高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法
2023-10-21 18:32:42 1
高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法
【專利摘要】本發明公開了一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法：取3g人參乾燥粉末，加入50mL蒸餾水；再加入1-3％的β-葡萄糖苷酶液；在高壓脈衝電場作用下酶水解，電場強度為5-25kV/cm，處理的脈衝數為6-12個；待上述反應完成，100℃加熱5min，使其鈍化；用水飽和正丁醇萃取反應液，離心分離，取上清液；將人參總皂苷提取液於55℃真空旋轉蒸發，樣品溶解於甲醇。本方法由於在酶解反應過程中引入高壓脈衝電場，提高酶製劑活性，加速酶解反應速度，快速、高效地促進人參中總皂苷物質溶出。
【專利說明】高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種製備人參總皂苷的方法，特別是涉及一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法。
【背景技術】
[0002]人參(Panax ginseng C.A.Meyer)是五加科人參屬植物,是傳統的名貴中藥。人參具有大補元氣，補脾益肺，生津止渴，安神增智等功效。人參中含有人參皂苷、揮髮油、有機酸、酯類及多糖類等多種成分活性成分，其中人參皂苷是人參的主要活性成分。目前，從人參中至少分離出了 40餘種人參皂苷單體。
[0003]人參皂苷是由苷元和糖基相連構成的植物糖苷類物質，廣泛存在於人參的根、莖、葉、花中。人參皂苷均屬於三萜皂苷，按其皂苷元結構不同可分為三種類型:齊墩果酸型皂苷如Ro ;原人參二醇型皂苷；原人參三醇型皂苷。後兩類均屬於達瑪烷型的四環三萜皂苷，是人參的主要活性成分之一。
[0004]目前，人參皂苷的傳統提取方法包括有機溶劑提取法、加熱回流法、索氏提取法和水蒸氣蒸餾法等。但是存在提取周期長、溶劑用量高、有效成分損失大、能耗高等問題。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提出一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法，以克服目前傳統提取方法中提取溫度高，提取時間長等缺點。
[0006]本發明採用以下技術方案實現:
[0007]—種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法，包括以下步驟:
[0008]I)取人參乾燥粉末，加入蒸餾水，
[0009]2)再加入酶製劑，
[0010]3)在高壓脈衝電場作用下酶水解；
[0011]4)待上述反應完成，加熱鈍化，
[0012]5)加入有機溶劑萃取，離心分離，取上清液，
[0013]6)濃縮提取液，樣品溶解於甲醇。
[0014]一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法的改進方案，所述步驟I)具體指:取3g人參乾燥粉末，加入50mL蒸餾水。
[0015]一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法的改進方案，所述步驟2)中加入的酶製劑為葡萄糖苷酶。
[0016]一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法的改進方案，所述步驟2)中酶製劑的添加量為1_3%。
[0017]一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法的改進方案，所述步驟3)中高壓脈衝電場的電場強度為5_25kV/cm,處理的脈衝數為6_12個。
[0018]一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法的改進方案，所述步驟4)具體指將通過所述步驟3)酶解後的溶液100°C加熱5min，使其鈍化。
[0019]一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法的改進方案，所述步驟5)中加入的有機溶劑為正丁醇，且使用水飽和溶液。
[0020]—種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法的改進方案，步驟6)中濃縮提取液，具體指將人參總皂苷提取液於55°C真空旋轉蒸發。
[0021]與現有技術相比，本發明具有以下優點:
[0022]本方法由於在酶解反應過程中引入高壓脈衝電場，提高酶製劑活性，加速酶解反應速度，快速、高效地促進人參中總皂苷物質溶出。
[0023]本發明利用高壓脈衝電場技術輔助商業化酶製劑水解製備人參總皂苷，具有無需加熱、反應速度快、提取率高、成本低等優點。
[0024]本發明方法具有條件溫和、不破壞皂甙結構、提取時間短、工藝條件簡單、樣品純度高等優點，並且採用的酶為價格低廉的商業化用酶。
【具體實施方式】
[0025]結合以下給出的實施例對本發明方法作進一步詳細說明。
[0026]一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法:取3g人參乾燥粉末，加入50mL蒸餾水；再加入1-3%的β -葡萄糖苷酶液；在高壓脈衝電場作用下酶水解，電場強度為5-25kV/cm，處理的脈衝數為6-12個；待上述反應完成，100°C加熱5min，使其鈍化；用水飽和正丁醇萃取反應液，離心分離，取上清液；將人參總皂苷提取液於55°C真空旋轉蒸發，樣品溶解於甲醇。
[0027]實施例1
[0028]本發明高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷，取3g人參粉末樣品，加入50mL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調節pH值至5.0，加入I % β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為0.5mg/mL，在PEF作用下酶解，電場強度為lOkV/cm，脈衝數為6 ;用水飽和正丁醇萃取反應液，離心分離，上清液揮發除去溶劑，經高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為
2.36%。
[0029]實施例2
[0030]本發明高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷，取3g人參粉末樣品，加入50mL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調節pH值至5.0，加入I % β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為1.0mg/mL，在PEF作用下酶解，電場強度為lOkV/cm，脈衝數為6 ;用水飽和正丁醇萃取反應液，離心分離，上清液揮發除去溶劑，經高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為
3.43%。
[0031]實施例3
[0032]本發明高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷，取3g人參粉末樣品，加入50mL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調節pH值至5.0，加入2% β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為1.0mg/mL，在PEF作用下酶解，電場強度為lOkV/cm，脈衝數為8。用水飽和正丁醇萃取反應液，離心分離，上清液揮發除去溶劑，經高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為3.52%。
[0033]實施例4
[0034]本發明高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷，取3g人參粉末樣品，加入50mL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調節pH值至5.0，加入I % β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為1.0mg/mL，在PEF作用下酶解，電場強度為5kV/cm，脈衝數為6。用水飽和正丁醇萃取反應液，離心分離，上清液揮發除去溶劑，經高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為
2.18%。
[0035]實施例5
[0036]本發明高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總阜苷，取3g人參粉末樣品,加入5OmL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調節pH值至5.0，加入I % β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為1.0mg/mL,在PEF作用下酶解，電場強度為20kV/cm，脈衝數為6。用水飽和正丁醇萃取反應液，離心分離，上清液揮發除去溶劑，經高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為3.38%。
[0037]實施例6
[0038]本發明高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷，取3g人參粉末樣品，加入50mL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調節pH值至5.0，加入I % β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為1.0mg/mL，在PEF作用下酶解，電場強度為lOkV/cm，脈衝數為12。用水飽和正丁醇萃取反應液，離心分離，上清液揮發除去溶劑，經高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為3.94%。
[0039]實施例7
[0040]本發明高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷，取3g人參粉末樣品，加入50mL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調節pH值至5.0，加入I % β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為1.0mg/mL,在PEF作用下酶解，電場強度為25kV/cm，脈衝數為6。用水飽和正丁醇萃取反應液，離心分離，上清液揮發除去溶劑，經高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為
3.06%。
[0041]實施例8
[0042]本發明高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷，取3g人參粉末樣品，加入50mL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調節pH值至5.0，加入3% β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為1.0mg/mL，在PEF作用下酶解，電場強度為lOkV/cm，脈衝數為8。用水飽和正丁醇萃取反應液，離心分離，上清液揮發除去溶劑，經高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為
3.55%。
【權利要求】
1.一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法，其特徵在於，包括以下步驟: 1)取人參乾燥粉末，加入蒸餾水， 2)再加入酶製劑， 3)在高壓脈衝電場作用下酶水解； 4)待上述反應完成,加熱鈍化， 5)加入有機溶劑萃取，離心分離，取上清液， 6)濃縮提取液，樣品溶解於甲醇。
2.根據權利要求1所述的一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法，其特徵在於，所述步驟I)具體指:取3g人參乾燥粉末，加入50mL蒸餾水。
3.根據權利要求1所述的一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法，其特徵在於，所述步驟2)中加入的酶製劑為葡萄糖苷酶。
4.根據權利要求1所述的一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法，其特徵在於，所述步驟2)中酶製劑的添加量為1_3%。
5.根據權利要求1所述的一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法，其特徵在於，所述步驟3)中高壓脈衝電場的電場強度為5-25kV/cm，處理的脈衝數為6_12個。
6.根據權利要求1所述的一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法，其特徵在於，所述步驟4)具體指將通過所述步驟3)酶解後的溶液100°C加熱5min，使其鈍化。
7.根據權利要求1所述的一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法，其特徵在於，所述步驟5)中加入的有機溶劑為正丁醇，且使用水飽和溶液。
8.根據權利要求1所述的一種高壓脈衝電場輔助酶水解製備人參總皂苷的方法，其特徵在於，步驟6)中濃縮提取液，具體指將人參總皂苷提取液於55°C真空旋轉蒸發。
【文檔編號】A61K36/258GK104398549SQ201410639581
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月11日 優先權日:2014年11月11日
【發明者】盧丞文, 殷湧光 申請人:長春師範大學