多重乳狀液及其製備方法

2024-01-27 07:17:15 2

專利名稱：多重乳狀液及其製備方法
技術領域：
本發明涉及用於製備油包水和水包油包水多重乳狀液組合物和方法。更具體地說，本發明涉及製備可用於許多不同用途的穩定的油包水多重乳狀液組合物和方法，所述用途包括但並不局限於輔助劑;疫苗，包括口服的和母體的(perental)免疫;口服的、局部的和非腸道的藥物輸送;以及化妝品。
一種乳狀液是至少由兩種不溶混的液體組成的一種非均勻體系，一種液體以液滴的形式分散在另一種液體中。這種體系具有最小的穩定性1。乳狀液的穩定性問題傳統上一直是著眼於加入添加劑如乳化劑和細分的固體。乳狀液由連續相和非連續相組成。非連續相廣義地被稱為分散相或內相，分散出現於其中的相被稱為連續相或外相。乳狀液的標準的組分是一種油相和一種水相。當水是連續相時，乳狀液被稱為水包油(O/W)，當油是連續相時，乳狀液被稱為油包水(W/O)。最近水包油包水(W/O/W)的多相乳狀液已經變得重要。
水包油乳狀液是最常用的乳狀液。然而油包水和多重乳狀液對於許多應用場合是所希望的，如果不穩定的問題可以被克服的話，它們就會被更廣泛地使用。《乳狀液技術大全》上說「多重(或雙重)乳狀液被用作儲存體系，並可以被認為是W/O型的一種變化。它們在藥物輸送中的潛在優點，可能被劑量形式和最佳配方與可接受的穩定性帶來的問題的日益複雜性抵銷」2。W/O是油包水的縮寫。「儘管很早就說可以使用它們，但多重乳狀液體系還沒有被廣泛地利用……如果需要高產率的多重微滴和良好的穩定性，用植物油製備多重乳狀液是特別困難的。
乳狀液一般是由三個組分組成的。油相，水相，和一種乳化劑。每種組分和它們的製備和結合方法關係到乳狀液的類型和穩定性。為了明確表示決定所製備的乳狀液的類型的規律，已經進行了許多嘗試3。一般來說，表面活性劑在其中最易溶的液體(油或水)，在最終的乳狀液中是連續相。然而，表面活性劑、油和其它物料的性質之間的相互關係，和乳化作用是非常經驗性的。即，這個規律適用於有限範圍的物料，而且常常有例外4。
混合組分的方式對於確定乳狀液的性質是重要的。一般有三種乳化的方法1)機械的，2)相轉化，和3)自然乳化5。
利用剪切力將乳狀液組分破碎成小顆粒的機械乳化是最常用的。相轉化指的是用與相反類型水包油最穩定的組分製備一種油包水類型的乳狀液的方法。然後乳狀液自然地改變類型。製備這些乳狀液的關鍵，取決於物料、鹽的濃度、溫度和其它因素。自然乳化指的是乳狀液在最小的攪動下形成的情況6。這意味著熱力學穩定性的程度是非常希望的，但幾乎不能實現。
表面活性劑是在同一分子裡含有親水部分和疏水部分。它們優先定位在油和水之間的界裡，並在此降低了表面自由能。然而，在表面活性劑的領域裡，化學結構和功能有很大的差異。人們努力研究親水一親脂平衡原理，以便為製備各種類型乳狀液和為其它各種業務預測表面活性劑的功能。親水-親脂平衡是親水和疏水成分的相對強度的半經驗的測量7。它關係到與將兩親的分子定位在油水界面處相聯繫的自由能。各種應用所需的親水-親脂平衡值表示在下表中表 Ⅰ 親水 － 親脂平衡值範圍和應用8
在文獻中這些值廣泛指導為具體目的選擇乳化劑。它們是為使用非離子乳化劑而設計的。雖然已經研究了用於陰離子或陽離子乳化劑的相似體系，但它們比用於非離子乳化劑的那些較少使用。用於許多非離子表面活性劑的親水-親脂平衡值已經公開9。
另外，戴維思(Davies)設計了一種用於表面活性劑計算親水-親脂平衡值的方法，所述計算直接由利用經驗導出值的公式進行10。這樣，一組數被指定給乳化劑中的各種組分基，並且由下述關係計算親水-親脂平衡值(HLB)11HLB＝7+∑(親水基數)-∑(親脂基數)已經證明，HLB值對於選擇乳化劑是有價值的指導，因為超出所述特定範圍的乳化劑幾乎是無效的。然而，一個恰當的HLB值並不能保證表明HLB以外的因素的性能也是重要的，而且必須考慮。應當注意到，對於表面活性劑的HLB小於3的沒有列出應用。這樣的試劑已經被用於將浴油(bathoil)分散到水的表面上，如疫苗輔助劑和用於一些其它場合。然而，它們幾乎不被用作乳化劑。
如上所述，大多數油包水乳狀液使用HLB為3至6範圍內的表面活性劑12。細分離的固體也可以用作乳化劑。文獻已經記載油包水乳狀液中的目標是產生具有穩定性且無電荷的界面膜13。常常可以通過增加乳化劑的濃度來增加乳狀液的穩定性，但是對於生物學的應用這增加了毒性問題，而且對於其它的應用也可能是不太適宜的。
當HLB和其它性質適度不同的表面活性劑混合到一起時，常常會提高乳狀液的穩定性。然而，如果所述差別太大，所述結合幾乎不起作用。人們一直企圖通過將它們的HLB值平均來預測表面活性劑的混合作用，但公知的實際情況是，混合所產生的結果遠遠不同於組分平均的結果14。混合的表面活性劑可以在穩定乳狀液方面產生協同效應。這被認為是與在油-水界面形成與液晶相似的結構配合體有關。已經將磷脂與Span 80混合，以穩定植物油包水的乳狀液15。
最後，聚氧乙烯鏈長的不均勻性常常影響乳狀液的穩定性，特別是在表面活性劑極易可溶的情況下。具有增加的鏈長度的不均勻性的製劑趨於產生具有較大穩定性的乳狀液。正如在前面的討論中可以看出的，根據化合物的物理性質很難預測化合物的任何結合的乳化性質。
各種油與它們可以被其乳化的難易程度和所產生的乳狀液的穩定性是明顯不同的。一般來說，礦物油比植物油更易乳化16。對於製備特定類型的乳狀液，每種油具有一種所需的HLB值。這就是如表Ⅰ所示的製備每種類型乳狀液的HLB值範圍的原因。為了製備最佳的乳狀液，油相的極性越大，表面活性劑的極性也必須越大。油包水乳狀液遵守與水包油乳狀液相似的規律，但是HLB值較低。許多常用製備油包水和水包油乳狀液所需的HLB值已經公開17。
為製備油包水乳狀液已經設計了一些方法。這些方法的大多數都包括在一個產生攪動或一種強剪切力的機器中將組分混合。所一直推薦的是在將這些相結合以前，將油溶性物料放於油相中和將水溶性物料放於水相中18。然而，這樣製備的乳狀液並不令人滿意。這種情況的一個例外是通過將一種水溶性表面活性劑放入油相中就可以製備非常好的水包油乳狀液19。對於油包水乳狀液的這種相反類型還沒有推薦。將疏水的表面活性劑放入乳狀液的水相中，一般導致惡劣的乳化。通過相轉化可以從油包水乳狀液製備好的水包油乳液。通過改變溫度，許多表面活性劑改變了它們的性質，並促進了從一種類型的乳狀液向另一種的轉換20。這種現象可以用於在某些條件下製備乳狀液。
用於油包水乳狀液的穩定劑現有技術的油包水乳狀液很難穩定。這嚴重損害了它們在本來會很希望用的許多場合的應用。已經通過增加一個或多個相或界面的粘度來企望穩定。這可以通過加在大部分相或在界面處其它結構中形成膠體的聚合物穩定劑來實現。這些聚合物包括蛋白質、澱粉、樹脂、纖維素、聚乙烯醇、聚丙烯酸和聚乙烯吡咯烷酮21。這些物料通過共價鍵或通過靜電和疏水部分相互作用結合到界面上。它們形成一種「界面配合物」，該配合物定義為兩個或多個表面活性分子在界面處以一種不存在於任何一個大部分相中的關係相連繫。位於乳狀液中的水包油界面處的某些配合物可以有效地穩定乳狀液。一些低分子量的物料已經作為穩定劑相似地被使用。這些包括可以與某些非離子乳化劑形成配合物的膽固醇22。另外，二價陽離子的脂肪酸鹽如硬脂酸鋁在穩定油包水乳狀液中是非常有效的。帶有一價陽離子的相同脂肪酸的鹽如硬脂酸鈉是無效的。
現有技術中油包水乳狀液的問題有礙於增加油包水乳狀液的用途的主要問題是製備、高粘度和差的穩定性方面的困難。植物油如花生油和豆油，或動物油如角鯊烯或角鯊烷，對於許多應用來說優於礦物油。然而，它們較難乳化，並會製成較不穩定的乳狀液。植物油的油包水乳狀液需要相對高濃度的一種疏水乳化劑如Span80和一種穩定劑。鋁或鎂的硬脂酸鹽已經成功地被用作穩定劑。然而，它們增加了乳狀液的複雜性和毒性。另一個問題是非離子表面活性劑的溶解度，以及它們製備穩定的乳狀液的能力隨溫度而改變。在溫度可能從低於凝固點到高於120°F變化，貯存乳狀液時，會出現問題。
為解決這些問題已經進行了許多嘗試，包括乳狀液的一些組分的聚合產生了增加的穩定性。人們已將聚合物加到水或油相中，然後進行化學聚合或通過輻射。使用X射線可將一些表面活性劑在油水界面處聚合。對於需要疏水表面活性劑的油包水乳狀液這樣做是無效的，因為這些表面活性劑趨於被X射線降解23。最後，為熔化或溶解乳狀液的某些組分，需要加熱到使蛋白質變性的溫度24。這妨礙了將這樣的乳狀液用於需要天然的、未損壞的蛋白質的許多生物活性物。最後可能需要非常高濃度的乳化劑。在一個例子中，乳狀液的油相高達82%，是由表面活性劑Pluronic
L121(poloxamer401)構成25。在同一專利中的其它例子需要加熱至高溫，以用嵌段共聚物表面活性劑製備油包水乳狀液。
所需要的是一種製備油包水乳狀液的改進的方法，該方法不需要高溫、有機溶劑、X射線或化學反應產生交聯而形成所希望的乳狀液。該法應當通過自然乳化最適宜地製備油包水乳狀液。另外，該乳狀液必須提高了穩定性。它們在高的溫度範圍內應當是穩定的。優選地，所述乳狀液對於用於生物學應用應當具有較低毒性。為此，它們應當含有較少的組分，而且所存在的這些組分應當是低毒性的。穩定劑應當減少。油包水乳狀液中的水的濃度應增至一較高值，優選超過80%。大部分油包水乳狀液使用少於約50%的水。最後，油包水乳狀液應當提供一種好的原料以便製備水包油包水的多重乳狀液。
多重乳狀液水包油包水多重乳狀液包括三個不同的相26。最內部的相是水相。它在油相中形成囊狀物，該油相又被包封在第二水相內。在水包油包水乳狀液中，每一個分散的油滴形成一種帶有單個或多個或含水的小室的有小泡狀物的結構，它們是通過一層油相組分與含水的懸浮液分開。這樣的乳狀液具有油包水乳狀液的大部分優點，而且具有低得多的粘度。它們還與脂質體有許多相似之處，但具有大的含水室，而且可以不用無機溶劑製備。多重乳狀液可以被認為是一種在油包水和水包油乳狀液之間的一種相對不穩定性的中間相。分開所述的兩個水相的油層可能變得非常薄，這與油相組分的量無關。這些乳狀液的穩定性按現象學可被理解為大約是由油層的穩定性決定的27。穩定的油層或膜是與增加穩定性相聯的。
多重乳狀液可以用於許多技術中，特別是用於藥品和分離科學中。它們在潛在的生物藥品應用中作為一種水相在另一種液滴內的分散的結果是獨一無二的。這些包括作為疫苗輔助劑、藥物輸送體系、藥物超劑量處理中的吸著劑貯存器和用作酶的固定。它們還可以被用於烴的分離和從廢水中除去有害物料。按照本發明的多重乳狀液可以被配製成化妝品和日常用品如蠟狀拋光劑。它們已經被用於為貯存注射劑固定胰島素和食品中。與多重乳狀液相聯繫的主要問題是它們的不穩定性，在許多它們表示明顯企望的應用場合，所述不穩定性嚴重地限制了它們的使用28。
多重乳狀液的製備多重乳狀液已經通過在不同情況下具有優點的幾種技術來製備。然而，它們中沒有一個是最適宜的。一種方法包括製備油包水乳狀液，然後通過增加水相的量直至超過油相的乳化能力而轉變成多重乳狀液。一種可供選擇的方案是，將溫度改變通過轉換點，某些乳狀液將會從油包水變為水包油，產生一過渡的多重乳狀液相。
具有兩個不同的水相的多重乳狀液必須用兩個步驟來製備。這首先通過用任何標準技術來製備一種油包水乳狀液來實現。然後將該油包水乳狀液在一般含有表面活性劑的第二水相中再乳化。對於第二個步驟，非離子乳化劑通常優於離子乳化劑。在第一個步驟中，Span80一直是一種用於油包水乳狀液的成功的乳化劑。「然而，在液體石蠟中取大量的Span80是為開發的多重狀液型分散體的必需的條件之一」29。Span80少於20%產生水包油乳狀液(見表Ⅱ)。對於石蠟油最適宜的是近似30%。對於動物油或植物油的乳化，甚至需要更大量的Span80，約50%。油包水乳化劑總是加到乳狀液的油相中。在外層水相中的親水乳化劑的濃度也是關鍵的，因為該濃度必須大大小於油相中疏水的乳化劑的濃度。例如，為製備穩定的乳狀液水相中的Tween80的濃度不能超過1%，而油相中的Span80必須超過30%30。
表
表Ⅱ在油相中的Span80對於由機械攪動製備的水包液體石蠟包水乳狀液的形成的影響;在所有例子中，水相中的SDS濃度固定在0.15M。多重乳狀液指數是W/O/W的形成的計量31。
在現有技術中，為了提高多重乳狀液的穩定性已經使用了多種穩定劑和控制。濃度為8%的大豆卵磷脂允許Span80的量降至20%，同時保持乳狀液的穩定性。象油包水乳狀液，油相的體積分數並不是關鍵的。這被認為是由於乳狀液組分是易動的，而且穩定性取決於當脂膜變薄時保持其完整性32。
象油包水乳狀液，植物油和動物油用於製造多重乳狀液比礦物油更困難。例如，用橄欖油製備一種多相乳狀液需要60%的Span8033。如果加入17%的大豆卵磷脂，該值減至43%。另外，可以用與表面活性劑用於W/O乳狀液相同的方式，使用成對的表面活性劑來穩定多重乳狀液。
現有技術多重乳狀液中的嵌段共聚物表面活性劑用作為疏水乳化劑的共聚物Pluronic
L101(poloxamer331)與作為親水乳化劑的Pluronic P123(poloxamer403)結合來製備水包油包水多重乳狀液34，35。在礦物油中的5%的Pluronic
L101與含有2%牛血清白蛋白的鹽水一起被乳化。一段時間後，牛血清白蛋白與Pluronic
L101在油水界面處形成一種配合體。該配合體被認為對於保持乳狀液的油包水組成的穩定性是重要的。如果在該界面的配合體有時間形成以前製備多重乳狀液，所得到的水包油包水乳狀液是穩定性較小的。然後該乳狀液在含有0.4%Pluronic
P123的鹽水中再乳化。在該研究中，評價幾種共聚物表面活性劑。發現Pluronic
L101和P123是最有效的。沒有評價帶有大於4000的疏水物的共聚物。
物理穩定劑由於多重乳狀液固有的不穩定性，人們已經嘗試了幾種通過製造物理穩定性而提高穩定性的方法36，37。一種方法是利用在內部水相中的親水聚合物與表面活性劑的相互作用。上述的BSA-L101相互作用就是一個例子。其它例子使用具有高分子量的聚丙烯酸或聚電解質，分子量近似為3百萬。另外，在界面處的表面活性劑已經由X射線或具有化學活性單體的聚合物交聯38。這種情況已經發生在內部水相中、在油水界面處、在油相中、以及在外部水相中的聚合物料上。已經將油滴用凝膠體和其它材料封裝以提供物理屏障。在某些條件下，雖然這些方法的每一種在一定程度提高了穩定性，但是這種乳狀液一直是難得穩定、無毒和有促進廣泛使用的功能。
多重水包油包水乳狀液的問題如上所述，水包油包水乳狀液的重要問題是穩定性。多重乳狀液的固有的不穩定性已經妨礙了大多數商業上使用。然而，已經有了一些企圖改進穩定性的報導。用於提高多重乳狀液的穩定性的方法一直是相當經驗性的，因為每種處理都趨於對於所評價的具體乳狀液是高度專一的39。然而，某些原理可以被公式化。最重要的問題似乎是由在外層中的水乳化劑引起的不穩定性，所述外層逐漸溶解油層中的疏水乳化劑，並毀壞內部的乳狀液40。帶有初始的界面膜的用於第二乳化步驟中的表面活性劑的幾乎不可避免的相互作用表明，在多重乳狀液中使用自由表面活性劑穩定劑的固有的不實用性。優選的是一種不允許穩定化組分擴散的更持久的界面膜。
多重乳狀液的評價根據油滴內部的水微滴的大小和數目，將多重乳狀液分為A、B和C型。A型是在油滴內有單個水微滴，B型有少量的水微滴，和C型有較多的水微滴41。按照這種分類，如Freund′s完全的輔助劑製備的乳狀液或本發明的多重乳狀液甚至比C型乳狀液細得多。已經報導，在某些條件下，多重乳狀液可以比初始的油包水乳狀液更穩定。在一個例子中，用一油酸甘油酯乳化的豆油在80℃下是穩定的42。據報導，用Freund′s輔助劑製備的多重乳狀液能在4℃貯存比其前體的油包水乳狀液更穩定。
限制多重乳狀液的使用的壓倒一切的問題是穩定性。大多數報導關於穩定性的文章表明，甚至對於更穩定的製備也是處於不可接受的水平。對於生物產品，相對於裝在冷藏室或冷凍室中的藥物來說，乳狀液應具有其貨架壽命。另外，用於提高穩定性的許多組分也會增加毒性。多重乳狀液通常使用高濃度的疏水表面活性劑和穩定劑，它們具有固有的毒性。另外，在內部水相中的小於50%的低濃度的水，使得用於輸送內部水相的油的量增加。這之所以重要，是因為內部水相對於大多數活性成分來說是所選場所。最後，極其希望的是使用植物油如花生油或動物油(角鯊烯或角鯊烷)代替不可代謝的礦物油。然而，使用植物油的多重乳狀液一直比使用礦物油的更難製備和保持穩定。
本發明包括油包水和水包油包水多重乳狀液和製備方法，本發明克服了先前的乳狀液的許多局限，而且本發明的乳狀液是可用於多種用途包括，但不局限於疫苗輔助劑，口服的，局部的和非腸道的藥物輸送，藥物，化妝品，食品和各種日用和工業用途的優越的製劑。
本發明是一種穩定的油包水乳狀液，該乳狀液包括在一連續油相內的分散的水相，該水相有一有效量的第一種表面活性劑;親水-親脂平衡值近似小於2，和連續的油相有一第二種表面活性劑。
本發明還包括一種穩定的水包油包水多重乳狀液，該乳狀液包括一在一油相內的分散的內部水相，所述油相在一連續的外部水相中，內部水相有親水-親脂平衡值近似小於2的有效量的第一種表面活性劑，和有一第二種表面活性劑的油相。最適宜地，表面活性劑可以加到連續的外部水相中。
加到內部水相中優選的化合物是一種有下述通式的有效量的表面活性共聚物
其中a是一個整數，使得由(C3H6O)表示的疏水部分具有平均分子量近似3000至15000，優選範圍在3000和9000之間，而且最優選的在近似5000至6000之間，b是一個整數，使得由(C2H4O)表示的親水部分構成化合物重量的約2%至19%。
共聚物Pluronic
180.5是優選的表面活性劑。Pluronic
180.5的分子式如下
其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似為5200，而親水部分(C2H4O)的重量百分比為近似在5%。
另一種優選的表面活性劑是Pluronic
L141，其分子式如下
其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似為4600，而親水部分(C2H4O)的重量百分比近似為10%。
乳狀液典型地是通過將內部水相、油和外部水相混合來製備。如果嵌段共聚物表面活性劑被包含在內部水相中，在乳化前，它應通過冷凍和允許通過溫熱析出來溶解。用任何方便的方法製備油包水(W/O)乳狀液。然後將其在外部的水相中再乳化以製備一種多重(W/O/W)乳狀液。W/O乳狀液可以通過將一樣品放入水中來測試。W/O/W乳狀液通過幾種方法來評價。最簡單的是顯微鏡法。
因此，本發明的一個目的是提供用於製備油包水和水包油包水乳狀液的組合物和方法，所述乳狀液是穩定的，並且可用於廣泛的應用領域。
本發明的另一個目的是提供製備優良的疫苗輔助劑的組合物和方法。
本發明的另一個目的是提供用於製備可以被用作非腸胃的，局部的，黏膜的或口服的藥物輸送賦形劑的乳狀液的組合物和方法。
本發明的另一個目的是提供可以用於製備在配製化妝品製劑中有用的乳狀液的組合物和方法。
本發明的另一個目的是提供可以用於製備在製備食品中有用的乳狀液的組合物和方法。本發明的另一個目的是提供可以用於製備在分離科學中有用的乳狀液的組合物和方法。
本發明的這些和其它目的、特徵和優點在重看下面所公開的實施例的詳細說明和附帶的權利要求後會顯得更清楚。


圖1是表示各種poloxamer化合物之間的關係的方塊(grid)圖。
圖2表示口服了在水包油包水乳狀液中的TNP-HEA免疫劑後在腸液中分泌的IgA的滴定度。
圖3表示在口服水包油包水乳狀液中的TNP-HEA免疫劑後IgG和IgA的血清滴定度。
本發明的新穎的乳狀液包括將一種親水-親脂平衡值近似小於2的不可溶的表面活性劑放入內部水相中。這與現有技術教導的疏水乳化劑應放入油相中相矛盾。
以最終分散的形式放入水相中的非常疏水的乳化劑提供了優越的乳狀液穩定性，這可能是由於在油/水界面形成了一種穩定的界面屏障的緣故。
加入到內部水相中的優選的化合物是具有下列通式的有效量的表面活性共聚物
其中a是一個整數，使得由(C3H6O)代表的疏水部分具有近似3000至15，000的平均分子量，優選5000和10，000，以及b是一個整數，使得由(C2H4O)表示的親水部分構成化合物重量的約2%至19%。
通過Pluronic L180.5的凝膠滲透分離製備共聚物L310。計算L310的式如下
其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量為近似10，000，而親水部分(C2H4O)的重量百分比為近似為4%。
共聚物Pluronic
L180.5是優選的表面活性劑。Pluronic
L180.5的分子式如下
其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似為5200，以及親水部分(C2H4O)的重量百分比為近似5%。
另一種優選的表面活性劑是Pluronic
L141，它具有下述分子式
其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量為近似4600，而親水部分(C2H4O)的重量百分比為近似10%。
Pluronic
或poloxamer共聚物嵌段是在鹼性催化劑的存在下，在升高的溫度和壓力下，通過環氧乙烷和環氧丙烷縮合生成的。在單體單元的數目上有一些統計上的變化，所述單體單元結合形成每個共聚物的聚合物鏈。給出的平均分子量是每種製劑中共聚物分子的平均重量的近似值。應當理解，環氧丙烷和環氧乙烷的嵌段不必是純的。只要總的物理化學性質基本上不改變，可以摻入少量的其它物料。製備這些產品的更詳細的討論可在U.S.2，674，619中找到，該專利在此結合參考。
poloxamer化合物的命名法是基於一種poloxamer方塊(圖1)。這種poloxamer方塊是命名和各種聚合物節的組成之間的關係。所給出的疏水(聚氧丙烯)平均分子量是其範圍的近似中點。方塊上的poloxamer數的前兩位數乘以100，就是所述疏水部分的近似平均分子量。後面的數字乘以10就是表面活性劑的親水部分(聚氧乙烯)含量的近似重量百分比44。例如，poloxamer407，示於方塊(圖1)的右上四分之一中，導自一種具有平均分子量為4000的疏水部分和佔共聚物總平均分子量70%的親水部分。另一個例子是poloxamer760.5，它具有一個平均分子量為7600道爾頓的疏水部分和具有一個佔共聚物總的平均分子量5%的親水部分。
本發明的乳狀液具有高度的穩定性，而且可以被製備成在內部水相中有高達近似90%至95%水。所述乳狀液隨著油滴的部分凝聚結成乳化的奶油狀物而不破壞內部的油包水乳狀液。親水的乳化劑使疏水的乳化劑加溶，在很大程度上消除了。多重乳狀液的共同問題是在外部水相中的親水的表面活性劑將疏水的表面活性劑吸出油相併在外部水相中使之加溶。這損害了油相的乳化能力。通過將一種疏水的表面活性劑放入內部水相中，使它與外部水相保持分開。油相的乳化能力並沒有被接觸外部水相表面活性劑損害。即使本發明的乳狀液的油相微滴可能結合和熔合，內部和外部水相有很少或沒有混合。其結果是，僅通過搖動該製劑，所述多層乳狀液可以被重新形成。油包水乳狀液可以自然地形成帶有高達90%的水。通過適當的攪動，新的乳狀液在完全毀壞後可以重新形成。這與大多數普通的具有大比例水的油包水乳狀液不同，它不能在毀壞後再形成，除非將所述組分分開並且重新開始所有步驟。
本發明的乳狀液除了礦物油外，還可以容易地用各種植物或動物油特別是花生油和角鯊烯製備，而且是穩定的。它們可以被製成在內部水相中有10%至95%的水，然而，對於大多數目的，最適宜的水濃度在60%和80%(體積/體積)之間。內部水相很有特點地具有非常細小的微滴尺寸。該製劑與現有技術的製劑相比可在大得多的程度下穩定地冷凍、冷藏，在室溫和升高溫度下也是穩定的。它們具有異常低的毒性。
本發明的乳狀液可以用各種不同類型的油，油相中的疏水表面活性劑，和外部水相中的親水表面活性劑形成。本發明可以使用的油包括但並不局限於，動物油，如角鯊烯或角鯊烷，植物油，例如花生油，礦物油，例如drakeol，和合成油如十四酸異丙酯。這些油以及表面活性劑的結合對於本領域中的技術人員來說是公知的。乳狀液還可利用其它穩定劑如矽石，硬脂酸鋁，牛血清白蛋白，其它蛋白質，以及其它本領域的技術人員知道的聚合劑和穩定劑。重要的是避免使用去乳化劑。
本發明的多重乳狀液的一般製備包括，首先用親水-親脂平衡值近似小於2的表面活性劑混合或均化，將形成乳狀液的內部水相的物料。其它物料可以被混合或溶於內部水相中。例如，如果該乳狀液要被用作輔助劑，可以將抗原放入水相中。優選的表面活性劑是這裡討論的嵌段共聚物，但要理解，可以使用其它表面活性劑，只要這些其它表面活性劑親水-親脂平衡值小於2。然後將混合物與一種油一起均化形成油包水混合物。
可以通過迅速將流體在兩個注射器間轉移來進行均化。還可以在一小型摻合機中通過聲波處理或通過本領域中普通技術人員公知的許多方法中的任何一種方法來進行均化。為製備水包油包水多重乳狀液，將油包水乳狀液用一第二種水相均化。
本發明的一種應用是製備有效的抗感染疫苗，該疫苗可以用於任何種類的動物。油包水乳狀液如Freund的完全輔助劑和輔助劑65已知是在產生抗許多種抗原的強的免疫感應中非常有效。輔助劑65是一種花生油包水的乳狀液，它使用二縮甘露醇-油酸酯作為乳化劑和硬脂酸鋁作為穩定劑。輔助劑65已經在許多動物和人體的研究中被評價45，46。按照本發明製備的乳狀液是優良的，因為它們具有較低的毒性，可以使用低劑量的油和表面活性劑，並且產生等效的或較高的免疫感應。對製備單一劑量的抗破傷風和B型肝炎的疫苗，它們是特別有效的。複合劑量的疫苗向單一劑量的疫苗的轉化是世界衛生組織的重點目標。所述配方還用作疫苗輔助劑，用於各種其它情況包括瘧疾、愛滋病(AIDS)、流行性感冒和雙球菌肺炎。
作為疫苗，所述配方具有允許降低抗原劑量的優點，抗原以更有效的方式使用。相對於礦物油乳狀液來說，它們較少發生對抗原的變性。這樣製造較高比例的有效抗體，抵抗正在感染的生物體的天然定子。按本發明製備的乳狀液除了利用嵌段共聚物的乳化性質外，還利用了它們的輔助效果。(見U.S.App.NO.07/544，831，該專利在此作為參考)。當與抗原一起使用時，所述乳狀液鼓勵對在寄生抗原上的較大數目的抗原目標或抗原決定基的抗體的製備。這些乳狀液是相對無毒的，因為油、表面活性劑和穩定物料減少了劑量。它們可以與脂多糖、胞壁醯基二肽衍生物或其它免疫調節劑混合，以調節適應不同地區生活的動、植物或抗體和細胞免疫之間的平衡。這樣，疫苗可以被調節以產生特殊類型的免疫響應，該響應對於抵抗特殊的疾病是特別有效的。由於免疫調節劑被含於乳狀液的內部相中，它們可以使用較低的劑量而具有較小的體系毒性。當按本發明製備的乳狀液用作輔助劑時，它們可以通過任何方便途徑靜脈、肌肉或皮下注射，口服或通過黏膜或鼻的途徑施用。該乳狀液在冷凍室中是無限期穩定的，這對於必須被冷藏的明礬輔助疫苗是一個主要優點。在世界的許多地方需要冷藏，「經受寒冷」，是使用疫苗的主要障礙。
按照本發明的油包水或多重乳狀液，可以被用作口服的、局部的或黏膜的使用的藥物輸送載體。它們具有含有容易變性的物料，如鹽水或其它在經過胃和上部胃腸道的轉移期間不變性的流體中的蛋白質的不尋常的性質。所述物料未受損地並具有高效能地輸送到下部胃腸道裡。尋找保護物料在經過上部胃腸道期間不被消化的方法長期以來一直是藥物輸送研究的容易被忘記的目標。
按照本發明的多重乳狀液可以被用於非腸道注射，以產生藥物的持久釋放或把藥物作為目標輸送至身體的具體部位，特別是具有高濃度的巨噬細胞的部位。由於多重乳狀液有許多脂質體的性質，它們可以被用於任何使用或考慮用脂質體的場合。它們具有有大的水相內部室的附加優點，並且可以不用有機溶劑製備47。這樣的乳狀液可以用於藥物的口服咽下以促進持久釋放和/或保護藥物在胃中不會由於酸和分解蛋白酶而消化。按本發明的乳狀液也可以促進吸收。另外，使用共聚物抑制脂肪酶並保持乳狀液完整和藥物輸送到胃腸道的較低部分。多重乳狀液還可以用於通過鼻、直腸、陰道或其它粘液膜輸送藥物。多重乳狀液的擴散到相容表面的趨勢促進藥物的通過任何外部的或內部的人體表面的輸送和吸收。
一種現有技術的油包水乳狀液，Freund的完全輔助劑，一直是最廣泛使用的用於使動物免疫的免疫輔助劑。然而對用於人類是很毒的。一種沒有分枝菌的變體，Freund的不完全輔助劑，被用於臨床疫苗中，但由於毒性原因被放棄了48，49，50，51。一種花生油的油包水乳狀液含有Arlacel A(一油酸二縮甘露醇酯)和硬脂酸鋁，這種乳狀液在本世紀六十年代被評作輔助劑用於人類疫苗52，53，54。它顯示出了一線希望，但後來被拋棄了。這些油包水乳狀液疫苗的問題之一是1/4至1/2ml劑量導致了過分多的油的注射，該油一直與嚴重的局部和偶爾全身的毒性反應相關。
具有高含量的水和適當穩定性的多重乳狀液具有在食品、化妝品、分離科學、化學反應的催化和許多其它領域中有潛在的用途。具有非常高含量的水的乳狀液以及沒有刺激性的穩定劑的多重乳狀液的製劑用在化妝品中是特別有利的。
已經建議多重乳狀液用於多種食品和調味汁中。共聚物的低毒性和含有食用油的組成為食品提供了良好的機會。
由本發明製備的多重乳狀液可以被用於已經製備其它油包水或水包油包水乳狀液的分離科學的任何場合。該多重乳狀液為物料通過半透膜(油層)擴散提供了一種方便的載體。在適當的場合，這可以被用於促進物料的分離。已經建議這樣的乳狀液可以被用於溶劑萃取和用作一種處理用藥過量的方法。
多重乳狀液縮寫以及所得代碼31R1 Meroxapol(Pluronic
R31R1)AlSt 硬脂酸鋁ALSt-1 10mg/ml硬脂酸鋁ALSt-4 40mg/ml硬脂酸鋁Arlacel 186 一和二脂醯甘油酯的非離子表面活性劑混合物BSA-3 3mg/ml含牛血清白蛋白的鹽水BSA-10 10mg/ml含牛血清白蛋白的鹽水DDA 二甲基二(十八烷基)溴化銨Drakeol 6VR 輕礦物油egg lec 蛋卵磷脂F68 poloxamer 188(Puronic
F68)iso myris 十四酸異丙酯CEF 雞胚成纖維細胞培養細胞和流體L101 poloxamer 331(Pluronic
L101)L121 poloxamer 401(Pluronic
L121)L141 poloxamer 461(Pluronic
L141)L180.5 poloxamer 520.5(Pluronic
L180.5)nd 未做Octadecyl 十八烷基胺O/W 水包油乳狀液P123 poloxamer 403(Pluronic
P123)Palmi acid 十八(烷)酸Plurocol 2010 聚氧化丙烯(MW∽2000)
Plurocol 4010 聚氧化丙烯(MW∽3900)RT 室溫S80 Span80，一油酸脫水山梨(糖)醇酯Sil-10 10mg/ml 5μm MIN-U-SIL(石英顆粒)Sil-50 50mg/ml 5μm MIN-U-SIL(石英顆粒)SOY Lec 大豆卵磷脂Span 65 三硬脂酸山梨(糖)醇酯T150R1 Tetronic
R T150R1T1501 (poloxamine)Tetronic
T1501Tween 80 一油酸聚氧化乙烯山梨(糖)醇酯W/O 油包水乳狀液W/O/W 水包油包水乳狀液在每張表的後兩欄中的分級代碼在下面的表中定義。標記「O」是最不穩定的，並在幾秒內毀壞。標記「4」是最穩定的，並且在惡劣條件下會使乳狀液保持數周或數月。標記「C」暗示，油中的水微滴聚集但並不融合或毀壞。
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由下面的實施例進一步闡明本發明，實施例並不以任何方式解釋成對本發明的範圍施加限制。相反，應當清楚地理解，在閱讀本說明書後，本領域的技術人員可以採取各種其它實例、改進和等同物，都不脫離本發明的實質和/或附帶的權利要求的範圍。
實施例1使用表示在表1至8中的物料和比例製備油包水和多重乳狀液(水包油包水)。首先，通過按所示比例混合組分來製備三相(內部水相、油相和外部水相)。例如，在表1的第35行，通過將共聚物L180.5以20%(V/V)與含3mg/mlBSA的生理鹽水溶液混合來製備內部水相。將該混合物放入4℃的冷藏室中以允許共聚物進入溶液。然後在使用前，將其變熱以使聚合物析出。由角鯊烯與含20%(體積)的Span80的混合物製備油相。不使用穩定劑。如果使用矽石作為穩定劑，它就會在與油結合以前，與油相表面活性劑混合。如果使用硬脂酸鋁作穩定劑，為溶解它油相得加熱至50℃到80℃。外部水相是含0.5%的Tween80和0.5%的F68的生理鹽水的混合物。
首先，通過使用本領域的技術人員熟習的任何適合的均化裝置均化製備油包水乳狀液。在該例中，1份(1ml)油相與1ml內部水相均化來製備油包水乳狀液。可以通過將一液滴乳狀液放在水的表面上來進行測試。該液滴應保持它的形狀並不分散。然後，油包水乳狀液在6份(6ml)外部水相中二級乳化以製備水包油包水乳狀液。已發現該乳狀液(表1的35行)在室溫下24小時高度穩定。表示在表1至8中的每種其它乳狀液用相似的步驟來製備。
Florence建議了一種將多重乳狀液分為A、B和C型的方案。C型是最好的。內部水相有許多小的水微滴。B型是一種較不令人滿意的乳狀液，其中內部水相有幾個不連續的水微滴。A型，是最差的一種，它的內部水相有一單個的大液滴。本實施例的乳狀液比Florence所描述的任何一種都好55。內部水微滴小得用光學顯微鏡不能看到單獨液微滴。而且，由於內部水相的無數的非常細小的水微滴，該乳狀液呈現出磨過的玻璃的外觀。
實施例2含10%至20%Span80的角鯊烯能製備穩定的油包水乳狀液，但不能製備穩定的水包油包水多重乳狀液(表1，25-26行)。
實施例3將共聚物L121、L141或L180.5加入到含10%Span80的角鯊烯中，減少了形成穩定的油包水乳狀液的能力(表1，1-12行)。需要20%的L141時，共聚物L121和L180.5使乳狀液在含8%濃度的角鯊烯情況下不穩定。
實施例4將Span80的濃度增至油相的20%，克服了L141的去穩定能力，並促進穩定的油包水乳狀液的製備。而且，在這種情況下的L141促進了形成穩定的多重乳狀液(表1，26和27行)。
實施例51或4%的硬脂酸鋁作為一種在油相中的穩定劑，克服了共聚物L141的去穩定性能力，而且還促進了穩定的多重乳狀液(表1，28-31行)的形成。
實施例6加入到乳狀液內部水相中的共聚物L141或L180.5，促進了形成穩定的多重乳狀液。由於文獻教導說，疏水的表面活性劑應放入油相中，這是令人驚奇的。而且，這些共聚物的HLB低於報導的用於有效的油包水乳化劑的那些(表1，32-35行和25-26行)。
實施例7F68是比Tween80更有效的用於製備多重乳狀液的外部水相的表面活性劑(表2，1-9行)。
實施例8如果Span80和共聚物L180.5在油相中結合，Span80的濃度從10%增加到40%，所得到的多重乳狀液的穩定性就會降低，這與文獻所說的多重乳狀液需要高濃度的Span80相矛盾(表2，20-27行)。
實施例9內部水相中的共聚物L180.5對於穩定多重乳狀液來說優於L141或更小的共聚物。當內部水相中的水的濃度升至油包水乳狀液中的水的80%時，這一點可以清楚地表明(表3，1-6行)。
實施例10共聚物L180.5有效地穩定了在內部水相中有80%水的多重乳狀液。正如貯存在37℃，4℃，冷凍成-20℃以及在幾周的期間融化用光學顯微鏡看到的，這些乳狀液保持穩定。(表3，1-6行)。
實施例11在內部水相中含80%水的多重乳狀液可以用大量的外部水相製備，而沒有危及穩定性，這與文獻所教導的限制外部水相的量的重要性相反(表3，1-3行和19-21行)。
實施例12含有角鯊烯的油包水乳狀液的內部水相中的共聚物L180.5，增加了油包水乳狀液的穩定性，而且非常顯著地增加了多重乳狀液的穩定性。多重乳狀液的穩定性取決於外部水相中的表面活性劑的類型。在內部水相中含有共聚物L180.5的製劑中，可以在外部水相中使用非常廣泛的表面活性劑(表4，7-12行和19-24行)。
實施例13一種在內部水相中含有10%共聚物L180.5和0.25%的P123作為外部水相表面活性劑的多重乳狀液由在內部的油包水乳狀液中的80%的水所構成，而且外部水相佔總體積的80%，使油相只構成總乳狀液的4%。這樣製備了高穩定的多重乳狀液，它能在17天的期間內，經受冷凍和融化4次，貯藏在冷藏室、室溫或37℃，另外一段時間，甚至沒有微小的變壞跡象(表4，24行)。
實施例14聚合物L180.5促進油包水和水包油包水多重乳狀液的穩定性的能力，用幾種油，疏水的油相表面活性劑和穩定劑來測試。內部水相中的L180.5共聚物增加了油包水和多重乳狀液的穩定性，所述乳狀液是用Span80、Arlacel 186或Span80加上硬脂酸鋁製備的花生油乳狀液(表5，11-20行)。它與礦物油(Drakeol6VR)有相似的效果(表5，21-30行)。在這些有很大的外部水相體積條件下，內部水相中的共聚物L180.5並沒有增加含有十四酸異丙酯或Plurocol的乳狀液的穩定性。
實施例15一直常常報導，用植物油製備穩定的油包水或水包油包水多重乳狀液是困難的。內部水相中的L180.5共聚物顯示了促進這樣的乳狀液的穩定的能力。含有花生油的Span80製備了一種甚至僅含50%水的水包油乳狀液(表16A，16行)。如果將共聚物L180.5加入內部水相，製得含50%、70%或90%水的高度穩定的油包水乳狀液。然後，該油包水乳狀液形成一穩定的多重乳狀液(表6，10-12行)。將該乳狀液貯存在冷凍或4℃的條件下進一步測試，發現在這些條件下也是穩定的。其它的穩定劑，如硬脂酸鋁單獨使用時是很少有效的，但當與共聚物L180.5結合使用時，可製備非常穩定的乳狀液(表6A，22-24行，28-30行和31-36行)。當內部水相含有在一用於疫苗的製劑的雞胚成纖維細胞和它們的培養基時可觀察到相似的結果(表6B，37-72行)。
實施例19將幾種疏水的表面活性劑加到角鯊烯、花生油、礦物油和十四酸異丙酯的油包水和多重乳狀液的內部水相中。共聚物L180.5顯著地增加了有這些油的每一種的油包水和多重乳狀液的穩定性(表7，1-2行，13-14行，25-26行和37-38行)。共聚物T1501具有相似的組較小的效果(表7，4行，16行，28行和40行)。DDA、大豆卵磷脂、硬脂酸鋁和十八烷基胺加入到內部水相時都增加了一種或多種油包水乳狀液的穩定性。(表7)實施例20內部水相中的蛋白質的效果和共聚物L180.5的濃度的研究評價表示在表8中。共聚物L180.5在穩定多重乳狀液中的最大效果需要濃度為5%或更大(1-2行，11-12行;表8)。然而，在使用0.01%這一最低濃度時，觀察到了影響(表8，9行，19行)。內部水相中蛋白質的存在對結果沒有影響。這些製劑都是在室溫和4℃下測試的，且具有相似的結果。進行了進一步的研究以評價鹽濃度對乳狀液的穩定性的影響。內部水相中用蒸餾水製成的乳狀液比那些用普通狀態的鹽水製成的較不穩定。相似地，兩倍於生理鹽水的濃度的鹽濃度製成較低穩定性的乳狀液。這與先前的其它情況的結果一致，所述結果表明，鹽濃度的類型和量對於決定油包水和多重乳狀液的穩定性是重要的。
實施例21以5%(V/V)加入到十四酸異丙酯的油相中的L101不能與含BSA的鹽水形成一種80%的油包水乳狀液(表5，6行)。它還不能與含有P123作為外部水相的鹽水形成一種多重乳狀液(表5，6行)。這與Law等人的報導相反，他們用這些物料製備油包水和W/O/W兩種乳狀液56。然而，他們的工作和本發明有幾個基本的不同。首先，Law等人只描述了一種含50%油的油包水乳狀液。本發明可以用各種油包括十四酸異丙酯製備超過70%的乳狀液(表7，3行)。第二，他們的乳化是在一機械攪拌中以1200±200RPM的速度乳化30分鐘來形成一種油包水乳狀液。本發明的乳化一般是使用結合的注射器以一般用於製備免疫學的輔助劑乳狀液的方式進行5分鐘或更短時間來完成的57，58，59。這表明本發明的優越之處在於油包水乳狀液的製備容易得多。第三，Law等人教導表面活性劑如Span80加入到他們的乳狀液的油中會引起大量的凝聚。在本發明的許多實施例中對於各種油包括十四酸異丙酯，Span80是一種有效的油相乳化劑。(表7，37-38行)第四，Law等人教導，使用這些物料的多重乳狀液的形成，需要在製備W/O/W乳狀液之前，將油包水乳狀液放置過夜老化。這使得蛋白質和共聚物L101相互作用。他們的論文「由大分子和非離子表面活性劑的界面複合作用穩定W/O/W多重乳狀液」，表明他們的乳狀液的穩定性需要這一現象60。Law等人清楚地表明，保持表面活性劑分開的穿過油層是穩定W/O/W乳狀液的一個重要因素，但他們所針對的溶液是與本發明完全不同的。本發明的乳狀液是在溫和得多的攪拌條件下製備的，含有較高比例的水，是更穩定的，而且在製備油包水乳狀液後不需等待一段時間。
實施例22目前的用於B型肝炎感染的疫苗是安全和有效的，但對大多數人來說，在幾個月的期間內需要至少三次注射以實現10mlU/ml的保護抗體滴定度61。製備並測試一種作為疫苗用於B型肝炎病毒的表面抗原的多重乳狀液。由共聚物L180.5(10mg)與含於0.1ml鹽水中的130μg的由B型肝炎表面抗原取得的血漿混合構成內部水相併冷卻以溶解所述共聚物。油相是由0.08ml的含有90%角鯊烯和10%Span80的一種混合物構成。將內部水相和油相放入一個1ml園錐形塑料管中，並重複地吸取該混合物經過一個鈍的18號標準針進入一個1ml的塑料注射器。在少於30秒內形成了稠的油包水乳狀液。加入含0.25%Pluronic P103(poloxamer404)的鹽水0.22ml作為外部水相，所述乳狀液轉化為油包水多重乳狀液。該混合物經18號標準針吸入。將油包水乳狀液分散成一種多重乳狀液。
所得到的多重乳狀液由具有平均大小為10微米左右的油包水乳狀液微滴組成，而且內部水滴到要用光學顯微鏡分辨。在室溫下穩定期超過4個月。相似的製劑經過五個冷凍-融化循環仍然穩定的。
將該乳狀液通過皮下注射到ICR遠系繁殖的老鼠的脅肉內，注射量為0.05ml，其中含有1.23mg共聚物L180.5、1.03mg Span80、16μg抗原和9.25mg角鯊烯。所有老鼠在14天內產生的滴定度大於10mlU/ml。在28天時，平均滴定度為20，815mlU/ml。局部炎症響應是最小的。
實施例23實施例23至25表明按照本發明的一種油包水乳狀液如何可以被用於輸送作為一局部治療的活性組分。用一種油包水乳狀液(75%水)處理一個40歲的白人婦女，所述乳狀液使用在水相中的Pluronic L180.5和作為油相的角鯊烯和10%的Span80，帶有最後濃度為5%的硫酸皮膚素(科學蛋白質實驗室，Waunakee，WS)以用於頭部的嚴重輻射燒傷。
該病人接受了15劑量的全腦輻射，用於在她的左太陽穴腦葉中一個轉移的腺癌。該病人失去了她的全部頭髮。對她進行了傳統療法，該療法包括用蘆薈凝膠和羊毛脂局部處理她頭部燒傷。在她前額上的燒傷是特別嚴重的。
該病人遭受了極度痛和癢。該病人的頭頂皮被紅的發炎的條狀物蓋滿。該病人的耳朵後面的腫塊受到大劑量的輻射，此處皮膚破裂、發紅、腫脹而且非常乾燥。油包水乳狀液施加到她的整個頭頂和前額。病人立即解除了發癢。首次處理後12小時，在她頭部的所有的紅的發炎的條狀物完全消失了。她前額的皮膚變軟且柔和。使用該油包水乳狀液，病人基本上12小時不癢。數周內病人能睡眠而不用第一次的藥物處理。
實施例24將50ml含5%硫酸皮膚素的70%的油包水乳狀液施加到一位61歲的白人男子身上，該人患嚴重的「接觸性」皮炎已5年以上。該病人的最嚴重問題是他的手而且特別是在冷天。病人的手指間，皮膚破裂出血而且他的整個手具有鱗狀的燙傷外觀。該病人的手癢得他在睡眠時將手抓傷直到流血。病人一天兩次施用W/O乳狀液，早晚各一次。第一次處理後幾個小時內，解除了痛和癢。病人使用該乳狀液一周後，皮膚變柔軟而且有正常的皮膚外觀。
實施例25處理一位有嚴重的覆蓋整個背部的曬斑的30歲的白人男子。該病人將其背部暴露於太陽下達近似7小時，有最少的遮陽物。第二天，痛苦嚴重得使病人作嘔。該病人在遭受目炙後用在實施例23中所用的油包水乳狀液處理48小時。在近似30分鐘內，解除了痛和癢。該製劑一天施用兩次。第一次施用後24小時，所有發紅、發炎全部消失。他繼續使用該製劑三天，皮膚完全治癒。
實施例26製備一種水包油包水多重乳狀液，它包括50%(V/V)的含0.25%的共聚物P123的鹽水的外部水相。另外50%(V/V)是由72%鹽水，18%角鯊烯，2%Span80和32mg共聚物L310和每0.5ml乳狀液0.5mgTNP-HEA組成的分散的油包水相。該乳狀液給OCR遠系繁殖的老鼠口服，劑量為每支老鼠0.5ml。在一個放大200倍的顯微鏡下檢查該多重乳狀液。乳狀液在顯微鏡下表示出油包水乳狀液的粒子直徑為1.0至20μ。透射顯示了老鼠的迴腸末端，胃服乳狀液後6小時，顯示乳狀液粒子與一種Peyers Patch(P)的圓頂狀物結合。因為蛋白質抗原懸浮在乳狀液的鹽水中，該實驗暗示油包水乳狀液能夠將天然抗原輸送到與腸聯合的淋巴腺組織。該乳狀液肉眼可見的，而且是由完整的油包水顯微粒子組成。一個內含物試樣在口服後六小時被取出，由Ouchterlony分析測試發現含有抗原性的完整的TNP-HEA。在口服含有抗原的油包水乳狀液後測試出分泌的IgA值。內部水相中含有TNP-HEA的油包水乳狀液(0.5ml)在0，14，34天注入6個一組的遠系繁殖ICR老鼠的胃中。其它組接受同樣的乳狀液試驗，所述乳狀液含有100μg已解毒的RaLPS，皂草苷或矽石作為輔助劑。口服後，IgG和IgA抗體循環，測量滴定度。在收集老鼠的腸液的同時收集血樣。結果表示在圖2和3中。在大多數情況下，單獨服用TNP-HEA抗原乳狀液在腸液和血漿中都得到了最高的滴定值。當口服含有TNP-HEA的鹽水，在腸液或血漿中都沒有免疫響應。
當然，應當理解，前面所述只與本發明的優選實施例有關，而且許多可以做出的改進和選擇都不脫離本發明的實質和範圍，本發明的實質和範圍表示在附帶的權利要求中。
權利要求
1.一種穩定的油包水乳狀液，含有在一連續的油相內的分散的水相，水相含有一種親水一親脂平衡值近似小於2的有效量的第一種表面活性劑，而連續的油相含有第二種表面活性劑。
2.按權利要求1的乳狀液，其中第一種表面活性劑具有下列分子式其中疏水部分(C3H5O)的平均分子量在近似3000至15000之間，而親水部分(C2H4O)的重量百分比近似在2%和15%之間。
3.按權利要求1的乳狀液，其中第一種表面活性劑具有下列分子式其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似為10，000，而親水部分(C2H4O)的重量百分比近似為4%。
4.按權利要求1的乳狀液，其中第一種表面活性劑有下列分子式其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似為5200，而親水部分(C2H4O)的重量百分比近似在5%。
5.按權利要求1的乳狀液，其中油選自由植物油、動物油和礦物油組成的組。
6.按權利要求5的乳狀液，其中植物油是花生油。
7.按權利要求5的乳狀液，其中礦物油選自由drakeol 6VR、十四酸異丙酯和聚氧丙烯組成的組。
8.按權利要求5的乳狀液，其中動物油選自由角鯊烯和角鯊烷組成的組。
9.權利要求1的乳狀液，其中第二種表面活性劑選自由poloxamer331、poloxamer461、poloxamer520.5、Span80、一油酸脫水山梨(糖)醇酯、三硬脂酸脫水山梨(糖)醇酯和Arlacel186組成的組。
10.一種穩定的水包油包水多重乳狀液，含有在一油相內的分散的內部水相，所述油相在一連續的外部水相中，內部水相含有親水一親脂平衡值近似小於2的有效量的第一種表面活性劑，而油相含有第二種表面活性劑。
11.按權利要求10的乳狀液，其中外部水相含有第三種表面活性劑。
12.按權利要求11的乳狀液，其中第三種表面活性劑選自由poloxamer403，Tween80，poloxamer188或其混合物組成的組。
13.按權利要求12的乳狀液，其中第三種表面活性劑是poloxamer403。
14.按權利要求10的乳狀液，其中第一種表面活性劑有下列分子式其中疏水部分(C3H5O)的平均分子量近似在3000至15000之間，而親水部分(C2H4O)的重量百分比近似在2%和15%之間。
15.按權利要求10的乳狀液，其中第一表面活性劑有下列分子式其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似為10，000，而親水部分(C2H4O)的重量百分比近似為4%。
16.按權利要求10的乳狀液，其中第一種表面活性劑有下列分子式其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量在近似5200，而親水部分(C2H4O)的重量百分比近似為5%。
17.按權利要求10的乳狀液，其中油選自由植物油、動物油和礦物油組成的組。
18.按權利要求17的乳狀液，其中植物油是花生油。
19.按權利要求17的乳狀液，其中礦物油選自由drakeol 6VR、十四酸異丙酯和聚氧化丙烯組成的組。
20.按權利要求17的乳狀液，其中動物油選自由角鯊烯和角鯊烷組成的組。
21.按權利要求10的乳狀液，其中第二種表面活性劑選自由poloxamer331、poloxamer461、poloxamer520.5、Span80、一油酸脫水山梨(糖)醇酯、三硬脂酸脫水山梨(糖)醇酯和Arlacel186組成的組。
全文摘要
本發明涉及油包水和水包油包水多重乳狀液及其製備方法，克服了許多先前的乳狀液的局限，而且可用於許多場合包括但並不局限於疫苗輔助劑、藥品、化妝品以及各種日用和工業用途的優良製劑。
文檔編號A61K9/113GK1073889SQ9210884
公開日1993年7月7日 申請日期1992年6月26日 優先權日1991年6月27日
發明者R·L·亨特, C·E·苯尼特 申請人:埃默裡大學