用途，益處選自護理/預防皺紋、鬆弛、乾燥、老化和/或光老化皮膚；促進/保持皮膚的膠原水平；促進/保持皮膚的核心蛋白聚糖水平；舒緩受刺激的、發紅的和/或敏感皮膚；改善皮膚的肌理、光滑度和/或緊緻度。
全文摘要
護理老化、起皺和/或光損傷皮膚的美容方法，通過局部施用含8－異戊二烯基－4′，5，7－三羥黃烷酮的組合物而提供。
文檔編號A61K8/30GK1474684SQ01818894
公開日2004年2月11日 申請日期2001年11月2日 優先權日2000年11月14日
發明者R·M·多諾文, M·R·格林, M·C·塔斯克, P·R·亞特斯, R M 多諾文, 亞特斯, 塔斯克, 格林 申請人:荷蘭聯合利華有限公司