心臟衰老生物標誌物及其用途的製作方法

2023-09-21 06:56:10

專利名稱：心臟衰老生物標誌物及其用途的製作方法
技術領域：
本發明一般涉及動物健康和長壽的營養支持領域。具體而言，本發 明提供了ー組心臟中衰老的生物標誌物，包括參與fct信號通路的幾個基因。本發明還提供了這些生物標誌物的用途，以鑑定用於延緩心臟衰老的營養和飲食方案，並用於這些基因自身的調節以延緩心臟衰老。相關技術的說明有機體及其組成器官的衰老目前是生物學和醫學研究中非常關注的主題。衰老的標誌包括幹細胞和祖細胞功能的降低和組織再生的下降(Rando,2006, Nature 441 1080-1086)。衰老組織對創傷和損傷表現出降低的內在抗性。固有(resident)細胞和循環幹細胞以及祖細胞都是非特異性細胞，其對於創傷組織修復的進行是關鍵的。這種再生功能隨組織衰老而降低。已經假定，幹細胞和祖細胞功能異常可能會促進衰老和疾病。最新的報導描述了 Wnt/β-聯蛋白信號通路與幹細胞衰老之間的聯繫(參見，例如 White 等人，2007，Current Biology 17(21) :R923_925 ;Brack 等人，2007，Science317 :807-810 ；Liu 等人，2007，Science 317 :803-806 ;Nusse，2008，Cell Research 18 523-527 ;Rando，2006，上文)。β -聯蛋白是Wnt信號通路的關鍵中介體(Willert&Nusse，1998, Current Opinion in Genetics & Development 8 :95-102 ;Nusse, 2008,上文)。當fct蛋白質在細胞膜上與其受體結合時，將在細胞內引發一系列的生物化學反應。信號級聯放大通過β_聯蛋白最終進入細胞核中，所述β_聯蛋白將fct信號從細胞質轉遞至細胞核，以與其他核內蛋白一起調節基因表達(Huelsken & Birchmeirer, 2001, Curr.Op.Genet. & Devel. 11 :547-553)。據報導，在加速衰老的動物模型的多種組織和器官中，Wnt信號是增加的(Liu等人，2007，上文)。報導了持續的Wnt暴露引起了細胞衰老。類似地，已經報導了在衰老的骨骼肌幹細胞中増加的fct信號(Brack等人，2007，上文)。此外，還報導了 Wnt信號促進肌幹細胞的肌源性至纖維發生性的轉變，並抑制該信號保存了肌源性命運(myogenic fate)。在心臟中，Deb等人報導了用分泌型捲曲相關蛋白質2 (SFRP2)(胞外Wnt拮抗劑)拮抗fct信號抑制分化並將胚胎的和成熟的心臟祖細胞維持在未分化狀態(Deb等人，2008，Stem Cells 26:35-44)。因此，那些研究者假定，Wnt信號隨衰老增カロ，並且該信號驅動心臟的幹細胞和祖細胞進入纖維發生型譜系(Deb，2008，ResearchProposal Summary-New Scholar Award in Aging, Ellison Medical Founaation atURLellisonfoundation. org/)。Ashton等人報導對比年輕心臟,Wnt信號通路在「衰老」心臟中下調。(Ashton 等人，2005,Experimental Gerontology41 :189-204),但該研究中沒有報導β_聯蛋白的表達。此外，儘管已經顯示，小鼠中有功能性活性的心臟祖細胞在20月齡時達到峰值(Gonzales 等人，2008, Circulation Research 102 :597-606),但在 Ashton等人研究的「衰老」組中，小鼠的齡期範圍為16-18月齡。因此，在Ashton等人研究中使用的小鼠並不是真正衰老的個體。正好處於隨意攝取水平以下的限量熱量攝入已經在許多動物物種，包括哺乳動物例如嚙齒類動物和靈長類動物中顯示出増加壽命、降低或延緩許多年齡相關的疾病的發病、改善應激抗性和減緩功能衰退。事實上，臨床試驗已經開始評價熱量限制(CR)在人類中的長壽促進作用。但是在人類和動物中一祥，由於所需限制的程度和長短，在大多數個體中，CR似乎不可能是提高壽命的可行策略。為此，已經將研究集中於在不實質改變飲食攝入的情況下，鑑定能模擬CR的作用的物質，例如，藥物試劑、營養物質等。嘗試已經直接朝向鑑定可以模擬CR的ー種或多種生理或生物化學作用的試劑(參見，Barger 等人，2008，PLoS ONE 3(6) e2264. doi 10. 1371/journal, pone. 0002264),或者可以在某些組織和器官中模擬與CR相關的基因表達譜的試劑(例如，Spindler，美國專利6，406，853 ;美國專利申請公開2003/0124540 ；Barger等人，2008，上文)。關於 後者，已經公開了用於分析與CR相關的基因和篩選基於基因表達譜的CR模擬物的方法(Spindler 等人，美國專利申請公開 2004/0180003、2004/0191775 和 2005/0013776 ；Pan 等人，美國專利申請公開2007/0231371)。據報導，在多種非心臟細胞和組織系統中，許多物質與聯蛋白和/或Wnt信號相互作用，所述物質包括藻酸鹽(Dettmar等人,2007, Biomater Sci Polym Ed18 :317-333)、芹菜苷配基(Shukla 等人，2007，Cancer Res. 67 :6925-6935)、抗壞血酸(Quintanilla 等人，2005，J Biol Chem 280 :11615-11625)、薑黃素(Mahmoud 等人，2000，Carcinogenesis21 :921-927)、黃燒酮(Park等人，2005, Biochem Biophys Res Commun331 1222-1228)、染料木素(Guo 等人，2002，Am J Physiol Cell Physiol283 :C722_C734)、透明質酸(Bourguignon 等人，2007，J Biol Chem282 :1265-1280)、鎂(Caveda 等人，1996，J Clin Invest 98 :886-893)、油酸單甘油酸憐脂酸(monooleyl phosphatidic acid)(Malbon，2005，Sci STKE 292 :pe35)、柚苷配基(Lee 等人，2005，Biochem Biophys ResCommun 335 :771-776)、一氧化氮(硝化甘油)(Pr6votat 等人，2OO6, Gastroenterology131 :1142-1152)、五羥黃酮(van Erk 等人，2005，Eur J Nutr 44 :143-556)、白藜蘆醇(Hope 等人，2008, Mol Nutr Food Res 52 :S52_S61)、S-氨基甲酸胱氨酸(Proweller 等人，2006，Cancer Res 66 :7438-7444)、丁酸鈉(Abramova 等人，2006，J Biol Chem281 21040-21051)、水楊酸鈉(Lee 等人，2003，Int J Oncol 23 :503-508)、亞精胺(Guo 等人，2002，Am J Physiol Cell Physiol 283 :C722_734)、鞘氨醇(Olsson 等人，2004，Am JPhysiol Gastrointest Liver Physiol 287 :G929_937)、水溶性維生素 E (維生素 E 衍生物)(Quintanilla 等人,2005,上文)和葡萄糖(Lin 等人,2006, J Am Soc Nephrol 17 2812-2820)。然而，在許多情況下，還沒有完全理解所報導的此類相互作用發生的機制，以及此類相互作用的影響。儘管可得到上面所總結的方法，但對於篩選可以延緩或逆轉整個身體或者特定組織和器官的衰老過程、促進健康衰老和增加長壽的試劑更強大的、更快和更少花費的方法，仍存在需求。此外，儘管可得到上述方法和試劑，但對於可以延緩整個身體或者特定組織和器官(例如心臟)的衰老或者在不需要個體實質上改變其熱量攝取的情況下模擬CR的作用的方法和組合物，仍存在需求。本發明滿足了這些需求。發明概述因此，本發明的目的是提供與年輕受試者比較，在老年受試者的心臟細胞和組織中差異表達的ー個或ー個以上基因或者基因區段。本發明另外的目的是提供包含與年輕受試者比較，在老年受試者的心臟細胞和組織中差異表達的多個多核苷酸的組合。本發明的另一目的是提供兩個或兩個以上多核苷酸或多肽探針的組合物，所述組合物適合於檢測與年輕受試者比較，在老年受試者的心臟細胞和組織中差異表達的基因的表達。本發明另外的目的是提供用於測量心臟細胞或組織的生物學衰老的方法。 本發明的另一目的是提供用於測量與年輕受試者或標準對照比較，測試物質對在老年受試者的心臟細胞和組織中差異表達的ー個或ー個以上基因的表達譜的影響的方法。本發明的另ー目的是提供用於在個體中延緩心臟衰老的方法。使用代表與年輕受試者比較，在老年受試者的心臟細胞和組織中差異表達的基因和基因區段的多核苷酸或多肽的新組合，實現了ー個或ー個以上這些另外的目的，其中所述基因通過下述內容而相關通過它們涉及心臟中的fct信號通路，通過相對於年輕心臟組織在年老組織中它們表達的降低，以及通過由CR或者白藜蘆醇攝入而逆轉所引起的此類年齡相關的降低。該多核苷酸用於產生組合物、探針、基於探針的裝置、以及用於測定與年輕受試者或標準對照比較，在老年受試者的所選擇組織中差異表達的多核苷酸的狀態的方法，其對於實現以上定義的目的是有用的，例如，所述目的是在心臟中預測和診斷與衰老有關的疾病和用於在心臟中篩選物質以測定它們是否可能具有抗衰老作用。還將多核苷酸用於調節心臟中參與fct信號的基因和基因產物的表達或者活性，特別是β-聯蛋白基因和β_聯蛋白。也提供了包含試劑例如探針、使用探針的裝置、和物質的組合的試劑盒，以及含有此類試劑盒的包裝、用於操作信息的電腦程式和用於交流涉及差異表達基因的信息的通信介質和使用其的方法。本發明其他的和另外的目的、特性和優點對本領域技術人員而言是顯而易見的。發明詳述定義術語「衰老」指有機體、器官、組織或者其任一部分的生物學或生理學衰老。其包括有機體、器官、組織或者其任一部分中與年齡相關的疾病的發展。類似地，「心臟衰老」指心臟或者其任一部分的生物學或生理學衰老，包括心臟或者其任一部分中與年齡相關的疾病的發展。在本文中提及的心臟或者任一其他器官意圖包括包含心臟或者其他器官的全部細胞和組織。術語「動物」指人類或其他動物，包括禽類、牛、犬、馬、貓、hicrine、鼠類、綿羊和豬等動物。當將該術語用於比較測試受試者的情況時，比較的動物是相同物種的和可能的相同品種或種類的動物。本文中所用的術語「非人類動物」指除人類外的全部動物。「伴侶動物」是任ー馴養的動物，且包括但不限於，貓、狗、兔、豚鼠、雪貂、倉鼠、小鼠、沙鼠、馬、牛、山羊、綿羊、驢、豬等。優選地，動物是人類或伴侶動物例如狗或貓。
術語「抗體」指任一與特異抗原結合的免疫球蛋白，包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE抗體。該術語包括多克隆抗體、單克隆抗體、單價抗體、人源化抗體、雜共軛對配合物(heteroconjugate)、具有多表位特異性的抗體組合物、嵌合抗體、雙特異性抗體、雙抗體、單鏈抗體和抗體片段例如Fab、Fab』、F(ab』)2和Fv或者其他抗原結合片段。術語「陣列」指在基質上有序排列的至少兩種探針。探針的至少ー個是對照或標準，並且探針的至少ー個是診斷性探針。在基質上從約2個至約40，000個探針的排列確保探針和樣品多核苷酸或多肽之間形成的每ー標記複合物的大小和信號強度是分別可區別的。術語「結合複合物」指當樣品中的多肽與結合配偶體特異結合(如本文中所定義)時形成的複合物，所述結合配偶體例如是抗體或其功能性片段。術語「卡路裡限制」或「熱量限制」(「CR」 )指在沒有營養不足的情況下的任一低熱量飲食方案。一般而言，該限制是源自糖類、脂肪和蛋白質的總熱量的限制。儘管沒有限 制於此，但限制一般是相對於隨意消耗的約25%至約40%的熱量攝入。「飲食補充物」指除動物的正常飲食外擬被攝入的產物。飲食補充物可以是任一形式，例如固體、流體、凝膠、片劑、膠囊、粉末等。優選地，它們以方便的劑型提供。在ー些實施方案中，它們以散裝消費包裝例如散裝粉末或液體提供。在其他實施方案中，補充物以可以包含到其他食物物品例如點心、加工處理物(treats)、補充棒(supplement bar)、飲料等中以散裝量提供。如本文中所述，術語「有效量」指化合物、材料、組合物、藥物或其他材料的量或者方案(例如飲食或鍛鍊方案)的條件的量，其對實現特別的生物結果是有效的，所述生物結果例如是在所選擇的組織(例如心臟)中逆轉或延緩衰老。術語「表達」(例如「基因表達」)指基因的轉錄以產生mRNA，WlmRNA的翻譯以產生蛋白質。轉錄或翻譯的速率的增加，以及轉錄或翻譯的產物(例如mRNA或蛋白質)的產生的増加包括於術語「增加的基因表達」、「上調的基因表達」等中。類似地，轉錄或翻譯的速率的減少，以及轉錄或翻譯的產物(例如mRNA或蛋白質)的產生的減少包括於術語「減少的基因表達」、「下調的基因表達」等中。術語「基因表達的調節」 「影響基因表達」等指增加或者減少基因表達。術語「差異表達」或者「差異地表達」指増加的或者上調的基因表達或者減少的或下調的基因表達，例如檢測到樣品中轉錄的信使RNA或者翻譯的蛋白質的量不存在、存在或者至少I. 2倍改變。如本文中所用，「延長」施用通常指超過I個月的時間。涉及2、3或者4個月以上的時間。還考慮包括5、6、7、8、9或者10個月以上的更長時間。還包括11個月或者I年以上的時間。本文還涉及延續1、2、3年或者更多年的更長期使用。在某些動物的情況下，考慮應當將本發明方法鑑定的物質有規律地施用給該動物。如本文中所用，「定期(regularbasis) 」、「定期施用」和/或「定期攝入」指至少每周施用。考慮了更頻繁的施用，例如每周兩次或者三次。還包括了包含毎日施用至少一次、兩次、三次或者更多次的方案。無論是否在本文中明確示例，認為任一劑量頻率都是有用的。本領域技術人員應當理解，劑量頻率是待施用物質的函數，並且ー些組合物可能需要更多或者更少的頻率施用，以維持期望的生物化學、生理學或者基因表達影響，即包括食物攝入、飽腹感、脂類代謝和脂肪利用，以及與其相關的基因表達譜的ー種或多種影響。如本文中所用，術語「延長的定期」、「延長的定期施用」和/或「延長的定期攝入」指物質有規律地施用的延長。術語「食物」或「食物組合物」指意圖由動物，包括人類消耗的，並為其提供營養的組合物。「為人類消耗配製的食物產品」是特別地意圖由人類攝食的任ー組合物。「寵物食物」是意圖由寵物，優選地由伴侶動物消耗的組合物。「完全的和營養均衡的寵物食物」是以合適的量和比例，例如基於伴侶動物營養領域中公認的權威機構的推薦，含有對食物的預期接受者或消費者所有已知的所需營養物的寵物食物。因此，在沒有添加補充營養源的情況下，能將此類食物用作為飲食攝入的唯一來源以維持生命或促進生產。營養均衡的寵物食物組合物在本領域是廣泛已知並廣泛使用的。術語「片段」指(I)為完整序列的一部分的寡核苷酸或多核苷酸序列，並且對於特定的用途，其具有與完整多核苷酸序列相同的或類似的活性，或者(2 )為完整序列的一部分的肽或多肽序列，並且對於特定的用途，其具有與完整多肽序列相同的或類似的活性。此類片段可以包含認為適合於特定用途的任一數目的核苷酸或胺基酸。一般而言，寡核苷酸或多核苷酸片段含有來自完整序列至少約10、50、100、或1000個核苷酸，並且多肽片段含有至少約4、10、20或50個來自完整序列的連續胺基酸。該術語包括片段的多核苷酸變體和多肽變體。術語「基因」指參與產生多肽的全部或部分DNA區段，包括在編碼區之前和之後的區域(前導區和非轉錄尾區)和在單個編碼區段(外顯子)之間的間插序列(內含子)。該術語包括與基因編碼序列的互補區(complement)雜交的任一 DNA序列。術語「基因產物」指基因的轉錄產物，例如mRNA或其衍生物(例如，cDNA)或者基因轉錄物的翻譯產物。術語「基因產物」一般指翻譯產物，其是蛋白質。在本文中，術語「基因產物」可以與術語「蛋白質」或「多肽」互換使用。術語「同系物」指⑴多核苷酸，包括來自相同的或不同的動物物種的多核苷酸，與對照核苷酸具有大於30 %、50%、70%或90%的序列相似性，並且具有與對照多核苷酸相同的或基本上相同的特性，並執行與對照多核苷酸相同的或基本上相同的功能，或者具有在嚴格條件下與對照多核苷酸特異雜交的能力或(2)多肽，包括來自相同的或不同的動物物種的多肽，與對照多肽具有大於30%、50 %、70%或90%的序列相似性，並且具有與對照多肽相同的或基本上相同的特性，並執行與對照多肽相同的或基本上相同的功能或者具有與對照多肽特異結合的能力。當指全長編碼序列的片段時，這些片段的功能可能僅僅是編碼某序列多肽的選定部分或者是可以與編碼該多肽的另一多核苷酸片段雜交的合適類似序列。當指多肽的片段吋，這些片段的功能可能僅僅是形成適合於產生抗體的表位。使用本領域技術人員已知的方法，例如Karlin和Altschul算法(Proc. Natl. Acad. Sci. USA87 =2264-2268(1990))可以確定兩個多肽序列或兩個多核苷酸序列的序列相似性。此類算法已經合併入 Altschul 等人的 NBLAST 和 XBLAST 程序中(J. Mol. Biol. 215 :403-410)。為了獲得用於比較目的的空位比對，可以使用如在Altschul等(Nucl. Acids Res. 25 3389-3402(1997))中所述的 Gapped Blast。當使用 BLAST 和 Gapped BLAST 程序時，使用各個程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默認參數。術語「雜交複合物」指當一個多核苷酸的嘌呤與互補的多核苷酸的嘧啶形成氫鍵，例如，5』 -A-G-T-C-3』與3』 -T-C-A-G-5』鹼基配對時，在樣品多核苷酸之間形成的複合物。互補的程度和核苷酸類似物的使用影響雜交反應的有效性和嚴格性。
術語「結合(in conjunction) 」指將藥物、食物或其他物質(I)與組合物，特別地食物組合物一起施用給動物，或(2)使用相同或不同的施用途徑在大約相同的時間或定期地分別以相同的或不同的頻率施用給動物。「定期地」指對於特定物質，以可接受的劑量方案施用物質。「大約相同的時間」一般指在相同的時間或在彼此間隔約72小時內施用物質(食物或藥物)。「結合」特別包括施用方案，其中將物質例如藥物在規定的時期施用，並將本發明的組合物無限定地施用。術語「個體」當指動物時，指任一物種或種類的個體動物。該術語可以與術語「受
試者」互換使用。術語「多核苷酸」或「寡核苷酸」指核苷酸的聚合物。該術語包括DNA和RNA(包括cDNA和mRNA)分子，單鏈的或雙鏈的，如果是單鏈的，其互補序列為線性或環狀形式。該術 語也包括作為合適序列的片段、變體、同系物和等位基因，其具有與原始序列相同的或基本上相同的特性，並執行相同的或基本上相同的功能。特別地，該術語包括來自不同物種，例如小鼠和狗或貓的同系物。當比對時，該序列可以是完全互補的(沒有錯配)或者可以具有至多約30%的序列錯配。優選地，對於多核苷酸，鏈含有約50至10，000個核苷酸，更優選地約150至3，500個核苷酸。優選地，對於寡核苷酸，鏈含有約2至100個核苷酸，更優選地約6至30個核苷酸。多核苷酸或寡核苷酸的確切大小取決於多種因素和特定的應用，以及多核苷酸或寡核苷酸的用途。該術語包括合成的和從天然源分離並純化的核苷酸聚合物。術語「多核苷酸」包括「寡核苷酸」。術語「多肽」、「肽」或「蛋白質」指胺基酸的聚合物。該術語包括天然存在的和非天然存在的(合成的)聚合物和其中用人工化學模擬物取代了ー個或ー個以上胺基酸的聚合物。該術語也包括片段、變體和同系物，其具有與原始序列相同的或基本上相同的特性並執行相同的或基本上相同的功能。該術語包括任ー長度的聚合物，優選地含有約2至1000個胺基酸，更優選地約5至500個胺基酸的聚合物。該術語包括合成的和從天然源分離並純化的胺基酸聚合物。術語「探針」指(I)寡核苷酸或多核苷酸，RNA或者DNA，不管是作為在純化的限制酶消化中天然存在的還是合成產生的，其能與具有與探針互補的序列的多核苷酸退火或者特異雜交或者(2)化合物或物質，包括肽或多肽，其能特異地結合特定的蛋白質或蛋白質片段，而基本上排斥其他蛋白質或蛋白質片段。寡核苷酸或多核苷酸探針可以是單鏈的或者雙鏈的。探針的確切長度取決於許多因素，包括溫度、來源和用途。例如，對於診斷性應用，取決於靶序列的複雜性，寡核苷酸探針一般含有約10個至100個、15個至50個或者15個至25個核苷酸。在某些診斷性應用中，多核苷酸探針含有約100-1000、300-600個核苷酸，優選地約300個核苷酸。在本文中，選擇與特定靶序列的不同鏈「基本上」互補的探針。這意味著在ー組預測定的條件下，該探針必須是足夠互補的，以與它們的各自靶序列特異雜交或者退火。因此，探針序列不需要反映靶的確切互補序列。例如，非互補的核苷酸片段可以附著於探針的5』或3』端，而探針序列的剩下部分與靶序列互補。備選地，非互補鹼基或更長的序列可以散布在探針中，條件是該探針序列具有與靶多核苷酸序列足夠的互補性，以特異地與靶多核苷酸退火。肽或多肽探針可以是與蛋白質或肽特異結合的任一分子，包括DNA(對於DNA結合蛋白質)、抗體、細胞膜受體、肽、輔因子、凝集素、糖、多糖、細胞、細胞膜、細胞器和細胞器膜。
術語「樣品」指含有例如，多核苷酸、多肽、抗體、代謝物等的任ー動物組織或流體，包括細胞和包含DNA和RNA的其他組織。實例包括脂肪、血液、軟骨、結締組織(connective)、上皮、淋巴、肌肉、神經、痰等。樣品可以是固體的或流體的，並且可以是DNA、RNA、cDNA、體液例如血液或尿液、細胞、其細胞製備物或其可溶性組分或者培養基整分試樣、染色體、細胞器等。術語「単獨包裝」指試劑盒的組分與ー個或ー個以上容器物理相關或包含在其內，並將其作為生產、分配、銷售或使用的単位。容器包括但不限於，包、箱、瓶、熱縮塑料包(shrink wrap packages)、主要的或另外固定的組分或者其組合。單獨包裝可以是物理相關的單獨的食物組合物的容器，以將它們作為生產、分配、銷售或使用的単位。術語「特異結合」指兩個分子之間特異的 和精確的相互作用，其取決於它們的結構，特別是它們的分子側基。例如，調節蛋白嵌入到DNA分子的大溝中、兩單鏈核酸之間沿主鏈的氫鍵鍵合或者蛋白質的表位與激動劑、拮抗劑或抗體之間的結合。術語「特異地雜交」指具有足夠互補序列的兩單鏈多核苷酸之間的締合，以在本領域一般使用的預測定條件下允許該雜交(有時也稱為「基本上互補」)。例如，該術語可以指多核苷酸探針與包含在根據本發明的ー個方面的單鏈DNA或RNA分子內的基本上互補的序列雜交，以基本上排除多核苷酸探針與非互補序列的單鏈多核苷酸雜交。當適合於其使用的上下文時，術語「標準」或者「對照」指⑴與含有來自施用了測試物質的受試者的組織的樣品比較，含有來自施用了對照或參考物質或者沒有施用物質的受試者的組織的對照樣品，例如，以測定測試物質是否會引起差異的基因表達。術語「嚴格條件」指(I)在具有O. I %牛血清白蛋白、O. I %菲可、O. I %聚こ烯吡咯烷酮的50% (體積/體積)甲醯胺、ρΗ6· 5，含有750mM NaCl、75mM檸檬酸鈉的50mM磷酸鈉緩衝液中，在42°C雜交，(2)在42°C，在50%甲醯胺、5XSSC(0.75M NaCl、0.075M檸檬酸鈉)、50mM磷酸鈉(pH6.8)、0. I %焦磷酸鈉、5XDenhardt雜交溶液、超聲的鮭魚精子DNA(50y g/ml)、0. 1% SDS 和 10%葡聚糖硫酸酯中雜交;在 42°C，在 O. 2XSSC和 O. 1% SDS中洗滌或者在50°C，用O. 015M NaCUO. 0015M檸檬酸鈉、O. 1% Na2SO4洗滌或者應用類似的低離子強度和高溫洗滌劑以及類似的變性劑進行類似的方法。術語「變體」指(I)含有來自多核苷酸序列的任何替換、變異、修飾、取代、缺失或添加ー個或ー個以上核苷酸的多核苷酸序列或對多核苷酸序列進行任何替換、變異、修飾、取代、缺失或添加ー個或ー個以上核苷酸的多核苷酸序列，並且其具有與原始序列相同的或基本上相同的特性，並執行相同的或基本上相同的功能和(2)含有來自多肽序列任何替換、變異、修飾、取代、缺失或添加ー個或ー個以上胺基酸的多肽序列或對多肽序列進行任ー替換、變異、修飾、取代、缺失或添加ー個或ー個以上胺基酸的多肽序列，並且其具有與原始序列相同的或基本上相同的特性，並執行相同的或基本上相同的功能。因此，該術語包括單核苷酸多態性(SNP)和等位變異，並包括多肽中保守或非保守胺基酸替換。根據需要，該術語也包括化學衍生化的多核苷酸或多肽，以及用天然不存在的核苷酸或胺基酸替換的核苷酸或胺基酸。術語「虛擬(virtual)包裝」指試劑盒組分通過關於ー個或ー個以上物理或虛擬試劑盒組分的說明而聯合在一起，其指導用戶如何獲取其他組分，例如，在ー個包裝(bag)中含有一個組分和指導用戶前往網址、聯繫記錄的信息、查看可視信息或者聯繫醫務工作者(caregiver)或指導者以獲取如何使用試劑盒的說明的指導。術語「Wnt信號」、「Wnt通路」等指熟知的信號轉導通路，其涉及參與胚胎發生，以及在成年動物中參與正常的生理過程的基因及其編碼的蛋白質的複雜網絡。在本文中，這些基因和蛋白質有時指「Wnt-相關的」基因或蛋白質，當將細胞暴露於胞外fct配體時，其產生或者調節fct信號分子的產生、其與靶細胞上的受體的相互作用，以及靶細胞的生理學應答。「年輕的」 一般指處於成年早期，即經過青春期或青年期的成熟的個體，如由物種或者由物種內的品系、品種或種群，根據已知的參數定義。如本文中所用，「年老的」或「老年的」指身體上或時間上在其平均預期壽命的最後30%內的個體，如由物種或者由物種內的品系、品種或種群，根據已知的參數確定。在本文中，出於簡潔的目的使用範圍，以避免不得不列舉並描述範圍內的每ー個 數值。根據需要，可以選擇範圍內的任ー合適的數值，作為範圍的上限值、下限值或者界限。如在本文中所用，單詞的単數形式包括其複數，並且反之亦然，除非另外清楚指明。因此，指代詞「ー個」、「一」和「所述」(「a」、「an」和「the」)一般包括各個術語的複數。例如，提到「個體」、「動物」、「方法」或「疾病」時包括此類「受試者」、「動物」、「方法」或「疾病」的複數。類似地，應當將詞語「包含」、「包括」和「含有」解釋為是列舉而非窮舉。同樣地，應當將術語「包括」、「包括的」和「或者」理解為是列舉，除非上下文明確禁止此種解釋。類似地，術語「實例」，特別是當後面有一系列術語時，其僅僅是示例性的和說明性的，並且不應當將其理解為排他的或者全部的。術語「包含」意圖包括由術語「基本上由......組成」和「由......組成」所包括
的實施方案。類似地，術語「基本上由......組成」意圖包括由術語「由......組成」所
包括的實施方案。此處公開的方法和組合物以及其他優勢並不限於特定的方法、規程和試劑，因為，如本領域技術人員所理解的，他們是可以變化的。此外，本文中所用的術語僅用於描述特定的實施方案的目的，並且並不意圖和並非限制公開的或要求保護的本發明的範圍。除非另外定義，本文中所用的所有技術和科學術語，專業術語和縮寫具有由本發明領域中或使用該術語的領域中普通技術人員通常理解的含義。儘管可以將與本文中所述的組合物、方法、生產的物品或其他手段或材料類似的或等同的那些任何組合物、方法、生產的物品或其他手段或材料用於本發明的實踐，但在本文中描述了優選的組合物、方法、生產的物品或其他手段和材料。 本文中引用的或提及的所有專利、專利申請、出版物、技術和/或學術文章和其他參考文獻在此處以受適用的法律允許的程度引用作為參考。這些參考文獻的討論僅g在總結其中所進行的推斷。並未做出關於任一此類專利、專利申請、出版物或參考文獻或其任何部分是相關的、重要的或現有技術的承諾。特別保留了質疑此類專利、專利申請、出版物和其他參考文獻為相關的、重要的或現有技術的任一主張的準確性和適用性的權利。發明本文中所描述的本發明的許多方面源於發明人發現幾種基因表達的年齡相關減少，所述幾種基因是心臟中fct信號通路的正向決定因素(positive determinant)。在兩種不同的動物物種中進行了該觀察，表明在衰老的心臟中觀察到的fct通路的下調並不是物種特異的。特別地，β_聯蛋白(Wnt信號中的重要參與者)也是下調的。這些觀察與Wnt信號隨年齡増加的許多既往和最新發現相反。本發明人還發現，通常已知的延緩衰老過程的營養幹預，例如熱量限制和白藜蘆醇補充，抑制了 Wnt通路基因表達的年齡相關減少，並使許多Wnt基因的表達增回至在來自年輕動物的心臟組織中所觀察到的水平。根據上述發現，在本發明的許多方面中，通過測量或者調節參與Wnt信號通路的ー種或者多種基因的表達而監測或者操作fct信號通路，發明人發現所述ー種或者多種基因在衰老的心臟組織中下調。此類基因包括Dlghl、Magi3, AktU Dab2、RacU CtnnbUCamk2d、Mapkl、Senp2、Smad3、Mark2、Ccndl和Pias4。可以將形成這些基因的多核昔酸及其片段，以及它們所編碼的蛋白質和片段，例如用於測量心臟細胞或組織的生物學年齡的診斷性或者預測性測定，或者用於篩選對延緩心臟衰老有效的測試化合物的測定，或者用於操作心臟中的Wnt信號以延緩心臟衰老。在本發明的某些實施方案中，測量了至少ー種差異表達基因的表達。在其他實施方案中，測量了兩種或者兩種以上差異表達基因的表達，提供了基因表達模式或者基因表 達譜。在本發明的多種實施方案中，可以以ー種或兩種方式測量基因表達的改變(I)通過檢測由特定的基因產生的mRNA來測量轉錄；和⑵通過檢測由特定的轉錄物產生的蛋白質來測量翻譯。使用本領域用於定量多核苷酸的任一熟知方法，例如，如PCR(包括但不限於，RT-PCR和qPCR)、RNA酶保護、Northern印跡法、微陣列、大陣列(macroarray)和其他雜交方法，在RNA水平測量減少的或增加的表達。根據本發明測定的或討論的基因一般為mRNA或反轉錄mRNA的形式。基因可以是克隆的和/或擴增的。克隆本身似乎並不偏向基因在群體內的表現度。然而，優選地是將聚腺苷酸+RNA用作來源，因為它可以以更少的加工步驟使用。因此，本發明ー個方面的特徵是包含與年輕受試者比較，在老年受試者的心臟組織中差異表達的多個多核苷酸或者其表達的蛋白質的組合，其中所述多核苷酸選自參與心臟組織中fct信號的兩個或者兩個以上基因或者其片段。在某些實施方案中，基因選自Dlghl、Magi3> Aktl> Dab2> Racl、Ctnnbl、Camk2d、Mapkl、Senp2、Smad3、Mark2> Ccndl 和Pias4。在其他實施方案中，基因選自 Dlghl、Magi3> Ctnnbl> Camk2d、Mapkl 和 Senp2。又在其他實施方案中，基因是Magi3、Ctnnbl和Camk2d。在某些實施方案中，差異表達通過CR或者通過白藜蘆醇的攝入而逆轉，所述白藜蘆醇可以作為飲食方案的一部分，例如作為食物或者飼料的添加劑或者作為飲食補充物施用。在一個實施方案中，組合包含兩個或兩個以上的多核苷酸或者表達自該多核苷酸的蛋白質。優選地，該組合包含多個多核苷酸或者表達自多核苷酸的蛋白質，並且可以包含多達代表全部上述基因的全部多核苷酸或蛋白質或者其片段。當組合包含一種或者ー種以上的片段時，片段可以是保留原始多核苷酸或蛋白質的特性和功能的任一大小，優選地約30 %、60 %或者90 %的原始的特性和功能。多核苷酸和蛋白質可以來自任ー動物；例如包括人類或者伴侶動物，如狗和貓。通過標準信息庫(standard information mining)和本領域技術人員熟知的分子方法，可以獲得來自不同動物物種的多核苷酸和蛋白質的同系物。例如，可以將基因或蛋白質的名稱或者功能的描述輸入到幾個公共可獲得的資料庫之一中，其會產生提供有關來自不同物種的該基因信息，包括序列信息的資源列表。此類資料庫的ー種是「InformationHyperlinked over Proteins (iHOP) 」 資料庫，其可以通過 url :ihop_net. org 在因特爾網上獲得。備選地，可以使用已知基因或蛋白質的公共資料庫檢索號，以獲得該基因或蛋白質的序列信息，並且使用序列比對搜索，捜索其他物種中的同系物或直向同源物。例如，ロぶ以在 National Institutes of Health’s National Center for BiotechnologyInformation(NCBI)資料庫中輸入來自小鼠的基因或蛋白質的GenBank檢索號，從而獲得該小鼠基因的DNA或多肽序列。使用相同的資料庫，在小鼠DNA或蛋白質序列、或者其足夠定義基因或蛋白質的長度的片段上進行BLAST捜索，以鑑定來自其他物種，例如，貓的足夠同源序列。然後，可以將來自其他目的物種的序列的檢索號輸入到資料庫中，以獲得涉及那些全長核苷酸或蛋白質序列的信息，以及其他描述性信息。
本發明另一方面的特徵是包含用於檢測與年輕受試者比較，在老年受試者的心臟組織中差異基因表達的探針的組合物，其中所述探針檢測參與心臟組織中fct信號的兩種或者兩種以上基因或者基因產物。在某些實施方案中，基因選自Dlghl、Magi3、Aktl、Dab2、RacI、CtnnbI、Camk2d、Mapkl、Senp2、Smad3、Mark2、Ccndl 和 Pias4。在其他實施方案中，基因選自Dlghl、Magi3、Ctnnbl、Camk2d、Mapkl和Senp2。又在其他實施方案中，基因是Magi3、Ctnnbl和Camk2d。在某些實施方案中，差異表達通過CR或者通過白藜蘆醇的攝入而逆轉，所述白藜蘆醇可以作為飲食方案的一部分施用，例如作為食物或者飼料的添加劑或者作為飲食補充物。探針可以包含與Wnt相關的基因或其片段特異雜交的多核苷酸或者寡核苷酸。備選地，它們可以包含多肽結合劑，其與由fct相關的基因或其片段的表達產生的多肽特異結合。在某些實施方案中，多肽結合劑是抗體，並且在特定的實施方案中，它們是單克隆抗體。在優選的實施方案中，探針與人類、犬或者貓的多核苷酸或者多肽特異雜交或者結合。通常，視特定物種和用途而定，組合物包含用於檢測多核苷酸或蛋白質，或者其片段的多個探針，一般約5個、10個、15個、20個、25個、30個、35個、40個、45個、50個、60個、70個、80個、90個、100個或更多的探針。本領域技術人員應當理解，可以使用針對單ー靶基因或蛋白質的多個不同探針，以完善使用該探針的測定的敏感性和準確性。例如，可以使用與靶多核苷酸上不同的序列特異雜交的幾個寡核苷酸探針。同樣地，可以使用對靶蛋白上不同的表位免疫學上特異的幾個抗體。使用在本文中所列的任一基因的序列信息，可以製備針對來自任一物種，優選地人類、狗或貓的所討論樣品的ー個或ー個以上寡核苷酸或多核苷酸探針。該探針應當具有足夠的長度，以基本上專門地與合適的互補基因或轉錄物特異雜交。在某些實施方案中，寡聚核苷酸探針為至少約10個、12個、14個、16個、18個、20個或25個長度的核苷酸。在一些實施方案中，期望的是至少約30個、40個、50個、60個、70個、80個、90個或100個核苷酸的更長探針，和在一些實施方案中，合適的是長於約100個核苷酸的探針。探針可以包含編碼功能蛋白質的全長序列。使用本領域技術人員已知的方法，例如，從核苷酸體外合成、從天然源分離和純化或者酶促地切割本發明的多核苷酸，可以製備或獲得核酸探針。可以通過本領域已知的多種方法檢測雜交複合物，其包含與包含Wnt相關的基因的多核苷酸雜交的核酸探針。在本發明的某些實施方案中，可以將固定化的核酸探針用於多核苷酸和它們的表達模式的快速和特異檢測。一般地，核酸探針與固相支持體連接，並且靶多核苷酸(例如，基因、轉錄產物、擴增子或最常見地擴增混合物)與探針雜交。一般用螢光團或其他標記，例如鏈黴抗生物素，標記探針或靶或者二者。在標記靶的情況下，可以通過檢測結合的螢光檢測雜交。在標記探針的情況下，一般通過淬滅標記來檢測雜交。在探針和靶二者都標記的情況下，一般通過監測由兩個結合標記的接近產生的顔色轉變(colorshift)來進行雜交的檢測。多種標記策略、標記物等，特別地對於基於螢光的應用都是本領域已知的。在另ー實施方案中，探針包含多肽結合劑，其與由本文中所列的ー個或ー個以上基因或其片段的表達產生的多肽或其片段特異地結合。可以使用可得到的在本文中所鑑定的任一 Wnt相關蛋白質的序列信息製備此類蛋白質結合探針。可以用於測定樣品中蛋白質的水平的測定技術也是本領域技術人員熟知的。此類測定技術包括免疫放射測定法、競爭結合測定法、蛋白印跡分析和ELISA測定法。在使用抗體的測定方法中，多克隆抗體和單克隆抗體二者都適用於在本發明中使用。正如本領域技 術人員正常理解，此類抗體可以是對特定的蛋白質、或蛋白質的表位、或蛋白質片段免疫學上特異的。製備對蛋白質或多肽免疫學上特異的多克隆抗體和單克隆抗體的方法也是本領域熟知的。本發明優選的實施方案可以使用用於檢測和定量由本文所述基因的表達產生的蛋白質的抗體。儘管可以通過免疫沉澱、親和分離、蛋白質印跡分析等檢測蛋白質，但是優選的方法是使用ELISA型方法，其中將抗體固定在固相支持體上，並將靶蛋白質或多肽暴露於固定化的抗體。探針或靶，或者二者都可以標記。多種標記策略、標記物等都是本領域已知的。在一個實施方案中，可以使用寡核苷酸或多核苷酸探針的陣列，而另ー實施方案可以使用與差異表達的基因產物特異結合的抗體或其他蛋白質的陣列。可以根據已知的方法，例如，如在固相支持體上原位合成或通過微印刷(micro-printing)技術將預合成的探針連接到固相支持體，定製此類陣列。在優選的實施方案中，定製核酸或蛋白質結合探針的陣列以特異地檢測由本文所述的兩個或兩個以上差異表達的基因或基因片段產生的轉錄物或蛋白質。本發明還提供涉及監測基因表達的改變的測定方法。根據這些方面的ー個方面，提供了測量心臟細胞或組織的相對生物學年齡的方法。該方法包括步驟(a)通過測量在心臟細胞或組織中與fct信號相關的ー個或ー個以上基因的轉錄或者翻譯產物，測定測試基因表達譜；(b)將測試基因表達譜與來自己知生物學年齡的等價心臟細胞或組織的對照基因表達譜比較；和(C)根據比較測定心臟細胞或組織的相對生物學年齡。在某些實施方案中，Wnt相關的基因是 Dlghl、Magi3> Aktl> Dab2> Racl、Ctnnbl、Camk2d、Mapkl> Senp2、Smad3、Mark2、Ccndl 或 Pias4。其他實施方案使用 Dlghl、Magi3>CtnnbU Camk2d、Mapkl 或 Senp2。另外的實施方案使用 Magi3、Ctnnbl 或 Camk2d。在特定的實施方案中，測量編碼聯蛋白的基因，例如Ctnnbl的表達。如在下部分中更詳細地描述，在某些實施方案中，在培養的細胞群體上進行該方法。更一般地，在來自動物的細胞或組織上進行該方法。在優選的實施方案中，通過檢測來自人類或伴侶動物(最典型地為狗或貓)的fct相關基因的差異表達，將該方法用於測量生物學心臟年齡。在特定的實施方案中，將探針與基底結合，優選地在陣列中。在一些實施方案中，相對同時進行待測基因表達譜與對照譜之間的比較，(即，來自老年和年輕受試者的心臟細胞或者組織)。然而，在另ー實施方案中，用於比較的對照是基於使用該方法以前獲得的數據。在該實施方案中，將探針暴露於樣品以形成雜交或結合複合物，檢測所述雜交或結合複合物，並與標準的那些雜交或結合複合物比較，其可以包含用己知生物學年齡的心臟細胞或者組織之前收集的與fct基因表達水平相關的信息。來自樣品和標準的雜交或結合複合物之間的差異表明多核苷酸的差異表達，和因此在老年受試者對比標準的組織中差異表達的基因，所述標準可以包含之前從年輕受試者或另ー類型的對照受試者中分離的mRNA。可以將如上所述的那些方法用於實施、促進或指導抗衰老方案，例如熱量限制和/或營養方案或者鍛鍊方案。此類方法包括獲取來自接受了該方案的受試者的心臟組 織樣品。然後，使用基因或蛋白質陣列或者本文所述的其他檢測方法，分析該組織樣品ー個或者ー個以上Wnt相關基因的受調節的表達。分析的結果將顯示在個體中，該治療或者方案在延緩心臟衰老中是否有效。本發明的另ー方面提供了用於篩選具有延緩心臟衰老能力的試劑或者方案。該方法包括步驟(a)在不存在試劑或方案的情況下，在來自老年受試者的心臟組織中，通過測量ー個或ー個以上與fct信號相關的基因的轉錄或翻譯產物測定第一基因表達譜；(b)在存在試劑或方案的情況下，在來自老年受試者的心臟組織中，通過測量ー個或ー個以上與fct信號相關的基因的轉錄或翻譯產物測定第二基因表達譜；和(C)將第一基因表達譜與第二基因表達譜比較，其中第二基因表達譜的改變表明試劑或者方案，當施用給個體時，可以用於延緩心臟衰老。這種類型的方法還可以包括將至少第二基因表達譜與對照基因表達譜比較，所述對照基因表達譜通過測量來自年輕受試者的心臟組織或者來自存在對照物質或方案的老年受試者的心臟組織中ー個或ー個以上與fct信號相關的轉錄或翻譯產物而獲得，所述對照物質或方案當施用給個體時，已知延緩心臟衰老。此類方案或者物質包括，例如，CR或者白藜蘆醇的攝入。類似於以前的方法，待測基因表達譜與對照譜之間的比較是相對同時的，即同時測定來自老年和年輕受試者的心臟細胞和組織。然而，備選地，用於比較的對照可以基於使用該方法以前獲得的數據。在該實施方案中，將探針暴露於樣品以形成雜交或結合複合物，檢測所述雜交或結合複合物，並與標準的那些雜交或結合複合物比較，所述標準的那些雜交或結合複合物可以包含用己知生物學年齡的心臟細胞或者組織之前收集的與Wnt基因表達水平相關的信息，或者接受了對照方案或治療(例如，CR或者白藜蘆醇的攝入)的心臟細胞或者組織之前收集的與fct基因表達水平相關的信息，所述對照方案或治療如由fct相關的基因表達所測量的已知對心臟衰老具有作用。在某些實施方案中，Wnt相關的基因是 Dlghl、Magi3> Aktl> Dab2> Racl、Ctnnbl、Camk2d、Mapkl> Senp2、Smad3、Mark2、Ccndl 或 Pias4。其他實施方案使用 Dlghl、Magi3>CtnnbK Camk2d、Mapkl 或 Senp2。又其他實施方案使用 Magi3、Ctnnbl 或 Camk2d。在特定的實施方案中，測量編碼聯蛋白的基因，例如Ctnnbl的表達。在一個實施方案中，在培養的細胞群體上進行該方法。將包含根據本發明的fct相關基因的核酸構建體引入到培養的宿主細胞中。如本領域已知，宿主細胞可以哺乳動物細胞系，優選地是心臟來源或者譜系的，或者已知分化成心臟細胞的祖細胞系。將基因的編碼序列與適合於使用的特定宿主細胞的合適調節表達元件有效連接。根據本領域的任一可接受的方法，包括但不限於，轉染、轉化、磷酸鈣沉澱、電穿孔和脂轉染，可以將核酸構建體引入到宿主細胞中。此類技術是本領域熟知且常規的。基因表達測定可以使用包含與報告基因有效連接的所選擇衰老相關基因的啟動子的基因構建體來實施。可以將報告子構建體引入到合適的培養細胞中，包括但不限於，上述的標準宿主細胞系或者新近分離自受試者的細胞，例如脂肪或肌肉細胞。通過在存在或不存在測試化合物的情況下監測報告基因的表達來進行測定。在另ー實施方案中，在動物上進行該方法。一般地，將測試化合物或者測試方案(飲食、鍛鍊等)施用給受試者，並分析在受試者的所選擇心臟組織中的基因表達譜，以測 定測試化合物對fct相關基因或基因產物的轉錄或翻譯的影響。可以原位或離體外分析基因表達，以測定測試化合物的作用。在另ー實施方案中，將測試化合物或方案施用給受試者，井根據本領域合適的任一方法，原位或離體外分析表達自基因的蛋白質的活性，以測定測試化合物對目的蛋白質的活性的影響。此外，在將測試化合物施用給受試者的情況下，也可以評價化合物的生理性、全身性和物理性作用，以及化合物的可能毒性。測試物質可以是任一物質和物質的組合，所述物質和物質的組合如通過如上所列fct相關基因的表達的改變或者逆轉的年齡相關改變所測定的可能對心臟衰老具有影響。合適的測試物質包括但不限於，胺基酸；蛋白質、肽、多肽、核酸、寡核苷酸、多核苷酸、小分子、大分子、維生素、礦物質、單糖；複合糖；多糖；碳水化合物；中鏈三醯甘油(MCT);三醯甘油(TAG)、n-3 ( Ω -3)脂肪酸包括DHA, EPA、ALA ;n_6 ( Ω -6)脂肪酸包括LA、Y -亞麻酸(GLA)和ARA ;SA、綴合的亞油酸(CLA);膽鹼源例如卵磷脂；脂溶性維生素包括維生素A和其前體例如類胡蘿蔔素(例如，(β_胡蘿蔔素))、維生素D源例如維生素D2(麥角鈣化醇)和維生素D3(膽鈣化醇)、維生素E源例如生育酚(例如，α-生育酚)和生育三烯酚，以及維生素E衍生物，例如水溶性維生素(trolox)、和維生素K源例如維生素Kl (葉綠醌)和維生素K2(甲萘醌)；水溶性維生素包括B族維生素例如核黃素、尼克酸(包括煙醯胺和煙酸)、吡哆素、泛酸、葉酸、生物素和鈷胺素；和維生素C(抗壞血酸)；抗氧化劑，包括上面列出的一些維生素、特別地維生素E和C ;並且生物類黃酮例如芹菜苷配基、兒茶素、ニ氫黃酮、染料木素、柚苷配基、五羥黃酮和茶黃素；醌例如泛醌；類胡蘿蔔素例如番茄紅素和番茄黃素；和α-硫辛酸山-肉鹼；D_薴烯；葡糖胺；S_腺苷甲硫氨酸；脫こ醯殼多糖；藻酸鹽；鈣；透明質酸；鎂；油酸單甘油醯磷脂酸；一氧化氮(例如，作為硝酸甘油)；s-氨基甲醯半胱氨酸(胺基酸類似物)；丁酸鈉；水楊酸鈉；亞精胺；鞘氨醇和葡萄糖。在優選的實施方案中，測試物質是營養物，其可以添加到食物中或者作為補充物消耗。本發明還提供了通過前述方法鑑定為當施用給個體時可以延緩心臟衰老的物質或方案。鑑於所鑑定的種類，此類物質可以在心臟中增加fct信號，或者可以在心臟中增加參與fct信號的ー種或ー種以上基因或者基因產物的表達或者活性，或者可以在心臟中至少部分逆轉fct相關基因表達或者基因產物活性的年齡相關降低。本發明的另一方面提供了用於測量心臟細胞或組織的生物學年齡的試劑盒。該試劑盒以在単獨包裝中的単獨容器或者以虛擬包裝中的単獨容器中包含(I)適合於在心臟細胞或組織中測量與fct信號相關的ー個或ー個以上基因的表達的試劑，和(2)如何使用心臟細胞或組織中與fct信號相關的基因的表達的測量值來確定心臟細胞或組織的生物學年齡的說明。在某些實施方案中，該試劑盒包含適合於測量兩個或兩個以上fct相關基因的試劑。在某些實施方案中，Wnt相關基因是Dlghl、Magi3, AktU Dab2、Racl、Ctnnbl、Camk2d、Mapkl、Senp2、Smad3、Mark2、Ccndl 或 Pias4。其他實施方案使用 Dlghl、Magi3>CtnnbU Camk2d、Mapkl 或 Senp2。另外的實施方案使用 Magi3、Ctnnbl 或 Camk2d。在特定的實施方案中，測量編碼聯蛋白的基因的表達，例如Ctnnbl。在另ー特定的實施方案中，測量樣品中β_聯蛋白的量或者活性。在特定的實施方案中，試劑的至少一部分是探針，其包含(a)與基因表達的轉錄產物或其片段特異雜交或者擴增基因表達的轉錄產物或其片段的多核苷酸；或(b)多肽結合剤，其與基因表達的翻譯產物或其片段特異結合。在一個實施方案中，多肽結合劑是抗體，其可以是多克隆和/或單克隆抗體。在一些實施方案中，探針與基底(substrate)結合，並可以排列在陣列中的基底上。試劑盒還可以包含將基因的表達水平與心臟衰老關聯的對照。此種對照可以包含 下述的ー種或ー種以上(I) ー種或ー種以上己知生物學年齡的心臟細胞或組織，或者(2)顯示在ー種或ー種以上己知生物學年齡的心臟細胞或組織中每一基因的期望表達水平的信息。該試劑盒還可以包含對照物質，例如白藜蘆醇，發明人已經顯示，所述白藜蘆醇的攝入逆轉了心臟衰老對Wnt基因表達的影響。在任一前述類型的試劑盒中，當試劑盒包含虛擬包裝時，該試劑盒受限幹與ー個或ー個以上物理試劑盒組分組合的在虛擬環境中的說明。在一個實施方案中，試劑盒含有探針和/或其他物理組分，並且用於使用探針和其他組分的說明可以通過國際網際網路得至IJ。試劑盒可以含有其他物品例如用於混合樣品、探針，和試劑的裝置，以及用於使用該試劑盒的裝置，例如試管或混合器具。根據另一方面，本發明的特徵是包裝，其包含適合於在心臟細胞或組織中測量一個或ー個以上與fct信號相關的基因的基因表達的試劑；該包裝還包含貼在包裝上的標籤，該標籤含有單詞、圖片、設計、縮寫、標語、短語或者其他圖案(device)或者它們的組合，其顯示包裝的內含物含有用於測定心臟細胞或組織的生物學年齡的試劑。本發明的另一方面提供了計算機系統，其包括含有識別心臟細胞或組織中與Wnt信號有關的ー個或ー個以上基因的表達水平的信息的資料庫，以及使得用戶能訪問或者操作資料庫中的信息的用戶界面，與年輕動物比較，所述與Wnt信號有關的ー個或ー個以上基因的表達水平在年老的心臟中是降低的。該資料庫可以含有識別ー個或ー個以上參與fct信號的基因的表達水平的信息以及與資料庫交流的用戶界面，所述基因例如Dlghl、Magi3> Aktl> Dab2> Racl、Ctnnbl、Camk2d、Mapkl、Senp2、Smad3、Mark2、Ccndl 或 Pias4,所述交流特別是輸入、操作和查看不同動物或動物種類的信息。在一個實施方案中，資料庫進一歩含有鑑定由Wnt相關基因編碼的ー個或ー個以上多肽的活性水平的信息。在另ー實施方案中，資料庫進一歩包含ー個或ー個以上Wnt相關基因及其編碼的蛋白質的序列信息，優選地來自多種物種。在其他實施方案中，資料庫含有涉及基因在一種或多種動物物種中的說明的其他信息。計算機系統是能包含並操作數據且能與用戶交流的任ー電子裝置，例如，典型的計算機或者設計的有助於使用本發明和輸出與動物的狀態有關的結果的分析儀器。本發明的此外另一方面的特徵在於用於交流下述ー種或ー種以上用途的信息或者說明的介質(I)心臟細胞或組織中與fct信號相關的基因，所述與Wnt信號相關的基因在衰老的心臟中與年輕動物比較是降低的，(2)通過在個體的心臟中增加Wnt信號和/或増加β_聯蛋白的量或活性，在個體中延緩心臟衰老，(3)通過在個體的心臟中施用増加fct信號和/或増加β_聯蛋白的量或活性的試劑或方案，在個體中延緩心臟衰老，(4)通過在心臟中調節與fct信號相關的基因的表達，篩選測試化合物或方案延緩心臟衰老的能力，(5)通過測量心臟細胞和組織中與Wnt信號相關的基因的表達，測定心臟細胞和組織的生物學年齡，和(6)用於測量與年輕動物比較，在年老的心臟細胞或組織中與Wnt信號相關的基因的差異表達的試劑盒和試劑；其中所述介質包含ー個或ー個以上的含有信息或說明的物理或電子文件、數字存儲介質、光學存儲介質、聲學報告、視聽展示或者可視顯示。介質可以選自本領域已知的多種介質或者此類介質的任何組合，包括但不限於顯示的網址、可視顯示kiosk、小冊子、產品標籤、包裝說明書、廣告、散發材料、公告欄、 錄音帶、錄影帶、DVD、⑶-ROM、計算機可讀晶片、計算機可讀卡、計算機可讀盤、USB裝置、FireWire裝置、和/或計算機存儲器。在另一方面，本發明提供了在個體中延緩心臟年老的方法，其集中於增加個體心臟中的Wnt信號。個體可以是年老的或者易於摧患或者摧患引起心臟衰老的疾病或病症的任一物種或種類的動物，包括任何年齡、物種、健康條件等的動物。優選地，動物是人類或伴侶動物，例如狗或貓。在一個實施方案中，動物是易於摧患或者摧患心臟的多種細胞和組織衰老的年老動物。在另ー實施方案中，動物是易於罹患或者罹患脅迫或者老化心臟的疾病或病症，或者與老年個體相關並對身體其他部分造成有害作用的心臟疾病或病症的動物。無論何種情況，將本發明方法應用於延緩心臟衰老對個體的心臟具有有益的影響，並從而對整個個體具有有益的影響。此類疾病和病症包括但不限於癌症、AIDS、充血性心臟病、慢性阻塞性肺病、腎衰竭、重度燒傷、心臟病發作(局部缺血)、冠狀動脈病、動脈硬化、手木，例如血管成形術或心臟搭橋術(heart bypass)、瓣膜性心臟病、肥厚型心肌病等。如果個體表現出ー種或ー種以上有關心臟疾病、血管疾病等的危險因子，那麼認為個體可能「易子」罹患心臟衰老或者易於發展成與心臟衰老相關的疾病或病症。此類危險因子是本領域技術人員已知的，並且包括但不限於超重、缺乏體力活動(physical inactivity)、高血壓、高膽固醇和/或甘油三酷、心絞痛、糖尿病、吸菸、遺傳、性別為男性、壓カ和過量的酒精攝取。用於在個體中延緩心臟衰老的一般方法包括步驟(a)鑑定需要延緩心臟衰老的個體；和(b)調節影響個體的心臟中fct信號的至少ー個基因的表達，其中所述調節導致心臟中的fct信號的増加，從而在個體中延緩心臟衰老。在某些實施方案中，Wnt相關基因是 Dlghl、Magi3、Aktl、Dab2、Racl、Ctnnbl、Camk2d、Mapkl、Senp2、Smad3、Mark2、Ccndl 或Pias4。其他實施方案集中於Dlghl、Magi3、Ctnnbl、Camk2d、Mapkl或Senp2的調節。另外的實施方案使用Magi3、Ctnnbl或Camk2d。在特定的實施方案中，調節編碼聯蛋白的基因的表達，例如Ctnnbl。在另ー特定的實施方案中，調節個體中β_聯蛋白的量或者活性。在一個實施方案中,調節包括增加ー個或ー個以上基因的表達。在另ー實施方案中，増加的fct信號與個體的心臟中β -聯蛋白的量或者活性的増加相關。
另ー實施方案包括給個體施用有效量的ー種或ー種以上試劑，或者對個體進行ー種或ー種以上増加心臟中fct信號或者至少部分逆轉心臟中Wnt信號的年齡相關減少的方案，從而在個體中延緩心臟衰老。該試劑可以在個體的心臟中通過模擬β_聯蛋白的活性而發揮作用。在某些實施方案中，通過在個體的心臟中增加Wnt信號或者通過在心臟中至少部分逆轉Wnt信號的年齡相關減少，將包括CR或者白藜蘆醇的攝入的方案用於延緩心臟衰老。可以將此類方案與其他方案或試劑，例如通過本文中所述的方法鑑定的那些方案或試劑組合。優選的實施方案包括定期，優選地延長的定期給個體ロ服施用增加心臟中Wnt信號的物質，從而延緩心臟衰老。通常將物質定期施用至少兩周，更優選地至少4周或者更長。可以無限地持續施用物質，例如，1、2、3、6或9個月或者I年或一年以上或者甚至個體的一生。通常，物質的施用至少每日一次，但劑量方案取決於物質的性質和效力。因此，可以 較頻繁地施用，例如，每日兩次或者三次，或者較小頻率地施用，例如每周3次、每周兩次、每周一次、每月兩次或者毎月一次。在某些實施方案中，物質的延長的定期ロ服施用造成了 Dlghl、Magi3、Aktl、Dab2、RacI > CtnnbI > Camk2d>MapkI > Senp2、Smad3、Mark2、Ccndl 或 Pias4 的一個或一個以上的表達的改變或者與年齡相關的表達改變的逆轉。其他實施方案集中於Dlghl、Magi3、Ctnnbl、Camk2d、Mapkl或Senp2的調節。另外的實施方案使用Magi3、Ctnnbl或Camk2d。在特定的實施方案中，通過延長的定期ロ服施用該物質，調節編碼β -聯蛋白的基因的表達，例如Ctnnbl0在另ー特定的實施方案中，調節個體中β_聯蛋白的量或者活性。白藜蘆醇是ー類物質的實例，當以延長的定期ロ服施用給受試者時，逆轉了心臟中fct相關基因表達的年齡相關改變。在一個實施方案中，調節包括增加ー個或ー個以上基因的表達。在另ー實施方案中，増加的fct信號與個體心臟中β -聯蛋白的量或活性的増加相關。當用作為一般飲食需求的補充劑時，可以將該物質直接施用給動物。可以備選地將該物質與日常飼料或者食物接觸或者與之混合，或者作為飲食補充劑而添加，所述日常飼料或者食物包括流體，如飲用水。當與日常飼料或食物一起應用或者摻入到日常飼料或食物中應用時，施用是本領域技術人員熟知的。施用可以作為動物的飲食方案的一部分實施。例如，飲食方案可以包括以有效延緩心臟衰老的量使動物定期攝入該物質。在另ー實施方案中，將該物質連同一種或ー種以上的藥物、營養製品或者營養劑施用給動物，用於延緩心臟衰老或者用於一般地増加壽命。在某些實施方案中，根據該方法施用的物質的每日或者定期劑量為每千克體重約O. OOlg至每千克體重IOgo更具體地，劑量超過每千克體重O. 01,0. 02,0. 03,0. 04,0. 05、O. 06,0. 07,0. 08,0. 09或O. Igo在其他實施方案中，取決於物質和劑量頻率，劑量可以是每千克體重O. 2、O. 5、I、3、5、7或IOg或更多。本領域技術人員熟悉針對受試者的劑量以及給藥方案的開發。
實施例本發明可以通過以下實施例進ー步說明，應當理解，除非另外特定指明，這些實施例僅提供為說明的目的，並不意圖限制本發明的範圍。
實施例I材料和方法從NCBI的Gene Expression Omnibus (GEO)選擇了兩個公開的卩齒齒類動物心臟年老基因表達數據集(I)華盛頓大學的大鼠研究(UW) (Linford幾等人(2007)i'ranscriptional Response to Aging and Calorie Restriction in Heart and AdiposeTissue。Aging Cell 6 :673-688)(研究 I);和(2) LifeGen 的小鼠研究(Barger JL 等人(2008)A Low Dose of Dietary Resveratrol partially Mimics Calorie Restrictionand Retards Aging Parameters in Mice。PLoS ONE 3(6) :1-10)(研究 2)。兩個研究的材料和方法顯示於參考文獻中。第三個數據集來自未公開的小鼠心臟衰老研究。在該研究中，將小鼠分成兩組(η = 7),並根據Barger研究中的方法 餵飼對照飲食。在5月齡(年輕組)和25月齡(老年組)時處死小鼠。收集心臟組織並進行微陣列基因表達測定(研究3)。在研究2和研究3中，使用Affymetrix小鼠基因組4302. O基因晶片。在研究I中，使用Affymetrix大鼠基因組2302. O基因晶片。表I中概述了三個研究的說明。表I
權利要求
1.包含多個多核苷酸或者其片段的組合，所述多個多核苷酸與年輕受試者比較，在老年受試者的心臟組織中是差異表達的，其中所述多核苷酸選自參與心臟組織中fct信號的兩個或兩個以上基因。
2.權利要求I的組合，其中所述基因是DlghUMagi3> Aktl> Dab2> RacU CtnnbUCamk2d、Mapkl、Senp2、Smad3、Mark2、Ccndl 和 Pias4。
3.權利要求2的組合,其中所述基因是Dlghl、Magi3、Ctnnbl、Camk2d、Mapkl和Senp2。
4.權利要求3的組合,其中所述基因是Magi3、Ctnnbl和Camk2d。
5.權利要求I的組合，其中所述差異表達通過熱量限制(CR)或者通過白藜蘆醇的攝入而逆轉。
6.組合物，其包含用於檢測與年輕受試者比較，在老年受試者的心臟組織中差異基因表達的探針，並且所述探針檢測心臟組織中參與fct信號的兩個或兩個以上基因或者基因產物。
7.權利要求6的組合物，其中所述基因是Dlghl、Magi3,AktU Dab2、RacU CtnnbUCamk2d、Mapkl、Senp2、Smad3、Mark2> Ccndl 或 Pias4。
8.權利要求7的組合物，其中所述基因是Dlghl、Magi3>Ctnnbl、Camk2d、Mapkl或Senp2。
9.權利要求8的組合物,其中所述基因是Magi3、Ctnnbl或Camk2d。
10.權利要求6的組合物，其中所述差異表達通過CR或者通過白藜蘆醇的攝入而逆轉。
11.權利要求6的組合物，其中所述探針包含 a)與基因表達的轉錄產物特異雜交或者擴增基因表達的轉錄產物的多核苷酸，或其片段；或 b)與基因表達的翻譯產物特異結合的多肽結合剤，或其片段。
12.權利要求11的組合物，其中所述多肽結合劑是抗體。
13.權利要求6的組合物，其中所述探針與基底是結合的。
14.權利要求13的組合物，其中所述探針在陣列中。
15.用於篩選能延緩心臟衰老的試劑或方案的方法，包括步驟 a)在不存在試劑或方案的情況下，在來自老年受試者的心臟組織中，通過測量ー個或ー個以上與Wnt信號相關的基因的轉錄或翻譯產物而測定第一基因表達譜； b)在存在試劑或方案的情況下，在來自老年受試者的心臟組織中，通過測量一個或ー個以上與Wnt信號相關的基因的轉錄或翻譯產物而測定第二基因表達譜；和 c)將所述第一基因表達譜與所述第二基因表達譜比較，其中第二基因表達譜的改變表明試劑或者方案，當施用給個體時，可以用於延緩心臟年老。
16.權利要求15的方法，進ー步包括將至少所述第二基因表達譜與對照基因表達譜比較，所述對照基因表達譜通過測量來自年輕受試者的心臟組織中或者來自存在對照物質或方案的老年受試者的心臟組織中ー個或ー個以上與fct信號相關基因的轉錄或翻譯產物而獲得，所述對照物質或方案已知當施用給個體時，延緩心臟衰老。
17.權利要求16的方法，其中所述對照物質或方案包含CR或白藜蘆醇的攝入。
18.權利要求15的方法，其中所述基因是Dlghl、Magi3,AktU Dab2、RacU CtnnbUCamk2d、Mapkl、Senp2、Smad3、Mark2、Ccndl 或 Pias4。
19.權利要求18的方法，其中所述基因是Dlghl、Magi3>CtnnbI、Camk2d、Mapkl或Senp2。
20.權利要求19的方法，其中所述基因是Magi3、Ctnnbl或Camk2d。
21.權利要求20的方法，其中所述基因是Ctnnbl。
22.權利要求15的方法，其中所述測定在培養的細胞群體上進行。
23.權利要求15的方法，其中所述測定在來自動物的細胞或組織上進行。
24.權利要求15的方法，其中所述心臟組織中與Wnt信號相關的基因的轉錄或翻譯產物的測量用探針完成，並且所述探針包含 a)與轉錄產物特異雜交或者擴增轉錄產物的多核苷酸，或其片段；或 b)與翻譯產物特異結合的多肽結合劑，或其片段。
25.權利要求24的方法，其中所述多肽結合劑是抗體。
26.物質或方案，其通過權利要求15的方法鑑定為當施用給受試者時可以延緩心臟衰老。
27.用於測量心臟細胞或組織的相對生物學年齡的方法，包括步驟 a)通過在心臟細胞或組織中測量與fct信號相關的ー個或ー個以上基因的轉錄或者翻譯產物，測定測試基因表達譜； b)將測試基因表達譜與來自己知生物學年齡的等價心臟細胞或組織的對照基因表達譜比較；和 c)根據所述比較測定心臟細胞或組織的相對生物學年齡。
28.權利要求27的方法，其中所述基因是Dlghl、Magi3,AktU Dab2、RacU CtnnbUCamk2d、Mapkl、Senp2、Smad3、Mark2、Ccndl 或 Pias4。
29.權利要求28的方法，其中所述基因是Dlghl、Magi3,CtnnbU Camk2d、Mapkl或Senp2。
30.權利要求29的方法，其中所述基因是Magi3、Ctnnbl或Camk2d。
31.權利要求30的方法，其中所述基因是Ctnnbl。
32.權利要求27的方法，其中所述測定在培養的細胞群體上進行。
33.權利要求27的方法，其中所述測定在來自動物的細胞或組織上進行。
34.權利要求27的方法，其中所述心臟組織中與Wnt信號相關的基因的轉錄或翻譯產物的測量用探針完成，並且所述探針包含 a)與轉錄產物特異雜交或者擴增轉錄產物的多核苷酸，或其片段；或 b)與翻譯產物特異結合的多肽結合劑，或其片段。
35.權利要求34的方法，其中所述多肽結合劑是抗體。
36.用於測量心臟細胞或組織的生物學年齡的試劑盒，包含(I)適合於測量心臟細胞或組織中與fct信號相關的兩個或兩個以上基因的表達的試劑，和(2)怎樣使用心臟細胞或組織中與fct信號相關的基因的表達的所述測量來測定心臟細胞或組織的生物學年齡的說明。
37.權利要求36的試劑盒，進一歩包含將基因的表達水平與心臟年老關聯的對照。
38.權利要求37的試劑盒，其中所述對照包含下述的ー種或ー種以上(I)ー種或ー種以上己知生物學年齡的心臟細胞或組織，或者(2)顯示在ー種或ー種以上己知生物學年齡的心臟細胞或組織中每一基因的預期表達水平的信息。
39.權利要求36的試劑盒，其中所述基因是Dlghl、Magi3、Aktl、Dab2、Racl、Ctnnbl、Camk2d、Mapkl、Senp2、Smad3、Mark2、Ccndl 或 Pias4。
40.權利要求37的試劑盒,其中所述基因是Dlghl、Magi3>Ctnnbl、Camk2d、Mapkl或Senp2。
41.權利要求38的試劑盒,其中所述基因是Magi3、Ctnnbl或Camk2d。
42.權利要求36的試劑盒，其中所述試劑是探針，包含 a)與基因表達的轉錄產物特異雜交或者擴增基因表達的轉錄產物的多核苷酸，或其片段；或 b)與基因表達的翻譯產物特異結合的多肽結合剤，或其片段。
43.權利要求42的試劑盒，其中所述多肽結合劑是抗體。
44.權利要求43的試劑盒，其中所述探針與基底是結合的。
45.權利要求44的試劑盒，其中所述探針在陣列中。
46.用於測量心臟細胞或組織的生物學年齡的試劑盒，包含(I)適合於測量心臟細胞或組織中β_聯蛋白的量或活性的試劑，和(2)怎樣使用心臟細胞或組織中β_聯蛋白的量或活性的所述測量來測定心臟細胞或組織的生物學年齡的說明。
47.權利要求46的試劑盒，進一歩包含將β_聯蛋白量或活性的水平與心臟衰老關聯的對照。
48.權利要求47的試劑盒，其中所述對照包含下述的ー種或ー種以上(I)ー種或ー種以上己知生物學年齡的心臟細胞或組織，或者(2)顯示在ー種或ー種以上己知生物學年齡的心臟細胞或組織中β -聯蛋白的量或活性的信息。
49.權利要求48的試劑盒，其中所述試劑是探針，包含 a)與β_聯蛋白基因轉錄產物特異雜交或者擴增β_聯蛋白基因轉錄產物的多核苷酸，或其片段；或 b)與β_聯蛋白特異結合的多肽結合劑，或其片段。
50.權利要求49的試劑盒，其中所述多肽結合劑是抗體。
51.權利要求46的試劑盒，其中所述探針與基底是結合的。
52.權利要求51的試劑盒，其中所述探針在陣列中。
53.包裝，其包含適合於測量心臟細胞或組織中與Wnt信號相關的ー個或ー個以上基因的基因表達的試劑；所述包裝進ー步包含貼在包裝上的標籤，所述標籤含有單詞、圖片、設計、縮寫、標語、短語或者其他圖案或者它們的組合，所述標籤顯示包裝的內含物含有用於測定心臟細胞或組織的生物學年齡的試劑。
54.計算機系統，其包含資料庫，所述資料庫含有鑑定心臟細胞或組織中與Wnt信號相關的ー個或ー個以上基因的表達水平的信息，所述表達水平在年老的心臟中與年輕動物比較是降低的，以及使得用戶可以訪問或操作資料庫中的信息的用戶界面。
55.介質，其用於顯示下述ー種或ー種以上用途的信息或者說明(I)心臟細胞或組織中與fct信號相關的基因，所述與Wnt信號相關的基因在年老的心臟中與年輕動物比較是降低的，(2)通過在個體的心臟中增加Wnt信號和/或増加β -聯蛋白的量或活性，在個體中延緩心臟衰老，(3)通過施用在個體的心臟中增加Wnt信號和/或増加β_聯蛋白的量或活性的試劑或方案，在個體中延緩心臟衰老，(4)篩選測試化合物或方案通過在心臟中調節與Wnt信號相關的基因的表達而延緩心臟衰老的能力，(5)通過測量心臟細胞和組織中與fct信號相關的基因的表達，測定心臟細胞和組織的生物學年齡，和(6)用於測量與年輕動物比較，在年老的心臟細胞或組織中與fct信號相關的基因的差異表達的試劑盒和試齊IJ;其中所述介質包含ー個或ー個以上的含有信息或說明的物理或電子文件、數字存儲介質、光學存儲介質、聲學報告、視聽展示或者可視顯示。
56.權利要求55的介質，其選自顯示的網址、可視顯示kiosk、小冊子、產品標籤、包裝說明書、廣告、散發材料、公告欄、錄音帶、錄影帶、DVD> CD-ROM、計算機可讀晶片、計算機可讀卡、計算機可讀盤、USB裝置、FireWire裝置、計算機存儲器和它們的任何組合。
57.用於在個體中延緩心臟衰老的方法,包括步驟 a)鑑定需要延緩心臟衰老的個體；和 b)調節影響個體的心臟中fct信號的至少ー個基因的表達，其中所述調節導致心臟中 的Wnt信號的增加,從而在個體中延緩心臟衰老。
58.權利要求57的方法，其中所述基因是Dlghl、Magi3,AktU Dab2、RacU CtnnbUCamk2d、Mapkl、Senp2、Smad3、Mark2、Ccndl 或 Pias4。
59.權利要求58的方法，其中所述基因是Dlghl、Magi3>CtnnbI、Camk2d、Mapkl或Senp2。
60.權利要求59的方法，其中所述基因是Magi3、Ctnnbl或Camk2d。
61.權利要求60的方法，其中所述基因是Ctnnbl。
62.權利要求57的方法，其中所述調節包含増加ー個或ー個以上基因的表達。
63.權利要求57的方法，其中所述增加的Wnt信號與個體的心臟中β-聯蛋白的量或活性的増加相關。
64.權利要求57的方法，其包括給個體施用有效量的ー種或ー種以上的試劑，或者使個體接受ー種或ー種以上的方案，從而在個體中延緩心臟衰老，所述試劑或者方案増加心臟中fct信號或者至少部分逆轉心臟中Wnt信號的年齡相關減少。
65.權利要求64的方法，其中所述試劑模擬個體的心臟中β-聯蛋白的活性。
66.權利要求64的方法，其中所述方案包含熱量限制或者白藜蘆醇的攝入。
67.ー種或ー種以上増加心臟組織中Wnt信號或者至少部分逆轉心臟組織中Wnt信號的年齡相關減少的試劑在製備用於延緩心臟衰老的藥物中的用途。
68.權利要求67的用途，其中所述試劑是白藜蘆醇。
全文摘要
本發明提供了一組涉及心臟衰老的強大的生物標誌物，其包含參與Wnt信號通路的幾個基因。已經發現，這些基因在老年的心臟組織對比年輕的心臟組織中是下調的。公開了使用這些生物標誌物監控心臟衰老和鑑定延緩心臟衰老的營養物和飲食方案的方法。還公開了調節這些基因自身以延緩心臟衰老的方法。
文檔編號G01N33/53GK102695807SQ201080060948
公開日2012年9月26日 申請日期2010年11月9日 優先權日2009年11月10日
發明者Q·李 申請人:雀巢產品技術援助有限公司