吡咯並苯並二氮雜類化合物的製作方法

2023-09-22 21:11:15

專利名稱：吡咯並苯並二氮雜類化合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及吡咯並苯並二氮雜萆(PBDs)，尤其是攜有C2芳基取代基 的吡咯並苯並二氮雜萆二聚體。
背景技術：
某些吡咯並苯並二氮雜萆(PBDs)具有能夠識別DNA特定序列並與之 結合的性能；該優選的序列為PuGPu。第一個PBD抗腫瘤抗生素安麴黴 素發現於1965(Leimgruber,等，J. Am. Chem. Soc" 87, 5793-5795(1965); Leimgruber，等，J. Am. Chem. Soc.， 87， 5791-5793(1965))。此後，許多天然 存在的PBDs ^皮才艮道，超過10種合成路線^皮開發應用於各種類似物 (Thurston,等，Chem. Rev. 1994, 433-465(1994))。該家族成員包括 abbeymycin(Hochlowski，等，J. Antibiotics, 40， 145-148(1987))、奇卡黴素 (chicamycin) (Konishi， 等，J. Antibiotics, 37, 200-206(1984))， DC-81(Japanese Patent 58-180 487; Thurston,等，Chem. Brit" 26， 767-772(1990) ;Bose， 等，Tetrahedron, 48, 751-758(1992))、 mazethramycin(Kuminoto， 等，J. Antibiotics, 33, 665-667(1980》、 neothramycins A和B(Takeuchi，等,J. Antibiotics, 29， 93-96(1976))、 porothramycin(Tsunakawa,等,J. Antibiotics, 41, 1366-1373(1988》、 prothracarcin(Shimizu， et al, J. Antibiotics, 29， 2492-2503(1982); Langley 和Thurston, J. Org. Chem., 52, 91-97(1987))、 sibanomicin(DC-102)(Hara， 等，J. Antibiotics, 41， 702-704(1988); Itoh,等，J. Antibiotics, 41, 1281-1284(1988))、西伯利亞黴素(Leber,等，J. Am. Chem. Soc" 110, 2992-2993(1988))和託馬黴素(Arima, 等,J. Antibiotics, 25, 437-444(1972))。 PBDs的通式為
它們由於其芳族A環和吡咯並C環中的取^基的數量、類型和位置不 同以及C環的飽和度不同而不同。在B-環中的N10-C11位置上存在亞胺 (N=C)、甲醇胺(NH-CH(OH))或甲醇胺甲醚(NH-CH(OMe)),該位置是導 致DNA烷基化的親電子中心。所有已知的天然產物在手性Clla位上具有 (S)-構型，所以當自C環向A環方向看時它們向右扭轉。這使得它們具有 與B-型DNA小溝螺旋相同的適當的三維形狀，從而能夠在結合位點匹配 (Kohn， In Antibiotics III. Springer誦Verlag， New York,第3-11頁(1975); Hurley和Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res.， 19, 230-237(1986))。能 夠在小溝形成加合物的性能使其能夠幹擾DNA加工，所以它們可以用作 抗腫瘤藥物。
本發明者曾經在WO 2004/043963公開了在C2位置上具有芳基的細胞 毒素化合物，例如
本發明者也曾經在共同未決的PCT申請PCT/GB2005/000768(以WO 2005/085251公開)中公開了攜有C2芳基的二聚體PBD化合物，例如

發明內容
本發明者發現化合物例如ZC-207具有溶解度的問題，通過採用這些 化合物的不同類型解決了這些問題。
其中
RZ為任選取代的Cwo芳基基團；
R6和R9獨立選自h、 r、 oh、 or、 sh、 sr、 nh2、 nhr、 nrr，、
硝基、Me3Sn和滷素；
其中R和R，獨立選自任選取代的d-12烷基、C3_2G雜環基和C5-2G芳基
基團；
R7選自h、 r、 oh、 or、 sh、 sr、 nh2、 nhr、 nhrr，、硝基、
Me3Sn和卣素；
r"為c3—12亞烷基和/或芳族環(苯或吡咬)，所述亞烷基鏈可以含有一或 多個雜原子，例如o、 s、 nh; x選自o、 s或nh; z為2或3;
m為藥學上可接受的單價陽離子；
R2'、 R6'、 R7'、 R9'、 x，和m，分別選自與R2、 R6、 R7、 R9、 x和m相 同的基團，或者m和m，可以一起代表藥學上可接受的二價陽離子。
已知具有亞胺鍵的吡咯並苯並二氮雜萆在水中可以轉化為二-甲醇胺 形式，因而分離出的吡咯並苯並二氮雜萆通常以亞胺、單-甲醇胺和二-甲醇 胺形式的混合物存在。另外，如果分離出來的化合物為含有這三種形式混 合物的固體，則它們之間的平衡可能會隨時間而變化。儘管這不會對化合 物的給藥造成問題，但它會對在給定量的粉末中活性物質的量的精確估算 造成困難。本發明化合物至少在一定程度上能夠克服該困難同時還能保持 活性，所以適用於藥物的製備。
二聚體吡咯並苯並二氮雜萆較單體吡咯並苯並二氮雜萆具有優勢，因 為它們具有在小溝中交聯dna的能力，這使得細胞毒性增加。
本發明的另一個方面涉及化合物在治療(尤其是治療增生性疾病)方法 中的用途，涉及含有這些化合物的組合物以及它們在生產治療增生性疾病 的藥物中的用途。
定義 取代基
本文所用術語"任選取代的"是指可以是未取代的或者是取代的母體基團。
除非另外說明，本文所用術語"取代的"是指可以攜有一或多個取代基 的母體基團。本文所用術語"取代基，，以傳統意義使用，是指以共價的方式 與母體基團結合，或者如果適當的話，與母體基團稠合。大量的取代基是 眾所周知的，其形成和引入母體基團的方法也是眾所周知的。
取代基的實例在下面更詳細地描述。
Cl12烷基本文所用術語"d-u烷基，，是指自具有1 - 12個碳原子的烴 化合物的碳原子上除去氫原子後獲得的單價基團，它們可以是脂肪族或者 是脂環族，它們可以是飽和的或不飽和的(例如部分不飽和的、完全不飽和 的)。所以，術語"烷基，，包括下面討論的亞類鏈烯基、炔基、環烷基等。
飽和烷基基團的實例包括但不限於甲基(d)、乙基(C2)、丙基(Q)、 丁
基(C》、戊基(Cs)、己基(C6)和庚基(C7)。
飽和的線性烷基基團的實例包括但不限於曱基(d)、乙基(C。、 n-丙基 (C3)、 n-丁基(Ct)、 n-戊基(Cs)、 n-己基(C6)和n-庚基(C7)。
飽和的支鏈烷基基團的實例包括異-丙基(C3)、異-丁基(C"、仲-丁基 (C4)、叔-丁基(d)、異-戊基(C5)和新-戊基(Cs)。
C2.12鏈烯基本文所用術語"(:2—12鏈烯基"是指具有一或多個碳-碳雙鍵 的烷基基團。
不飽和鏈烯基基團的實例包括但不限於乙烯基(乙烯基、-CH=CH2)、 l-丙烯基(-CI^CH-CH3)、 2-丙烯基(烯丙基，-CH-CH=CH2)、異丙烯基(l-甲基乙烯基、-C(CH3)=CH2)、 丁烯基(Q)、戊烯基(Cs)和己烯基(C6)。
C2.12炔基本文所用術語"Cw2炔基，，是指具有一或多個碳-碳三鍵
的烷基基團。
不飽和炔基基團的實例包括但不限於乙炔基(-C = CH)和2-丙炔基(炔 丙基、-CH2-C=CH)。
C3_12環烷基本文所用術語"Cw2環烷基，，是指也為環基基團的烷基 基團；也就是自環烴(碳環)化合物的脂環族環原子上除去氫原子後獲得的 單價基團，該基團具有3-7個碳原子，包括3-7個環原子。
環烷基的實例包括但不限於那些衍生自下列的基團
飽和的單環烴化合物
環丙烷(Q)、環丁烷(d)、環戊烷(Q)、環己烷(Q)、環庚烷(C7)、甲 基環丙烷(C0、 二甲基環丙烷(Cs)、甲基環丁烷(Cs)、 二甲基環丁烷(C6)、 曱基環戊烷(C6)、 二甲基環戊烷(C》和甲基環己烷(C7);
不飽和的單環烴化合物
環丙烯(<:3)、環丁烯(Q)、環戊烯(Cs)、環己烯(C6)、曱基環丙烯(CO、
二甲基環丙烯(Cs)、甲基環丁烯(Cs)、 二甲基環丁烯(C6)、甲基環戊烯(C6)、
二甲基環戊烯(C7)和曱基環己烯(C7);和 飽和多環經化合物
降蒈烷(C7)、降蒗烷(C7)、降冰片烷(C》。
C3—2。雜環基本文所用術語"C^。雜環基"是指自雜環化合物的環原 子上除去氫原子後獲得的單價基團，該基團具有3-20個環原子，其中1 -IO個為環雜原子。優選，每個環具有3-7個環原子，其中1_4個為環 雜原子。
在本文中，前綴(例如C3-2Q、 C3—7、 Cs-6等)代表環原子的數目或環原子 數目的範圍，包括碳原子或雜原子。例如，本文所用術語"Cs-6雜環基，，是
指具有5或6個環原子的雜環基基團。
單環雜環基基團的實例包括但不限於那些衍生自下列的基團
Nr.氮丙啶(C3)、氮雜環丁烷(C4)、吡咯烷(四氫吡咯)(Cs)、吡咯啉(例
如，3-p比咯啉、2，5-二氫吡咯)(Cs)、 2H-吡咯或3H-吡咯(異吡咯)(Cs)、派梵
(C6)、 二氫吡咬(Ce)、四氫吡咬(C6)、氮雜萆(C7);
01:氧雜環丙烷(C3)、氧雜環丁烷(C0、氧雜環戊烷(四氫呋喃)(Cs)、
氧雜環戊烯(二氫呋喃)(Cs)、、港烷(四氫吡喃)(C6)、 二氫吡喃(C6)、吡喃(C6)、
氧雜萆(C7);
石克雜環丙烷(C3)、硫雜環丁烷(C4)、硫雜環戊烷(四氫蓉吩)(Cs)、
硫雜環己烷(四氫噻喃)(C6)、疏雜萆(C7);
02: 二氧戊環(Cs)、 二氧六環(<:6)和二氧雜環庚烷(<:7); 03:三氧雜環己烷(C6);
N2:咪唑烷(Cs)、 二唑烷(Cs)、咪嗤啉(Cs)、吡唑啉(二氫吡唑)(Cs)、 哌喚(C6);
NiCh:四氫 惡唑(C5)、 二氫 惡唑(Cs)、四氫異 悉唑(Cs)、 二氫異 悉唑 (C5)、嗎啉(C6)、四氫嗜、嗪(C6)、 二氫喁嗪(C6)、喁嗪(Q); 噻唑啉(Cs)、鑲唑烷(Cs)、硫代嗎啉(C6); N201:噁二餘6);
OiSr.氧硫雜環戊烯(Cs)和氧硫雜環己烷(瘞噁烷)(C6);和 即^:噁蓬溱(C6)。
取代的單環雜環基基團的示例包括那些衍生自環狀糖類的基團，例如， 呋喃糖類(Cs)，如呋喃阿拉伯糖、呋喃來蘇糖、呋喃核糖和呋喃木糖；吡 喃糖類(C6)，如吡喃阿洛糖、吡喃阿萆糖、吡喃葡萄糖、吡喃甘露糖、吡 喃古洛糖、吡喃艾杜糖、吡喃半乳糖和吡喃塔羅糖。
Cs-2o芳基本文所用術語"(:5-2芳基"是指自芳族化合物的芳族環原 子上除去氫原子後獲得的單價基團，該基團具有3-20個環原子。優選， 每一個環具有5-7個環原子。
在本文中，前綴(例如Cwo、 C5-7、 Cs-6等)代表環原子的數目或環原子
數目的範圍，包括碳原子或雜原子。例如，本文所用術語"(:5.6芳基，，是指
具有5或6個環原子的芳基基團。
環原子可以全部是碳原子，例如在"碳環芳基基團"中。
碳環芳基基團的實例包括但不限於那些衍生自下列的基團苯(即苯
基)(C6)、茶(Ckj)、甘菊環(do)、蒽(<:14)、菲(Cm)、萘並萘((:18)和芘((:16)。 芳基基團(包含稠合環，其中至少一個環為芳環)的實例包括但不限於
衍生自下列的基團茚滿(如2，3-二氫-lH-茚)(C9)、茚(Q)、異茚(C9)、四 氫化萘(l，2，3，4-四氫萘(Qo)、荒(Cu)、芴(Cu)、非那烯(Cu)、醋菲(ds)和 醋蒽(Cw)。
或者，環原子可以包括一或多個雜原子，如在"雜芳基基團"中。單環 雜芳基基團的實例包括但不限於那些衍生自下列的基團 p比咯(Cs)、吡啶(C6); Ch:呋喃(Cs); S"漆吩(Cs);
NiOi: 惡唑(<:5)、異噴、唑(Cs)、異^悉嗪(C6);
N2(^:巧悉二唑(呋咱)(Cs);
NA:噁三哇(C5);
N^r.噻唑(Cs)、異噻唑(Cs);
N2:咪唑(l，3-二唑)(Cs),、吡唑(l，2-二唑)(Cs)、 p達溱(l,2-二溱)(C6)、嘧 啶(1,3-二喚)(C6)(例如胞嘧啶、胸腺嘧咬、尿嘧咬)、吡嗪(1，4-二"秦)(C6); N3:三唑(Cs)、三嗪(C6);和 N4:四峻(Cs)。
含有稠合環的雜芳基的實例包括但不限於
衍生自下列基團的Q(具有2個稠合環)苯並呋喃(OO、異苯並呋喃 (00、吲哚(ND、異吲哚(N^、中氮茚(NO、 二氫吲味(NO、異二氫吲哚(N^、 噤呤(N4)(例如腺噤呤、鳥嘌呤)、苯並咪唑(N2)、吲唑(]\2)、苯並嗜、唑(NiCh)、 苯並異噍唑(NiCh)、苯並間二氧雜環戊烯(02)、苯並呋咱(N20J、苯並三唑 (N3)、苯並噻喃(S0、苯並噻唑(NWO、苯並瘞二唑(N2S);
衍生自下列基團的Qu)(具有2個稠合環)色烯(OD、異色烯(OO、苯 並二氫吡喃(OJ、異苯並二氫吡喃(OO、苯並二 惡烷(02)、奮啉(N0、異喹 啉(Ni)、奮-秦(N0、 苯並^I溱(Ni00、苯並二嗪(N2)、吡啶並吡啶(N"、喹 喔啉(N。、會峻啉(N2)、噌啉(N2)、酞噪(N2)、 1,5-二氮雜萘(N2)、蝶咬(]\4);
衍生自苯並二氮雜萆(N2)的Cu(具有2個稠合環)；
衍生自下列基團的<:13(具有3個稠合環)啼唑(NO、 二苯並呋喃(OO、 二苯並瘞吩(S0、咔啉(N。、萘嵌間二氮雜苯(N2)、吡啶並吲咮(1\2);和
衍生自下列基團的Cm(具有3個稠合環)吖啶(N^、咕噸(OO、噻噸
(SO、夾二氧蒽(oxanthrene) (02)、吩塞5惡(ChS0、吩溱(Nz)、吩嗜、嗪(N"0、 吩瘞溱(NiSO、瘞蒽(S2)、菲啶(NO、菲咯啉(N》、吩溱(N2)。
上述基團，無論是單獨存在還是作為其它取代基的一部分存在，其自 身可以任選被一或多個選自其自身以及下面列出的另外的取代基所取代。
卣素-F、 -Cl、 -Br和-I。
羥基-OH。
醚-OR，其中R為醚取代基，例如Cw烷基基團(也稱為Cw烷氧基 基團，下面將討論)，C^o雜環基基團(也稱為C3-2雜環M基團)或C5—20
芳基基團(也稱為Cs-20芳氧基基團)，優選Cw烷基基團。
烷氧基-OR，其中R為烷基基團，例如d-7烷基基團。d—7烷氧基 基團的實例包括但不限於-OMe(甲氧基)、-OEt(乙氧基)、-O(nPr)(n-丙氧 基)、-O(iPr)(異丙氧基)、-O(nBu)(n- 丁氧基)、-O(sBu)(仲-丁氧 基)、畫O(iBu)(異丁氧基)和-O(tBu)(叔-丁氧基)。
縮醛-CI^OI^XOR2),其中W和R2獨立為縮搭取代基，例如d-7
烷基、(:3_2。雜環基或(:5.2芳基，優選d.7烷基，或者在"環"縮搭基團的情
況下，Ri和R"與它們所連接的兩個氧以及它們所連接的碳一起形成具有4 -8個環原子的雜環環。縮醛基團的實例包括但不限於-CH(OMe)2、 -CH(OEt)2和陽CH(OMe)(OEt)。
半縮醛-CH(OH)(OR1)，其中I^為半縮醛取代基，例如Cw烷基、 <:3.2。雜環基或Cs-20芳基，優選d.7烷基。半縮醛基團的實例包括但不限 於-CH(OH)(OMe)和-CH(OH)(OEt)。
縮酮-CI^OI^XOR2),其中W和I^如縮醛所定義，R為縮酮取^ 基，但不為氫，例如Cw烷基、C3_2Q雜環基或C5-2Q芳基，優選Cw烷基。 縮 酮 的 實 例 包 括 但 不 限 於 -C(Me)(OMe)2 、 -C(Me)(OEt)2 、 -C(Me)(OMe)(OEt) 、 -C(Et)(OMe)2 、 -C(Et)(OEt)2和畫C(Et)(OMe)(OEt)。
半酮縮醇-CRCOHXOR1),其中W如半縮醛所定義，R為半酮縮醇
取代基，不為氫，例如Cw烷基、C3—2Q雜環基或Cs—2。芳基，優選d—7烷基。
半酮縮醇的實例包括但不限於-C(Me)(OH)(OMe)、
-C(Et)(OH)(OMe)、 -C(Me)(OH)(OEt)和-C(Et)(OH)(OEt)。 氧代(酮基，-酮)=0。 石克酮(;琉酮)=S。
亞氨基(亞胺)=NR,其中R為亞M取代基，例如氫、Cw烷基、 Cwo雜環基或Cw芳基，優選氫或Cw烷基。酯基的實例包括但不限於 =NH、 =NMe、 =NEt—NPh。
甲醯基(甲醛)-C(=0)H。
醯基(酮基)-C(=0)R，其中R為醯基取代基，例如Cw烷基(也稱為
d々烷基醯基或Cw烷醯基)、C3-2。雜環基(也稱為C3—2。雜環醯基)或C5_20
芳基(也稱為C5-2。芳醯基)，優選d.7烷基。醯基的實例包括但不限 於-C(K))CH3(乙醯基)、-C(-0)CH2CH3(丙醯基)、國C(-0)C(CH3)3(t-丁醯基) 和-C(K))Ph(苯曱醯基，苯基酮)。
^&(羧酸)-C(:O)OH。
硫代JtJ^(硫代羧酸)-C(=S)SH。
石統幾基畫C(K))SH。
硫逐M^: -C(=S)OH。
亞氨酸-C(=NH)OH。
羥將酸-C(=NOH)OH。
酯(羧酸酯，氧基羰基)-C(=0)OR，其中R為酯取代基，例如d-7
烷基、C3-2Q雜環基或Cs-2Q芳基，優選Cw烷基。酯的實例包括但不限 於-C^O)OCH3、 -C(=0)OCH2CH3、 -C(=0)OC(CH3)3和-C(-O)OPh。
醯氧基(反酯(reverse ester)): -OC(=0)R，其中R為醯氧基取代基， 例如d.7烷基、C3-20雜環基或Cs-2o芳基，優選Cw烷基。醯氧基的示例包 括 但 不 限 於 -OC(=0)CH3( 乙 醯 氧 基)、-OC(=0)CH2CH3、 OC(=0)C(CH3)3、畫OC(-O)Ph和畫OCeO)CH2Ph。
氧基羰基氧基-OC(-O)OR,其中R為酯取代基，例如Cw烷基、 C3-2Q雜環基或C5-2Q芳基，優選d_7烷基。酯的實例包括但不限 於-OC(=0)OCH3 、-OC(=0)OCH2CH3 、-OC(=0)OC(CH3)3 和 -OC(=0)OPh。
-NRiR2,其中Ri和I^獨立為M取代基，例如氫、Cw烷基(也
稱為d—7烷基氨基或二-Cw烷基氨基)、C3-2Q雜環基或C^。芳基，優選H
或Cw烷基，或者，在"環"JL基的情況中，Ri和I^與它們所連接的氮原 子一起形成具有4-8個環原子的雜環環。氨基可以是伯氨(-NH2)、仲氨 (-NHR"或叔氨(-NHR1112)，並且如果是陽離子的形式，可以是季銨 (-+NR1112113)。 氨基的 實例 包括但不限 於-NH2、 -NHCH3、 -NHC(CH3)2、 -N(CH3)2、 -N(CH2CH3)2和-NHPh。環 氨基的實例包括但不限於吖丙啶子基(aziridino)、氮雜環丁烷子基 (azetidino)、他咯烷子基、哌啶子基、派溱子基、嗎啉代和硫代嗎啉代。
醯M(氨基甲醯基、氨曱醯基、M羰基、甲醯胺)-C^C^NRiR2, 其中W和R2獨立為如氨基所定義的氨基取代基。醯氛基的實例包括但不 限於畫C^O)NH2、 -C(=0)NHCH3、 -C(=0)N(CH3)2 、 -C(=0)NHCH2CH3 和-C(^0)N(CH2CH3)2以及其中R1和R2與它們所連接的氮原子一起形成雜 環結構的醯氨基，所述雜環結構例如哌啶子基羰基、嗎啉代羰基、硫代嗎 啉代羰基和派秦子基羰基。
硫代醯#^(硫代氨甲醯基)-C^S^RiR2,其中Ri和R^蟲立為如氨 基所定義的氨基取代基。醯氨基的實例包括但不限 於-C^S)NH2、 -C(=S)NHCH3、《(=8)]\((:113)2和-<:(=8)~11 12(:113。
醯基醯^J^(醯基^J^): -NR^^C^R2,其中Ri為醯胺取代基，例如
氬、d.7烷基、C3-2。雜環基或C5-2Q芳基，優選氫或d-7烷基，W為醯基取 代基，例如Cw烷基、C3-20雜環基或C5-20芳基，優選氫或d-7烷基。醯基
醯胺的實例包括 <旦不限於-NHC(=0)CH3 、 -NHC(=0)CH2CH3 和-NHC(-O)Ph。 W和I^可以一起形成環結構，例如琥珀醯亞胺基、馬來 醯亞胺基和苯鄰二甲醯亞胺基
琥珀醯亞胺基 馬來醯亞胺基 苯鄰二曱醯亞胺基 M羰基氧基-OC^C^NI^R2,其中W和R2獨立為如氨基所定義
的氨基取代基。氨基羰基氧基的實例包括但不限於-OC(-0)NH2、 -OC(=0)NHMe、 -OC(=0)NMe2和-0<:(=0)臓2。
脲基-NCR^CONR2^3,其中議2和R3獨立為如氨基所定義的^J^ 代基，W為脲基取代基，例如氫、Cw烷基、C3-2Q雜環基或C5_2G芳基，優 選氫或Ci-7烷基。脲基的實例包括但不限於-NHCONH2 、 -NHCONHMe、 -NHCONHEt、 -NHCONMe2、 -NHCONEt2、 -NMeCONH2、 -醒eCONHMe、-醒eCONHEt、 -NMeCONMe2和畫匪eCO纖2。
胍基-NH-C(=NH)NH2。
四唑基具有4個氮原子和1個碳原子的五元芳環，
亞M: =NR,其中R為亞M取代基，例如氫、Cw烷基、(:3-20雜 環基或Cs-2。芳基，優選H或Cw烷基。亞氨基的實例包括但不限於-NH、 =NMe和Net。
脒(脒基)-C(=NR)NR2,其中每一個R均為脒取代基，例如氫、 烷基、C3-2Q雜環基或C5.2Q芳基，優選H或d.7烷基。脒的實例包括但不 限於畫C(-NH)NH2、 -C(=NH)NMe2和畫C(-NMe)NMe2。
硝基-N02。
亞硝基-NO。
疊氮基-N3。
氰基(腈)-CN。
異絲-NC。
氰氧基-OCN。
異氰氧基-NCO。
氰硫基(硫氰基)-SCN。
異氰硫基(異硫氰基)-NCS。
硫氫基(硫醇，巰基)-SH。
硫醚(石克化物)-SR，其中R為硫醚取代基，例如Cw烷基(也稱為Cw 烷石克基)、C3—20雜環基或Cw芳基，優選Cw烷基。d.7烷硫基的實例包 括但不限於-SCBb和-SCH2CH3。
二硫化物醫SS畫R，其中R為二硫化物取代基，例如d—7烷基、C3-20 雜環基或Cs-2Q芳基，優選Cw烷基(此處也稱為Cw烷基二硫化物)。Cw 烷基二硫化物的實例包括但不限於-SSCH3和-SSCH2CH3。
鋶化物(亞磺酖基，亞碸)-S(K))R,其中R為鋶化物取代基，例如Cw 烷基、C3-2。雜環基或Cs-20芳基，優選C^烷基。鋶化物的實例包括但不限 於-Se。)CH3和-S卜0)CH2CH3。
碸(磺醯基)-S(=0)2R,其中R為m^代基，例如Cw烷基、(:3-20雜 環基或Cs-20芳基，優選d—7烷基，包括例如氟化的或全氟化的Cw烷基。 碸的實例包括但不限於-S(-0)2CH3(曱磺醯基)、-8(=0)20卩3(三氟甲磺醯 基)、-S(=0)2CH2CH3(esyl)、 -S(=0)2C4F9(nonaflyl)、 -S(=0)2CH2CF3(:氟 乙磺醯基(tresyl))、 -S^O)2CH2CH2NH2(牛磺醯基(taury1))、 -S^O)2Ph(苯 磺醯基、besyl)、 4-甲基^t醯基(甲M醯基)、4-氯^t醯基(對氯^P^醯 基)、4-溴苯磺醯基(對溴苯磺醯基)、4-硝基苯基(對硝基笨璜醯基)、2-^ 餘(napsyl)和5-二曱基氨基-萘-l-基磺酸基(丹磺醯基)。
亞磺酸(亞磺基)-S(=0)OH、 -S02H。
磺酸(磺基)-S(=0)2OH、 -S03H。
亞磺酸酯-S(=0)OR，其中R為亞磺酸酯取代基，例如Cw烷基、 C3—20雜環基或Cwo芳基，優選d—7烷基。亞磺酸酯的實例包括但不限 於-S(-0)OCH3(甲氧基亞磺醯基；亞磺酸甲酯)和-S(-0)OCH2CH3(乙氧基 亞磺醯基；亞磺酸乙酯)。
磺酸酯-S(=0)2OR，其中R為磺酸酯取代基，例如Cw烷基、C3-20 雜環基或C5_2Q芳基，優選C^烷基。磺酸酯的實例包括但不限 於-S(二0)20CH3(曱氧基磺醯基；磺酸曱酯)和-S(-0)20CH2CH3(乙氧基磺醯 基；磺酸乙酯)。
亞磺基氧基-OS(=0)R，其中R為亞磺基氧基取代基，例如Cw烷
基、C3-20雜環基或C5-20芳基，優選d—7烷基。亞磺基氡基的實例包括但不
限於-OS(-0)CH3和-OS(-0)CH2CH3。
磺醯基氧基-OS(=0)2R，其中R為磺醯基氧基取代基，例如C^烷
基、C3_2 雜環基或Cwo芳基，優選C^烷基。磺醯基氧基的實例包括但不 限於-OS(-0)2CH3(甲磺酸酯)和-OS(-0)2CH2CH3(乙磺酸酯)。
硫酸酯-OS(=0)2OR;其中R為硫酸酯取代基，例如Cw烷基、C3_20 雜環基或Cw。芳基，優選d-7烷基。硫酸酯的實例包括但不限 於誦OS(-0)20CH3和-SO(-0)20CH2CH3。
氨磺醯基(亞磺酸醯胺)-SeC^NR1!^,其中F^和B^獨立為如氨基所 定義的氨_^取代基。氨磺醯基的實例包括但不限於-S(-0)NH2、 -S(=0)NH (CH3) 、 -S(=0)N(CH3)2 、 -S(=0)NH(CH2CH3) 、 S(=0)N(CH2CH3)2 和-S(-O)NHPh。
亞磺醯^&(磺酸醯胺；磺醯胺)-S^OhNI^R2,其中Ri和R2獨立 為如氨基所定義的氨基取代基。亞磺醯氨基的實例包括但不限 於8(=0)2,、 -S(=0)2NH(CH3)、 -S(=0)2N(CH3)2、 -S(=0)2NH(CH2CH3 )、-S(=0)2N(CH2CH3)2和-S(:0)2NHPh。
磺氨基-NR、(-0)20H，其中Ri為如氨基所定義的M取代基。磺 氨基的實例包括但不限於-NHSeO)20H和-N(CH3)S^O)20H。
磺醯氨基(Sulfonamino): -NI^S^OhR,其中R1為如氨基所定義的 氨基取代基，R為磺醯氨基取代基，例如d.7烷基、C3-2雜環基或C5.20 芳基，優選d-7烷基。磺醯氨基的實例包括但不限於-NHS(-0)2CH3
和-]\ 0)2<:6115。
亞磺醯氨基(Sulfinamino): -NR^^C^R,其中R1為如氨基所定義的 M取代基，R為亞磺醯M取代基，例如C^烷基、C3_2。雜環基或C5-20 芳基，優選Cw烷基。亞磺醯氨基的實例包括但不限於-NHS^O)CH3 和-N(CH3)S^O)C6Hs。
膦基(膦)-PR2，其中R為膦基取代基，例如-H、 Cw烷基、C3_20
雜環基或C5_2o芳基，優選-H、 d.7烷基或Cs.2芳基。膦基的實例包括但
不限於-PH2、 -P(CH3)2、 -P(CH2CH3)2、 -P(t曙Bu)2和國P(Ph)2. 二氧磷基-P(=0)2。
氧膦基(氧化膦)-P(=0)R2，其中R為氧膦基取代基，例如Cw烷基、 C3-2雜環基或C5.2o芳基，優選d.7烷基或C5_2Q芳基。氧膦基的實例包括
但不限於-P(-0)(CH3)2、 -P(=0)(CH2CH3)2、畫PeO)(t-Bu)2和畫P(-0)(Ph)2。 膦酸(膦醯基)-P(=0)(OH)2。
膦酸酯-P(=0)(OR)2,其中R為膦酸酯取代基，例如-H、 Cw烷基、 C3-2Q雜環基或C5_2Q芳基，優選-H、 d-7烷基或C5-2o芳基。膦酸酯的實例 包括但不限於-P(=0)(OCH3)2 、 -P(=0)(OCH2CH3)2 、隱PeO)(0誦叔曙Bu)2 和-P(:0)(OPh)2。
磷酸(膦醯基氧基)-OP(=0)(OH)2。
磷酸酯-OP(=0)(OR)2，其中R為磷酸酯取代基，例如-H、 C^烷基、
C3.2Q雜環基或CS-2e芳基，優選-H、 Cw烷基或Cs-2Q芳基。磷酸酯的實例
包括但不限於國OP^O)(OCH3)2、 -OP(=0)(OCH2CH3)2、 OP(^0)(0-叔-Bu)2 和-OP(^0)(OPh)2。
亞磷酸-OP(OH)2。
亞磷酸酯-OP(OR)2，其中R為亞磷酸酯取代基，例如-H、 Cw烷基、 C3_2Q雜環基或C5-2G芳基，優選-H、 d-7烷基或C5_2Q芳基。亞磚酸酯的實 例包括但不限於-OP(OCH3)2 、 -OP(OCH2CH3)2 、 -OP(O-叔-Bu)2 和-OP(OPh)2。
氨基亞磷酸酯(phosphoramidite):國OP(ORVnR22，其中1^和112為氨 基亞磷酸酯取代基，例如-H、(任選取代的)d—7烷基、C3-2。雜環基或C5-20 芳基，優選-H、 Cw烷基或C5-2G芳基。氨基亞磷酸酯的實例包括但不限 於-OP(OCH2CH3)-N(CH3)2、 -OP(OCH2CH3)-N(iPr)2 和-OP(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2 。
氨基磷酸酯-OPeOXOR^-NRV其中R1和R2為^tj^磷酸酯取代 基，例如-H、(任選取代的)d-7烷基、C3—20雜環基或C5-2G芳基，優選-H、 d.7烷基或C5-2Q芳基。氨基磷酸酯的實例包括但不限 於-OP(-0)(OCH2CH3)-N(CH3)2、 -OP(=0)(OCH2CH3)-N(i-Pr)2 和-OP(:0)(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2。
二氧基亞烷基-0-(CH2)n-0-，其中n=l-3，該基團與相鄰的原子結合。 二氧基亞烷基的實例包括但不限於-O-CH;rO-。
亞烷基 C3_12亞烷基本文所用術語"<:3_12亞烷基，，是指自具有3 - 12個碳原子
一個碳原子上除去兩個氬原子後獲得"歡酉&位i基團，:4以i脂肪族: 者是脂環族，並且它可以是飽和的、部分不飽和的或完全不飽和的。所以， 術語"亞烷基，，包括亞類亞鏈烯基、亞炔基、亞環烷基等，下面討論。
線性飽和的Cm亞烷基的實例包括但不限於-(CH2)n-，其中n為3-12的整數，例如-CH2CH2CH2-(亞丙基)、-CH2CH2CH2CH2-(亞丁 基)、CH2CH2CH2CH2CHH亞戊基)和-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CHH亞 庚基)。
支鏈飽和的C^2亞烷基包括但不限
於-CH(CH3)CH2-、 -CH(CH3)CH2CH2-、 -CH(CH3)CH2CH2CH2-、 -CH2C H(CH3)CH2-、 -CH2CH(CH3)CH2CH2-、 -CH(CH2CH3)-、 -CH(CH2CH3)C H2>-CH2CH(CH2CH3)CH2。
線性部分不飽和的C3—12亞烷基(Cw2亞鏈烯基和亞炔基)包括但不限
f-CH=CH-CH2-、 -CH2-CH=CH2-、 -CH=CH-CH2-CH2-、 -CH=CHCH2-CH2CH2-、 -CH=CH-CH=CH-、 CH=CH-CH=CH-CH2-、 -CH=CH-CH= CHCH2-CH2-、 -CH=CH-CH2-CH=CH-、 -CH=CH-CH2-CH2-CH=CH^ -CH2-C =C-CH2-。
支鏈部分不飽和的C3—12亞烷基(Cm亞鏈烯基和亞炔基)包括但不限
f-C(CH3)=CH-、 -C(CH3)=CH-CH2-、 -CH=CH-CH(CH3)-—-C = C-CH(CH3)-。
脂環族飽和的C3_12亞烷基(Cm亞環烷基)包括但不限於亞環戊基(例
如，環戊-l，3-亞基)和亞環己基(例如，環己-l，4-亞基)。
脂環族部分不飽和的C3—12亞烷基(Cw2亞環烷基)包括但不限於亞環戊 烯基(例如4-環戊烯-l，3-亞基)、亞環己烯基(例如2-環己烯-l，4-亞基；3-環 己烯-l,2-亞基；2,5-環己二烯-1,4-亞基)。
藥學上可接受的陽離子
藥學上可接受的單價和二價陽離子的實例在Berge等J. Pharm. Sci.， 66,1-19(1977)中有討論，它在此引入作為參考。
藥學上可接受的陽離子可以是無機或有機離子。
藥學上可接受的單價無機陽離子的實例包括但不限於鹼金屬離子，例
如Na+和K+。藥學上可接受的二價無機陽離子的實例包括但不限於鹼土金 屬陽離子，例如Ca"和Mg"。藥學上可接受的有機陽離子包括但不限於銨 離子(即NH/)和取代的銨離子(例如NH3R+、 NH2R2+、 NHR3+、 NR/)。某 些適當的取代的銨離子是那些衍生自下列的銨離子乙基胺、二乙基胺、 二環己基胺、三乙基胺、丁基胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、旅、秦、節 基胺、苯基千基胺、膽鹼、葡曱胺和氨丁三醇，還包括胺基酸，例如賴氨 酸和精氨酸。常用的銨離子的實例為N(CH3)4+。
本領域普通技術人員能夠較容易地確定候選化合物是否能夠治療任何 特定細胞類型的增生性疾病。例如，下面實施例中描述了可以適用於評價 特定化合物活性的分析方法。
術語"增生性疾病"是指過度細胞或異常細胞的不需要的或失控的細胞 增殖，無論在體外還是在體內，它都是不需要的，例如瘤形成增長或增生 性增長。
增生性疾病的實例包括但不限於良性、惡變前、惡性細胞增生，包括 但不限於贅生物和肺瘤(例如，組織細胞瘤、神經膠質瘤、星形細胞瘤、 骨瘤)、癌症(例如，肺癌、小細胞肺癌、胃腸癌、腸癌、結腸癌、乳腺癌、 卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、肝癌、腎癌、膀胱癌、胰腺癌、腦癌、肉瘤、 骨肉瘤、卡波氏肉瘤、黑素瘤)、白血病、銀屑病、骨病、纖維增生性疾病 (例如結締組織的纖維增生性疾病)和動脈^更化症。
任何類型的細胞均可以被治療，包括但不限於肺、胃腸(包括，例如腸、 結腸)、乳腺(乳房)、卵巢、前列腺、肝、腎、膀胱、胰臟、腦和皮膚。
治療方法
如上所述，本發明提供了式I化合物在治療方法中的用途。也提供了 治療方法，包括給予需要治療的患者治療有效量的式I化合物，優選藥物 組合物的形式。術語"治療有效量"為足以對患者產生有益作用的量。此類 有益作用為至少能夠改善至少一種症狀。給藥的實際量以及給藥的頻率和
時間周期取決於待治療疾病的性質和嚴重程度。普通執業醫師和其它醫生 有責任擬定治療處方(例如劑量)
化合物可以單獨給藥或者與其它治療聯合應用，同時給藥或者按順序 給藥取決於待治療的疾病。治療的實例包括但不限於化療(給予活性成分， 包括例如藥物)、外科手術和放療。
除了活性成分即式I化合物外，本發明藥物組合物及其根據本發明的 應用可以包括藥學上可接受的賦形劑、載體、緩衝劑、穩定劑或其它本領 域技術人員所熟知的物質。此類物質應為無毒的並且不會干擾活性成分的 功效。載體或其它物質的確切性能取決於給藥途徑，可以是口服給藥，或 者通過注射給藥，例如皮膚、皮下或靜脈內給藥。
用於口服給藥的藥物組合物可以是片劑、膠嚢、散劑或液體形式。片 劑可以含有固體栽體或輔料。液體藥物組合物通常含有液體載體，例如水、
石油、動物或植物油、礦物油或合成油。可以包括生理鹽水溶液、葡萄糖 或其它糖類溶液或二醇類，如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。膠嚢可以含有 固體載體，例如明膠。
對於靜脈內、皮膚或皮下注射或者在病痛部位的注射，活性成分可以
是胃腸外給藥可接受的水溶液的形式，無熱原，具有適當的pH、滲透壓和 穩定性。本領域相關技術人員能夠採用例如等滲載體如注射用氯化鈉、林 格氏注射液、乳酸林格氏注射液製備適當的溶液。如果需要，可以加入防 腐劑、穩定劑、緩沖劑、抗氧劑和/或其它添加劑。 包括的其它形式
除非另外說明，上面也包括這些取代基的已知的離子、鹽、溶劑化物 以及保護形式。例如，提及羧酸(-COOH)也包括其陰離子(羧酸根)形式 (-cocr)、鹽或溶劑化物形式以及常規的保護形式。同樣，提及氨基也包括 氨基基團的質子化形式(-N+HR1112)、鹽或溶劑化物形式，例如鹽酸鹽，以
及氨基的常規被保護形式。同樣，提及羥基也包括其陰離子形式(-o—)、鹽
或溶劑化物形式，以及常規被保護形式。
特別是，提瓦基團(-SOJV[)也包括其陰離子形式(-SOO或溶劑化物形式 以及常規被保護形式。
異構體和溶劑化物
某些化合物可能存在一種或多種特殊的幾何、光學、對映異構、非對 映異、差向異構、阻轉異構、立體異構、互變異構、構象或端基異構形式，
包括但不限於，順式-和反式；E-和Z-型；c-、 t-和r-型；內-和夕卜型；R-、 S-和內消旋-形式；d-和l-構型；(+)和(-)構型；酮-形式、烯醇-和烯醇化物-形式；順-和反-構型；向斜-和,皮斜-構型；a-和/3-構型；軸向和平伏形式； 船式、椅式、包封式和半椅式；及其組合，在下文中合稱為"異構體"(或同 質異構形式)。
在某些實施方案中，本發明化合物在C11位具有下列立體化學構型
注意除了下面所討論的互變異構形式外，尤其是應排除本文中所用 的術語"異構體，，中的結構(或構成)異構體(即，原子之間的連接是不同的而 並非僅僅是空間中原子的位置不同的異構體)。例如提及曱氧基-OCH3並不 包括其結構異構體羥曱基-CH20H。同樣，提及鄰-氯苯基並不包括其結構 異構體間-氯苯基。然而，提及一類結構時應包括此類結構中的結構異構體 形式(例如，Q々烷基包括n-丙基和異-丙基；丁基包括n-、異-、仲-和#又-丁基；甲氧基苯基包括鄰-、間-和對-曱氧基苯基)。
上述排除不是指互變異構形式，例如，酮型-、烯醇-和烯醇化物-形式， 例如，下列互變異構對酮型/烯醇(下面說明)、亞胺/烯胺、醯胺/亞氨基醇、 脒/脒、亞硝基/將、硫酮/烯疏醇、N-亞硝基/羥基偶氮基和硝基/酸式-硝基。
注意在術語"異構體"中特別包含的為具有一種或多種同位素取代基 的化合物。例如，H可以是任何同位素形式，包括111、 2H(D)和3H(T); C 可以是任何同位素形式，包括12(:、 "C和"C; O可以;l任何同位素形式， 包括160和180等等。
除非特別說明，提及特定化合物時應包括所有的此類異構體形式，包 括(完全或部分)夕卜消旋物及其另外的混合物。此類異構體形式的製備方法 (例如不對稱合成)和分離方法(例如分步結晶和色譜方法)在本領域中是已 知的，或者是通過採用本文方法或已知方法易於獲得的。
製備、純化和/或處理活性化合物的相應的溶劑化物是方便和需要的。 本文所用術語"溶劑化物，，的常規意義是指溶質(如活性化合物、活性化合物 的鹽)和溶劑的複合物。如果溶劑為水，則溶劑化物是指7JC合物，例如單-水合物、二-7jC合物、三-水合物等。
通用合成路線
PBD化合物的合成在WO 00/12508中進行了深入探討，該探討在此 引入作為參考。
根據專利申請中的討論，PBD優選路線中的關鍵步驟是環化以產生 B-環，包括在ll位上產生醛(或其相當的官能團)，並在此位置被Pro-NlO-氮攻擊
A6 u
IV
其中取代基如上所定義，RS代表與其它PBD部分的連接基(-X-R"-X-)， R"為氮保護基團，1112為112或其前體。"被掩蔽的醛，，-CPQ可以是乙縮 醛或硫縮醛，在此情況下環化包括去掩蔽。或者，它可以是醇-CHOH，在 此情況下，反應包括氧化，例如，通過TPAP、 TEMPO或DMSO(Swern
氧化)。
被掩蔽的醛化合物可以通過使相應的2，4-取代的吡咯烷與2-硝基苯甲 酸進4於縮合而獲得
R-
9
A
8、
R-
H 然後，可以將硝基還原為-NH2並通過與適當的試劑反應(例如氯代甲 酸酯)進行保護，該試劑在式IV化合物中提供了可除去的氮保護基團。
包含氧化-環化過程的方法在流程1中進行了描述(另一種類型的環化 將在後面流程2中描述)。
流程1
將醇(B)(其中Pro-N10-氮通常被保護為氨基甲酸酯)通過A4篩暴露於 的四丙基過釕酸銨(TPAP)/N-甲基嗎啉N-氧化物(NMO)從而產生氧化反應 並伴隨著自發的B-環閉合，得到需要的產物IV。已經發現TPAP/NMO氧 化過程特別適用於小規模反應，而採用基於DMSO的氧化方法(特別是 Swern氧化)證明其優於較大規模的操作(例如> 1 g)。將特別優選的氧化試 劑(二乙醯氧基碘)苯(l.l eq)和TEMPO(O.l eq)溶於CH2C12中。
未環化的醇(B)可以如下製備通常在溶液中，通常在鹼例如吡咬(優 選2當量)存在下，在中等溫度下(例如0。C)，使得式D的氮保護試劑(優選 氯代曱酸酯或醯氯)與氛基醇C的溶液進行反應。在這些條件下，通常幾乎 沒有或沒有觀察到O-醯化反應。
關鍵的氨基醇C可以通過相應的硝基化合物E的還原進行製備，選擇 能夠使得分子其它部分保持完整的方法。在適當的溶劑中(例如回流的甲醇 中)，釆用氯化錫(II)處理E，然後除去錫鹽，通常可以以高收率得到需要 的產物。
將E暴露於肼/Raney鎳避免錫鹽的產生，並且能夠得到較高收率的C ， 儘管該方法與可能的C和A-環取代基的範圍有衝突。例如，如果C-環是 不飽和的(C環本身不飽和，或者R2或R3不飽和)，則該工藝不適用。另一 種適當的還原方法是採用鈀炭作催化劑的催化氫化反應。
在例如K2C03存在下、於-25。C、在氮氣環境中，通過4吏適當的鄰-硝 基苯曱醯氯與式F化合物進行偶合，可以製備式E的硝基化合物。式F化 合物可以例如通過衍生自L-反式-羥基脯氨酸的酮的烯化作用容易地進行 製備。酮中間體也可以轉化為烯醇三氟曱磺酸酯，用於把介導的偶合反應 中。
鄰-硝基苯甲醯氯可以自式G的鄰-硝基苯甲酸(或者水解後的烷基酯) 合成，後者自身可以香草酸(或烷基酯)衍生物H製備。它們中許多可以得 自商業，有一些7>開於Althuis, T.H.和Hess， H.J., J. Medicinal Chem., 20(1) 146-266(1977)。
另 一種可選擇的環化反應(流程2)
formula see original document page 25
流程2
在流程1中，最後一步或倒數第二步是氧化環化反應。流程2中顯示 了 一種可選擇的採用硫縮醛偶合的方法。汞介導的去掩蔽使得環化為被保 護的PBD化合物IV。
硫縮醛化合物可以如流程2中所示製備採用文獻方法，使得石克縮醛 保護的C-環[才艮據文獻方法製備Langley, D.R. & Thurston, D.E., J. Organic Chemistry, 52， 91-97(1987)]與鄰-硝基苯甲酸(或水解後的烷基 酯)(G)偶合。因為疏縮醛基團的存在，得到的硝基化合物不能通過氫化反 應進行還原，所以，可以採用氯化錫(II)方法得到胺。然後，通過例如與氯 代曱酸酯或醯氯(例如2，2,2-三氯代乙基氯代甲酸酯)的反應，進行N-保護。
含有縮醛的C-環可以在此類包含其它方法(包括採用酸性條件)的去保 護的反應路線中用作代替物。
二聚體合成(流程3)
流程3
本發明中PBD 二聚體可以採用用於合成被保護的PBD單體的策略進 行合成。流程3中描述的合成路線顯示了其中二聚體連接基為式 -0-(CH2)n-0-的化合物，該連接基可以容易地修飾用作其它二聚體連接基。 二聚體形成的步驟中通常包括形成二(硝基酸)G'。然後，該化合物可以如 上面流程1或流程2中化合物G進行處理。
所述二(硝基酸)G'可以通過硝化(例如採用70%的硝酸)二(羧酸)而獲 得。這可以在鹼性條件下通過使兩當量的相應的苯曱酸與適當的二碘烷的 烷基化反應進行合成。多種苯曱酸可以得自商業，其它的可以通過常規方 法合成。或者，相應的苯甲酸酯可以通過採用適當的烷二醇進行Mitsunobu 醚化、隨後硝化、然後再水解結合在一起(不再詳述)。
二(硝基酸)的另一種合成方法包括包括二(硝基醛)的氧化，例如採用高 錳酸鉀的氧化。這可以通過採用例如70% HN03對二(醛)的直接硝化獲得。
最後，二(醛)可以通過兩當量的苯甲醛與適當的烷二醇的Mitsunobu醚化 反應而獲得。
PBD的另 一種可選擇路線
另 一種合成N10保護的PBD的方法公開於WO 2005/023814，在此引 入該文獻，它描述了異氰酸酯中間體的應用。
C2芳基取代基的引入在C2上引入離去基團formula see original document page 27通過採用適當的原料，可以將C2芳基取代基引入式IV化合物的相應 位置，在此情況下NIO可以去保護以得到需要的化合物(見下面)。或者， 可以採用下列方法，其中R12為^皮保護的羥基。環化後形成B-環，然後 通過常規方法優選將Cll-醇IV再次保護得到IIIb。例如，如果R11為TBS， 則所述保護可以通過使IV與TBSOTf和2,6-二甲基吡^^應而進行。然 後自IIIb裂解除去C2-保護基團得到C2醇。例如，當C2保護基團(R14) 為醯基時，該去保護反應可以通過加入K2C03的水溶液進行。
所述Cll位上的再次保護和C2醇的去保護〗吏得C2醇位上有選擇性 的進行反應，同時使得C11位不受影響。然後，將C2-醇氧化為酮IIIb。 優選該氧化在Swern條件下進行，獲得良好收率。然而，包括TPAP或 Dess Martin試劑的其它氧化方法也可以以良好的收率得到所述酮。
式II化合物中的R，"2可以是-OS02CH3、 -OS02(CnF2n+1)，其中n=0、 1或4，或者可以是-OS02RS，在此情況下IIIb的轉化可以通過採用適當的 酸酐處理而完成。例如，如果R，，u為三氟甲磺酸酯，則該反應採用三氟甲
磺酸酐在DCM中、在吡咬存在下進行。
式II化合物中的R，，12也可以是-I或-Br，在此情況下，IIIb的轉化可 以通過採用肼分別與碘或溴的反應而完成。
式II化合物中的R，，12也可以是-Cl ，則IIIb的轉化可以通過與磷醯氯
(例如POCl3)的反應而完成。
C2芳基取代基的引入離去基團的置換
該式II化合物可以在多種條件下反應以獲得具有偶合於Ic的C2位上 的懸掛基團(pendant group)的PBD前體分子。
特別優選採用4巴催化的偶合，例如Suzuki、 Stille和Heck偶合。該鈀 催化劑可以是任何適當的催化劑，例如Pd(PPh3)4、 Pd(OCOCH3)2、 PdCl2, Pd(dba)3。進行偶合的化合物可以是任何適當的試劑，例如，對於Heck偶 合，採用具有sp2 H的烯烴；對於Stille偶合，採用有機錫烷 (organostannanes);對於Suzuki偶合，採用有機硼衍生物。
在本發明優選的方面，偶合可以在微波條件下進行。通常，釔催化劑， 例如Pd(PPh3)4，為固體負栽的，例如在聚苯乙烯上，以便於處理和催化劑 的循環利用。未反應的硼酸可以在三氟曱磺酸酯完全消耗後採用 PS-DEAM分離，同時採用相分離柱(phase s印arator cartridge)分離偶合產 物。該方法可以在相同時間內同時合成多於一種(例如至多10、20或30種) 化合物。
式Ic化合物中的亞胺鍵可以通過標準方法去保護以獲得去保護的化合 物Ib(它可以是其甲醇胺形式或者是甲醇胺醚形成，這取決於所用的溶 劑)。例如，如果R"為Alloc,則去保護採用鈀進行以除去NIO保護基團， 隨後脫水。如果R"為Troc，則去保護採用Cd/Pb偶合試劑進行以獲得式 Ib化合物。
也可以參考WO 2004/043963和WO 2005/085251中的合成探討和實
施例，它們均在此引入作為參考。 轉化為含硫形式
式Ib化合物向本發明化合物的轉化可以通過加入適當的亞硫酸氫鹽
或亞磺酸鹽並隨後通過適當的純化步驟而進行。其它方法描述於GB2 053 894，在此引入作為參考。
其它的優選實例
優選X為O。
優選R，，代表線性飽和的Cm亞烷基，更優選為具有3、 5、 7、 8、 9、 10、 11或12個碳原子的亞烷基。其中，優選C3和Cs線性飽和的亞烷基。 R9優選為H。
R6優選選自H、 OH、 OR、 SH、 NH2、硝基和卣素，更優選為H或 閨素，最優選為H。
R7優選選自H、 OH、 OR、 SH、 SR、 NH2、 NHR、 NRR，和卣素，更 優選獨立選自H、 OH和OR，其中R優選選自任選取代的Cw烷基、C3_10 雜環基和C5-1C芳基。7-位上特別優選的取代基為OMe和OCH2Ph。
W優選為任選取代的Cs-7芳基，最優選為任選取代的苯基。
在某些實施方案中，112為<:9_12芳基，例如萘-l-基或萘-2-基。<:9_12芳 基的其它實例包括查啉基，例如會#~2-基、查啉-3-基和查啉-6-基。
在另一個實施方案中，112為<:5-7雜芳基，例如呋喃基、瘞吩基和吡咬 基。其中，優選蓉吩基，例如噻吩-2-基和噻吩-3-基。
C5-2。芳基可以攜有任何的取代基。優選其攜有1-3個取代基，更優 選攜有1和2個取代基，最優選單取代基團。
優選的C5—2。芳基(特別是苯基)的取代基包括囟素(例如F、 Cl、 Br); Cw烷氧基(例如曱氧基、乙氧基)；d—7烷基(例如甲基、三氟曱基、乙基、 丙基、叔-丁基)；二-氧基-亞烷基(例如二-氧基-亞甲基、-0-CH2-0-)。
特別優選的取代的Cs-2Q芳基包括但不限於4-甲基-苯基、4-曱氧基-苯 基、3-甲氧基苯基、4-氟-苯基、3，4-二氧基亞曱基-苯基、4-三氟甲基苯基、 4-甲硫基苯基(methylthi叩henyl)、 4-氰基苯基和4-苯氧基苯基。
特別優選的未取代的C5_2Q芳基包括但不限於瘞吩-2-基、萘-2-基、喹
啉-3-基和會#~6-基。
如果R為任選取代的C^烷基，優選其為任選取代的Cw烷基。 優選兩個PBD單體均同樣被取代。
優選M和M，均為藥學上可接受的單價陽離子，更優選其為Na+。
z優選為3。
優選的化合物包括formula see original document page 31
更優選的化合物包括:
MeO
OMe
最優選的化合物為
MeO
OMe
上述優選的化合物也可以具有Cs亞烷基連接鏈。
實施例 實施例1
(a)(2S,4R)-N-(苄基氧基a&)-2-叔-丁基二甲基甲矽烷基氧基甲基-4-羥 基吡咯烷(l)
根據本領域中已知的四步方法，自反式-4-羥基-L-脯氨酸開始，以高收 率得到化合物l(S.J. Gregson等，J. Med. Chem.， 2004,1161-1174)。
(b)(2S，4R)-N-(千基氧基羰基-2-叔-丁基二曱基甲矽烷基氧基甲基-4-氧 基乙醯基吡咯烷(2)
將吡咬(18.3 g, 18.7 mL， 232 mmol， 1.1 eq)、乙酸酐(23.6 g， 21.8 mL, 232 mmol, 1.1 eq)和DMAP(5.14 g， 42.1 mmol, 0.2 eq)加至攪拌的1(76.9 g, 211 mmol)的無水THF(l L)溶液中。將反應混合物攪拌16小時後，薄層 色i普(95:5 v/v CHCb/MeOH)顯示原料消耗完全。通過旋轉蒸發除去過量的 溶劑，將殘留物溶於EtOAc(lL)，用1NHCl(2xlL)、 H20(1 L)、鹽水(l L) 洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到為無色油狀物的乙酸鹽2(80.7 g， 94%): NMR(400 MHz, CDC13)(旋轉異構體)S 7.36-7.12(m, 5H), 5.30-5.10(m， 3H), 4.09-3.97(m, 2H)， 3.74-3.55(m， 3H), 2.36-2.29(m， 1H)， 2.11-2.06(m, 1H), 2.02(s, 3H), 0.87(s， 6H)， 0.86(s， 3H), 0.03和0.00(sx2， 6H); MS(ES), m/z(相對強度)430([M + Na+'， 95), 408([M + H廣，100)。
(c)(2S,4R)-2-叔-丁基二甲基甲矽烷基氧基甲基-4-氧基乙醯基吡咯烷
(3)
將甲珪烷基醚2(1.95 g， 4.80 mmol)和10% Pd/C(0.17 g)在無水乙醇(10 mL)中的漿狀物於45 Psi經Parr氫化16小時，此時薄層色i普(95:5 v/v CHCl3/MeOH)顯示原料消耗完全。將反應混合物通過硅藻土過濾以除去 Pd/C，濾墊用乙醇反覆洗滌。減壓下經旋轉蒸發除去過量的溶劑，得到為 淺橙色蠟狀油的胺3(1.28 g, 98%): IR(CHC13)3315, 2930， 2858， 1739， 1652， 1472， 1435,1375， 1251,1088， 838, 779， 667 cm1。
(d)l，l，-[[(丙烷-l，3-二基)二氧基二[(2S,4R)-(5-甲氧基-2-硝基-l，4-亞苯 基)羰基]]二 [2-(叔-丁基二甲基甲矽烷基氧基曱基)-4-氧基乙醯基吡咯烷(5)
將催化量的DMF(2滴)加至硝基-酸4(8.12 g, 17.4 mmol)1和草醯氯 (3.80 mL， 5.52 g, 43.5 mmol, 2.5 eq)的無水THF(250 mL)攪拌溶液中。最初 的沉澱物逐漸溶解，將反應混合物於室溫下攪拌16小時。在氮氣環境中、 於0。C(冰/丙酮)將得到的醯氯溶液滴加至攪拌的胺3(11.9 g, 43.5 mmol， 2.5 eq)、 TEA(9.71 mL， 7.05 g， 69.7 mmol, 4.0 eq)和H20(2.26 mL)的THF(IOO mL)溶液中。將反應混合物溫熱至室溫，再攪拌2.5小時。通過旋轉蒸發除 去過量的THF，將得到的殘留物在H2O(400 mL)和EtOAc(400 mL)之間分 配。分離各層，水層用EtOAc(3x200 mL)萃取。然後將合併的有機層用飽 和的NH4C1(200 mL)、飽和的NaHCO3(200 mL)、鹽水(200 mL)洗滌，幹 燥(MgSCX0。過濾並蒸發溶劑得到為深色油狀物的粗品產物。經快速色鐠 純化(99.7:0.3 v/v CHCWMeOH)分離得到純的醯胺5，為淺黃色玻璃物(13.3 g, 78%): NMR(400 MHz, CDC13)5 7.60(s, 2H), 6.60(s, 2H)， 5.06(br s， 2H), 4.44(br s, 2H)， 4.25-4.20(m， 4H)， 4.10畫4.08(m， 2H), 3.80(s, 6H),
3.64-3.62(m, 2H)， 3.36國3.32(m， 2H), 3.11誦3.08(m, 2H)， 2.36-2.26(m, 4H)， 2.13國2.08(m， 2H)， 1.92(s， 6H), 0.80(s， 18H), 0.00(sx2， 12H); 13C NMR(100.6 MHz, CDC13)5 171.0， 166.3, 154.5， 148.2, 137.4, 128.0， 127.2， 109.2, 108.5, 72.9, 65.6, 62.6， 57.4， 56.5, 54.8, 33.0, 28.6, 25.8, 21.0， 18.1; MS(ES)， m/z(相 對強度)1000([M + Na廣，39), 978([M + H廣，63), 977(M+.， 100)， 812(13)。
(e)l,l，-[[(丙烷-l，3-二基)二氧基二l(2S，4R)-(5-甲氧基-2-氨基-l，4-亞苯 基)羰基二[2-(叔-丁基二甲基曱矽烷基氧基甲基)-4-氧基乙醯基吡咯烷(6)formula see original document page 35
將連二亞硫酸鈉(16.59 g, 95.27 mmol, 5 eq)加至醯胺5(18.6 g， 19.1 mmol)的H2O(200 mL)和THF(400 mL)的攪拌溶液中。將反應混合物攪拌 36小時後j走轉蒸發除去過量的THF，將得到的殘留物用EtOAc(3x250 mL) 萃取。然後將合併的有機層用H2O(300 mL)、鹽水(300 mL)洗滌，乾燥 (MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快速色譜純化(80:20 v/v 己烷/EtOAc，然後梯度至純EtOAc)得到產物6，為黃色泡沫物(9.53 g, 55%): NMR(400 MHz, CDCb)(旋轉異構體)S 6.70和6'67(sx2， 2H)， 6.25 和6.23(sx2， 2H)， 5.20(br s， 2H)， 4.49(br s， 4H), 4.16-4.05(m， 6H)， 3.70(s， 6H)， 3.68-3.57(m， 4H)， 2.36-2.27(m， 4H), 2.12-2.04(m, 2H)， 1.96(s, 6H)， 0.85(s， 18H), 0.01和0.00(sx2， 12H); 13C NMR(100.6 MHz, CDCl3)S 170.6， 170.0， 141.1, 116.3, 113.1, 102.3, 102.1， 102.0, 66.2, 65.3, 65.2, 57.0, 28.9, 18.2; MS(ES)， m/z(相對強度)946(M十+ 29， 43)， 933([M + 16+, 61)， 932([M + 15]+, 100)， 918([M + H]+, 72)。
(f)l，l，-[[(丙烷-l，3-二基)二氧基二[(2S,4R)-[5-甲氧基-l,4-亞苯基 -2-(2,2，2-三氯代乙氧基羰基氨基)羰基]1 二 [2-(叔-丁基二甲基甲矽烷基氧基 曱基)-4-氧基乙醯基吡咯烷(7) 將冰乙酸(310 mL)和H2O(100 mL)的混合物滴加至7(13.8 g, 10.9 mmol)的THF(250 mL)溶液中，於室溫下攪拌16小時。將反應混合物用 DCM(750 mL)稀釋，用飽和的NaHC03(5 L)中和。水層用DCM(3 x 500 mL)
36
於-10。C(液氮/乙二醇)中，將2,2，2-三氯代乙基氯代甲酸酯(3.58 mL， 5.50 g， 26.0 mmol, 2.2 eq)的無水DCM(60 mL)滴加至無水吡咬(3.82 mL， 3.80 g, 47.2 mmol， 4.0 eq)和聯苯胺(bis畫aniline) 6(10.8 g， 11.8 mmol)的無水 DCM(150 mL)溶液中。於室溫下16後，將反應混合物用飽和的 NH4Cl(2xl50mL)、飽和的CuSO4(150 mL)、 H2O(150mL)、鹽水(150 mL) 洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到黃色粘稠的油狀物，將其經快 速色譜純化(70:30 v/v己烷/EtOAc)，得到為白色玻璃狀物的7(13.8 g, 92%): & NMR(400 MHz, CDC13)5 9.42(br s, 1H)， 7.83(s, 2H)， 6.76和 6.74(sx2， 2H)， 5.21(br s， 2H)， 4.79和4.73(d x 2, 4H, J = 12.0 Hz)， 4.56(br s， 2H), 4.26-4.23(m， 4H), 4.09-4.04(m， 2H)， 3.74(s, 6H), 3.72畫3.68(m， 2H), 3.60(br s， 4H), 2.40-2.32(m, 4H), 2.23-2.08(m， 2H)， 1.95(s, 6H)， 0.85(s, 18H)， 0.01和0.00(sx2, 12H); 13C NMR(100.6 MHz, CDC13)5 170.4， 169.2, 151.9， 151.5,150.8， 143.4， 132.6， 114.4,111.7, 95.3, 74.4, 65.5, 65.4, 57.3, 56.4， 32.5， 28.8， 25.8, 21.1, 18.1, 14.9; MS(ES)， m/z(相對強度)1306([M + 38廣，92)， 1304([M + 36+ ， 100), 1282([M + 14+, 97), 1280([M + 12+ ， 55)。
(g)l，l，-[[(丙烷-l，3-二基)二氧基]二 [(2S,4R)-[5-曱氧基-1，4-亞苯基 -2-(2，2,2-三氯代乙氧基羰基氨基)l羰基]]二(2-羥基甲基-4-氧基乙醯基吡咯 烷)(8)
萃取，合併有機層，用鹽水(l L)洗滌，乾燥(MgS04)。薄層色譜(60:40 v/v己 烷/EtOAc)顯示原料完全消失。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快速 柱色譜層析純化(99.7:0.3 v/v CHCi3/MeOH梯度至96:4 v/v CHCl3/MeOH)，得到為白色玻璃狀物的產物8(11.6 g， > 100%): & 醒R(500 MHz, CDC13)5 8.92(br s， 2H)， 7.55(s, 1H)， 6.71(s, 1H)， 5.18(br s， 2H)， 4.78(d, 2H， J = 12.0 Hz), 4.72(d, 2H, J = 12.0 Hz)， 4.50(br s， 2H), 4.22-4.19(m， 4H), 4.00(br s， 2H)， 3.78(s， 6H)， 3.76-3.52(m， 6H)，)， 2.32-2.30(m, 2H), 2.21-2.17(m， 2H), 2.09-2.04(m, 2H)1.94(s， 6H); 13C NMR(125.8 MHz, CDC13)5 170.4， 152.2, 149.8, 145.0, 111.3， 106.5, 95.6， 74.4, 72.5, 65.4， 64.1, 58.7， 56.5， 56.3, 33.6, 29.1, 21.1。
(h)l,l，-[[(丙烷-l,3-二基)二氧基二[(llS，llaS,2R)-10-(2，2,2-三氯代乙 氧基羰基)-ll-羥基-7-曱氧基-2-氧基乙醯基-l,2，3，10，ll,lla-六氫-5H-吡咯 並[2,l-c][l,4苯並二氮雜萆-5-酮](9)
將TEMPO(0.69 g， 4.42 mmol， 0.4 eq)和BAIB(15.7 g， 48.7 mmol， 4.4 eq)加至二醇8(11.5 g, 11.1 mmol)的DCM(150 mL)的攪拌的溶液中。將反 應混合物攪拌2小時，用DCM(400 mL)稀釋，用飽和的NaHSO3(500 mL)、 飽和的NaHCO3(500 mL)、鹽水(200 mL)洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並蒸 發溶劑得到粗品產物，將其經快速柱色譜層析純化(99.9:0.1 v/v CHCWMeOH，然後梯度至99.7:0.3 v/v CHCl3/MeOH)得到產物9，為淺黃 色玻璃狀物(4.43 g， 39%): & NMR(400 MHz, CDC13)5 7.28(s， 2H, H6), 6.84(s, 2H， H9)， 5.68(d, 2H, J = 9.1 Hz, Hll), 5.37-5.35(m, 2H, H2)， 5.18(d， 2H， J = 12.0 Hz， Troc CH2), 4.32-4.21(m, 6H, OCH2CH2CH20, Troc CH2)， 4.03(dd, 2H， J = 13.2， 2.6 Hz, H3), 3.92(s， 6H， OCH3x2)， 3.39陽3.69(m， 4H, H3和Hlla), 2.39-2.35(m， 6H, OCH2CH2CH20和HI), 2.03(s， 6H， CH3C02 x 2) ; 13C NMR(100.6 MHz, CDC13)5 170.4(CH3CO2)， 167.4(Cquat), 154.3(Cquat)， 150.5(Cquat)， 149.1(Cquat)， 127.4(Cquat)， 124.9(Cquat)， U4.1(C9)，
110.9(C6)， 95.0(Troc CC13)， 87.5(C11), 75.0(Troc CH2), 71.4(C2), 65.5(OCH2CH2CH20), 58.4(Clla)， 56.1(OCH3)， 51.1(C3)， 35.8(C1)， 29.1(OCH2CH2CH20), 21.0(CH3CO2); MS(ES)， m/z(相對強度)1058(M + Na+ ， 100)。
(i)l,l，-[[(丙烷畫l,3-二基)二氧基二[(llS，llaS，2R)誦10-(2,2，2畫三氯代乙氧 基羰基)-ll-(叔-丁基二甲基甲矽烷基氧基)-7-甲氧基-2-氧基乙醯基 -1,2，3，10,11,113-六氫-511-吡咯並[2，1-(:][1,4苯並二氮雜萆-5-酮]1(10)
Troc Troc
將TBSOTf(2.70 mL， 3.10 g， 11.7 mmol， 3.0 eq)加至聯二醇9(4.05 g, 3.91 mmol)和2，6-二曱基吡啶(1.82 mL, 1.68 g, 15.6 mmol, 4.0 eq)的 DCM(50mL)的攪拌的溶液中。將反應混合物攪拌2.5小時，用DCM(150 mL)稀釋，用飽和的CuSO4(2xl00mL)、飽和的NaHCO3(100 mL)、鹽水 (200 mL)洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快 速柱色鐠層析純化(99.9:0.1 v/v CHCl3/MeOH)，得到為白色玻璃狀物的產 物10(5.05 g, >100%): & NMR(400 MHz, CDC13)5 7.05(s, 2H， H6)， 6.52(s， 2H, H9)， 5.53(d, 2H, J = 9.0 Hz， Hll)， 5.14(br s， 2H， H2), 4.99(d， 2H， J = 12.0 Hz， Troc CH2), 4.06-3.87(m, 8H, OCH2CH2CH20， Troc CH;j和Hlla), 3.71(s, 6H, OCH3x2), 3.48-3.43(m, 4H, H3), 2.21-2.11(m, 4H， OCH2CH2CH20和HI), 2.03-1.96(m, 2H， Hl), 1.81(s, 6H， CH3C02 x 2)， 0.63(s， 18H, TBS CH3 x 6)， 0.00(sx2, 12H， TBS CH3x4); 13C NMR(100.6
MHz, CDC13)5 170.3(CH3CO2), 167.9(Cquat)， 153.6(Cquat), 150.4(Cquat), 149.2(Cquat)， 127.9(Cquat), 125.5(Cquat)， 113.9(C9), U0.7(C6)， 95.2(Troc CC13), 88.2(C11), 74.7(Troc CH2), 71.7(C2)， 65.0(OCH2CH2CH2O), 60.5(Clla)， 56.1(OCH3), 51.2(C3)， 36.2(C1)， 28.8(OCH2CH2CH20)， 25,6(TBS CH3), 21.0(CH3CO2), 17.8(TBS Cquat)， 14.2和14.1(TBS CH3); MS(ES)， m/z(相對強度)1285([M + 21]+', 100), 1265([M + H]+.， 75)。
(j)l,l，-[[(丙烷曙l，3國二基)二氧基l二[(llS,llaS，2R)-10-(2,2，2-三氯代乙 氧基羰基)-ll-(叔-丁基二甲基甲矽烷基氧基)-7-甲氧基-2-羥基
2,3,10,11,11a-六氫-5H-吡咯並[2，l-c][l，4]苯並二氮雜萆-5-酮](11)
Troc Troc
將K2C03(93 mg， 0.67 mmol， 5.0 eq)的H20(2 mL)溶液滴加至乙酸酯 10(170 mg， 0.13 mmol)的MeOH(3 mL)的攪拌的溶液中。最初的無色溶液 最終變為黃色，觀察到形成白色沉澱物。將反應混合物攪拌16小時，此時 薄層色譜(95:5 v/v CHCl3/MeOH)顯示原料消耗完全。旋轉蒸發除去過量的 溶劑，將混合物用IN HC1小心地中和至pH 7。將得到的混合物用 EtOAc(3x25 mL)萃取，然後將合併的有機層鹽水(40 mL)洗滌，乾燥 (MgS04)。過濾並除去溶劑得到為白色玻璃狀物的產物11(151 mg， 95%): &匿R(400 MHz, CDC13)5 6.94(s, 2H， H6), 6.52(s， 2H， H9), 5.53(d， 2H, J =9.0 Hz, Hll)， 5.00(d, 2H， J - 12.0 Hz, Troc CH2)， 4.36畫4.35(m， 2H， H2), 4.06誦3.82(m， 8H， OCH2CH2CH20， Troc CH2和H3)， 3.61(s， 6H, OCH3x2), 3.54-3.48(m， 2H, Hlla)， 3.39-3.34(m, 2H, H3), 2.96和2.95(br sx2, 2H, OH x 2)， 2.21畫2.20(m, 2H， OCH2CH2CH20)， 2.19國2.08(m， 2H, Hl), 1.卯-1.74(m， 2H， HI), 0.64(s, 18H, TBS CH3 x 6)， O.OO(s， 12H, TBS CH3x4); 13C NMR(100.6 MHz, CDC13) S 168.5(Cquat)， 153.6(Cquat), 150.3(Cquat)， 149.1(Cquat), 127.9(Cquat), 125.4(Cquat), U3.9(C9), U0.7(C6)， 95.2(Troc CC13)， 88.3(C11)， 74.7(Troc CH2)， 69.4(C2)， 65.0(OCH2CH2CH2O), 60.9(Clla)， 55.9(OCH3)， 54.1(C3), 38.8(C1)， 28.9(OCH2CH2CH20), 25.6(TBS CH3), 17.8(TBS Cquat); MS(ES)， m/z(相對強度)1196([M + 16〗+、 100)，1181([M + H]+', 82)。
(k)l,l，畫[[(丙烷-l,3-二基)二氧基二[(llS,llaS)-10-(2,2，2-三氯代乙氧基 羰基)-11-(叔-丁基二甲基曱矽烷基氧基)-7-曱氧基-2-氧代-1，2,3，10,11，113-六氫-5H-吡咯並[2，l-c[l，4苯並二氮雜萆-5-酮(12)
Troc Troc
在氮氣環境中、於-60。C(液氮/CHCl3)，將無水DMSO(0.82 mL, 0.90 g, 11.5 mmol， 6.0 eq)的無水DCM(20 mL)溶液滴加至草醯氯(2.88 mL 2 M的 DCM溶液，5.76 mmol， 3.0 eq)的攪拌溶液中。於-55。C攪拌1.5小時後，將 底物11(2.26 g， 1.92 mmol)的無水DCM(30 mL)溶液滴加至反應混合物中， 然後將其於一45。C再攪拌2小時。將TEA(10.8 mL, 7.82 g; 71.7 mmol, 4.2 eq) 的無水DCM(90mL)溶液滴加至混合物中，再攪拌30分鐘。將反應混合物 溫熱至0°C ，用冷的1 N HCl(2x50 mL)、 H2O(50 mL)、鹽水(50 mL)洗滌， 乾燥(MgS04)。過濾並真空蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快速柱色語層 析純化(70:30v/v己烷/EtOAc，然後梯度至40:60 v/v己烷/EtOAc)，得到 為白色玻璃狀物的甲醇胺12(1.62 g， 72%): 1H NMR(400 MHz, CDC13)5 7.02(s, 2H, H6)， 6.54(s, 2H， H9)， 5.59(d, 2H， J = 9.2 Hz, Hll), 4.98(d， 2H， J =12.0 Hz, Troc CH2)， 4.09曙3.86(m, 8H, OCH2CH2CH20, Troc CHz和H3), 3.75-3.66(m， 10H, OCH3x2， Hlla，和H3), 2.72(dd, 2H, J = 10.2, 19.6 Hz, Hl), 2.82(dd, 2H, J = 2.6， 19.6 Hz, Hl)， 2.22-2.19(m， 2H, OCH2CH2CH20), 0.63(s, 18H, TBS CH3 x 6)， 0.00(sx2， 12H, TBS CH3x4); 13C NMR(100.6
MHz, CDC13)5 207.7(C2), 168.0(Cquat)， 153.7(Cquat), 150.7(Cquat), 149.4(Cquat)， 127.8(Cquat)， 124.6(Cquat)， U4.0(C9), U0.6(C6)， 95.1(Troc CC13)， 87.4(C11), 74.8(Troc CH2), 65.0(OCH2CH2CH2O)， 58.9(Clla)， 56.1(OCH3), 53.0(C3)， 40.3(C1), 28.8(OCH2CH2CH20), 25.6(TBS CH3), 17.8(TBS CqUat); MS(ES)， m/z(相對強度)1224([M + 48]+., 100), 1210([M + 34+ ， 60)， 1199([M + Na] + ， 35), U92([M + 16] +, 40)， 1176(M+, 18)。
(1)1，1，-[[(丙烷-l，3-二基)二氧基二[(llS，llaS)-10-(2，2,2-三氯代乙氧基 羰基)-1 l-(叔-丁基二曱基甲珪烷基氧基)-7-甲氧基-2-[[(三氟曱基)磺醯基l氧 基]-l,10,ll，lla-四氫-5H-吡咯並[2，l-c[l,4苯並二氮雜萆-5-酮(13)
於室溫下、氮氣環境中，將自剛剛打開的a瓶中取出的無水三氟甲
磺酸酐(3.09 mL， 5.19 g, 18.4 mmol, 22 eq)快速一次性加至劇烈攪拌的酮 12(0.98 g， 0.84 mmol)和無水吡啶(1.49 mL， 1.46 g， 18.4 mmol, 22 eq)的無7片 DCM(50 mL)溶液中。最初形成的沉澱物逐漸溶解，溶液最終轉變為深紅 色。將反應混合物攪拌4.5小時，此時薄層色i普(80:20 v/v EtOAc/己烷)顯 示原料消耗完全。將混合物倒入冷的飽和NaHCO3(60 mL)中，用 DCM(3x80 mL)萃取。然後將合併的有機層用飽和的CuS04(2xl25 mL)、 鹽水(125 mL)洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其 經快速柱色譜層析純化(80:20 v/v己烷/EtOAc)，得到為淺黃色玻璃狀物三 氟甲磺酸酯13(0.74 mg, 61%): [a25 D = +46.0 。(c = 0.33， CHC13); &
醒R(楊MHz, CDC13)5 7.23(s， 2H, H6)， 7.19(s， 2H， H3), 6.77(s， 2H， H9)， 5.94(d， 2H， J = 8.9 Hz， Hll)， 5.23(d， 2H, J = 12.0 Hz， Troc CH2), 4.31-4.28(m， 2H， OCH2CH2CH20)， 4.18(d, 2H， J = 12.2 Hz， Troc CH2)， 4.15-4.13(m， 2H, OCH2CH2CH20), 3.95-3.91(m， 8H， OCH3x2, Hlla)， 3.35(dd, 2H， J = 11.0， 16.6 Hz， Hl), 2.84(d, 2H， J = 16.6 Hz, Hl)， 2.46-2.44(m, 2H, OCH2CH2CH20), 0.89(s， 18H， TBS CH3 x 6), 0.29和 0'26(sx2, 12H, TBS CH3x4); 13C NMR(100.6 MHz, CDC13)S 164.9(Cquat)， 153.6(Cquat)， 151.0(Cquat), 149.5(Cquat)， 136.0(Cquat), 127.7(Cquat), 123.9(Cquat)， 121.0(C3), U4.0(C9), U0.9(C6), 95.1(Troc CC13)， 86.3(C11), 74.8(Troc CH2)，65.0(OCH2CH2CH2O)，60.6(Clla),56.2(OCH3), 34.4(C1)， 28.8(OCH2CH2CH20), 25.6(TBS CH3), 17.8(TBS Cquat); IR(CHC13)3020, 2957， 2860,1725,1674， 1651， 1604,1516,1466,1454， 1431， 1409,1329,1312， 1274,1216， 1138， 1113,1083,1042,1006，卯O， 840， 757， 668， 646, 610 cm1; MS(ES)， m/z(相對強度)1461([M + 21]+ ， 100)， 1440(M+, 55)。
(m)l,l，-[[(丙烷-l,3-二基)二氧基二[(llS，llaS)-10-(2，2,2-三氯代乙氧 基羰基)-ll-(叔-丁基二甲基甲矽烷基氧基)-7-曱氧基-2-(對-甲氧基 苯)-l,10，ll，lla-四氫-5H-吡咯並[2,l-c[l,4]苯並二氮雜萆-5-酮](14)
於室溫下，將TEA(0.20 mL， 148 mg， 1.46 mmol， 6.0 eq)的H20(1.5 mL) 和EtOH(lO mL)溶液加至三氟甲磺酸酯13(350 mg， 0.24 mmol)的曱苯(lO mL)溶液中。向該混合物中加入4-甲氧基苯硼酸(96 mg， 0.63 mmol， 2.6 eq) 和Pd(PPh3)4(llmg，9fxmol,0.04eq)。將反應混合物攪拌15分鐘，此時薄 層色i普(80:20 v/vEtOAc/己烷)顯示原料消耗完全。除去過量的溶劑，將殘 留物溶於EtOAc(25 mL)，用H20(15 mL)、鹽水(15 mL)洗滌，乾燥(MgS04)。 過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快速柱色譜層析純化(80:20 v/v己 烷/EtOAc，然後梯度至50:50 v/v己烷/EtOAc)，得到為黃色玻璃狀物的 14(286 mg, 87%): ^匪R(400 MHz， CDC13)5 7.38(s， 2H, H3), 7.32-7.28(m， 6H, H6和H13)， 6.92(d, 4H, J = 8.7 Hz， H14), 6.81(s, 2H, H9), 5.93(d， 2H， J =8.8 Hz， Hll), 5.24(d， 2H， J = 12.0 Hz， Troc CH2)， 4.34-4.29(m， 2H， OCH2CH2CH20)， 4.20-4.1 l(m， 4H, Troc CH2和OCH2CH2CH20)， 4.00畫3.96(m, 8H, Hlla和OCH3x2), 3.84(s, 6H， OCH3x2)， 3.36(dd, 2H， J = 10.8， 16.6 Hz， HI), 2.85(d, 2H, J = 16.5 Hz， HI), 2.48-2.45(m, 2H， OCH2CH2CH20)， 0.93(s， 18H， TBS CH3x6)， 0.30和0.27(sx2, 12H， TBS CH3x4) ; 13C NMR(100.6 MHz, CDC13)S 162.5(Cquat)， 161.3(Cquat), 159.2(Cquat), 151.1(Cquat)， 148.1(Cquat)， 140.3(Cquat), 126.2(C13)， 126.0(Cquat)， 123.2(Cquat), m.9(C3)， 119.3(Cquat)， U4.3(C6), 111.9(C14)， U1.2(C9)， 95.2(Troc CC13), 87.3(C11)， 74.8(Troc CH2)， 65.0(OCH2CH2CH2O), 61.5(Clla), 56.1和55.3(OCH3), 35.3(C1)， 28.8(OCH2CH2CH20)， 25.7(TBS CH3), 17.9(TBS Cquat); MS(ES)， m/z(相對強度)1357(M+'， 63)， 1114(48)， 955(59), 919(78)。
(11)1，1，-[[(丙烷-1，3-二基)二氧基二[(11&8)-7-甲氧基-2-(對-曱氧基 苯)-l，lla-二氫-5H-吡咯並[2,l-c[l,4苯並二氮雜革-5-酮(ZC-207)
將10% Cd/Pd(461 mg, 3.73 mmol， 20 eq)加至快速攪拌的14(253 mg， 0.19 mmol)、 THF(5 mL)和1 N NH4OAc(5 mL)的混合物中。將反應混合物 攪拌1.5小時，此時薄層層析顯示原料消耗完全。將固體過濾並用H20和 DCM洗滌。水層用萃取DCM(3x30 mL)，合併有機萃取液，用鹽水洗滌(50 mL)，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快速柱色鐠 層析純化(99.9:0.1 v/v CHCl3/MeOH，然後梯度至95:5 v/v CHCl3/MeOH), 得到為黃色玻璃狀物的ZC-207(132 mg， 96%): [a20D = +880.0 °(c = 0.22， CHC13);力醒R(400 MHz, CDC13)S 7.79(d, 2H, J = 3.9 Hz， Hll)， 7.44(s, 2H， H6), 7.30(s， 2H， H3), 7.24(d， 4H, J = 8.7 Hz， H13)， 6.81(d， 4H， J = 8.7 Hz, H14)， 6.79(s, 2H， H9)， 4.30畫4.18(m， 6H, OCH2CH2CH20和Hlla)， 3.86(s， 6H， OCH3x2)， 3.74(s， 6H， OCH3x2), 3.48(dd， 2H， J = 11.8， 16,2 Hz, HI), 2.85(d， 2H, J = 16.2 Hz, HI), 2.38-2.32(m, 2H， OCH2CH2CH20); 13C NMR(62.9 MHz, CDC13)S 162.5(C11), 161.3(Cquat), 159.2(Cquat), 151.1(Cquat), 148.1(Cquat), 140.3(Cquat), 126.2(C13), 126.0(Cquat)， 123.2(Cquat), 121.9(C3)， 114.3(C14), m.9(C9), U1.2(C6), 65.4(OCH2CH2CH20), 56.2和 55.3(OCH3), 53.8(Clla)， 35.6(C1)， 28.9(OCH2CH2CH20); MS(ES)， m/z(相 對強度)741(M+'， 43)， 660(71)。
(0)1,1，[[(丙烷-l,5-二基)二氧基]二[(llaS)-ll-磺基-7-甲氧基-2-(4-甲氧 基苯基)-l，10,ll，lla-四氫-5H-吡咯並[2，l-c][l，4]苯並二氮雜萆-5-酮]]鈉鹽 (ZC-423)
將亞硫酸氬鈉(6.74 mg, 65 pmol)的水(1.5 mL)溶';^i口至ZC-207(24.01
mg, 32 /tmol)的二氯曱烷(1.5 mL)的攪拌溶液中。將反應混合物劇烈攪拌2 小時，然後分離有機層和水層。薄層層析分析(洗脫劑-EtOAc)顯示水相中 沒有ZC-207存在，但有存在具有強uv吸收的基線物質。將水層凍幹得到 為白色固體的亞硫酸鹽加合物ZC-423(17 mg, 55%): & NMR(400 MHz， d6-DMSO)5 7.42(s, 2H， H-3)， 7.38(d， 4H, J = 8.72 Hz， 2，誦H)， 7.05(s, 2H, H-6), 6.92(d， 4H, J = 8.92 Hz， 3'-H)， 6.52(s, 2H， H國9), 5.27(s， 2H, NH)， 4.35-4.25(m， 2H, Hlla)， 4.15-4.05(m, 4H, OCH2CH2CH20)， 3.95(d, 2H， J = 10.4 Hz, Hll)， 3.77(s, 6H, OMe)， 3.72(s， 6H， OMe)， 3.55-3.45(m, 2H, Hl), 3.30-3.15(m, 2H, Hl)， 2.25畫2.15(m， 2H， OCH2CH2CH20)。 實施例2
(a)l，l，-[(丙烷-l,3-二基)二氧基二[(llS,llaS)-10-(2,2,2-三氯代乙氧基 羰基)-ll-(叔-丁基二曱基甲矽烷基氧基)-7-曱氧基-2-(萘-2-基)-l，10，ll,lla-四氫-5H-吡咯並[2,l-c[l，4苯並二氮雜萆-5-酮](17)
於室溫下，將TEA(0.15 mL, 1.05 mmol, 6.0 eq)的H20(1 mL)和 EtOH(lO mL)溶液加至13(251 mg, 0.17 mmol)的甲苯(6 mL)溶液中。向該 混合物中加入2-:g^酸(77.9 mg, 0.45 mmol, 2.6 eq)和Pd(PPh3)4(8.0 mg， 7 pmol, 0.04 eq)。將反應混合物在微波照射中於100。C加熱20分鐘，此時薄 層色譜(80:20 v/vEtOAc/己烷)顯示原料消耗完全。除去過量的溶劑，將殘 留物溶於EtOAc(20 mL)中，用H20(15 mL)、鹽水(15 mL)洗滌，乾燥 (MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快速柱色謙層析純化 (80:20 v/v己烷/EtOAc，然後梯度至50:50 v/v己烷/EtOAc)，得到為黃色 玻璃狀物的17(191 mg, 81%): iHNMR(400 MHz, CDC13)S 7.32-7.29(m, 6H Harom), 7.61-7.58(m, 6H， Harom)， 7.52-7.42(m， 4H, H3和Harom)， 7'30(s, 2H, H6), 6.81(s， 2H, H9)， 5.98(d， 2H, J = 8.8 Hz, Hll), 5.24(d, 2H, J = 12.0 Hz, Troc CH2), 4.35-4.30(m, 2H, OCH2CH2CH20), 4.20-4.13(m， 4H, Troc CH2 和OCH2CH2CH20), 4.08-4.00(m, 2H， Hlla)， 3.97(s, 6H， OCH3x2)， 3.50(dd，
2H， J = 10.8, 16.6 Hz， Hl)， 2.98(d, 2H， J = 16.5 Hz， Hl)， 2.50國2.48(m， 2H, OCH2CH2CH20)， 0.94(s， 18H， TBS CH3 x 6)， 0.30和0.28(sx2， 12H, TBS CH3x4)。
(b)l，l，-[[(丙烷-l，3-二基)二氧基l二[(llaS)-7-曱氧基-2-(萘-2-基)-l,lla國 二氫-5H-吡咯並[2，l-c[l，4j苯並二氮雜萆-5-酮(18)
將10% Cd/Pb (455 mg， 3.71 mmol， 26 eq)加至快速攪拌的17(1卯mg, 0.14 mmol)、 THF(3.2 mL)和1 N NH4OAc(3.2 mL)的混合物中。將反應混 合物攪拌6.5小時，此時薄層層析顯示原料消耗完全並形成副產物。將固 體過濾並用H20和MeOH洗滌。除去過量的'溶劑，將殘留物用H20(25 mL) 和DCM(25 mL)稀釋。水層用DCM(3x25 mL)萃取，合併有機萃取液，用 鹽水洗滌(50mL)，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其經 快速柱色i普層才斤純化(99:l v/v CHCl3/MeOH,然後梯度至98:2 v/v CHCl3/MeOH),得到為黃色玻璃狀物的18(38 mg， 36%): NMR(400 MHz, CDC13)5 7.85(d， 2H， J = 3.9 Hz， Hll), 7.77-7.65(m, 6H， Harom)， 7.59-7.50(m, 6H， H3和Harom), 7.47(s， 2H, H6)， 7.44誦7.33(m， 4H， Harom)， 6.82(s， 2H, H9), 4.42畫4.32(m, 2H， Hlla)， 4.31-4.14(m， 4H， OCH2CH2CH20)， 3.89(s， 6H, OCH3x2)， 3.69-3.56(m， 2H, Hl)， 3.50-3.37(m, 2H, Hl)， 2，45 2.29(m， 2H, OCH2CH2CH20)。formula see original document page 45(e)l,l，-[(丙烷-l,3-二基)二氧基二[(llaS)-11-磺基-7-甲氧基-2-(萘-2-基)-l, 10，11，11a-四氫-5H-吡咯並[2,l-c[l，4]苯並二氮雜萆-5-酮ll鈉鹽(19)
將亞硫酸氫鈉(6，67 mg， 0.064 mmol, 2.0 equiv.)的H20(1.5 mL)溶液加 至化合物18(25 mg， 0.032 mmol)的無水DCM(1.5 mL)溶液中。將反應混合物攪拌5小時。反應混合物用DCM(5 mL)和H20(5 mL)稀釋。分離水層(不 要振搖分液漏鬥)並在冷凍乾燥器中乾燥得到為比重輕的白色固體19(7 mg， 22 %): iHNMR(400 MHz， DMSO)5 7.78-7.72(m， 8H, Harom), 7.68(s, 2H， H3), 7.59-7.27(m， 6H， Har。m), 6.92(s, 2H, H6)， 6.41(s, 2H， H9), 5.21(d， 2H, J =5.2 Hz, NH)， 4.38-4.31(m, 2H， Hlla)， 4.12-3.96(m， 4H， OCH2CH2CH20), 3.87(d, 2H， J = 10.4 Hz, Hll), 3.70(s, 3H, OCH3)， 3.61(s， 3H, OCH3), 3.40-3.12(m， 4H, HI), 2.28-2.22(m, 2H， OCH2CH2CH20)。 實施例3
(a)l，l，-[[(丙烷-l,3-二基)二氧基二[(llS,llaS)-10-(2,2，2-三氯代乙氧基 羰基)-ll-(叔-丁基二甲基甲矽烷基氧基)-7-曱氧基-2-(噻吩-2-基)-l,10,ll,lla-四氫-5H-吡咯並2,l-c[l,4苯並二氮雜萆-5-酮](20)
將TEA(O.ll mL, 0.82 mmol， 6.0 eq)的H2O(0.8 mL)和EtOH(5 mL)溶 液加至13(197 mg， 0.14 mmol)的曱苯(5 mL)溶液中。向該混合物中加入瘞 吩-2-硼酸(45.5 mg, 0.36 mmol， 2.6 eq)和Pd(PPh3)4(6.3 mg， 5 pmol, 0.04 eq)。將反應混合物於室溫下攪拌3小時，此時薄層色語(S0J0v/vEtOAc/ 己烷)顯示原料消耗完全。除去過量的溶劑，將殘留物溶於EtOAc(20 mL)， 用H20(15 mL)、鹽水(15 mL)洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到 粗品產物，將其經快速柱色譜層析純化(80:20v/v己烷/EtOAc),得到為黃 色玻璃狀物的20(168 mg, 94%): iHNMR(400 MHz, CDC13)5 7.32(s, 2H, H3)， 7.26(s， 2H， H6), 7.24誦7.19(m, 2H, Harom)， 7.04國6.79(m, 2H, Harom), 6.94-6.88(m， 2H， Harom)， 6.78(s, 2H， H9)， 5.92(d， 2H, J = 8.9 Hz， Hll)， 5.24(d， 2H, J = 12.0 Hz， Troc CH2), 4.36-4.25(m， 2H, OCH2CH2CH20)， 4.19-4.08(m， 4H, Troc CH2和OCH2CH2CH20)， 4.02-3.87(m, 8H， Hlla和 OCH3x2), 3.37(dd, 2H， J = 10.8,16.6 Hz, HI), 2.85(d, 2H, J = 16.5 Hz， HI), 2.52-2.37(m, 2H， OCH2CH2CH20)， 0.91(s， 18H， TBS CH3 x 6)， 0.28和 0.25(sx2,12H， TBS CH3x4)。
(b)l，l，-[[(丙烷-1,3- 二基)二氧基二 [(llaS)-7-甲氧基-2-(噻吩-2畫 基)-l，lla-二氫-5H-吡咯並2，l-cl，4苯並二氮雜萆-5-酮](21)
將10% Cd/Pb (288 mg， 2.35 mmol， 20 eq)加至快速攪拌的20(154 mg， 0.12 mmol)、 THF(3 mL)和1 N NH4OAc(3 mL)的混合物中。將反應混合物 攪拌3小時，此時薄層層析顯示原料消耗完全。過濾固體並用H20和DCM 洗滌。水層用DCM(3xl5 mL)萃取，合併有機萃取液，用鹽水洗滌(40 mL)， 乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快速柱色鐠層析純 化(99:1 v/vCHCl3/MeOH，然後梯度至98:2 v/v CHCl3/MeOH)，得到為黃 色玻璃狀物的21(59 mg， 72%): iHNMR(400 MHz， CDC13)S 7.卯(d, 2H， J = 4.0 Hz, Hll), 7.51(s, 2H， H6)， 7.36(s， 2H, H3)， 7.22(d, 2H, J = 5.2 Hz, Harom)， 7.02(dd， 2H, J = 3.6， 5.0 Hz, Harom), 6.98(d, 2H， J = 3.4 Hz， Harom)， 6.88(s, 2H， H9)， 4.43-4.23(m, 6H, Hlla和OCH2CH2CH20), 3.94(s, 6H, OCH3x2)， 3.59(ddd， 2H, J = 2.0， 11.5,16.0 Hz， Hl)， 2,85(ddd, 2H， J = 1.5, 5.2， 16.0 Hz， Hl), 2.49-2.40(m, 2H， OCH2CH2CH20)。
(c)l，l，-[[(丙烷-l,3-二基)二氧基]二I(llaS)-ll-磺基-7-甲氧基-2-(噻吩 -2-基)-1,10，11，11a-四氫-5H-吡咯並[2,l-c][l,4]苯並二氮雜萆-5-酮鈉鹽(22)
NaS03、 H s ^4^/N^-^^^^^OMe MeO
《T o
22
將亞;s克酸氬鈉(16.5 mg, 0.159 mmol， 2.0 equiv.)的H20(3.5 mL)溶液加
至化合物21(55.0 mg, 0.079 mmol)的DCM(3.5 mL)溶液中。將反應混合物
攪拌4小時。薄層色i普(EtOAc)顯示原料消耗完全，產物斑點位於基線處。
將反應混合物用DCM和H20稀釋。分離水層(不要振搖分液漏鬥)，在冷
凍乾燥器中乾燥得到為比重輕的黃色固體22(53.9 mg， 75 %): ^NMR(400
MHz， DMSO)5 7.42(dd， 2H， J = 1.5, 4.7 Hz， Harom), 7.33國7.30(m, 6H, Harom)， 6.53(s, 2H， H9)， 5.30(d， 2H, J = 3.8 Hz, NH)， 4.35-4.29(m, 2H， Hlla)，
4.12-4.06(m， 4H, OCH2CH2CH20)， 3.95(d, 2H， J = 10.3 Hz, Hll), 3.72(s, 6H, OCH3x2), 3.53-3.19(m， 4H， Hl)， 2.23畫2.21(m， 2H, OCH2CH2CH20)。 實施例4
(a)l，l，-[[(丙烷-l,3-二基)二氧基二[(llS，llaS)-10-(2，2，2誦三氯代乙氧基 羰基)-ll-(叔-丁基二甲基甲矽烷基氧基)-7-曱氧基-2-(喹啉-6-基)-l,10，ll,lla-四氫-5H-吡咯並[2,l-c[l，4苯並二氮雜萆-5-酮(23)
於室溫下，將TEA(0.12 mL， 0.84 mmol， 6.0 eq)的H2O(0.8 mL)和 EtOH(5 mL)溶液加至三氟甲磺酸酯13(202 mg， 0.14 mmol)的甲苯(5 mL) 溶液中。向該混合物中加入6-(4,4,5，5-四甲基-1，3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)會淋(93.0 mg， 0.36 mmol， 2.6 eq)和Pd(PPh3)4(6.5 mg, 6 pmol， 0.04 eq)。 將反應混合物在孩i波照射中於IO(TC加熱15分鐘，此時薄層色"i普(80:20 v/v EtOAc/己烷)顯示原料消耗完全。除去過量的溶劑，將殘留物溶於EtOAc(20 mL),用H20(15mL)、鹽水(15 mL)洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑 得到粗品產物，將其經快速柱色"i普層析純化(80:20 v/v己烷/EtOAc，然後 梯度至50:50 v/v己烷/EtOAc)，得到為黃色玻璃狀物的23(126 mg， 64%):
iHNMR(400 MHz, CDC13)5 8.88(dd, 2H， J = 1.6， 4.2 Hz， Har。m)， 8.14(d， 2H， J = 7.6 Hz, Harom)， 8.07(d， 2H， J = 9.0 Hz， Harom)， 7.85(dd, 2H, J = 1.8, 8.9 Hz, Harom)， 7.6"s, 2H， H3)， 7,55(d, 2H, J = 1.8 Hz, Harom), 7.41(dd， 2H, J = 4.3, 8.3 Hz， Harom)， 7.31(s， 2H， H6), 6.82(s, 2H， H9), 5.98(d， 2H， J = 8.8 Hz， Hll), 5.25(d， 2H, J = 12.1 Hz, Troc CH2), 4.34誦4.31(m， 2H， OCH2CH2CH20)， 4.21-4.15(m, 4H， Troc CH2和OCH2CH2CH20)， 4.09-4.03(m， 2H, Hlla)， 3.97(s, 6H, OCH3x2)， 3.48(ddd, 2H， J = 1.6, 10.4, 16.1 Hz， Hl)， 2.98(dd， 2H， J = 2.4, 16.1 Hz， HI), 2.50-2.47(m， 2H, OCH2CH2CH20), 0.95(s， 18H， TBS CH3 x 6), 0.32和0.28(sx2, 12H, TBS CH3x4)。
(b)l,l，-[[(丙烷-1,3- 二基)二氧基1 二 [(11aS)-7國曱氧基-2畫(喹啉-6- 基)-l,lla-二氫-5H-吡咯並[2，l-c[l，4苯並二氮雜萆-5-酮U(24)
將10% Cd/Pb (516 mg， 4.21 mmol, 25 eq)滴加至快速攪拌的23(234 mg，0.17mmo1)、 THF(5 mL)和1 N NH4OAc(5 mL)的混合物中。將反應混 合物攪拌5小時，此時薄層層析顯示原料消耗完全並形成少量的副產物。 過濾固體並用H20和大量的MeOH洗滌。除去過量的溶劑，將殘留物用 H20(35 mL)和CHC13(35 mL)稀釋。水層用CHCl3(3x30 mL)萃取，合併有 機萃取液，用鹽水洗滌(IOO mL)，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到粗 品產物，將其經快速柱色譜層析純化(99.5:0.5 v/vCHCl3/MeOH，然後梯度 至96:4 v/v CHCl3/MeOH)，得到為黃色玻璃狀物的24(44 mg, 33%): &
NMR(400 MHz, CDC13)5 8.85(dd， 2H， J = 1.6， 4.2 Hz, Harom)， 8.09(d， 2H， J =7.6 Hz， Harom)， 8.03(d, 2H， J = 9.0 Hz， Harom)， 7.88(d, 2H, J = 3.9 Hz， Hll), 7.82(dd， 2H， J = 1.8, 8.9 Hz， Harom), 7.24(s, 2H, H3), 7.59(s, 2H, Harom), 7.52(s， 2H, H6), 7.48(dd, 2H, J = 4.3， 8.3 Hz， Harom), 6.88(s， 2H, H9)， 4.48-4.42(m, 2H, Hlla)， 4.39-4.28(m， 4H, OCH2CH2CH20), 3.94(s， 6H， OCH3x2)， 3.76-3.63(m, 2H, HI), 3.09-2.98(m， 2H, Hl), 2.46畫2.43(m， 2H, OCH2CH2CH20)。 實施例5
(a)l,l，-[[(丙烷-l,3-二基)二氧基二[(llS，llaS)-10-(2，2，2-三氯代乙氧基 羰基)-ll-(叔-丁基二甲基曱矽烷基氧基)-7-曱氧基-2-(3-甲氧基 苯)-l,10,ll，lla-四氫-5H-吡咯並[2,l-c]l,4]苯並二氮雜萆-5-酮(25)
於室溫下，將TEA(0.071 mL, 0.51 mmol, 6.0 eq)的H2O(0.6 mL)和 formula see original document page 49
EtOH(3.5 mL)溶液加至三氟甲磺酸酯13(122 mg, 0.085 mmol)的甲苯(3.5 mL)溶液中。向該混合物中加入3-甲氧基苯酚硼酸(33.5 mg， 0.22 mmol， 2.6 eq)和Pd(PPh3)4(3.9 mg, 3.4 fxmol, 0.04 eq)。將反應混合物在微波照射中於 100。C加熱5分鐘，此時薄層色i普(80:20 v/v EtOAc/己烷)顯示原料消耗完 全。除去過量的溶劑，將殘留物溶於EtOAc(10mL)，用H;jO(10mL)、鹽 水(10mL)洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快 速柱色i普層析純化(80:20 v/v己烷/EtOAc，然後梯度至60:40 v/v己烷 /EtOAc)，得到為黃色玻璃狀物的25(66 mg， 57%): ill NMR(400 MHz， CDC13)5 7.23(s， 2H， H3)， 7.05-7.00(m， 4H， H6和Harom), 6.70(d， 2H, J = 8.7 Hz， Harom)， 6.64(s， 2H, Harom)， 6.67-6.64(m， 4H， Harom和H9)， 5.67(d， 2H， J = 8.8 Hz, Hll)， 4.98(d, 2H, J = 12.0 Hz, Troc CH2), 4.08-4.02(m, 2H， OCH2CH2CH20), 3.92-3.84(m, 4H, Troc CH2和OCH2CH2CH20), 3.74-3.66(m， 8H, Hlla和OCH3x2), 3.68(s, 6H， OCH3x2), 3.10(dd, 2H， J = 10.8, 16.6 Hz， HI), 2.60(d， 2H, J = 16.5 Hz， Hl)， 2.22畫2.19(m， 2H, OCH2CH2CH20)， 0.68(s， 18H， TBS CH3 x 6)， 0.02和0.00(sx2， 12H, TBS CH3x4)。
(b)l,l，-[[(丙烷-l,3-二基)二氧基]二 [(llaS)-7-甲氧基-2-(3-甲氧基 苯)-l,lla-二氫-5H-吡咯並[2，l-c[l，4苯並二氮雜萆-5-酮](26)
將10% Cd/Pb (269 mg， 2.20 mmol， 25 eq)加至快速攪拌的25(119 mg， 0.088 mmol)、 THF(3 mL)和1 N NH4OAc(3 mL)的混合物中。將反應混合 物攪拌3.5小時，此時薄層層析顯示原料消耗完全。過濾固體並用1120和 MeOH洗滌。除去過量的溶劑，將殘留物用H2O(20 mL)和DCM(20 mL) 稀釋。水層用DCM(3x20 mL)萃取，合併有機萃取液，用H2O(50 mL)和 鹽水(50mL)洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其經 快速柱色譜層析純化(99.9:0.1 v/v CHCl3/MeOH，然後梯度至98:2 v/v CHCWMeOH)，；得到為黃色玻璃狀物的26(35 mg， 54%): NMR(400 MHz， CDC13)S 7.79(d, 2H, J = 3.9 Hz， Hll), 7.44(s， 2H, H3), 7.42(s, 2H， H6)' 7.21畫7.16(m， 2H, Har。m)， 6.90(d, 2H, J = 8.7 Hz, Har。m), 6.84-6.83(m, 2H， Harom)， 6.80(s, 2H， H9), 4.33誦4.17(m, 6H， OCH2CH2CH20和Hlla)， 3.86(s, 6H， OCH3x2), 3.75(s， 6H, OCH3x2)， 3.44(dd, 2H， J = 11.8, 16.2 Hz， Hl)， 3.30(d， 2H, J = 16.2 Hz, Hl)， 2.39畫2.33(m， 2H, OCH2CH2CH20)。
(c)l,l，-[[(丙烷-l，3-二基)二氧基二[(llaS)-ll-磺基-7-甲氧基-2-(3-甲氧 基苯)-l， 10,11，11a-四氫-5H-吡咯並2，l-cl[l，4苯並二氮雜萆-5-酮l鈉鹽(27)
將亞硫酸氬鈉(7.6 mg, 0.073 mmol, 2.0 equiv.)的H20(1.7 mL)溶';M口 至化合物26(27.0 mg， 0.036 mmol)的DCM(1.7 mL)溶液中。將反應混合物 攪拌2小時。薄層色"i普(EtOAc)顯示原料消耗完全，產物斑點位於基線處。 將反應混合物用DCM(5 mL)和H20(5 mL)稀釋。分離水層並冷凍乾燥得 到27，為比重輕的白色固體(12.1 mg， 35 %):力NMR(400 MHz， DMSO)5 7.61(s, 2H, H3), 7.27-7.23(m， 2H, Harom)， 7.08-6.99(m， 6H, Harom和H6)， 6.81-6.78(m, 2H, Har。m)， 6.54(s, 2H， H9)， 5.30(s, 2H, NH), 4.37-4.30(m， 2H, Hlla)， 4.17-4.08(m， 4H， OCH2CH2CH20), 3.84(d， 2H, J = 10.4 Hz， Hll), 3.78(s, 6H， OCH3x2)， 3.62(s, 6H, OCH3x2), 3.52畫3.20(m， 4H， Hl)， 2.26-2.20(m, 2H， OCH2CH2CH20)。
實施例6
(a)l，l，-[[(丙烷-l，3-二基)二氧基I二[(llS,llaS)-10-(2,2，2-三氯代乙氧基 羰基)-ll-(叔-丁基二曱基甲矽烷基氧基)-7-甲氧基-2-(3,4-亞曱基二氧基苯 基)-l，10,ll,lla-四氫-5H-吡咯並[2，l-c][l,4苯並二氮雜萆-5-酮(28)
於室溫下，將TEA(0.066 mL, 0.47 mmol, 6.0 eq)的H2O(0.6 mL)和 EtOH(3.5 mL)溶液加至三氟甲磺酸酯13(122 mg, 0.085 mmol)的甲苯(3.5 mL)溶液中。向該混合物中加入3,4-亞甲基二lL^苯基硼酸(34.2 mg, 0.21 mmol， 2.6 eq)和Pd(PPh3)4(3.6 mg， 3.2 pmol, 0.04 eq)。將反應混合物於樣史波 照射中100'C加熱5分鐘，此時薄層色鐠(80:20 v/vEtOAc/己烷)顯示原料 消耗完全。除去過量的溶劑，將殘留物溶於EtOAc(10mL)中，用H2O(10 mL)、鹽水(10mL)洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物， 將其經快速柱色鐠層析純化(80:20 v/v己烷/EtOAc，然後梯度至65:35 v/v 己烷/EtOAc),得到為黃色玻璃狀物的28(84 mg, 77%): iHNMR(400 MHz, CDC13)S 7.34(s， 2H， H6), 7.26(s， 2H， H3)， 6,89(s， 2H， H9)， 6.78-6.76(m, 4H, Harom)， 5"8Cs, 2H, OCH20)， 5,89(d， 2H， J = 8.8 Hz， Hll), S^^d, 2H， J = 12.0 Hz， Troc CH2)， 4.32-4.27(m， 2H， OCH2CH2CH20)， 4.18畫4.09(m, 4H, Troc CH2和OCH;jCH2CH20), 3.97-3.91(m， 8H， Hlla和OCH3x2)， 3.30(dd， 2H, J = 10.8， 16.6 Hz， Hl), 2.76(d, 2H, J = 16.6 Hz, Hl), 2.46-2.44(m, 2H， OCH2CH2CH20), 0.88(s, 18H， TBS CH3 x 6), 0.28和0.25(sx2， 12H, TBS C4)。
(b)l,l，-[[(丙烷-l,3-二基)二氧基二[(llaS)-7-甲氧基-2-(3，4-亞甲基二氧 基苯基)-l，lla-二氫-5H-吡咯並[2,l-c][l，4苯並二氮雜萆-5-酮](29)
將10% Cd/Pb (307 mg， 2.51 mmol， 25 eq)加至快速攪拌的28(139 mg, 0.101 mmol)、 THF(3.5mL)和1NNBUOAc(3.5mL)的混合物中。將反應混 合物攪拌5小時，此時薄層層析顯示原料消耗完全並形成少量的副產物。 過濾固體並用H20和MeOH洗滌。除去過量的溶劑，將殘留物用H20(25 mL)和DCM(25 mL)稀釋。水層用DCM(3x40 mL)萃取，合併有機萃取液， 用H2O(80 mL)和鹽水(80 mL)洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到 粗品產物，將其經快速柱色i普層析純化(99.9:0.1 v/vCHCl3/MeOH，然後梯 度至98:2v/vCHCVMeOH)，得到為黃色玻璃狀物的26(30 mg, 39%): ^NMR(400 MHz, CDC13)5 7.86(d， 2H, J = 3.9 Hz， Hll), 7.60(s, 2H， H6)， 7.36(s, 2H， H3), 6.91(d, 2H， J = 0.9 Hz， Harom), 6'86(s， 2H), 6.82國6.78(m， 4H， H9和Har。m)， 5.97(s， 2H, OCH20), 4.36-4.25(m, 6H, HI la和 OCH2CH2CH20)， 3.93(s， 6H, OCH3x2), 3.52(dd， 2H， J = 10.8,16.6 Hz, Hl)， 3.33(d， 2H, J = 16.6 Hz， HI), 2.46國2.40(m, 2H, OCH2CH2CH20)。
(c)l，l，-[[(丙烷-l,3-二基)二氧基二[(llaS)-ll-磺基-7-甲氧基-2-(3,4-亞 甲基二氧基苯基)-l， 10,11,11&-四氫-511-吡咯並[2,1-(:[1,4]苯並二氮雜萆誦5-酮鈉鹽(30)
將亞硫酸氫鈉(2.2 mg， 0.021 mmol， 2.0 equiv.)的H2O(0.5 mL)溶液加 至化合物29(8.1 mg, 0.0105 mmol)的DCM(0.5 mL)溶液中。將反應混合物 攪拌5小時。薄層色譜(EtOAc)顯示原料消耗完全，產物斑點位於基線處。 將反應混合物用DCM(1.5 mL)和H20(1.5 mL)稀釋。分離水層並冷凍乾燥 得到30,為比重輕的白色固體(3.5 mg, 34 %): iHNMR(400 MHz， DMSO)S 7.47(s, 2H， H3), 6.98(sx2， 2H, H6)， 7.06畫6.78(m, 6H， Harom), 6.51(sx2, 2H, H9)， 5.27(s, 2H, NH)， 4.32-4.26(m, 2H, Hlla), 4.17-4.07(m， 4H, OCH2CH2CH20), 3.93(d， 2H, J = 10.4 Hz, Hll)， 3.72(s， 6H， OCH3x2), 3.50-3.20(m, 4H, HI), 2.27畫2.20(m, 2H， OCH2CH2CH20)。
實施例7
(a)l,l，-[[(丙烷-l,3-二基)二氧基]二[(llS，llaS)-10-(2，2,2-三氯代乙氧基 羰基)-ll-(叔-丁基二曱基甲矽烷基氧基)-7-甲氧基-2-(4-氟苯)-l，lO，ll，lla-四氫-5H-吡咯並[2,l-c[l，4苯並二氮雜萆-5-酮](31)
於室溫下，將TEA(0.072 mL， 0.52 mmol， 6.0 eq)的H2O(0.6 mL)和
EtOH(3.5 mL)溶液加至三氟甲磺酸酯13(125 mg, 0.086mmol)的甲苯(3.5 mL)溶液中。向該混合物中加入4-氟苯硼酸(31.6 0.22mmo1, 2.6 eq)和 Pd(PPh3)4(4.0， 3.4nmo1， 0.04 eq)。將反應混合物在微波照射中於100。C加熱 5分鐘，此時薄層色鐠(80:20 v/vEtOAc/己烷)顯示原料消耗完全。除去過 量的溶劑，將殘留物溶於EtOAc(lO mL)，用H2O(10 mL)、鹽水(IO mL) 洗滌，乾燥(MgSCXO。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快速柱色譜 層析純化(80:20 v/v己烷/EtOAc，然後梯度至65:35 v/v己烷/EtOAc)，得 到為黃色玻璃狀物的31(82 mg, 71%): i;HNMR(400 MHz, CDC13)S 7.40(s， 2H, H3), 7.42(dd, 4H， J = 5.2， 8.7 Hz， Harom)， 7.28(s， 2H， H6), 7.06(dd， 4H, J =8.7 Hz， Harom), 6.70(s， 2H, H9)， 5.92(d, 2H， J = 8.8 Hz， Hll)， 5.22(d， 2H， J =12.0 Hz, Troc CH2)， 4.32-4.29(m， 2H, OCH2CH2CH20)， 4.19-4.10(m， 4H， Troc CH2和OCH2CH2CH20), 4.00-3.92(m， 8H， Hlla和OCH3x2)， 3.33(dd, 2H， J = 10.8， 16.5 Hz, Hl)， 2.84(d， 2H, J = 16.5 Hz, HI), 2.49畫2.44(m, 2H, OCH2CH2CH20)， 0.92(s, 18H， TBS CH3 x 6)， 0.30和0.27(sx2, 12H， TBS CH3x4)0
(1))1,1，-[1(丙烷-1，3-二基)二氧基]二1(1138)-7-甲氧基-2-(4-氟苯)-1，113-二氪-5H-吡咯並[2，l-c[l,4苯並二氮雜萆-5-酮1](32)
將10% Cd/Pb (342 mg, 2.80 mmol, 25 eq)加至快速攪拌的31(149 mg, 0.112 mmol)、 THF(4.5 mL)和1 N NH4OAc(4.5 mL)的混合物中。將反應混 合物攪拌5小時，此時薄層層析顯示原料消耗完全。過濾固體並用H20 和MeOH洗滌。除去過量的溶劑，將殘留物用H2O(30 mL)和DCM(30 mL) 稀釋。水層用DCM(3x30 mL)萃取，合併有機萃取液，用H2O(80 mL)和 鹽水(80 mL)洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物將其經快 速柱色譜層析純化(99.9:0.1 v/v CHCl3/MeOH，然後梯度至98:2 v/v CHCl3/MeOH)，得到為黃色玻璃狀物的32(60 mg, 75%): NMR(400 MHz, CDCl3)7.88(d, 2H， J = 3.9 Hz, Hll), S 7.51(s, 2H， H6), 7.43(s, 2H， H3)
7.34(dd, 4H, J = 5.3， 8.6 Hz， Harom)， 7.06(dd， 4H， J = 8.7 Hz, Harom)， 6,87(s, 2H, H9), 4.41畫4.25(m, 6H， Hlla和OCH2CH2CH20), 3.93(s, 3H， OCH3x2)， 3.55(dd, 2H, J = 10.8, 16.5 Hz, Hl)， 3.37(d， 2H, J = 16.5 Hz， Hl), 2.46-2.42(m, 2H， OCH2CH2CH20)。
(c)l,l，畫[(丙烷-l,3畫二基)二氧基]二[(llaS)-ll畫磺基-7畫甲氧基國2-(4國氟 苯)-l, 10，11，11a-四氫-5H-吡咯並2,l-c][l,4苯並二氮雜萆-5-酮]鈉鹽(33)
將亞硫酸氫鈉(13.9 mg， 0.134 mmol， 2.0 equiv.)的H20(3 mL)溶液加至 化合物32(48.0 mg， 0.067 mmol)的DCM(3 mL)溶液中。將反應混合物攪拌 2小時。薄層色譜(EtOAc)顯示原料消耗完全，產物斑點位於基線處。將 反應混合物用DCM(8 mL)和H20(8 mL)稀釋。分離水層並冷凍乾燥得到 33，為比重輕的白色固體(35.5 mg, 58 %): & NMR(400 MHz， DMSO)5 7.56(s， 2H, H3), 7.49(dd， 4H， J = 5.3， 8.6 Hz, Harom), 7.17(dd, 4H， J = 8.7 Hz， Harom), 7.07(s, 2H, H6), 6.53(s， 2H， H9), 5.28(s, 2H， NH)， 4.36-4.30(m, 2H, Hlla), 4.17-4.09(m, 4H, OCH2CH2CH20)， 3.95(d, 2H, J = 10.4 Hz, Hll)， 3.73(s, 6H, OCH3 x 2), 3.53-3.22(m, 4H， Hl)， 2.27-2.19(m, 2H， OCH2CH2CH20)。
實施例8
(a)l，l，-[[(戊烷-l，5-二基)二氧基]二[(2S，4R)-(5-甲氧基-2-硝基-l,4-亞苯 基)羰基l二[2-(叔-丁基二甲基甲矽烷基氧基甲基)-4-羥基乙醯基吡咯 烷](36) formula see original document page 56
將催化量的DMF(2滴)加至攪拌的硝基-酸34(15.0 g， 30.4 mmol)和草 醯氯(13.5 mL， 19.3 g, 152 mmol)的無水THF(300 mL)溶液中。將反應混合 物於室溫下攪拌16小時，真空除去溶劑。將得到的殘留物再溶於無水 THF(225 mL)中，於0'C(水/丙酮)、氮氣環境中，將該醯氯溶液滴加至攪 拌的胺35(20.7 g, 76.0 mmol)和TEA(84 mL， 61.52 g, 608 mmol)的 THF(150mL)溶液中。將反應混合物溫熱至室溫，再攪拌16小時。旋轉蒸 發除去過量的THF，將得到的殘留物在H2O(400 mL)和EtOAc(400 mL) 之間分配。分離各層，水層用EtOAc(3x130 mL)萃取。然後將合併的有機 層用飽和的NH4C1(200 mL)、飽和的NaHCO3(200 mL)、鹽水(200 mL)洗 滌，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，為深色油狀物。經快 速色i瞽純4匕(梯度流動相60:40 v/v己烷/EtOAc至40:60 v/v己烷/EtOAc) 分離得到純的醯胺36，為淺黃色玻璃狀物(23.56 g， 77%): & NMR(400 MHz， CDCl3)(旋轉異構體)5 7.66(s, 2H)， 6.71(s， 2H), 5.21-5.17(m， 2H), 4.57-4.53(m, 2H)， 4.21-4.08(m， 6H)， 3.91(s, 6H)， 3.76畫3.72(m， 2H), 3.46(dd， 2H, J = 11.8， 4.6 Hz), 3.21(d, 2H, J = 11.9 Hz), 2.44畫2.37(m， 2H), 2.24-2.18(m, 2H)， 2.03-1.94(m, 10H), 1.75-1.67(m, 2H)， 0.91畫0.84(m, 18H), 0.11-誦0.05(m, 12H); 13C NMR(100 MHz, CDC13)5 171.0， 166.4， 154.4,148.5， 137.5， 127.7, 109.2， 108.3， 72.9， 69.3， 62.6, 57.4， 56.5， 54.8, 33.0， 28.5, 25.8, 22.5, 21.0,18.2, -5.4和-5.5; LC/MS 2.93分鐘(ES+)m/z(相對強度)1006([M + H〗+， 100)。
(b)l,l，-[[(戊烷-l，5-二基)二氧基I二[(2S,4R)-(5-甲氧基-2-氨基-l，4-亞苯 基)羰基]]二2-(叔-丁基二甲基甲矽烷基氧基甲基)-4-羥基乙醯基吡咯
烷(37)
OTBS\ H2N
O
y。'
/ 37
將10% Pd-C(550 mg)的EtOAc(20 mL)漿狀物加至硝基化合物36(5.5 g， 5.47 mmol)的EtOAc(73 mL)溶液中。將混合物採用Parr設備於30 psi 氫化24小時。將混合物脫氣並經薄層層析分析(EtOAc)，觀察到原料消耗 完全。通過Whatman GF/F濾紙真空過濾除去催化劑，將濾液蒸發得到為 灰色泡沫狀物的苯胺37(5.17 g, 100%): ^ NMR(400 MHz, CDC13)5 6.71(s， 2H), 6.22(s, 2H)， 5.25-5.23(m, 2H)， 4.58畫4.30(m， 6H), 4.14-4.05(m, 2H)， 3.99(t, J = 6.6 Hz， 4H), 3.79陽3.73(m， 8H), 3.69-3.54(m， 4H)， 2.40-2.33(m, 2H), 2.16-2.08(m， 2H), 2.00(s， 6H), 1.94-1.87(m, 4H), 1.68-1.60(m， 2H), 0.89(s， 18H), 0.05和0.04(sx2, 12H); 13C NMR(IOO MHz, CDC13)5 170.6， 170.0, 151.5, 141.7， 141.2， 113.1, 111.0, 102.0, 73.5， 68.5, 62.6， 57.0， 56.2， 32.9, 28.7, 25.6, 22.6, 21.1, 18.1, -5.1和-5.4; LC/MS 2.78分鐘(ES+)m/z(相 對強度)946(M + H〗+'， 52)， 672(30)， 399(20), 274(65)， 166(20)。
(c)l，l，-[[(戊烷-l，5-二基)二氧基二[(2S,4R)-[5-甲氧基-l,4-亞苯基 -2-(2，2，2-三氯代乙氧基羰基氨基)]羰基]二[2-(叔-丁基二曱基甲矽烷基氧基 甲基)_4-羥基乙醯基吡咯烷](38)
TBSO、 /^/0/^^/0\^/ z。TBS
38
於-10。C(液氮/乙二醇)，將2,:2,2-三氯代乙基氯代甲酸酯(2.63 mL, 4.05 g， 19.1 mmol)的無水DCM(45 mL)溶液滴加至攪拌的胺37(8.21 g， 8.70 mmol) 和無水吡咬(2.81 mL, 2.75 g, 34.8 mmol)的無水DCM(120 mL)溶液中。於 室溫下攪拌16小時後，薄層色譜(50:50 v/v己烷/EtOAc)顯示原料消耗完 全。將反應混合物用飽和的NH4Cl(2x70 mL)、飽和的CuSO4(70 mL), H2O(70 mL)、鹽水(70 mL)洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到Troc-氨基甲酸酯38，為黃色泡沫狀物(11.25 g， 99%): & NMR(400 MHz,
CDC13)S 9.48(br s， 1H), 7.85(s， 2H), 6.79(s， 2H), 5.28-5.24(m， 2H)， 4.86曙4.76(m, 4H)， 4.70-4.53(m， 2H), 4.12(t， J = 6.4 Hz， 4H)， 4.14國4.10(m, 2H), 3.80(s, 6H), 3.76(dd， 2H， J = 12.2, 3.8 Hz)， 3.69畫3.62(m， 4H)， 2.44-2.37(m, 2H), 2.16(dd, 2H, J = 14.1, 8.1 Hz)， 2.10-1.92(m, 10H), 1.72-1.65(m, 2H)， 0.90(s, 18H), 0.06和0.04(s x 2， 12H); 13C NMR(IOO MHz, CDC13)S 170.5， 169.3, 152.0, 151.1, 144.2, 132.4, 114.4， 111.8， 105.2, 95.3， 74.4, 73.4, 68.7， 62.3， 57.3， 57.2， 56.5， 32.6, 28.7, 25.8, 22.6， 21.1， 18.1， -5.4和 -5.5; LC/MS 3.23分鐘(ES十/ES畫)m/z(M+,未》見察到)，472(30)， 416(15), 302(85)， 274(60)， 198(20)， 170(100), 142(50)， 110(80)。
(d)l，l，-[(戊烷-l，5-二基)二氧基二[(2S，4RH5-甲氧基-l,4-亞苯基 -2-(2，2,2-三氯代乙氧基羰基氨基)l羰基l二(2-羥基甲基-4-羥基乙醯基吡咯 烷)(39)
將冰乙酸(90 mL)加至攪拌的38(5.06 g, 3.91 mmol)的H2O(30 mL)和 THF(30 mL)溶液中。將反應混合物於室溫下攪拌16小時，此時薄層色i普 (95:5 v/vCHCl3/MeOH)顯示反應完全。於(TC(冰/丙酮)，將該酸性溶液滴 加至攪拌的NaHC03(132 g)的H20(1.3 L)溶液中。 K層用EtOAc(3x200 mL) 萃取，合併有機層，用H2O(200 mL)、鹽水(200 mL)洗滌，乾燥(MgS04)。 過濾並真空蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快速柱色i普層析純化(98:2 v/v CHCl3/MeOH)，得到為白色玻璃狀物的聯二醇39(4.04 g, 97%): &
NMR(400 MHz, CDC13)5 9.01(br s, 2H), 7.66(s， 2H), 6.79(s， 2H)， 5.23國5.20(m， 2H)， 4.84(d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.77(d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.63-4.55(m, 2H), 4.10(t， J = 6.4 Hz, 4H)， 4.08-4.01(m， 2H)， 3.82(s, 6H), 3.75(dd, 2H， J = 12.6， 3.7 Hz)， 3.70-3.58(m, 4H)， 2.26(dd, 2H, J = 14.1, 7.6 Hz)， 2.15畫2.06(m， 2H), 2.01(s, 6H)， 1.98-1.92(m, 4H)， 1.74-1.65(m, 2H); 13C 醒R(IOO MHz, CDC13)S 170.6， 170.4， 152.1， 150.9， 144.8， 131.0， 115.6, 111.3, 105.7, 95.3, 74.3， 72.5, 68.7, 64.3， 58.8， 56.6， 56.5, 33.6， 28.5， 22.6.
(e)l,l，-[(戊烷-l,5畫二基)二氧基l二(llS,llaS,2R)-10-(2，2，2-三氯代乙 氧基羰基)-ll-羥基-7-曱氧基-2-羥基乙醯基-l，2，3，10,ll,lla-六氫-5H-吡咯 並2，1《][1，4苯並二氮雜萆_5-酮(40)
將TEMPO(234 mg， 1.50 mmol)和BAIB(5.31 g， 16.5 mmol)滴加至攪 拌的聯二醇39(4.0 g, 3.75 mmol)的DCM(140 mL)溶液中。將反應混合物於 氮氣環境中攪拌24小時，此時薄層色譜(95:5 v/v CHCl3/MeOH)顯示原料 轉化為產物。將混合物用DCM(30 mL)稀釋，用飽和的NaHSO"2 x 30 mL) 水溶液、飽和的NaHCO3(2x30 mL)水溶液、鹽水(30 mL)洗滌，乾燥 (MgS04)。過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快速柱色鐠層析純化(梯 度洗脫CHC13至99.5:0.5 v/v CHCl3/MeOH)，得到為淺黃色玻璃狀物的 環化的產物40(1.99 g， 50%):力NMR(400 MHz, CDC13)S 7.27(s, 2H)， 6.78(s, 2H), 5.68(d， 2H， J = 9.7 Hz)， 5.41-5.35(m， 2H), 5'24(d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.23(d, 2H, J = 12.0 Hz)， 4.14-3.97(m， 6H), 3'93(s, 6H), 3.77-3.69(m, 4H)， 2.46-2.33(m, 4H), 2.05(s, 6H)， 2.03-1.87(m, 4H), 1.70-1.62(m, 2H); 13C
NMR(IOO MHz, CDC13)5 170.4， 167.5, 154.4, 150.6， 149.0, 127.3, 124.5, 113.7, 110.8， 95.0, 87.5， 75.0， 71.4， 68.8， 58.3， 56.2, 51.1, 35.8, 28.5, 22.4, 21.0。
(f)l，l，-[[(戊烷-l，5-二基)二氧基二[(llS,llaS，2R)-10-(2，2,2-三氯代乙 氧基羰基)-ll-(叔-丁基二甲基曱矽烷基氧基)-7-甲氧基-2-羥基乙醯基 -1，2,3,10,11,11&-六氫-511-吡咯並[2，1-(;1[1,4苯並二氮雜萆-5-酮]1(41)
將TBSOTf(1.27 mL， 1.47 g， 5.54 mmol)滴加至攪拌的聯二醇40(1.96 g
1.85 mmol)和2，6-二甲基吡啶(0.86 mL, 0.79 g, 7.39 mmol)的無水DCM(40 mL)溶液中。將反應混合物於氮氣環境中攪拌5小時，此時薄層色語 (EtOAc)顯示原料消耗完全。然後用DCM(50 mL)稀釋，有機混合物用飽 和的CuSO4(30 mL)、飽和的NaHCO3(30 mL)、鹽水(50 mL)洗滌，乾燥 (MgS04)。過濾並真空蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快速柱色譜層析純 化(40:60 v/v己烷/EtOAc)得到產物41，為白色玻璃狀物的(1.31 g， 55%): 衛H NMR(400 MHz, CDC13)5 7.27(s, 2H), 6.72(s， 2H)， 5.76(d, 2H, J = 9.0 Hz): 5.37(br s, 2H)， 5.24(d, 2H， J = 12.1 Hz), 4.17(d， 2H， J = 12.1 Hz), 4.14-3.96(m， 6H)， 3.93(s， 6H), 3.75-3.66(m， 4H), 2.40-2.33(m， 2H)， 2.28-2.18(m， 2H)， 2.04(s， 6H)， 1.98-1.卯(m, 4H)， 1.69-1.62(m， 2H), 0.86(s， 18H), 0.23和0.22(sx2， 12H); 13C N證(IOO MHz, CDC13)S 170.4， 168.0, 153.6， 150.5, 149.1， 127.9， 125.3， 113.9, 110.7， 95.2， 88.2, 74.7， 71.7, 68.7, 60.5， 56.2， 51.2, 36.3， 28.7, 25.6， 22.7, 21.1， 17.8， -4.2和-5.2。
(g)l,l，-[[(戊烷-l,5-二基)二氧基]二(llS,llaS,2R)-10-(2,2，2-三氯代乙 氧基羰基)-ll-(叔-丁基二甲基甲矽烷基氧基)-7-曱氧基-2-羥基 -1,2,3,10，11，113-六氫-511-吡咯並[2,1-(:1[1,4苯並二氮雜萆-5-酮(42)
formula see original document page 60
將K2C03(685 mg， 4.96 mmol)的H20(15 mL)溶液滴加至攪拌的乙酸 酯化合物41(1.28 g, 0.99 mmol)的MeOH(15 mL)溶液中。最初的無色溶液 最終轉變為黃色，〗t見察到形成白色沉澱物。將反應混合物於回流下加熱5 小時，此時薄層色語(EtOAc)顯示原料完全轉化為產物。旋轉蒸發除去過 量的溶劑，將混合物小心地用IN HC1中和至pH 7。將得到的混合物用 DCM(5x20 mL)萃取，然後將合併的有機層用鹽水洗滌(50 mL)，乾燥 (MgS04)。過濾，隨後真空蒸發除去溶劑，得到為白色固體的產物42(982 mg， 82%):力醒R(400 MHz, CDC13)5 7.19(s， 2H), 6.72(s, 2H), 5.75(d, 2H， J = 9.0 Hz), 5.22(d, 2H， J = 12.0 Hz)， 4.58-4.56(m, 2H), 4，18(d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.11-3.95(m, 6H)， 3.85(s， 6H)， 3.75誦3.69(m, 2H), 3.59(dd, 2H， J = 12.7, 4.2
Hz)， 2.55(br s， 2H), 2.38畫2.25(m， 2H)， 2.14-2.03(m, 2H)， 1.97誦1.85(m， 4H)， 1.74-1.62(m, 2H), 0.86(s, 18H，)， 0.22和0.21(sx2， 12H); 13C NMR(100 MHz, CDC13)5 168.5,153.6， 150.6,149.1,127.9,125.3,114.0， 110.8, 95.3， 88.3, 74.7; 69.5， 68.8， 60.8, 56.0， 54.0,38.8， 28.8, 25.6, 22.7,17.8, -4.2和畫5.2。
(h)l,l，-[(戊烷-l,5-二基)二氧基二[(llS,llaS)漏10-(2,2,2-三氯代乙氧基 羰基)-11-(叔-丁基二曱基甲矽烷基氧基)-7-曱氧基-2-氧代-1，2,3,10,11,11&-六氫-5H-吡咯並[2，l-c[l,4苯並二氮雜萆-5-酮(43)
Troc Troc
於5分鐘內、於氮氣氛下、-60。C(液N2/CHCl3)，將無水DMSO(0.34 mL， 0.37 g， 4.78 mmoI)的無水DCM(4 mL)溶液滴加至攪拌的草醯氯(1.20 mL 的2M的DCM溶液，2.39 mmol)。於-55。C攪拌15分鐘後，將底物42(962 mg, 0.80 mmol)的無水DCM(8 mL)溶液於10分4中內滴加至反應混合物 中。於-55。C再攪拌1小時後，將TEA(1.56 mL， 1.13 g; 11.2 mmol)的無水 DCM(4 mL)溶液於5分鐘內滴加至反應混合物中。將反應混合物溫熱至0 。C ，然後用DCM(50 mL)稀釋。將有機溶液用冷的1 N HC1(20 mL)、 H2O(20 mL)、鹽水(30mL)洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並真空蒸發溶劑得到粗品產 物，將其經快速柱色鐠層析純化(50:50v/v己烷/EtOAc),得到為泡沫狀物 的聯二酮43(550 mg, 57%): & NMR(400 MHz, CDC13)5 7.25(s, 2H)， 6.76(s， 2H), 5.82(d， 2H, J = 9.3 Hz), 5.22(d, 2H, J = 12.0 Hz), 4.32(d， 2H， J = 20.4 Hz)， 4.22(d, 2H, J = 12.0 Hz)， 4.17-4.08(m， 4H), 4.03-3,89(m, 10H), 2.96(dd， 2H, J = 19.6， 10.2 Hz)， 2.56(dd, 2H， J = 19.6， 2.8 Hz), 1.99-1.92(m, 4H), 1.72-1.64(m, 2H)， 0.86(s, 18H), 0.24和0.23(sx2， 12H); 13C NMR(IOO MHz, CDC13)5 207.7， 168.0, 153.8， 151.0, 149.5, 127.9, 124.4， 114.1, 110.8, 95.2， 87.5, 74.8, 68.8, 58.9， 56.2， 52.9, 40.4， 28.7, 25.6, 22.8 17.8， -4.12和 -5.31。
(i)l,l，-[[(戊烷-l,5-二基)二氧基二[(llS,llaS)-10-(2,2,2-三氯代乙氧基 羰基)-l l-(叔-丁基二甲基曱矽烷基氧基)-7-甲氧基-2-[[(三氟甲基)磺醯基]氧
基l-l，10,ll，lla-四氫-5H-吡咯並[2,l-cI[l，41苯並二氮雜萆-5-酮11(44)formula see original document page 62
於0-5。C(冰)、氮氣環境中，將自剛剛打開的安瓿瓶中取出的無水三 氟甲磺酸酐(1.61 mL， 2.71 g, 9.60 mmol)—次性快速加至劇烈攪拌的酮43 (525 mg， 0.44 mmol)和無水吡啶(0.78 mL, 759 mg， 9.60 mmol)的無水 DCM(25mL)溶液中。將反應混合物立即溫熱至室溫，最終轉變為深紅色。 將反應混合物攪拌共28小時，此時薄層色譜(80:20 v/v EtOAc/己烷)顯示 原料消耗完全。將混合物倒入冷的飽和NaHC03(50 mL)中，用DCM(3 x 20mL)萃取。然後將合併的有機層用飽和的CuSO4(30mL)、鹽水(30 mL) 洗滌，乾燥(MgS04)。過濾並真空蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快速柱 色i普層析純化(80:20 v/v己烷/EtOAc)得到三氟曱磺酸酯44，為黃色泡沫狀 物(249 mg， 39%): ^醒R(400 MHz, CDC13) S 7.23(s, 2H)， 7.17(s, 2H)， 6.73(s, 2H)， 5.93(d, 2H， J = 8.9 Hz), 5.22(d， 2H, J = 12.1 Hz)， 4.21(d, 2H， J = 12.0 Hz), 4.15-4.07(m， 2H), 4.02畫3.86(m， 8H)， 3.33(ddd, 2H, J = 16.6, 10.7， 2.3 Hz)， 2.82(dd， 2H, J = 16.7， 2.6 Hz)， 1.98-1.91(m， 4H)， 1.71-1.63(m， 2H), 0.88(s, 18H), 0.28和0.25(sx2， 12H); 13C NMR(IOO MHz, CDC13)S 164.9， 153.6， 151.3, 149.6,136.0， 127.8, 123.7， 121.0， 118.6(q， J = 321.5 Hz), 114.2, 111.0, 95.1, 86.4, 74.9, 68.8, 60.6, 56.2， 34.4, 28.7， 25.6, 22.8, 17.8, -4.2和 -5.4。
(j)l,l，-[[(戊烷-l，5-二基)二氧基二[(llS,llaS)-10-(2,2,2-三氯代乙氧基 羰基)-ll-(叔-丁基二甲基甲矽烷基氧基)-7-甲氧基-2-(對-甲氧基苯 基)-l,10，ll,lla-四氫-5H-吡咯並[2,l-cl，4]苯並二氮雜萆-5-酮](45)formula see original document page 62
於室溫下，將Pd(PPh3)4(7.43 mg, 6.43 nmol)滴加至三氟曱磺酸酯44
(236 mg, 0.16 mmol)、 4-甲氧基苯基硼酸(63 mg， 0.42 mmol)、 TEA(0.13 mL， 98 mg， 0.97 mmol)的H2O(0.8 mL)、 EtOH(5 mL)和甲苯(5 mL)溶液中。將 反應混合物在孩"皮中於100。C加熱30分鐘，此時薄層色i瞽(80:20 v/v EtOAc/己烷)顯示原料消耗完全。真空蒸發除去過量的溶劑，將得到的殘留 物溶於EtOAc(50 mL)中，用H2O(20 mL)、鹽水(20 mL)洗滌，乾燥(MgS04)。 過濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快速柱色譜層析純化(梯度洗脫 80:20 v/v己烷/EtOAc至50:50 v/v己烷/EtOAc)，得到為黃色玻璃狀物的 C2-芳基產物45(117 mg， 52%): ^NMR(400 MHz, CDC13)S 7.35(s， 2H), 7.31(s, 2H)， 7.31-7.27(m， 6H)， 6.卯(d， 4H, J = 8.8 Hz)， 6.76(s， 2H)， 5.92(d， 2H, J = 8.8 Hz)， 5.23(d， 2H， J = 12.0 Hz), 4.20(d, 2H， J = 12.1 Hz)， 4.14-4.05(m， 4H), 4.04-3.95(m, 2H), 3.93(s, 6H)， 3.83(s， 6H)， 3.34(ddd， 2H, J =16.3, 10.4， 2.0 Hz)， 2.86-2.75(m, 2H)， 2.02-1.94(m， 4H), 1.72-1.66(m, 2H), 0.93和0.86(sx2,18H)， 0.28和0.25(sx2， 12H); 13C NMR(IOO MHz, CDC13)5 163.7， 159.1， 153.7, 150.8， 149.3, 127.8， 126.3， 126.1， 125.4， 122.3, 122.2， 114.3， 114.2， 110.9， 95.3， 87.3， 74.8， 68.8， 61.5, 56.2, 55.4, 35.3, 28.8， 25.7， 22.8,17.9， -4.0和國5丄
(k)l,l，-[[(戊烷-l，5-二基)二氧基]二[(llaS)-7-甲氧基-2-(對-甲氧基苯 基)-l，lla-二氫-5H-吡咯並[2，l-c][l,4]苯並二氮雜萆-5-酮I(46)
將10% Cd/Pb (192 mg, 1.55 mmol)加至快速攪拌的45(107 mg， 77.3 pmol)、 THF(2.5mL)和1NNH40Ac(2.5mL)的混合物中。將反應混合物攪 拌3小時；此時薄層色語(95:5 v/v CHCWMeOH)顯示形成需要的PBD， 伴有副產物的產生。過濾收集固體，用H20和DCM洗滌。7JC層用DCM(3 xl0mL)萃取，合併有機萃取液，用鹽水(50mL)洗滌，乾燥(MgS04)。過 濾並蒸發溶劑得到粗品產物，將其經快速柱色譜層析純化(梯度洗脫 CHC13至99:1 v/v CHCl3/MeOH),得到為黃色玻璃狀物的亞胺46 (32.5 mg， 55%): iH醒R(400 MHz, CDC13) 5 7.89(d, 2H， J = 3.9 Hz)， 7.53(s, 2H)，
7.39(s， 2H), 7.34(d， 4H， J = 8.8 Hz), 6'90(d， 4H， J = 8.8 Hz), 6.82(s, 2H), 4.43-4.38(m, 2H), 4.18國4.05(m， 4H)， 3.95(s， 6H)， 3.83(s, 6H)， 3.58(ddd, 2H， J =16.2, 11.5， 1.9 Hz)， 3.38(ddd， 2H, J = 16.3， 5.1， 1.6 Hz)， 2.01-1.94(m, 4H), 1.73-1.66(m, 2H); 13C NMR(IOO MHz, CDC13)5 162.6， 161.3, 159.2， 151.3， 148.1, 140.3， 126.2, 126.0(x2)， 123.2， 122.0， 119.1, 114.3, 111.9， 110.9， 68.8, 56.2， 55.4, 53.9, 35.6， 28.7， 22.6。
(j)l,l，畫[[(戊烷-l,5-二基)二氧基l二[(llaS)-ll畫磺基畫7匿甲氧基畫2-(對醫曱 氧基苯基)-l,10,ll,lla-四氫-5H-吡咯並[2,l-c[l，4苯並二氮雜萆-5-酮鈉鹽 (47)
將亞硫酸氬鈉(4.卯mg， 47.2 pmol)的水(3 mL)溶液滴加至攪拌的46 (18.11 mg, 23.6 /imol)的二氯曱烷(1.5 mL)溶液中。將反應混合物劇烈攪拌 24小時，然後分離有機和無機層。水相的薄層色譜分析(95:5 v/v CHCl3/MeOH)顯示46(R廣0.3)不存在，但存在具有強UV-吸收的基線物質。 水層經冷凍乾燥得到亞硫酸鹽加合物47，為比重輕的固體(IO mg， 43%):
^NMR(400 MHz, DMSO-d6) S 7.41(s, 2H)， 7.37(d, 4H， J = 8.7 Hz)， 7.04(s， 2H), 6.91(d, 4H, J = 8.9 Hz)， 6.47(s, 2H), 5.24(s, 2H)， 4.31誦4.21(m, 2H)， 4.06-3.86(m, 6H)， 3.76(s， 6H)， 3.71(s， 6H)， 3.51-3.21(m， 4H), 1.90-1.70(m, 4H)， 1.62-1.51(m， 2H)。
實施例9:體外細胞毒性測定 勿應^ (M7T為、鄭
1小時暴露
於37。C，在含有5。/。C02的潮溼空氣中，將K562人類慢性骨髓白血 病細胞保存於補充有10%胎牛血清和2 mM穀氨醯胺的RPM1 1640介質 中，將其與特定劑量的藥物一起於37。C黑暗中培養1小時。通過離心終止 培養(5min,300 g)，用不含藥物的介質洗滌細胞一次。適當的藥物處理後， 將細胞轉移到96-孔微量板中(每孔104個細胞，每個樣品8孔)。然後將板
置於37。C、黑暗潮溼的含有5%<:02的環境中。根據存活細胞將黃色可溶 性四哇鹽3-(4,5- 二甲基瘞唑-2-基)-2，5- 二苯基-2H-四唑溴化物(MTT, Aldrich-Sigma)還原為不溶性紫色甲臢沉澱物的能力進行分析。將板培養4 天后Cf吏得對照細胞在數量上增加約IO倍)，向每個孔中加入20 pL的MTT 溶液(5 mg/mL的磷酸鹽緩衝液)，將板再培養5小時。然後將板於300 g離 心5分鐘，自細胞沉澱中吸出介質，使每孔殘留體積為10-20 /*L。向每 個孔中加入DMSO(200 ^L)，振搖樣品以保證混合均勻。然後在Titertek Multiscan ELISA讀板儀上於550 rnn讀取光密度，並繪製劑量-反應曲線。 對於每一條曲線，將最終的光密度降低到對照值的50%所需要的藥物劑量 即為IC5o值。
96小時暴露
在上述方法的修改方法中，將5 x 104個K562細胞(如上所述)保存在 補充有10。/。胎牛血清(Sigma)和20mM L-穀氨醯胺(Sigma)的RPMI 1640 介質(Sigma)中，將190 的上述溶液與特定劑量的藥物(10/tL)於37。C在 5%(:02中培養96小時。向每個孔中加入250ing/inl(終濃度)MTT,將板再 培養4小時。採用Envision讀板儀(Applied Biosystems)於450nm處讀取 吸收度。然後，通過Graphpad PRISM分析數據，獲得ICso(定義為能夠 使細胞數量減少一半所需要的化合物的濃度)。
絲
化合物ICsoOtM)
ZC-2070.0053a
ZC-4230.0015b
al小時培養
b96小時培養
K562細胞系(AlamarBlue分析)
將待實驗化合物溶於100% Biotech等級的DMSO(Sigma)中，然後在 2% DMSO中稀釋為2 或200 nM的儲存濃度。將100 pi的儲存濃度
在2% DMSO中以1:3系列稀釋到中間(intermediate)聚苯乙烯96孔細胞 培養板中(Nunc)。將2。/。DMSO置於外列中用作空白，並置於第2或第11 列中(取決於採用的是分析板的頂部還是底部)用作對照。然後將中間板的 整排以一式三份轉移到螢光相容性聚苯乙烯96孔細胞培養板(Greiner BioOne)的B排-D排或E排-G排的各孔中，每孔lOjil。在補充有10% 胎牛血清(Sigma)和20mM L-穀氨醯胺(Sigma)並不含酚紅的RPMI 1640 (Sigma)中制4^有5 x 1(^個細胞/ml的細胞溶液。將190 jil細胞溶液加至 分析板的各孔中，自第2列至第11列。將l卯pi培養介質加至第1列和 第12歹'J。將板於37。C在5% C02中培養96小時。將ljiM(終濃度)的 rezasurin(被生存細胞轉化為焚光resofurin)滴加至每個孔中，將板再培養 4小時。採用Envision讀板儀(Applied Biosystems)於530-570nm亂l光和 580 - 620nm發射光讀取焚光。然後，通過Graphpad PRISM分析數據， 獲得ICso(定義為能夠使細胞數量減少一半所需要的化合物的濃度)。 結果
化合物IC50(nM)
19<1
22<1
26<1
27<1
29<1
30<1
32<1
33<1
LOXIMVI和OVCAR-5細胞系
在補充有10。/。胎牛血清(Sigma)和20mM L-穀氨醯胺(Sigma)並不含酚 紅的RPMI 1640(Sigma)中制^^有濃度為5 x 14個細胞/ml的LOXIMVI 人類黑素瘤細胞或OVCAR-5人類卵巢腫瘤細胞的細胞溶液。將l卯jil的 細胞溶液加至焚光相容性聚苯乙烯96孔細胞培養板(Greiner BioOne)的
每一個孔中，自第2列至第11列。將190 jil培養介質加至第1列和第12 列。將板於37。C在5% C02中培養過夜。將化合物溶於100% Biotech等 級的DMSO(Sigma)中，隨後在2% DMSO中稀釋至儲存濃度。將100 jd的 儲存濃度在2% DMSO中以1:3系列稀釋到中間聚苯乙烯96孔細胞培養 板中(Nunc)。將2% DMSO置於外列中用作空白，並置於第2或第11列 中(取決於採用的是分析板的頂部還是底部)用作對照。然後將中間板的整 排以一式三份轉移到細胞培養板的B排-D排或E排-G排的各孔中，每 孔10^1。將板於37。C在5% C02中培養96小時。將ljiM(終濃度)的 rezasurin(被生存細胞轉化為焚光resofurin)加至每個孔中，將板再培養4 小時。釆用Envision讀板4義(Applied Biosystems)於530-570nm亂 l光和 580 - 620nm發射光讀取焚光。然後，通過Graphpad PRISM分析數據， 獲得ICso(定義為能夠使細胞數量減少一半所需要的化合物的濃度)。 結果
細胞系formula see original document page 67實施例10:抗腫瘤活性
下列實驗在由Home Office, London, UK批准的項目許可下進4亍，並 且完全根據UK CCCR指導原則(Workman, P.，等，British Journal of Cancer, 77,1畫10(1998))進行。
LOX IMVI(人類黑素瘤)在棵鼠(B&K Universal, Hull, UK)皮下生長。 通過套管針將腫瘤以單腫瘤片段的形式移植到腹側。以單次靜脈注射(iv) 預先i殳定的最大耐受劑量(MTD)3mgkg-l採用ZC423對8個攜帶腫瘤的小 鼠組進行治療，採用5。/。DMA/鹽水作為'溶媒。對照小鼠(11=8)單獨採用溶 媒進行治療。
當肺瘤能夠確切地用卡尺測量時(平均面積4 x 4mm)開始治療，治療效 果通過每天卡尺測量腫瘤大小和小鼠體重來評價。腫瘤體積通過公式a2 x b/2計算，其中a為腫瘤的較小直徑，b為腫瘤的較大直徑。結果見

圖1，
它是相對腫瘤體積與時間的圖(a ZC423; 對照-溶劑)。通過 Mann-Whitney分析(例如，如文獻所述Essential Statistics第二版(1989)， D.G.Rees， ISBN 0 412 32030 4, Chapman和Hall, London)顯示ZC423的活
性具有統計學上的顯著意義。
圖2顯示了相同實驗的結果—ZC423;命對照-溶劑)，但實驗周期延 長，並且平均RTV的標尺度放大。對照組於16天時停止，此時與治療組 相比，對照組全部小鼠均有腫瘤存在，而治療組中所有的動物在第68天時 仍沒有腫瘤存在。
在上述相同的條件下採用OVCAR-5(人類卵巢腫瘤)進行研究。結果見 圖3—ZC423; 對照-溶劑)。在該研究中，對照組於32天時終止。 實施例11:交聯和溶解度 DNA交聯
閉環pucl8DNA採用HindIII線性化，然後去磷酸化，最終採用多核 苷酸激酶用[T32P-ATP在5，末端標記。包含IO ng DNA和藥物的反應於 37。C在終體積為50 的1 x TEOA(25 mM三乙醇胺，1 mM EDTA， pH 7.2)緩衝水溶液中進行。通過加入等體積的終止溶液(0.6 M NaOAc, 20 mM EDTA， 100/ig/mL tRNA)終止反應，隨後用乙醇沉澱。樣品離心後，棄除 上清夜，將沉澱冷凍乾燥。將樣品再懸浮於10^L鹼性變性緩衝液(4mg溴 酚藍，600 mg蔗糖和40 mg NaOH)，於室溫下渦旋3分鐘。將沒有變性的 對照再懸浮於10 標準蔗糖上樣染料中(2.5 mg溴酚藍，2.5 mg 二甲苯腈 藍和4g蔗糖)。將樣品和對照都直接上樣於瓊脂糖凝膠上。
電泳在20 cm長度的0.8%浸沒式水平瓊脂糖凝膠上進行16小時， 38-40 V， 1 x TAE電泳緩沖液(2.42 g Tris鹼，0.372 g EDTA, 0.571ml水乙 酸)。凝膠置於Savant SG210D SpeedGel凝膠乾燥器中一層Whatman 3MM上於8(TC乾燥80分鐘，下面有一層DE81濾紙。暴露於FujiRX x-射線膠片過夜後，獲得自動射線照相圖。採用BioRadGS-670成像雷射光 密度計定量測定膠片色帶。通過測定每一條泳道中總DNA(雙鏈色帶和單 鏈色帶密度的和)與雙鏈色帶密度的量的比計算交聯百分率。以藥物濃度對 測定的交聯DNA的百分率水平作圖得到劑量響應曲線，通過它可以得到
使得DNA交聯50。/。所需要的量(XLso)。 溶解度
通過將實驗化合物溶解以得到飽和溶液所需的最小水量來確定溶解度。
結果
DNA交聯
化合物IC50(/iM)
180.2
192
210.5
220.3
溶解度
化合物1L水中化合物的量(g)
ZC-207不溶
ZC-42311
279
304
33權利要求
1.式I化合物或其溶劑化物其中R2為任選取代的C5-20芳基；R6和R9獨立選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR』、硝基、Me3Sn和滷素；其中R和R』獨立選自任選取代的C1-12烷基、C3-20雜環基和C5-20芳基；R7選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NHRR』、硝基、Me3Sn和滷素；R″為C3-12亞烷基和/或芳族環，其中亞烷基鏈可以含有一或多個雜原子；X選自O、S或NH；z為2或3；M為藥學上可接受的單價陽離子；R2』、R6』、R7』、R9』、X』和M』分別選自與R2、R6、R7、R9、X和M相同的基團，或者M和M』可以一起代表藥學上可接受的二價陽離子。
2. 權利要求1的化合物，其中X為O。
3. 權利要求1或權利要求2的化合物，其中R"代表線性飽和的C3.12 亞烷基。
4. 權利要求1-3中任一項的化合物，其中W為H。
5. 權利要求1-4中任一項的化合物，其中W為H。
6. 權利要求1-5中任一項的化合物，其中R7選自H、 OH和OR， 其中R選自任選取代的d_7烷基、C3_10雜環基和C5-10芳基。
7. 壽又利要求6的化合物，其中117為OMe或OCH2Ph。
8. 權利要求1 - 7中任一項的化合物，其中R2為任選取代的C5_7芳基。
9. 權利要求8的化合物，其中W為任選取代的苯基。
10. 權利要求1-9中任一項的化合物，其中兩個PBD單體被同樣取代。
11. 權利要求1-10中任一項的化合物，其中M和M，為藥學上可接 受的單價陽離子。
12. 權利要求ll的化合物，其中M和M，為Na+。
13. 權利要求1 - 12中任一項的化合物，其中z為3。
14. 權利要求1-13中任一項的化合物，用於治療方法中。
15. 藥物組合物，該藥物組合物含有權利要求1-13中任一項的化合 物和藥用賦形劑。
16. 權利要求1-13中任一項的化合物在生產用於治療增生性疾病的 藥物中的用途。
17. 權利要求1 - 13中任一項的化合物，用於治療增生性疾病。
全文摘要
本發明公開式I化合物或其溶劑化物，在式(I)中，R2為任選取代的C5-20芳基；R6和R9獨立選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR』、硝基、Me3Sn和滷素；其中R和R』獨立選自任選取代的C1-12烷基、C3-20雜環基和C5-20芳基；R7選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NHRR』、硝基、Me3Sn和滷素；R」為C3-12亞烷基和/或芳族環，其中亞烷基鏈可以含有一或多個雜原子；X選自O、S或NH；z為2或3；M為藥學上可接受的單價陽離子；R2』、R6』、R7』、R9』、X』和M』分別選自與R2、R6、R7、R9、X和M相同的基團，或者M和M』可以一起代表藥學上可接受的二價陽離子。
文檔編號C07D519/00GK101171257SQ200680015716
公開日2008年4月30日 申請日期2006年4月21日 優先權日2005年4月21日
發明者P·W·霍華德, S·J·格雷格森, 陳治治 申請人:斯皮羅根有限公司