中藥材、中藥製劑的指紋圖譜構建方法和鑑別方法與流程
2024-04-12 14:11:05
1.本技術涉及中藥檢測和分析化學技術領域，具體涉及中藥材、中藥製劑的指紋圖譜構建方法和鑑別方法，特別涉及當歸或其製劑、當歸炭或其製劑的指紋圖譜構建方法，以及當歸和當歸炭的鑑別方法、當歸製劑和當歸炭製劑的鑑別方法。
背景技術：
2.當歸來源於傘形科植物當歸angelica sinensis(oliv.)diels的乾燥根。味甘、辛，性溫，歸肝、心、脾經。具有補血活血，調經止痛、潤腸通便的作用。主要含有揮髮油、有機酸、胺基酸、糖類等多種成分。當歸炒炭後止血作用增強，偏重於止血和血，主要用於治療崩中漏下，月經過多等症。兩者臨床效用和主要化學成分均存在一定差異，因此，明確炒炭前後當歸的化學成分差異，對飲片藥性的研究具有重要作用。
3.有報導記載了當歸的指紋圖譜的構建方法，但該方法共有峰的標定和指認數目較少，未能實現全成分的圖譜分析。
4.中藥製劑是指在中醫藥理論指導下，以中藥產品為基礎，中藥飲片為原料，通過提取、分離、純化獲得半成品，再經藥劑學方法加工製成各種劑型的製劑。相較於飲片，已失去原有的形狀特徵，且經過提取後，與藥材的化學成分存在一定差異。目前還未有當歸或當歸炭製劑的鑑別方法報導。
5.因此，有必要建立一種科學的當歸或其製劑、當歸炭或其製劑的檢測和鑑別方法。
技術實現要素：
6.有鑑於此，本技術特提出一種中藥材或中藥製劑的指紋圖譜的構建方法，可客觀、科學、全面地反映中藥材和/或中藥製劑的內在化學特徵信息，作為其質量檢測的依據。本技術的中藥材包括當歸和當歸炭，中藥製劑包括當歸製劑和當歸炭製劑。
7.具體地，所述的指紋圖譜構建方法包括如下步驟：
8.取所述中藥材或所述中藥製劑，用提取溶劑進行提取，製得供試品溶液；
9.取所述供試品溶液進行超高效液相色譜分析，得到所述中藥材或所述中藥製劑的指紋圖譜；
10.其中，所述進行超高效液相色譜分析包括按照如下流動相條件進行洗脫：以乙腈為流動相a，以體積濃度0.08％～0.12％的甲酸水溶液為流動相b，所述流動相a和所述流動相b的體積百分比的總和為100％；
11.所述洗脫的程序包括：
12.0～12min，所述流動相a的體積百分比由5％上升至23％；
13.12min～13min，所述流動相a的體積百分比由23％上升至43％；
14.13min～18min，所述流動相a的體積百分比由43％上升至44％；
15.18min～20min，所述流動相a的體積百分比由44％上升至46％；
16.20min～22min，所述流動相a的體積百分比由46％上升至47％；
17.22min～23min，所述流動相a的體積百分比由47％上升至58％；
18.23min～29min，所述流動相a的體積百分比由58％上升至59％；
19.29min～30min，所述流動相a的體積百分比由59％上升至80％；
20.30min～34min，保持所述流動相a的體積百分數為80％。
21.在本技術的一些實施方式中，所述的指紋圖譜構建方法中，所述超高效液相色譜分析的條件包括如下特徵中的一個或幾個：
22.(1)色譜柱為十八烷基矽烷鍵合矽膠色譜柱；
23.(2)色譜柱的型號為waters acquity uplc beh shield rp18；
24.(3)柱溫為20℃～25℃；
25.(4)檢測波長為260nm～270nm；
26.(5)流動相的流速為0.28ml/min～0.32ml/min；
27.(6)進樣量為0.5μl～1.5μl。
28.在本技術的一些實施方式中，所述的指紋圖譜構建方法中，所述提取溶劑為甲醇。
29.在本技術的一些實施方式中，所述的指紋圖譜構建方法中，所述提取的方法為超聲。
30.在本技術的一些實施方式中，所述的指紋圖譜構建方法中，所述中藥材或中藥製劑的指紋圖譜中：
31.所述當歸的指紋圖譜包括19個共有峰，分別為峰1、峰2、峰3、峰4、峰5、峰6、峰7、峰8、峰9、峰10、峰11、峰12、峰13、峰14、峰15、峰16、峰17、峰18和峰19；
32.所述當歸炭的指紋圖譜包括10個共有峰，分別為峰6、峰7、峰10、峰11、峰12、峰19、峰20、峰21、峰22和峰23；
33.所述當歸製劑的指紋圖譜包括8個共有峰，分別為峰1、峰3、峰5、峰6、峰7、峰12、峰24和峰25；
34.所述當歸炭製劑的指紋圖譜包括4個共有峰，分別為峰3、峰6、峰7和峰20；
35.其中，峰1為色氨酸、峰3為綠原酸、峰5為阿魏酸、峰6為洋川芎內酯i、峰7為洋川芎內酯h、峰12為藁本內酯、峰20為5-羥甲基糠醛；
36.以峰6為參照，各特徵峰及其相對保留時間如下：峰1：0.23
±
10％；峰2：0.57
±
10％；峰3：0.60
±
10％；峰4：0.91
±
10％；峰5：0.93
±
10％；峰7：1.07
±
10％；峰8：1.30
±
10％；峰9：1.63
±
10％；峰10：1.67
±
10％；峰11：1.74
±
10％；峰12：1.77
±
10％；峰13：1.83
±
10％；峰14：2.31
±
10％；峰15：2.33
±
10％；峰16：2.35
±
10％；峰17：2.37
±
10％；峰18：2.41
±
10％；峰19：2.43
±
10％；峰20：0.16
±
10％；峰21：0.21
±
10％；峰22：2.82
±
10％；峰23：2.84
±
10％；峰24：0.64
±
10％；峰25：0.67
±
10％。
37.本技術還涉及一種中藥材的鑑別方法，包括如下步驟：
38.將中藥材用提取溶劑進行提取，製得待測品溶液ⅰ；
39.將所述待測品溶液ⅰ進行高效液相色譜分析，生成待測樣品圖譜ⅰ；
40.以所述的指紋圖譜構建方法制定的中藥材的指紋圖譜作為對照圖譜，計算待測樣品圖譜ⅰ和所述中藥材的指紋圖譜的相似度，相似度大於0.8即為質量合格；
41.其中，所述進行超高效液相色譜分析包括按照如下流動相條件進行洗脫：以乙腈為流動相a，以體積濃度0.08％～0.12％的甲酸水溶液為流動相b，所述流動相a和所述流動
相b的體積百分比的總和為100％；
42.所述洗脫的程序包括：
43.0～12min，所述流動相a的體積百分比由5％上升至23％；
44.12min～13min，所述流動相a的體積百分比由23％上升至43％；
45.13min～18min，所述流動相a的體積百分比由43％上升至44％；
46.18min～20min，所述流動相a的體積百分比由44％上升至46％；
47.20min～22min，所述流動相a的體積百分比由46％上升至47％；
48.22min～23min，所述流動相a的體積百分比由47％上升至58％；
49.23min～29min，所述流動相a的體積百分比由58％上升至59％；
50.29min～30min，所述流動相a的體積百分比由59％上升至80％；
51.30min～34min，保持所述流動相a的體積百分數為80％。
52.在本技術的一些實施方式中，所述中藥材的鑑別方法中，所述超高效液相色譜分析的條件包括如下特徵中的一個或幾個：
53.(1)色譜柱為十八烷基矽烷鍵合矽膠色譜柱；
54.(2)色譜柱的型號為waters acquity uplc beh shield rp18；
55.(3)柱溫為20℃～25℃；
56.(4)檢測波長為260nm～270nm；
57.(5)流動相的流速為0.28ml/min～0.32ml/min；
58.(6)進樣量為0.5μl～1.5μl；
59.(7)進樣濃度為6mg/ml～10mg/ml。
60.在本技術的一些實施方式中，所述中藥材的鑑別方法中，所述提取溶劑為甲醇。
61.在本技術的一些實施方式中，所述中藥材的鑑別方法中，所述提取的方法為超聲。
62.本技術還涉及一種中藥製劑的鑑別方法，包括如下步驟：
63.將中藥製劑用提取溶劑進行提取，製得待測品溶液ⅱ；
64.將所述待測品溶液ⅱ進行高效液相色譜分析，生成待測樣品圖譜ⅱ；
65.以所述的指紋圖譜構建方法制定的中藥製劑的指紋圖譜作為對照圖譜，計算待測樣品圖譜ⅱ和中藥製劑的指紋圖譜的相似度，相似度大於0.8即為質量合格；
66.其中，所述進行超高效液相色譜分析包括按照如下流動相條件進行洗脫：以乙腈為流動相a，以體積濃度0.08％～0.12％的甲酸水溶液為流動相b，所述流動相a和所述流動相b的體積百分比的總和為100％；
67.所述洗脫的程序包括：
68.0～12min，所述流動相a的體積百分比由5％上升至23％；
69.12min～13min，所述流動相a的體積百分比由23％上升至43％；
70.13min～18min，所述流動相a的體積百分比由43％上升至44％；
71.18min～20min，所述流動相a的體積百分比由44％上升至46％；
72.20min～22min，所述流動相a的體積百分比由46％上升至47％；
73.22min～23min，所述流動相a的體積百分比由47％上升至58％；
74.23min～29min，所述流動相a的體積百分比由58％上升至59％；
75.29min～30min，所述流動相a的體積百分比由59％上升至80％；
76.30min～34min，保持所述流動相a的體積百分數為80％。
77.在本技術的一些實施方式中，所述中藥製劑的鑑別方法中，所述超高效液相色譜分析的條件包括如下特徵中的一個或幾個：
78.(1)色譜柱為十八烷基矽烷鍵合矽膠色譜柱；
79.(2)色譜柱的型號為waters acquity uplc beh shield rp18；
80.(3)柱溫為20℃～25℃；
81.(4)檢測波長為260nm～270nm；
82.(5)流動相的流速為0.28ml/min～0.32ml/min；
83.(6)進樣量為0.5μl～1.5μl。
84.在本技術的一些實施方式中，所述中藥製劑的鑑別方法中，所述提取溶劑為甲醇。
85.在本技術的一些實施方式中，所述中藥製劑的鑑別方法中，所述提取的方法為超聲。
86.本技術根據當歸和當歸炭所含成分存在差異的特點，通過採用合適的色譜條件，可以全面地檢測待測物的成分，方法穩定，精密可靠。
87.本技術的構建方法製得的指紋圖譜具備特徵性、重現性和可操作性，能提供更多豐富特徵峰信息，從而更全面反映樣品質量，為當歸、當歸炭、當歸製劑、當歸炭製劑的質量提供快速、靈敏、客觀、準確的檢測手段。
88.本技術的構建方法建是基於特定的中藥原料以及在製劑過程中化學成分之間的相互作用，各個特徵峰的保留時間在一定範圍內是固定的，並且會在原材料發生變化，比如使用了偽劣藥材時產生差異。因此可以很好的鑑別藥材或其製劑的質量，可以起到鑑別真偽的作用。
89.本技術的構建方法製得的中藥材的指紋圖譜，可明確當歸和當歸炭的共有成分和差異性成分，為二者的質量評價、藥理藥效研究和鑑別提供參考。
90.本技術的構建方法製得的中藥製劑的指紋圖譜，能有效鑑別當歸製劑和當歸炭製劑，彌補了無法從顯微與性狀鑑別特徵進行檢查和鑑別的缺陷。
附圖說明
91.為了更清楚地說明本技術具體實施方式或現有技術中的技術方案，下面將對具體實施方式或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本技術的一些實施方式，對於本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。
92.圖1為本技術1.2.1中不同濃度甲醇條件的下當歸提取結果對比圖；
93.圖2為本技術1.2.1中不同濃度甲醇條件的下當歸炭提取結果對比圖；
94.圖3為本技術1.2.1中不同濃度甲醇條件的下當歸配方顆粒提取結果對比圖；
95.圖4為本技術1.2.1中不同濃度甲醇條件的下當歸炭配方顆粒提取結果對比圖；
96.圖5為本技術1.2.2中不同提取條件的下當歸提取結果對比圖；
97.圖6為本技術1.3.1中不同流動相條件色譜結果對比圖；
98.圖7為本技術1.3.2中不同流速條件色譜結果對比圖；
99.圖8為本技術1.3.3中不同柱溫條件色譜結果對比圖；
100.圖9為本技術1.3.4中不同檢測波長條件色譜結果對比圖；
101.圖10為實施例1中對照品的色譜峰指認圖；
102.圖11為實施例1中17批當歸的疊加色譜圖譜；
103.圖12為實施例1中17批當歸炭的疊加色譜圖譜；
104.圖13為實施例1中17批當歸配方顆粒的疊加色譜圖譜；
105.圖14為實施例1中10批當歸炭配方顆粒的疊加色譜圖譜；
106.圖15為實施例1中17批當歸的對照指紋圖譜；
107.圖16為實施例1中17批當歸炭的對照指紋圖譜；
108.圖17為實施例1中17批當歸配方顆粒的對照指紋圖譜；
109.圖18為實施例1中10批當歸炭配方顆粒的對照指紋圖譜；
110.圖19為實施例2中34批當歸和當歸炭原料聚類分析結果；
111.圖20為實施例2中34批當歸和當歸炭原料pca結果；
112.圖21為實施例2中34批當歸和當歸炭原料pls-da結果；
113.圖22為實施例3中27批當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒聚類分析結果；
114.圖23為實施例3中27批當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒pca結果；
115.圖24為實施例3中27批當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒pls-da結果。
具體實施方式
116.下面結合實施方式、實施例和附圖，進一步闡述本技術。應理解，這些實施例僅用於說明本技術而不用於限制本技術的範圍。此外應理解，在閱讀了本技術講授的內容之後，本領域技術人員可以對本技術作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本技術所附權利要求書的保護範圍。
117.除非另有定義，本文所使用的所有的技術和科學術語與屬於本技術的技術領域的技術人員通常理解的含義相同。本文中在本技術的說明書中所使用的術語只是為了描述具體的實施例的目的，不是旨在於限制本技術。
118.術語
119.除非另外說明或存在矛盾之處，本文中使用的術語或短語具有以下含義：
120.本文所使用的術語「和/或」的選擇範圍包括兩個或兩個以上相關所列項目中任一個項目，也包括相關所列項目的任意的和所有的組合，所述任意的和所有的組合包任意的兩個相關所列項目、任意的更多個相關所列項目、或者全部相關所列項目的組合。比如，「a和/或b」包括a、b和a+b三種並列方案。
121.本文中，「優選」、「較佳」、「更佳」等僅為描述效果更好的實施方式或實施例，應當理解，並不構成對本技術防護範圍的限制。
122.本技術中，「進一步」、「更進一步」、「特別」等用於描述目的，表示內容上的差異，但並不應理解為對本技術保護範圍的限制。
123.本技術中，以開放式描述的技術特徵中，包括所列舉特徵組成的封閉式技術方案，也包括包含所列舉特徵的開放式技術方案。
124.本技術中，涉及到數值區間(也即數值範圍)，如無特別說明，可選的數值分布在上述數值區間內視為連續，且包括該數值範圍的兩個數值端點(即最小值及最大值)，以及這
兩個數值端點之間的每一個數值。如無特別說明，當數值區間僅僅指向該數值區間內的整數時，包括該數值範圍的兩個端點整數，以及兩個端點之間的每一個整數。此外，當提供多個範圍描述特徵或特性時，可以合併這些範圍。換言之，除非另有指明，否則本文中所公開之範圍應理解為包括其中所歸入的任何及所有的子範圍。
125.本技術中的溫度參數，如無特別限定，既允許為恆溫處理，也允許在一定溫度區間內存在變動。應當理解的是，所述的恆溫處理允許溫度在儀器控制的精度範圍內進行波動。允許在如
±
0.5℃、
±
0.4℃、
±
0.3℃、
±
0.2℃、
±
0.1℃的範圍內波動。
126.本技術中，重量可以是μg、mg、g、kg等化工領域公知的質量單位。
127.在本技術的第一方面，提供一種中藥材或中藥製劑的指紋圖譜構建方法。本技術的指紋圖譜的構建方法，通過採用合適的色譜條件，可以全面反映當歸、當歸炭、當歸製劑、當歸炭製劑的質量，方法穩定，精密度、重現性好，為質量檢測和樣品鑑別提供更客觀的依據。
128.本技術中的中藥材包括當歸和當歸炭，優選自當歸或當歸炭，中藥製劑包括當歸製劑和當歸炭製劑，優選自當歸製劑或當歸炭製劑。
129.本技術中的中藥製劑，具體是指以中藥產品為基礎，中藥飲片為原料，通過提取、分離、純化獲得半成品，再經藥劑學方法加工製成各種劑型的製劑。中藥製劑包括但不限於中藥配方顆粒。優選為中藥配方顆粒。
130.本技術中，當歸炭根據《中國藥典》2020年版炮製通則項下炒炭法標準製備。作為舉例地，製備方法包括如下步驟：取當歸飲片，置熱鍋內，用武火炒至表面焦黑色、內部焦褐色或至規定程度時，噴淋清水少許，熄滅火星，取出，晾乾。
131.本技術中，當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒均是採用水提法製得，具體包括如下步驟：提取、濃縮、乾燥、制粒。作為舉例地：當歸配方顆粒可以通過包括如下步驟製備得到：取當歸飲片適量，加適量水，提取2次，每次30～60分鐘，過濾，濾液於50～80℃減壓濃縮至相對密度為1.04～1.08(80℃)的清膏，加入輔料適量，攪拌均勻，噴霧乾燥，控制進風溫度170～190℃，出風溫度85～95℃，噴乾粉加入適量輔料，混合均勻，幹法制粒，即得；當歸炭配方顆粒可以通過包括如下步驟製備得到：取當歸炭飲片適量，加適量水，提取2次，每次1小時，過濾，濾液於65～80℃減壓濃縮至相對密度為1.08～1.10(80℃)的清膏，加入輔料適量，攪拌均勻，噴霧乾燥，控制進風溫度170～190℃，出風溫度85～95℃，噴乾粉加入適量輔料，混合均勻，幹法制粒，即得。
132.在本技術的一些實施方式中，指紋圖譜構建方法包括如下步驟：
133.取所述中藥材或所述中藥製劑，用提取溶劑進行提取，製得供試品溶液；
134.取所述供試品溶液進行超高效液相色譜分析，得到所述中藥材或所述中藥製劑的指紋圖譜；
135.其中，所述進行超高效液相色譜分析包括按照如下流動相條件進行洗脫：以乙腈為流動相a，以體積濃度0.08％～0.12％的甲酸水溶液為流動相b，所述流動相a和所述流動相b的體積百分比的總和為100％；
136.進一步地，所述洗脫的程序包括：
137.0～12min，所述流動相a的體積百分比由5％上升至23％；
138.12min～13min，所述流動相a的體積百分比由23％上升至43％；
139.13min～18min，所述流動相a的體積百分比由43％上升至44％；
140.18min～20min，所述流動相a的體積百分比由44％上升至46％；
141.20min～22min，所述流動相a的體積百分比由46％上升至47％；
142.22min～23min，所述流動相a的體積百分比由47％上升至58％；
143.23min～29min，所述流動相a的體積百分比由58％上升至59％；
144.29min～30min，所述流動相a的體積百分比由59％上升至80％；
145.30min～34min，保持所述流動相a的體積百分數為80％。
146.在一些實施方式中，指紋圖譜構建方法包括如下步驟：
147.精密稱定中藥材或中藥製劑，用提取溶劑進行提取，製得供試品溶液；
148.精密稱定色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內酯i、洋川芎內酯h、藁本內酯以及5-羥甲基糠醛的標準品，用溶劑溶解，製得參照物溶液；
149.精密吸取供試品溶液和參照物溶液，分別進行超高效液相色譜分析，得到供試品指紋圖譜和參照物色譜圖譜，根據供試品指紋圖譜和參照物色譜圖譜得到中藥材或中藥製劑的指紋圖譜。
150.在一些實施方式中，指紋圖譜構建方法中，超高效液相色譜分析的條件包括如下特徵中的一個或幾個：
151.(1)色譜柱為十八烷基矽烷鍵合矽膠色譜柱；
152.(2)色譜柱的型號為waters acquity uplc beh shield rp18；
153.(3)柱溫為20℃～25℃；
154.(4)檢測波長為260nm～270nm；
155.(5)流動相的流速為0.28ml/min～0.32ml/min；
156.(6)進樣量為0.5μl～1.5μl。
157.在一些實施方式中，指紋圖譜構建方法中，提取溶劑為甲醇。
158.在一些實施方式中，指紋圖譜構建方法中，提取的方法為超聲。
159.在本技術的一些實施方式中，中藥材或中藥製劑的指紋圖譜中：
160.當歸的指紋圖譜包括19個共有峰，分別為峰1、峰2、峰3、峰4、峰5、峰6、峰7、峰8、峰9、峰10、峰11、峰12、峰13、峰14、峰15、峰16、峰17、峰18和峰19；
161.當歸炭的指紋圖譜包括10個共有峰，分別為峰6、峰7、峰10、峰11、峰12、峰19、峰20、峰21、峰22和峰23；
162.當歸製劑的指紋圖譜包括8個共有峰，分別為峰1、峰3、峰5、峰6、峰7、峰12、峰24和峰25；
163.當歸炭製劑的指紋圖譜包括4個共有峰，分別為峰3、峰6、峰7和峰20；
164.其中，峰1為色氨酸、峰3為綠原酸、峰5為阿魏酸、峰6為洋川芎內酯i、峰7為洋川芎內酯h、峰12為藁本內酯、峰20為5-羥甲基糠醛；
165.進一步的，以上各特徵峰中：以峰6(洋川芎內酯i)為參照，各特徵峰及其相對保留時間如下：峰1：0.23
±
10％；峰2：0.57
±
10％；峰3：0.60
±
10％；峰4：0.91
±
10％；峰5：0.93
±
10％；峰7：1.07
±
10％；峰8：1.30
±
10％；峰9：1.63
±
10％；峰10：1.67
±
10％；峰11：1.74
±
10％；峰12：1.77
±
10％；峰13：1.83
±
10％；峰14：2.31
±
10％；峰15：2.33
±
10％；峰16：2.35
±
10％；峰17：2.37
±
10％；峰18：2.41
±
10％；峰19：2.43
±
10％；峰20：0.16
±
10％；峰
21：0.21
±
10％；峰22：2.82
±
10％；峰23：2.84
±
10％；峰24：0.64
±
10％；峰25：0.67
±
10％。
166.本技術還涉及一種中藥材的鑑別方法，該鑑別方法是基於本技術第一方面提供的中藥材的指紋圖譜，將待測藥材的圖譜與標準圖譜進行對比，可鑑定藥材的歸屬和品質優劣，為待測藥材的質量綜合評價及藥理藥效研究提供參考。
167.在一些實施方式中，中藥材的鑑別方法包括如下步驟：
168.將中藥材用提取溶劑進行提取，製得待測品溶液ⅰ；
169.將待測品溶液ⅰ進行高效液相色譜分析，生成待測樣品圖譜ⅰ；
170.以本技術第一方面提供的指紋圖譜構建方法制定的中藥材的指紋圖譜作為對照圖譜，計算待測樣品圖譜ⅰ和待測樣品圖譜ⅰ的相似度，相似度大於0.8即為質量合格；
171.其中，進行超高效液相色譜分析包括按照如下流動相條件進行洗脫：以乙腈為流動相a，以體積濃度0.08％～0.12％的甲酸水溶液為流動相b，所述流動相a和所述流動相b的體積百分比的總和為100％；
172.進一步地，洗脫的程序包括：
173.0～12min，流動相a的體積百分比由5％上升至23％；
174.12min～13min，流動相a的體積百分比由23％上升至43％；
175.13min～18min，流動相a的體積百分比由43％上升至44％；
176.18min～20min，流動相a的體積百分比由44％上升至46％；
177.20min～22min，流動相a的體積百分比由46％上升至47％；
178.22min～23min，流動相a的體積百分比由47％上升至58％；
179.23min～29min，流動相a的體積百分比由58％上升至59％；
180.29min～30min，流動相a的體積百分比由59％上升至80％；
181.30min～34min，保持所述流動相a的體積百分數為80％。
182.在本技術的一些實施方式中，中藥材的鑑別方法中，超高效液相色譜分析的條件包括如下特徵中的一個或幾個：
183.(1)色譜柱為十八烷基矽烷鍵合矽膠色譜柱；
184.(2)色譜柱的型號為waters acquity uplc beh shield rp18；
185.(3)柱溫為20℃～25℃；
186.(4)檢測波長為260nm～270nm；
187.(5)流動相的流速為0.28ml/min～0.32ml/min；
188.(6)進樣量為0.5μl～1.5μl。
189.在本技術的一些實施方式中，中藥材的鑑別方法中，提取溶劑為甲醇。
190.在本技術的一些實施方式中，中藥材的鑑別方法中，提取的方法為超聲。
191.本技術還涉及一種中藥製劑的鑑別方法，該鑑別方法是基於本技術第一方面提供的中藥製劑的指紋圖譜，將待測製劑的圖譜與標準圖譜進行對比，能有效鑑別當歸製劑和當歸炭製劑，彌補了無法從顯微與性狀鑑別特徵進行檢查和鑑別的缺陷。
192.在本技術的一些實施方式中，中藥製劑的鑑別方法包括如下步驟：
193.將中藥製劑用提取溶劑進行提取，製得待測品溶液ⅱ；
194.將所述待測品溶液ⅱ進行高效液相色譜分析，生成待測樣品圖譜ⅱ；
195.以本技術第一方面提供的指紋圖譜構建方法制定的中藥製劑的指紋圖譜作為對照圖譜，計算待測樣品圖譜ⅱ和中藥製劑的指紋圖譜的相似度，相似度大於0.8即為質量合格；
196.其中，進行超高效液相色譜分析包括按照如下流動相條件進行洗脫：以乙腈為流動相a，以體積濃度0.08％～0.12％的甲酸水溶液為流動相b，所述流動相a和所述流動相b的體積百分比的總和為100％；
197.進一步地，洗脫的程序包括：
198.0～12min，流動相a的體積百分比由5％上升至23％；
199.12min～13min，流動相a的體積百分比由23％上升至43％；
200.13min～18min，流動相a的體積百分比由43％上升至44％；
201.18min～20min，流動相a的體積百分比由44％上升至46％；
202.20min～22min，流動相a的體積百分比由46％上升至47％；
203.22min～23min，流動相a的體積百分比由47％上升至58％；
204.23min～29min，流動相a的體積百分比由58％上升至59％；
205.29min～30min，流動相a的體積百分比由59％上升至80％；
206.30min～34min，保持所述流動相a的體積百分數為80％。
207.在本技術的一些實施方式中，中藥製劑的鑑別方法中，超高效液相色譜分析的條件包括如下特徵中的一個或幾個：
208.(1)色譜柱為十八烷基矽烷鍵合矽膠色譜柱；
209.(2)色譜柱的型號為waters acquity uplc beh shield rp18；
210.(3)柱溫為20℃～25℃；
211.(4)檢測波長為260nm～270nm；
212.(5)流動相的流速為0.28ml/min～0.32ml/min；
213.(6)進樣量為0.5μl～1.5μl。
214.在本技術的一些實施方式中，中藥製劑的鑑別方法中，提取溶劑為甲醇。
215.在本技術的一些實施方式中，中藥製劑的鑑別方法中，提取的方法為超聲。
216.以下為一些具體的實施例。
217.下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的藥材原料、輔料、試劑等，如無特殊說明，均為市售購買產品。其中：
218.儀器及型號如下：
219.waters acquity型超高效液相色譜系統(美國waters公司)；me204e型分析天平(梅特勒-託利多公司)；kq-500de型數控超聲清洗器(崑山市超聲儀器有限公司)；
220.材料及試劑如下：
221.當歸為購買所得，由包括如下廠家提供：佛山市龍德藥業有限公司、隴西縣馮了性藥材飲片有限公司、哈爾濱福順堂藥材有限公司、甘肅中平倉儲服務有限公司和安徽省永香中藥飲片有限公司，詳細來源參見表1；當歸炭為自製，製備方法如下：取當歸飲片，置熱鍋內，用武火炒至表面焦黑色、內部焦褐色或至規定程度時，噴淋清水少許，熄滅火星，取出，晾乾；當歸、當歸炭配方顆粒由廣東一方製藥有限公司提供，詳細批號參見表2。
222.表1當歸來源批號
[0223][0224]
表2當歸、當歸炭配方顆粒批號
[0225][0226]
色氨酸(批號：140686-201904，純度：99.9％，中國食品藥品檢定研究院)；綠原酸(批號：110753-202119，純度：96.3％，中國食品藥品檢定研究院)；阿魏酸(批號：110773-201915，純度：99.4％，中國食品藥品檢定研究院)；洋川芎內酯i(批號：112071-202101，純度：99.2％，中國食品藥品檢定研究院)；洋川芎內酯h(批號：dstdy018201，純度：99.6％，樂美天醫藥)；藁本內酯(批號：20092403，純度：98.77％，成都普菲德生物技術有限公司)；5-羥甲基糠醛(批號：111626-202215，純度：99.5％，中國食品藥品檢定研究院)；
[0227]
甲醇(分析純，西隴科學股份有限公司)；甲醇、乙腈(色譜純，默克股份有限公司)；甲酸(色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司)；水為超純水(取自實驗室milli-q超純水系統，默克股份有限公司)。
[0228]
以下測試涉及色譜檢測，均採用如下測定法：精密吸取1μl待測溶液(參照物溶液或供試品溶液)，注入超高效液相色譜儀，記錄色譜圖。
[0229]
實施例1指紋圖譜的構建
[0230]
1.1製備參照物
[0231]
精密稱取色氨酸、綠原酸、阿魏酸、洋川芎內酯i、洋川芎內酯h、藁本內酯、5-羥甲基糠醛對照品適量，加甲醇製成每1ml含色氨酸1.5μg、綠原酸2μg、阿魏酸5μg、洋川芎內酯i6μg、洋川芎內酯h1.5μg、藁本內酯250μg、5-羥甲基糠醛20μg的混合參照物溶液。
[0232]
1.2供試品製備方法考察
[0233]
1.2.1提取溶劑的考察
[0234]
取當歸、當歸炭、當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒各約0.2g，精密稱定，分別加入30％甲醇、70％甲醇、甲醇各25ml，稱定重量，超聲30min，再稱定重量加甲醇補足失重，過濾，取續濾液，即得當歸、當歸炭、當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒供試品溶液，於同一色譜條件下進樣測定，考察不同濃度甲醇對樣品的提取情況。結果見圖1～圖4，對比各提取溶劑的提取情況可知，使用甲醇作為提取溶劑時，得到的當歸和當歸炭原料及製劑的色譜圖色譜峰數目較多，峰面積較大，能夠更全面的反映當歸和當歸炭原料及製劑的內在成分，最終確定提取溶劑為甲醇。
[0235]
1.2.2提取方式考察
[0236]
取當歸粉末約0.2g，精密稱定，加入甲醇25ml，稱定重量，分別於回流30min、超聲30min、超聲45min、超聲60min進行提取，放冷，再稱定重量，加甲醇補足失重，過濾，取續濾液，即得。於同一色譜條件進樣測定，考察不同提取方式的提取情況。見圖5，結果顯示採用超聲和回流進行提取時，各色譜峰數目和峰面積無明顯增加，超聲30min時即可提取完全，從提取效率及經濟節能方面考慮，最終確定提取方式為超聲30min。
[0237]
1.2.3確定供試品製備方法
[0238]
基於上述考察結果，確定的製備方法如下：取當歸藥材、當歸炭飲片粉末(過三號篩)約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲30min，再稱定重量，加甲醇補足失重，過濾，取續濾液，即得當歸、當歸炭供試品溶液。
[0239]
另取當歸、當歸炭配方顆粒0.2g，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲30min，再稱定重量，加甲醇補足失重，過濾，取續濾液，即得當歸、當歸炭配方顆粒供試品溶液。
[0240]
1.3建立色譜條件
[0241]
1.3.1流動相組成考察
[0242]
取當歸供試品溶液，分別考察以乙腈-水、甲醇-0.1％甲酸水、乙腈-0.1％甲酸水為流動相時的洗脫情況，見圖6，結果顯示，以乙腈-0.1％甲酸為流動相時，色譜峰數目多，分離情況好，最終確定流動相組成為乙腈-0.1％甲酸水。
[0243]
1.3.2流速考察
[0244]
取當歸供試品溶液，分別考察流速為0.2ml/min、0.25ml/min、0.3ml/min時的分離情況，見圖7，結果表明，3個流速條件下色譜峰分離的整體情況較為相似，在5～9min及26～34min區間的色譜峰在0.3ml/min的流速條件下分離情況較好，且在相同時間內，0.3ml/min流速出峰快，耗時時間短，最終優選流速為0.3ml/min。
[0245]
1.3.3柱溫考察
[0246]
取當歸供試品溶液，分別考察柱溫為20℃、25℃、30℃時的分離情況，見圖8，結果表明，柱溫為20～25℃時，10～11min處的色譜峰能夠完全分離，柱溫升高至30℃後分離效果差，最終優選柱溫為25℃。
[0247]
1.3.4檢測波長考察
[0248]
取當歸供試品溶液，使用dad檢測器於210～400nm進行光譜掃描，在254～290nm處檢測到的色譜峰較多，對比不同檢測波長下的色譜圖，見圖9，結果顯示19～22min處色譜峰在260～270nm吸收較強，峰數目較多且峰面積較大，在280～290nm有個別色譜峰消失，綜合
整體情況，考慮色譜峰數目及平均峰面積情況，最終確定檢測波長為270nm。
[0249]
1.3.5確定色譜條件
[0250]
基於上述考察結果，確定的色譜條件如下：以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑(waters acquity uplc beh shield rp18 column，2.1
×
100mm，1.7μm)；以乙腈為流動相a，以0.1％甲酸水溶液為流動相b，按下表3中的規定進行梯度洗脫；流速為每分鐘0.3ml；柱溫為25℃；檢測波長為270nm。
[0251]
表3梯度洗脫表
[0252][0253][0254]
1.4方法學考察
[0255]
1.4.1精密度試驗
[0256]
取當歸、當歸炭及配方顆粒樣品各約0.2g，精密稱定，按「1.2.3」項下確立的條件製備供試品溶液，按「1.3.5」項下確立的色譜條件連續進樣6次，分別計算各共有峰的保留時間與峰面積。結果表明各共有峰相對保留時間rsd《0.28％，各共有峰相對峰面積rsd《2.85％，表明儀器精密度良好。
[0257]
1.4.2重複性試驗
[0258]
取當歸、當歸炭及配方顆粒樣品各約0.2g，精密稱定，平行6份，按「1.2.3」項下確立的條件製備供試品溶液，按「1.3.5」項下確立的色譜條件進樣測定，分別計算各共有峰的保留時間與峰面積。結果表明各共有峰的相對保留時間rsd《0.35％，各共有峰的相對峰面積rsd《3.93％，表明方法重複性良好。
[0259]
1.4.3穩定性試驗
[0260]
取當歸、當歸炭及配方顆粒樣品各約0.2g，精密稱定，按「1.2.3」項下條件製備供試品溶液，分別於2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h進樣測，測定方法條件同「1.3.5」項下確立的色譜條件，計算各共有峰的保留時間及峰面積。結果各共有峰的相對保留時間rsd《1.20％，各共有峰的相對峰面積rsd《4.14％。表明供試品在24h內穩定。
[0261]
1.5特徵圖譜的建立及共有峰確定
[0262]
1.5.1構建指紋圖譜
[0263]
各取17批次的當歸藥材、當歸炭飲片和17批當歸配方顆粒及10批當歸炭配方顆粒，按「1.2.3」項下條件製備供試品溶液，按「1.3.5」項下確立的色譜條件進樣測定，採用對
照品圖譜(圖10)進行峰指認，結果表明峰1為色氨酸、峰3為綠原酸、峰5為阿魏酸、峰6為洋川芎內酯i、峰7為洋川芎內酯h、峰12為藁本內酯、峰20為5-羥甲基糠醛。
[0264]
比較17批當歸藥材色譜圖，確定了19個共有峰，分別為峰1～峰19，色譜數據見表4～7。
[0265]
表4 17批當歸藥材各共有峰保留時間(峰1～10)
[0266][0267][0268]
表5 17批當歸藥材各共有峰保留時間(峰11～19)
[0269][0270]
表6 17批當歸藥材各共有峰峰面積(峰1～10)
[0271][0272][0273]
表7 17批當歸藥材各共有峰峰面積(峰11～19)
[0274]
編號峰11峰12峰13峰14峰15峰16峰17峰18峰19dg 0164712897323380927173581443615077476521078dg 0259753791792798828623769484716963603826245dg 0378653206182952937848790818225734569021951dg 0481024773703253135305814706723890801927137dg 0564342710482421728366675556218825541616647dg 06120053342064766044919603979626860424525353dg 0786182281035146431144475527716526345021854dg 0867062985652299027605582416513266260315169dg 0980953522283246232865304394114116526717209dg 10731461087027094313847116183223471050935890dg 11101115628854020537146722609422132839527429dg 1279803653513939545347535768721720605126475dg 1365012369502791445645041431513169378016077dg 14972843475238713529890721204134199803033550dg 1555403351983191533883022375513447684625159dg 1685794726173113438176886861528748789632690dg 17553714088840741342535772949720121527604
[0275]
比較17批當歸炭色譜圖，確定了10個共有峰，分別為峰6、峰7、峰10、峰11、峰12、峰19、峰20、峰21、峰22、峰23，色譜數據見表8～9。
[0276]
表8 17批當歸炭飲片各共有峰保留時間
[0277]
編號峰6峰7峰10峰11峰12峰19峰20峰21峰22峰23dgt 0111.5412.2919.2720.0620.4327.981.852.4032.5932.84dgt 0211.5512.3119.2720.0720.4327.981.862.4132.5932.84
dgt 0311.5912.3419.2920.0920.4728.021.862.4132.6232.87dgt 0411.5512.3119.2520.0520.4327.971.862.4132.5932.84dgt 0511.5912.3419.3220.1120.4928.031.862.4132.6332.88dgt 0611.5812.3419.2920.1120.4628.001.872.4132.6032.85dgt 0711.5612.3119.2920.1020.4528.001.862.4132.6132.86dgt 0811.5812.3319.2920.0820.4628.011.862.4132.6132.85dgt 0911.5712.3319.2720.0620.4427.991.852.4032.6232.86dgt 1011.5412.3019.2820.0720.4427.991.852.4032.6032.85dgt 1111.6012.3519.3320.1320.5128.071.872.4132.6332.88dgt 1211.5512.3119.2620.0620.4327.991.872.4132.6132.86dgt 1311.5712.3119.2720.0720.4428.001.862.4132.6132.85dgt 1411.5912.3519.3320.1220.5028.041.862.4132.6332.87dgt 1511.5712.3319.2920.0920.4628.021.862.4132.6232.87dgt 1611.5612.3219.3120.1220.4828.021.862.4132.6132.86dgt 1711.5712.3319.3120.1020.4828.011.862.4132.6232.86
[0278]
表9 17批當歸炭飲片各共有峰峰面積
[0279][0280][0281]
比較17批當歸配方顆粒色譜圖，確定了8個共有峰，分別為峰1、峰3、峰5、峰6、峰7、峰12、峰24、峰25。色譜數據見表10～11。
[0282]
表10 17批當歸配方顆粒各共有峰保留時間
[0283]
編號峰1峰3峰5峰6峰7峰12峰24峰25dg k12.746.8410.8111.5912.3420.437.417.78dg k22.746.8410.8011.5712.3320.427.417.77dg k32.746.8410.8111.5912.3520.457.417.77dg k42.776.8810.8611.6312.3820.497.467.82dg k52.756.8510.8311.5912.3420.457.437.78dg k62.756.8610.8411.5912.3420.457.447.79
dg k72.776.8710.8211.6112.3620.457.427.79dg k82.766.8610.8411.6112.3620.457.447.80dg k92.746.8510.8311.5912.3420.447.437.78dg k102.746.8310.8211.5912.3520.457.407.77dg k112.776.8810.8511.6212.3720.477.457.81dg k122.736.8310.7911.5712.3320.437.397.76dg k132.746.8410.8211.5812.3420.447.417.77dg k142.796.8910.8811.6512.4020.487.477.83dg k152.806.9210.9111.6812.4320.517.507.86dg k162.766.8610.8311.6112.3620.457.427.79dg k172.756.8310.8011.5912.3420.437.397.76
[0284]
表11 17批當歸配方顆粒各共有峰峰面積
[0285][0286][0287]
比較10批當歸炭配方顆粒色譜圖，確定了4個共有峰，分別為峰3、峰6、峰7、峰20，色譜數據見表12～13。
[0288]
表12 10批當歸炭配方顆粒各共有峰保留時間
[0289]
編號峰3峰6峰7峰20dgt k16.9911.7512.511.92dgt k26.9511.6712.431.90dgt k36.9411.6812.431.90dgt k46.9511.7012.461.90dgt k56.9411.6812.431.89dgt k67.0511.8012.391.93dgt k76.9511.6712.431.89dgt k86.9311.6612.411.89dgt k96.9611.7012.451.90
dgt k106.9511.6712.431.90
[0290]
表13 10批當歸炭配方顆粒各共有峰峰面積
[0291]
編號峰3峰6峰7峰20dgt k1546227191586975978dgt k2583526046596875045dgt k3630227043613063207dgt k4607328460606368216dgt k5613128554667364164dgt k6425725031192268827dgt k73140393617980503503dgt k83505410698706503274dgt k95638232094195354451dgt k105592196664005327123
[0292]
1.5.2相似度評價
[0293]
將1.5.1中得到的17批當歸藥材、17批當歸炭飲片、17批當歸配方顆粒、10批當歸炭配方顆粒色譜分別導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統，採用中位數法生成各自的疊加圖譜(見圖11～圖14)和對照圖譜(見圖15～圖18)。
[0294]
17批當歸藥材樣品色譜圖與對照圖譜的相似度依次為0.998、0.997、0.998、0.997、0.996、0.993、0.962、0.999、0.999、0.991、0.999、0.995、0.998、0.999、0.998、0.996、0.943；相似度均》0.9，表明17批當歸藥材批次間的各化學成分穩定；
[0295]
17批當歸炭飲片樣品色譜圖與對照圖譜相似度依次為0.848、0.996、0.989、0.989、0.990、0.996、0.999、0.898、0.990、0.993、0.989、0.997、0.998、0.994、0.991、0.996、0.996；17批當歸炭飲片中15批相似度均》0.9，僅有2批相似度在0.8～0.9之間，表明17批當歸炭飲片批次間整體相似度較高，部分批次存在一定差異，推測可能與炮製程度有關；
[0296]
17批當歸配方顆粒樣品色譜圖與對照圖譜相似度依次為0.999、0.999、0.999、1.000、0.996、1.000、1.000、0.996、1.000、0.998、0.997、0.998、0.995、0.985、0.996、0.996、0.989；相似度均》0.9，表明17批當歸配方顆粒批次間的各化學成分穩定；
[0297]
10批當歸炭配方顆粒與對照圖譜相似度依次為0.976、0.978、0.960、0.963、0.956、0.977、0.998、0.998、0.997、0.997。相似度均》0.9，表明10批當歸炭配方顆粒批次間的各化學成分穩定。
[0298]
實施例2：當歸和當歸炭指紋圖譜的鑑別應用
[0299]
2.1當歸、當歸炭指紋圖譜相似度分析
[0300]
以實施例1中所得的當歸藥材、當歸炭飲片的對照指紋圖譜(分別記作dg-r、dgt-r)作為參照圖譜，將實施例1中的17批當歸藥材和17批當歸炭飲片的色譜圖分別導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統，與上述對照指紋圖譜進行全譜峰匹配，17批當歸樣品與當歸對照指紋圖譜相似度範圍在0.938～1.000，與當歸炭對照指紋圖譜相似度範圍在0.150～0.158；
[0301]
17批當歸炭樣品與當歸炭對照指紋圖譜相似度範圍在0.804～0.999，與當歸對照
指紋圖譜相似度範圍在0.080～0.686；
[0302]
結果表明，通過將測定的當歸和當歸炭的指紋圖譜對比，通過相似度值所在的區間，可粗略評判相對應的原料來源。
[0303]
表14當歸與當歸炭樣品相似度評價結果
[0304][0305][0306]
2.2.當歸、當歸炭指紋圖譜各成分差異分析
[0307]
將當歸、當歸炭的指紋圖譜進行對比分析，炮製後當歸炭新生成的峰20、峰21、峰22、峰23，可直接作為當歸和當歸炭原料的重要區別；將17批當歸和當歸炭的指紋圖譜色譜峰峰1～峰23的峰面積(未檢測到的峰面積以0計)分別進行數據正態性檢驗，大部分色譜峰峰面積均呈非正態分布，採用非參數的mann-whitney u檢驗，檢驗結果如表15～16。結果表明，當歸和當歸炭峰1～峰23均具有顯著性差異(p《0.05)，基於指紋圖譜色譜峰可對當歸和當歸炭的原料來源進行區分。
[0308]
表15當歸、當歸炭原料峰面積檢驗統計結果(峰1～12)
[0309][0310]
表16當歸、當歸炭原料峰面積檢驗統計結果(峰12～23)
[0311][0312]
2.3.當歸、當歸炭指紋圖譜化學模式識別研究
[0313]
①
當歸、當歸炭原料指紋圖譜聚類分析
[0314]
以34批當歸、當歸炭的23個色譜峰峰面積為變量，進行聚類分析，見圖19，結果可明顯分為兩大類，17批當歸聚為一類，17批當歸炭聚為另一類，由此可知當歸和當歸炭原料的整體成分組成有較大差異。
[0315]
②
當歸、當歸炭原料指紋圖譜主成分分析(pca)
[0316]
將34批當歸、當歸炭的峰面積數據(未檢測到的峰面積以0計)經spss處理進行主成分分析，以特徵值》1共提取了3個主成分，分析結果見表17。累計方差貢獻率為90.975％，可反應出34批當歸、當歸炭的整體信息。數據導入simca，得到主成分得分圖，見圖20，結果顯示34批樣品可分為兩大類，其中17批當歸樣品分為一類，17批當歸炭樣品分為另一類，表明當歸和當歸炭指紋圖譜各成分差異較大。
[0317]
表17總方差解釋表
[0318][0319]
③
當歸、當歸炭原料指紋圖譜偏最小二乘回歸分析(pls-da)
[0320]
基於pca分析結果，將34批當歸、當歸炭的峰面積數據處理後導入simca進行pls-da分析，對34批樣品按已知的類別進行主觀分類，見圖21，結果表明，當歸和當歸炭原料明顯各自分布在得分圖兩側，與pca結果一致，pls-da模型中的擬合參數r2(y)＝0.961，模型預測參數q2＝0.946，均大於0.5，表明所建模型預測能力較強，以模型變量投影(vip)值大於1作為指標對當歸和當歸炭原料的差異性成分進行篩選，提取了10個重要的特徵性指標，重要程度依次為峰23、峰8、峰22、峰14、峰21、峰20、峰5、峰1、峰2、峰13，結合各成分差異性分析結果，最終確定當歸和當歸炭原料中的差異性色譜峰依次為峰23、峰8、峰22、峰14、峰21、峰20、峰5、峰1、峰2、峰13。
[0321]
實施例3：當歸配方顆粒和當歸炭配方顆粒指紋圖譜的鑑別應用
[0322]
3.1.當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒指紋圖譜相似度分析
[0323]
以實施例1中所得的當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒的對照指紋圖譜(分別記作dg-kr、dgt-kr)作為參照圖譜，將實施例1中的17批當歸配方顆粒和10批當歸炭配方顆粒的色譜圖分別導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統，與上述對照指紋圖譜進行全譜峰匹配，相似度憑藉結果見表18。
[0324]
根據表18可知，17批當歸配方顆粒樣品與當歸配方顆粒對照指紋圖譜相似度範圍
在0.972～0.992，與當歸炭配方顆粒對照指紋圖譜相似度範圍在0.083～0.112；10批當歸炭配方顆粒樣品與當歸炭配方顆粒對照指紋圖譜相似度範圍在0.934～0.998，與當歸配方顆粒對照指紋圖譜相似度範圍在0.052～0.422；結果表明，通過將測定的當歸和當歸炭配方顆粒的指紋圖譜對比，通過相似度值所在的區間，可粗略評判相對應的配方顆粒來源。
[0325]
表18當歸配方顆粒和當歸炭配方顆粒樣品相似度評價結果
[0326][0327]
3.2.當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒指紋圖譜各成分差異分析
[0328]
將當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒的指紋圖譜進行對比分析，峰12、峰25僅在當歸配方顆粒中檢出，峰20僅在當歸炭配方顆粒中檢出，可直接作為當歸配方顆粒和當歸炭配方顆粒的重要區別；將17批當歸配方顆粒和10批當歸炭配方顆粒的指紋圖譜色譜峰峰1、峰3、峰5、峰6、峰7、峰12、峰20、峰24、峰25的峰面積(未檢測到的峰面積以0計)分別進行數據正態性檢驗，符合正態分布採用t檢驗，非正態分布則採用非參數的mann-whitney u檢驗，檢驗結果見表19-20。
[0329]
結果表明，當歸配方顆粒和當歸炭配方顆粒各色譜峰均具有顯著性差異(p《0.05)，基於指紋圖譜色譜峰可對當歸配方顆粒和當歸炭配方顆粒進行區分。
[0330]
表19當歸、當歸炭配方顆粒峰面積t檢驗統計結果
[0331]
[0332][0333]
表20當歸、當歸炭配方顆粒峰面積非參數檢驗統計結果
[0334][0335]
3.3.當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒指紋圖譜化學模式識別研究
[0336]
①
當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒指紋圖譜聚類分析
[0337]
以27批當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒的9個色譜峰峰面積為變量，進行聚類分析，見圖22，結果可明顯分為兩大類，17批當歸配方顆粒聚為一類，10批當歸炭配方顆粒聚為另一類，由此可知當歸配方顆粒和當歸炭配方顆粒的整體成分組成有明顯差異。
[0338]
②
當歸、當歸炭配方顆粒指紋圖譜主成分分析
[0339]
將27批當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒的峰面積數據(未檢測到的峰面積以0計)經spss處理進行主成分分析，以特徵值》1共提取了2個主成分，分析結果見表21。累計方差貢獻率為89.909％，可反應出27批當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒的整體信息。數據導入simca，得到主成分得分圖，結果顯示27批樣品可分為兩大類，見圖23，其中17批當歸配方顆粒樣品分為一類，10批當歸炭配方顆粒樣品分為另一類(10批當歸炭配方顆粒又可再細分為三類，其中，k9、k10批次可細分為一類，k7、k8批次可再分為一類，其餘批次分為另一類)，表明當歸配方顆粒和當歸炭配方顆粒指紋圖譜各成分差異較大；當歸炭配方顆粒各批次間存在一定差異，推測可能與不同批次的原料差異有關。
[0340]
表21總方差解釋表
[0341][0342]
③
當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒指紋圖譜偏最小二乘回歸分析(pls-da)
[0343]
基於pca分析結果，將27批當歸配方顆粒、當歸炭配方顆粒的峰面積數據處理後導入simca進行pls-da分析，對27批樣品按已知的類別進行主觀分類，分類結果見圖24。
[0344]
結果表明，當歸和當歸炭配方顆粒明顯各自分布在得分圖兩側，pls-da模型中的擬合參數r2(y)＝0.971，模型預測參數q2＝0.952，均大於0.5，表明所建模型預測能力較強，以模型變量投影(vip)值大於1作為指標對當歸和當歸炭配方顆粒的差異性成分進行篩選，提取了5個重要的特徵性指標，重要程度依次為峰1、峰25、峰5、峰12、峰24，結合各成分差異性分析結果，最終確定當歸和當歸炭配方顆粒中的差異性色譜峰依次為峰1、峰25、峰5、峰12、峰24、峰20。
[0345]
以上所述實施方式和實施例的各技術特徵可以進行任意合適方式的組合，為使描述簡潔，未對上述實施方式和實施例中的各個技術特徵所有可能的組合都進行描述，然而，只要這些技術特徵的組合不存在矛盾，都應當認為在本說明書記載的範圍中。
[0346]
以上所述實施例僅表達了本技術的幾種實施方式，但並不能因此理解為對申請專利範圍的限制。應當指出的是，對於本領域的普通技術人員來說，在不脫離本技術構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬於本技術的保護範圍。此外應理解，在閱讀了本技術的上述講授內容之後，本領域技術人員可以對本技術作各種改動或修改，得到的等價形式同樣落於本技術的保護範圍。還應當理解，本領域技術人員在本技術提供的技術方案的基礎上，通過合乎邏輯的分析、推理或者有限的試驗得到的技術方案，均在本技術所附權利要求的保護範圍內。因此，本技術專利的保護範圍應以所附權利要求為準，說明書和附圖可用於解釋權利要求的內容。