一種生產乳酸的方法及其專用植物乳桿菌的製作方法

2023-05-08 06:26:46

專利名稱：：一種生產乳酸的方法及其專用植物乳桿菌的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種生產乳酸的方法及其專用植物乳桿菌。
背景技術：
：隨著石油資源的不斷減少以及不可再生資源價格的節節攀升，開發利用對環境更友好的生物基產品已成為轉變經濟增長方式、保障生態鏈良性循環和實現經濟社會可持續發展的戰略需求。乳酸是一種重要的、多用途的生物基平臺化合物，能夠廣泛應用於食品、醫藥、化工、紡織、環保和農業等諸多領域，其中最重要、最廣泛的工業應用是用於生產可降解聚合物-聚乳酸(PLA)。聚乳酸具有生物相容性、生物可降解性以及優良的機械性能和物理性能，因而被產業界認為是新世紀最有發展前途的新型可再生材料，是石油基產品的重要替代品之一。聚乳酸是一類脂肪族聚酯，主要包括聚L-乳酸(PLLA)、聚D-乳酸(PDLA)和聚DL-乳酸(PDLLA)三種，其中使用規模最廣泛的是PLLA，PLLA目前已廣泛應用於醫學、紡織、農業和食品等領域。聚乳酸作為大規模應用的工業材料，需要有合適的熱穩定性，以防止其降解。然而由於同型聚乳酸熱變形溫度低，導致聚L-乳酸作為工業塑料的應用受到限制。2003年，Yamane等發現聚L-乳酸和聚D-乳酸的立體共聚物比單純的聚L-乳酸有更高的熔點，聚L-乳酸的熔點(rm)大約為18(TC，而聚L-乳酸和聚D-乳酸的立體共聚物的熔點能夠達到230°C，這一實驗結果使工業界對D-乳酸的生產產生了巨大的興趣。相對於對L-乳酸生產菌株的研究的高度關注，D-乳酸發酵生產的研究仍然處於起步階段。根據國內外文獻和專利的報導，目前只有德氏乳桿菌a."e/6n^c^)、嗜酸芽孢桿菌(iS/ora/actokc/〃ws/"w/z>ms)禾口棒狀乳桿菌(丄.cw7m/0rm/s)等有限的幾種天然乳酸菌用於生產D-乳酸，這極大地限制了D-乳酸在工業領域的應用，阻礙了聚乳酸市場的開拓。因此有必要篩選更優良、應用潛力更高的產D-乳酸的菌株，才能從根本上解決問題，滿足市場的要求。植物乳桿菌是典型的同型發酵乳酸菌，具有較強的乳酸生產能力和耐鹽性，是潛在的工業應用菌株，然而已發現的植物乳桿菌主要用於生產DL-乳酸，因而不能滿足市場對D-乳酸的要求。
發明內容本發明的目的是提供一株生產乳酸的植物乳桿菌a.p/anton^)SMB-2。本發明所提供的植物乳桿菌a孑/a"ton^)SMB-2是從發酵食品-雲南泡菜中篩選得到的，鑑定為植物乳桿菌(丄./7/a"tow附)。植物乳桿菌a.p/朋tomm)SMB-2已於2008年6月27日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所)，保藏登記號為CGMCC処2566。植物乳桿菌(Z./7/aWan^z)SMB-2CGMCCJVfe2566為革蘭氏陽性菌，菌落較小、圓形、淡乳白色、邊緣整齊光滑，電鏡觀察發現，SMB-2營養細胞的菌體大小為(0.5~0.6)pmX(0.93.0)Mm,菌株單生、成對生或短鏈狀排列，兼性厭氧，無芽孢。以上述植物乳桿菌a.p/awtomm)SMB-2CGMCCJVT22566為活性成分製備的生物菌劑也屬於本發明的保護範圍。上述生物菌劑在具體應用時，可根據需要在其中添加其他的輔料。本發明的第二個目的是提供一種利用植物乳桿菌(丄.;/a"towm)SMB-2CGMCC掀2566生產乳酸的方法。本發明所提供的生產乳酸的方法，是發酵植物乳桿菌a.p/wton^)SMB-2CGMCCWs2566得到乳酸。所述植物乳桿菌a.p/朋torwm)SMB-2CGMCCJV22566的發酵培養基的組成為葡萄糖120~150g/L、蛋白腖10g/L、牛肉膏10g/L、酵母提取物5g/L、K2HP043g/L、KH2P043g/L、乙酸鈉2g/L、MgS04.7H200.58g/L、MnS04'4H200.25g/L、Tween-801ml/L和用於控制發酵液pH值的中和劑。發酵過程中控制pH範圍在5.5~6.2。上述發酵培養基中的中和劑為Ca(OH)2或氨水，優選為Ca(OH)2，所述Ca(OH)2的濃度為296g/L。所述植物乳桿菌a.//朋torwm)SMB-2CGMCCW2566的發酵條件為35~39°C靜置培養48小時。所述發酵培養方式為分批補料發酵培養，每12小時補加60mL1000g/L的葡萄糖一次。本發明利用植物乳桿菌a.;/朋tomm)SMB-2CGMCCJV22566發酵生產乳酸，結果表明，發酵48小時時，發酵液中總乳酸的濃度為18%，D-乳酸的光學純度為84-86%，發酵產率為3.75g/L*h。且該植物乳桿菌a""o^"7/wp/""torwm)SMB-2CGMCCW2566易於沉降到發酵罐底部進行生長，有利於工業生產中菌-液的分離純化，可以降低乳酸工業生產的成本，具有重要的工業應用價值。圖1為植物乳桿菌a.//a"toww)SMB-2的具體篩選流程圖2為植物乳桿菌(丄.p/flw/an^)SMB-2的掃描電鏡照片圖3為植物乳桿菌a.p/a"far臓)SMB-2種子液的沉降效果圖4為植物乳桿菌a.//朋tor謂)SMB-2發酵液的沉降效果具體實施例方式下述實施例中所述方法，如無特別說明均為常規方法。下述實施例中所述百分含量，如無特別說明均為質量百分含量。實施例l、植物乳桿菌a.;/fl"^謂)SMB-2的分離、純化及鑑定植物乳桿菌a.//flwtorwm)SMB-2的具體篩選流程如圖1所示。1、菌種的分離和純化將發酵食品-雲南泡菜浸泡於無菌的生理鹽水中充分洗滌，然後取上述洗滌液加入到MRS液體培養基中，37匸厭氧富集培養48小時，獲得pH〈4.0的富集液；取上述富集液，10倍梯度稀釋後塗布於含4。/。CaCO3的MRS固體培養基上，37。C厭氧培養24小時，挑取透明圈較大的單菌落分別接種於MRS液體培養基中厭氧培養24小時，觀察是否產氣，篩選得到不產氣的菌株，即同型發酵乳酸菌；將上述篩選得到得同型發酵乳酸菌分別接種於復篩培養基上，37。C厭氧培養48小時，通過高效液相色譜檢測總乳酸的產量，獲得高產的乳酸菌；將上述獲得的乳酸菌通過乳酸檢測試劑盒(購自德國拜爾公司)檢測D-乳酸的光學構型，最終從發酵食品-雲南泡菜中得到一株D-乳酸光學純度為84~86%的菌株，即植物乳桿菌a.;/fl"tor訓)SMB-2，經多次傳代後發酵測試，總乳酸產量、D-乳酸的純度沒有明顯變化。植物乳桿菌a./7/a"torMW)SMB-2篩選中所用的MRS液體培養基為葡萄糖20g/L，蛋白腖10g/L，酵母粉5g/L，牛肉膏10g/L，K2HP042g/L，檸檬酸二鉸2g/L，乙酸鈉2g/L，吐溫801mL/L，MgS04'7H200.58g/L，MnS04'4H200.25g/L。發酵過程中控制pH範圍在5.5~6.2。115。C條件下滅菌20分鐘。植物乳桿菌a.p/fl"towm)SMB-2篩選中所用的含4Q/oCaC03的MRS固體培養基為葡萄糖20g/L，蛋白腖10g/L，酵母粉5g/L，牛肉膏10g/L，K2HP042g/L，檸檬酸二銨2g/L，乙酸鈉2g/L，吐溫801mL/L，MgS04*7H200.58g/L,MnS044H200.25g/L，CaC0340g/L，瓊脂15g/L。發酵過程中控制pH範圍在5.5~6.2。。115。C條件下滅菌20分鐘。植物乳桿菌(丄.//awtowm)SMB-2篩選中所用的復篩培養基為葡萄糖120g/L，蛋白腖10g/L，酵母粉5g/L，牛肉膏10g/L，K2HP042g/L，檸檬酸二銨2g/L，乙酸鈉2g/L，吐溫801mL/L，MgS04'7H200.58g/L，MnS04'4H200.25g/L，CaC0340g/L。發酵過程中控制pH範圍在5.56.2。115。C條件下滅菌20分鐘。D-乳酸光學純度二D-乳酸濃度/總乳酸濃度。2、菌株的鑑定將上述步驟l篩選得到的植物乳桿菌a.;/awtonw2)SMB-2進行形態特徵、生理生化試驗、API試劑盒和16SrDNA序列鑑定，具體結果如下該菌株菌落較小、圓形、淡乳白色、邊緣整齊光滑，.電鏡觀察發現，SMB-2營養細胞的菌體大小為(0.5-0.6)MmX(0.9~3.0)pm，菌株的電鏡掃描照片如圖2所示。菌株單生、成對生或短鏈狀排列，革蘭氏染色呈陽性，無芽孢。具體的生理formulaseeoriginaldocumentpage6表中結果"+"表示結果為陽性，"-"表示結果為陰性。利用API試劑盒(購自法國梅裡埃公司)對上述步驟1篩選得到的植物乳桿菌(丄.；/cmton^)SMB-2進行鑑定，結果如表2所示。表2API快速鑑定試驗結果tableseeoriginaldocumentpage7上表中對照指不含碳源的培養基植物乳桿菌(丄.//fl"tor"w)SMB-2的16SrDNA的核苷酸序列如序列表中序列1所示。菌株SMB-2的16SrDNA與植物乳桿菌a.;/朋torwm)A12-li(DQ0564191.1)的同源性最高，其同源性為98%，與其它乳酸菌的同源性較低。基於以上特徵，將本株D-乳酸生產菌SMB-2鑑定為植物乳桿菌a.p/朋towm)，並於2008年6月27日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所)，保藏登記號為CGMCCW22566。實施例2、利用植物乳桿菌a.;/a"torwm)SMB-2CGMCC熗2566發酵生產乳酸該實施例中所用培養基的組成如下MRS液體培養基葡萄糖20g/L，蛋白腖10g/L，酵母粉5g/L，牛肉膏10g/L，K2HP042g/L，擰檬酸二銨2g/L，乙酸鈉2g/L，吐溫801mL/L，MgS04'7H200.58g/L，MnSO4，4H2O0.25g/L。發酵過程中控制pH範圍在5.5~6.2。115°。條件下滅菌20分鐘。、發酵培養基葡萄糖135g/L、蛋白腖10g/L、牛肉膏10g/L、酵母提取物5g/L、K2HP043g/L、KH2P043g/L、乙酸鈉2g/L、MgS04'7H200.58g/L、MnS(V4H200.25g/L、Tween-801ml/L，Ca(OH)2296g/L。恆定pH5.8，115。C條件下滅菌20分鐘。發酵培養基中加入Ca(OH)2的目的是作為中和劑以控制發酵液的pH值。將上述實施例1篩選得到的植物乳桿菌a.;/a"to^w)SMB-2CGMCCW2566接種到MRS液體培養基中，37'C厭氧培養到對數生長期，使菌液濃度達到1091011cfu/mL,得到發酵種子液。在裝有3L上述發酵培養基的7L發酵罐中按照10%的體積比接入上述發酵種子液，發酵過程中，每12小時補加60mL1000g/L的葡萄糖一次，37"C靜置培養48小時，恆定pH5.8，結束髮酵。發酵過程結束後，通過高效液相色譜檢測發酵液中總乳酸的產量。具體的檢測條件如下:採用AgilentIIOO液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)測定總乳酸的含量，有機酸分離柱HPX-87H(Bio-Rad公司，7.8IDX300mm)，流動相為0.0005mol/L硫酸，流量0.5ml/min，進樣量20uL，紫外檢測器，檢測波長254nm，操作溫度4(TC。D-乳酸的含量通過D-乳酸檢測試劑盒(購自德國拜爾公司)檢測。標準乳酸樣品購買自Sigma公司。實驗設3次重複，3次重複的平均值如表3所示。_表3植物乳桿菌SMB-2在不同發酵時間下的總乳酸產量_發酵時間(h)_總乳酸產量(g/L)_D-乳酸光學純度124886%2412084%3615886%48_^_^_按照下述公式計算出發酵液中總乳酸的濃度、D-乳酸的光學純度和發酵產率。總乳酸的濃度-(總乳酸所佔面積/標準樣品所佔面積)X標準樣品質量濃度D-乳酸的光學純度^D-乳酸濃度/總乳酸濃度發酵產率=總乳酸濃度/發酵總時間結果表明，植物乳桿菌(丄.戶/a"torwm)SMB-2CGMCC她2566具有良好的發酵性能，在48小時內總乳酸的產量為180g/L，發酵液中總乳酸的濃度為18%，D-乳酸的光學純度為84-86%，發酵產率為3.75g/L*h。實施例3、利用植物乳桿菌a.//fl"torww)SMB-2CGMCC2566發酵生產乳酸該實施例中所用培養基的組成如下MRS液體培養基葡萄糖20g/L，蛋白腖10g/L，酵母粉5g/L，牛肉膏10g/L,K2HP042g/L，擰檬酸二銨2g/L,乙酸鈉2g/L，吐溫801mL/L，MgS04*7H200.58g/L，MnSO4*4H2O0.25g/L。發酵過程中控制pH範圍在5.5~6.2。115'C條件下滅菌20分鐘。發酵培養基葡萄糖150g/L、蛋白腖10g/L、牛肉膏10g/L、酵母提取物5g/L、K2HP043g/L、KH2P043g/L、乙酸鈉2g/L、MgS04.7H200.58g/L、MnS04.4H200.25g/L、Tween-801ml/L，Ca(OH)2296g/L。培養基的初始pH值為6.2。115。C條件下滅菌20分鐘。發酵培養基中加入Ca(OH)2的目的是作為中和劑以控制發酵液的pH值。將上述實施例1篩選得到的植物乳桿菌(Z./7/""ton^)SMB-2CGMCC処2566接種到MRS液體培養基中，37"厭氧培養到對數生長期，使菌液濃度達到109~10"cfu/mL，得到發酵種子液。在裝有3L上述發酵培養基的7L發酵罐中按照10%的體積比接入上述發酵種子液，發酵過程中，每12小時補加60mL1000g/L的葡萄糖一次，39"C靜置培養48小時，恆定pH6.2，結束髮酵。發酵過程結束後，通過高效液相色譜檢測發酵液中總乳酸的產量。具體的檢測條件如下:採用AgilentIIOO液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)測定總乳酸的含量，有機酸分離柱HPX-87H(Bio-Rad公司，7.8IDX300mm)，流動相為0.0005mol/L硫酸，流量O.5ml/min，進樣量20uL，紫外檢測器，檢測波長254nm，操作溫度4(TC。D-乳酸的含量通過D-乳酸檢測試劑盒(購自德國拜爾公司)檢測。標準乳酸樣品購買自Sigma公司。實驗設3次重複，3次重複的平均值如表4所示。表4植物乳桿菌SMB-2在不同發酵時間下的總乳酸產量發酵時間(h)_總乳酸產量(g/L)_D-乳酸光學純度124686%2411585%3614985%48_^_^_按照下述公式計算出發酵液中總乳酸的濃度、D-乳酸的光學純度和發酵產率。總乳酸的濃度=(總乳酸所佔面積/標準樣品所佔面積)X標準樣品質量濃度D-乳酸的光學純度^D-乳酸濃度/總乳酸濃度發酵產率二總乳酸濃度/發酵總時間結果表明，植物乳桿菌(丄.；/flntorwm)SMB-2CGMCC処2566具有良好的發酵性能，在48小時內總乳酸的產量為172g/L，D-乳酸的光學純度為85-86%，發酵產率為3.58g/L'h。實施例4、利用植物乳桿菌a.;/fl"toww)SMB-2CGMCCJvf22566發酵生產D-乳酸該實施例中所用培養基的組成如下MRS液體培養基葡萄糖20g/L，蛋白腖10g/L，酵母粉5g/L,牛肉膏10g/L，K2HP042g/L，檸檬酸二銨2g/L，乙酸鈉2g/L，吐溫801mL/L，MgS04*7H200.58g/L，MnS04*4H200.25g/L。發酵過程中控制pH範圍在5.5~6.2。。115。C條件下滅菌20分鐘。發酵培養基葡萄糖120g/L、蛋白腖10g/L、牛肉膏10g/L、酵母提取物5g/L、K2HP043g/L、KH2P043g/L、乙酸鈉2g/L、MgS04'7H200.58g/L、MnS04'4H200.25g/L、Tween-801ml/L，Ca(OH)2296g/L。恆定pH5.5，115。C條件下滅菌20分鐘。發酵培養基中加入Ca(OH)2的目的是作為中和劑以控制發酵液的pH值。將上述實施例1篩選得到的植物乳桿菌a.//a"tonwOSMB-2CGMCCW2566接種到MRS液體培養基中，35"C厭氧培養到對數生長期，使菌液濃度達到1091011cfu/mL，得到發酵種子液。在裝有3L上述發酵培養基的7L發酵罐中按照10%的體積比接入上述發酵種子液，發酵過程中，每12小時補加60mL1000g/L的葡萄糖一次，35"C靜置培養48小時，恆定pH5.5，結束髮酵。發酵過程結束後，通過高效液相色譜檢測發酵液中總乳酸的產量。具體的檢測條件如下採用AgilentIIOO液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)測定總乳酸的含量，有機酸分離柱HPX-87H(Bio-Rad公司，7.8IDX300mm)，流動相為0.0005mol/L硫酸，流量0.5ral/min，進樣量20yL，紫外檢測器，檢測波長254nm，操作溫度4(TC。D乳酸的含量通過D-乳酸檢測試劑盒(購自德國拜爾公司)檢測。標準乳酸樣品購買自Sigma公司。實驗設3次重複，3次重複的平均值如表5所示。_表5植物乳桿菌SMB-2在不同發酵時間下的總乳酸產量_tableseeoriginaldocumentpage11按照下述公式計算出發酵液中總乳酸的濃度、D-乳酸的光學純度和發酵產率。總乳酸的濃度=(總乳酸所佔面積/標準樣品所佔面積)X標準樣品質量濃度D-乳酸的光學純度=D-乳酸濃度/總乳酸濃度'發酵產率==總乳酸濃度/發酵總時間結果表明，植物乳桿菌(Z.p/a"tonwz)SMB-2CGMCCJV22566具有良好的發酵性能，在48小時內總乳酸的產量為174g/L，D-乳酸的光學純度為84-86%，發酵產率為3.62g/L'h。實施例5、植物乳桿菌a.p/fl"toraw)SMB-2CGMCCWs2566的沉降實驗將篩選得到的植物乳桿菌SMB-2進行沉降效果的比較，結果如圖3和圖4所示。圖3為植物乳桿菌SMB-2的種子液的沉降效果，圖4為植物乳桿菌SMB-2在發酵液中的沉降效果。結果發現，在生長過程中，植物乳桿菌SMB-2易於沉降到發酵罐底部進行生長，這一特性有利於工業生產中菌-液的分離純化，可以降低乳酸工業生產的成本，具有重要的工業應用價值。序列表〈160>11〈211〉1440<212〉DNA〈213〉植物孚L桿菌(丄acto6acz7/M/7/a",ar"m)1gtcccacctt鄉cggctggttcct肪aaggttaccccaccgactttgggtgttacaaac60tctcatggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccggg雄gtattcaccgcggcatgctg120atccgcgattactagcgattccgacttcatgtaggcgagttgcagcctacaatccgaact180gagaatggctttaagagattagcttactctcgcgagttcgcaactcgttgtaccatccat240tgtagcacgtgtgtagcccaggtcataaggggcatgatgatttgacgtcatccccacctt300cctccggtttgtcaccggcagtctcaccagagtgcccaacttaatgctggcaactgataa360taagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacaac420catgcaccacctgtatccatgtccccgaagggaacgtctaatctcttagatttgcatagt480atgtcaagacctggtaaggttcttcgcgtagcttcgaattaaaccacatgctccaccgct540tgtgcgggcccccgtcaattcctttgagtttcagccttgcggccgtactccccaggcgga600atgcttaatgcgttagctgcagcactgaagggcggaaaccctccaacacttagcattcat660cgtttacggtatggactaccagggtatctaatcctgtttgctacccatactttcgagcct720cagcgtcagttacagaccagacagccgccttcgccactggtgttcttccatatatctacg780catttcaccgctacacatggagttccactgtcctcttctgcactcaagtttcccagtttc840cgatgcacttcttcggttgagccgaaggctttcacatcagacttaaaaaaccgcctgcgc900tcgctttacgcccaataaatccggacaacgcttgccacctacgtattaccgcggctgctg960gcacgtagttagccgtggctttctggttaaataccgtcaatacctgaacagttactctca1020gatatgttcttctttaacaacagagttttacgagccgaaacccttcttcactcacgcggc1080gttgctccatcagactttcgtccattgtggaagattccctactgctgcctcccgtaggag1140tttgggccgtgtctcagtcccaatgtggccgattaccctctcaggtcggctacgtatcat1200tgccatggtgagccgttacctcaccatctagctaatacgccgcgggaccatccaaaagtg1260atagccgaagccatctttcaaactcggaccatgcggtccaagttgttatgcggtattagc1320atctgtttccaggtgttatcccccgcttctgggcaggtttcccacgtgttactcaccagt1380tcgccactcactcaaatgtaattcatgatgcaagcaccaatcattaccagagttcgttcg1440權利要求1、植物乳桿菌(L.plantarum)SMB-2，其保藏號為CGMCC№2566。2、一種生產D-乳酸的方法，是發酵植物乳桿菌(A.p/朋tomm)SMB-2CGMCCWs2566得到D-乳酸。3、根據權利要求2所述的方法，其特徵在於所述植物乳桿菌a.p/^7towm)SMB-2CGMCC処2566發酵培養基的組成為葡萄糖120~150g/L、蛋白腖10g/L、牛肉膏10g/L、酵母提取物5g/L、K2HP043g/L、KH2P043g/L、乙酸鈉2g/L、MgS04'7H200.58g/L、MnS04.4H200.25g/L、Tween-801ml/L和用於控制發酵液pH值的中和劑。4、根據權利要求3所述的方法，其特徵在於所述發酵培養基中的中和劑為Ca(0H)2或氨水，優選為Ca(OH)2。5、根據權利要求4所述的方法，其特徵在於所述Ca(OH)2的濃度為296g/L。6、根據權利要求3-5所述的方法，其特徵在於:所述發酵培養基的pH為5.5-6.2。7、根據權利要求6所述的方法，其特徵在於所述發酵條件為35-39'C靜置培養48小時。8、根據權利要求7所述的方法，其特徵在於所述發酵的培養方式為分批補料發酵培養。9、根據權利要求8所述的方法，其特徵在於所述分批補料發酵為每12小時補加60mL1000g/L的葡萄糖。10、以權利要求1所述的植物乳桿菌a.//朋torwm)SMB-2CGMCC她2566為活性成分製備的生物菌劑。全文摘要本發明公開了一種生產D-乳酸的方法及其專用植物乳桿菌。本發明所提供的植物乳桿菌是植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)SMB-2CGMCC№2566。在35-39℃的條件下靜置培養植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)SMB-2CGMCC№256648小時即可得到D-乳酸。發酵液中總乳酸的濃度為18％，D-乳酸的光學純度為84-86％，發酵產率為3.75g/L·h。且該植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)SMB-2CGMCC№2566易於沉降到發酵罐底部進行生長，有利於工業生產中菌-液的分離純化，可以降低乳酸工業生產的成本，具有重要的工業應用價值。文檔編號A01N63/02GK101302488SQ20081011619公開日2008年11月12日申請日期2008年7月4日優先權日2008年7月4日發明者張延平,徐洪濤,寅李申請人:中國科學院微生物研究所