藥用劑量單位的製作方法

2023-11-01 17:13:52 1

專利名稱:藥用劑量單位的製作方法
本發明是關於腸胃外給藥的配製，尤其是用於溶解血栓治療的藥用劑量單位。
人體組織纖維蛋白溶酶原活化劑(t PA)是一種糖蛋白，它約有70000道爾頓(質量單位)及527個胺基酸。它是以人體組織的變化而分泌的及在血清中天然存在。t PA的功能在於凝結溶解使得纖維蛋白溶酶原轉化成纖維蛋白溶酶。t PA是親合性的及在纖維蛋白存在下表現是比較活波的。因而，t PA用於治療纖維蛋白酶聯合混亂，如血管極度的血栓形成、急性心肌梗塞和肺栓塞。這可以見Rijken等人在生物化學，生物物理學報580∶140(1979)，Vetterlein等人在生物化學雜誌254∶575(1979)，Rijken等人在生物化學雜誌256∶7035(1981)和Matsuo等自然學291∶590(1981)的文章。
t PA是某些細胞線包括Bowes黑色瘤細胞線過度產生的。見Wilson等人在癌症研究40∶933(1980).Collen等人在EP-A-41，766上公開了Bowes黑色瘤衍生物t PA的純化方法;Wilson在EP-A-113，319公開了用獨立的血清Bowes黑色瘤細胞線製備和純化t PA的方法。
t PA也可以用再生DNA工藝來製備。Opdenakker等人在歐洲生物化學雜誌121∶269(1982)公開用於t PA的mRNA分離方法;Edlund等人在Proc.Natl.Acad.Sci.USA80∶349(1983)公開了用於部分t PA的cDNA分離方法;Pennica等人在自然學301∶214(1983)公開了用於t PA在大腸桿菌中的t PA的cDNA凝結方法;Goeddel等人在EP-A-93，619及Levinson等人在EP-A-117，059公開了從在大腸桿菌中及在中國侖鼠卵巢細胞中的t PA的cDNA凝結方法。
Brouty-Boye在生物/工程1984年9月第1058頁報導了用人胚胎肺細胞製備t PA的方法。
Robinson在W084-01786上揭示了一種改進的t PA，這改進後的t PA缺少存在於天然t PA中的全部和部分的碳氫化合物部分。
t PA不能很好地溶於水，當PH為7.0時它在水中的溶解度是0.1mg/ml，因而在純化時，通常溶解t PA要用特別的增溶劑，這些增溶劑包括離液序列高的變性劑，如脲素和硫氰酸;表面活性劑如淨化劑;碳氫化合物如甘露糖醇及蛋白質如白蛋白和明膠雖然這些溶劑表現上看是改進t PA在水中的溶解度，但是t PA溶液傾向於不穩定，因而作為合適的腸胃外給藥還未得到公認及不能大量使用。
Wilson在EP-A-113，319中提出了加入一個非離子性的淨化劑避免表面吸收來改進溶解度。Wilson公開了一個藥物組成例子，在0.3摩爾氯化鈉和0.01%吐溫
80中含有0.075mg/ml的t PA。
Goeddel等人在EP-A-93，619公開了t PA可以用標準工藝配製並報導了一個實例一種藥水內含有25，000國際單位的t PA，25mg甘露醇與45mg氯化鈉的5ml水溶液及用0.9%氯化鈉混合。
Collen等人在EP-A-41，766闡明了t PA可以用標準工藝配製或不需要如氯化鈉、甘油、甘露醇和白蛋白等的添加物。一個可解釋的實例∶藥物組成含有t PA，0.001%吐溫
80和0.01-1%的白蛋白或存在於磷酸鹽緩衝的食鹽溶液中的甘露醇。
Yoshizaki等人在EP-A-112，940公開了白蛋白可以用作為t PA的穩定劑。
Murakami等人在EP-A-123，304公開了加入明膠可以使t PA穩定。
Kruithof等人在生物化學雜誌226∶631-636(1985)公開了一個用於由獨立的Bowes黑色瘤細胞製備出t PA的純化方案培養基離心的步驟，將吐溫
80和Na N3加入到離心後的上層清液中，用6M鹽酸調節PH到4.5，溶液通過SP-Sephadex層析柱，用在醋酸鈉緩衝劑中的氯化鈉洗脫t PA，其PH值為4.5(0.1M醋酸鈉，0.25M氯化鈉，0.001%吐溫
80，0.05%Na N3)。收集部分洗脫液，濃縮到t PA濃度為0.93mg/ml(42，800國際單位/每毫升)，在醋酸鈉緩衝劑中通過Sephadex G-100層析柱(50mM醋酸鈉，0.5M氯化鈉，0.01%吐溫
80，0.05%Na N3，PH4.5)，將產品濃縮到t PA濃度為0.38mg/ml(35，000國際單位/每毫升)然後在-70℃保存。
美國診斷學公司有銷售凍幹的t PA。用於再生的Vendor′s程序為「用0.1M醋酸/醋酸鈉緩衝劑先使其PH值為3.9來調節理想的PH值，並加入1mg/ml的白蛋白來避免測定」。
本發明的一個目的是配製一種適用於製備無菌的t PA藥用劑量單位的藥物配製，它不需要用典型的增溶劑/穩定劑如離液序列高的試劑、表面活性劑、變性劑和碳氫化合物來獲得高溶解度，也就是在水中的溶解度大於0.1mg/ml。
本發明的另一個目的是製備一種在室溫相對穩定的t PA藥物配製。
本發明還有一個目的是製備一種能適用於腸胃外給藥的t PA藥物配製。
為達到本發明的這些和其它的目的，下文將充分敘述。
一方面，本發明是一個用於腸胃外給藥的t PA無菌藥用劑量單位，其包括t PA在PH3.5-5.5下，在一個含有緩衝劑的藥物可接受的溶劑中。
另一方面，本發明是一整套包括一個或多個無菌內含物的凍幹形式t PA，及一個或多個用於重新構成的無菌內含物溶液，在這裡緩衝劑是由一種或兩種容器和緩衝劑提供的。選擇使用用於重新組合的溶液和用於重新組合溶液量以及t PA的量，以便於根據混合容器裡的物質來提供，這個重新組合的產品是一種用於腸胃外給藥的藥用劑量單位，其包括在緩衝劑中含有0.1-15%mg/ml的t PA，藥物上可接受的溶劑，PH3.5-5.5。
附圖是t PA0.39mg/ml(除了其它另有指明以外)在脲素或醋酸/醋酸銨溶液中最初退化(失去活性)速率的圖示表。
現在敘述的是t PA在沒有增溶劑或穩定劑存在下當PH3.5-5.5時有很高的溶解度，如在PH4.0時(0.1M醋酸銨)t PA的溶解度約大於15mg/ml;在PH5.0時(0.1M醋酸銨)t PA的溶解度近似於3mg/ml。而前面的情況是在水中當PH7.0時t PA的溶解度為0.1mg/ml。
在本發明的配製中，t PA在PH4.0的溶解度是可以同通過用2M脲素在PH7.5得到的溶解度相匹配。然而，在本發明的配方中，不需要一些增溶劑存在來得到高的溶解度，因為這些增溶劑滲透利尿的並且當與t PA共同結合給藥時會引起不期望的付作用。
有關本發明已揭示的和在此所要求的再一表明，t PA在指定的PH範圍內是高度穩定的。在本發明的藥用劑量單位裡，這種增加穩定性在低的及高的t PA濃度裡是明顯的。例如，在下列表中報導了t PA的活性百分數，該t PA是在低濃度(0.39mg/ml另有規定除外)，40℃在脲素(2M脲素，0.3M氯化鈉，20mMtris-鹽酸和0.01%吐溫
80，PH7.5)或100mM醋酸銨中，其PH值用S-2251測定為3.5-5.5，此S-2251測定敘述於Weinderg等人在Immunol.Meth.75∶289(1984)。按照標準在標準情況下，高溫用來促使t PA失去活性。
脲素 醋酸銨天 pH7.5＊pH7.5 pH3.5 pH4.0 pH4.5 pH5.0 pH5.5 pH4.0＊0 100 100 100 100 100 100 100 1001 67 88 652 51 84 84 80 94 923 19 24 71 90 77 90 844 13 665 246 207 2 53 62 81 82 658 9 49 63 62 81 62 7210 411 37 37 56 82 69 69 521213 1814 34 40 70 62 6015 17 2316 22 16 53 58 2418 15 9 63 55＊1.3mg/ml＊＊9.8mg/ml
上述結果記錄列表於附圖中。這個結果與t PA在100mM醋酸溶液中的電泳分析是一致的。t PA在100mM醋酸溶液中40℃超過3星期也不退化，這是用聚丙烯醯胺膠電泳在PH4.0，4.5，5.0和5.5中測出的，在40℃PH3.5三星期後出現小波段，其相應為12，16和21千道爾頓。
本發明另一方面是，雖然在PH約低於7時t PA是極大的不活波，但當PH恢復到約為7時它的活性也恢復了。因此在對於病人需要治療血栓的用藥時，本發明的t PA劑量單位其環境PH變為7，t PA就具有活性了。本發明的藥用劑量單位在低溫時增加穩定性，因此最好不要在大於室溫保存，即大約在20℃-25保存。雖然，在本發明的配製中的t PA低溫下如0-15℃是比較穩定的，但本發明的藥用劑量單位其優點是在較高的溫度如＞20℃時t PA仍是穩定的，可以用前面報導的結果證明。在4℃時，不僅在2M脲素溶液(PH7.5)中的，而且是在100mM醋酸銨溶液(PH4.0)中的t PA在幾個星期之後，基本上保持了全部的活性。在室溫(約22℃)，t PA在本發明的配製中於幾個星期裡也將穩定的。如果希望長期保存，t PA可以用適當的賦形劑凍幹保存，然後再組成本發明的藥用劑量單位以適於立即使用或比較短期保存。
參照上面所述可以獲得結果為，能使用由在血清存在下從中口大田鼠卵巢(CHO)細胞生長的再組合來製得的t PA。然而，本發明包括從其它來源的t PA所組成的藥用劑量單位，包括血清、黑色瘤細胞、哺乳細胞血清、細菌、酵母菌、昆蟲細胞、植物細胞和其他哺乳細胞，可以是再生的或天然的。本發明還可以適用於t PA的其他形式，它包括單鏈t PA、異體t PA(即在沒有重大影響異體t PA活性、溶解度、穩定性的情況下t PA中的胺基酸有一個或幾個發生變化)和改變了葡萄糖殘基結構的t PA。
此外，對於醋酸銨，其他藥物上可接受的緩衝劑可以用於本發明的藥用劑量單位，其中有用的緩衝劑為下列酸和它的鹽的混合物醋酸、己二酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸、天門冬氨酸、穀氨酸、其它在期望範圍內的緩衝劑並且是有用於本發明的酸包括穀氨酸、馬來酸、富馬酸、琥珀酸、庚＝酸、β-丙氨酸和烯醇羥基丙酮酸。最好陰離子是醋酸根，最好陽離子是鈉和銨。
本發明藥用劑量單位中緩衝劑的濃度可以選擇維持在PH3.5-5.5，最好是4.0-5.0，更好地選擇在4.0-4.8。典型的例子，緩衝劑濃度約為在適當酸中的10-200mM，最好是20-100mM鈉或銨鹽。緩衝劑是用標準工藝製備的，即將氫氧化鈉加到100mM的醋酸水溶液中選擇一個有利於本發明的PH範圍，從而用來製備本發明的藥用劑量單位，其中緩衝劑是100mM醋酸鈉。
更好的是，本發明的藥物配製為一種水溶液。然而，有一定的極性、與水混溶和非水溶性溶劑也可適用於腸胃外的藥物配製，這些溶劑可以用於本發明，只要基本上不對t PA的活性及穩定性產生有害的效果，這些溶劑是否有用可以用常規的實驗鑑定。
除了t PA和緩衝劑以外，本發明的藥用劑量單位還可以含有少量的適用於腸胃外給藥的其它試劑，例如防腐劑，象乙基汞硫代水楊酸鈉、氯丁醇或對甲苯及強度調節劑象氯化鈉、葡萄糖或甘露醇，本發明的藥用劑量單位最好是等滲的(250-310mOSM/kg)。Wang等人在腸胃外藥物學會雜誌34∶452(1980)報導了在腸胃外藥物配製中使用賦形劑。此外，本發明的藥用劑量當其住還能包括加入藥物活性劑如纖維蛋白、強心劑、antiarrythmic或降血壓劑。
t PA在本發明的藥用劑量單位中的藥物穩定性可以用包括加入親水性聚合的冷凍保護劑進一步增加，如羥烷基纖維、明膠、阿拉伯膠、聚乙烯吡咯烷酮(分子量10，000-60，000)及聚亞烷基二醇如1，2-亞乙基二醇(分子量4，000-40，000)。這些試劑的使用在凍幹時或再生時增強在溶液中的穩定性(使失活及蛋白質退化減少到最低程度)，最好的這樣試劑是分子量為20，000-50，000的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。
這些試劑可以以溶液或者粉末形式加到t PA的配製中。最好，在凍幹前，把這些試劑加入到本發明的t PA配製中，使得在再生和試劑在最終時，再生劑量單位仍是一個安全和有效的量。就分子量為40，000的聚乙烯吡咯烷酮來說(Plasdone30)它的用量約是1-15mg，最好是4-10mg/每1mg的t PA。對於明膠來說，適用於用大的量來達到增加穩定性，例如它的用量是10-1000mg/每1mgt PA。
本發明的藥用劑量單位含有t PA為0.1-15mg/ml，最好為0.5-10mg/ml，它是用藥物化學的標準工藝製備的。如凍幹的t PA可以與一個適當的緩衝劑重新組合，在溶液中的t PA可以滲析交換適當的緩衝劑或t PA溶液的PH可以用酸、鹽或緩衝劑調節，這樣，本發明的藥用劑量單位包括那些已凍幹的劑量單位，以便在於一個水溶性的溶劑重新組合時，得到本發明藥用劑量單位的溶液形式。按照慣例，t PA最後一步的純化是可以在PH3.5-5.5下，在適宜地，含緩衝劑水溶液情況下進行。
本發明的藥用劑量單位的製備是為了用於患病者，尤其是人類患病者;t PA的腸胃外有效量滿足於溶解血栓的治療，特別是靜脈內的、冠狀動脈內的及大部分是動脈內的。t PA在劑量單位中的確切濃度及給予的藥用劑量單位中的確切體積是取決於指定或各種條件。
最佳的給定劑量單位可以按標準的藥物和醫學實踐得到。對於一個典型的心肌梗塞(acute M I)在超過10-180分鐘(min)時間內，最好約30-90分鐘給予的總劑量為25-125mg，例如Collen等人在《循環》第70卷第1012頁(1984)報導了急性心肌梗塞病人的治療是在超過30-120分鐘的時間內給予靜脈注射0.5-0.75mg/kg(或35-53mg/70kg(每))。Collen等人報導的配方是每10ml藥水中含有0.5mg/mlt PA。Sobel等人在《循環》第69卷第983頁(1984)報導了對於急性心肌梗塞的病人給予注射200-400×103國際單位(IU)的t PA。Van de Werf等在新英格蘭醫學雜誌，第310卷第609頁(1984)報導了對急性心肌梗塞病人在靜脈注射(i.v.)和冠狀動脈內(i.c.)給藥t PA的劑量範圍，從約3×105IU/15min i.c.-約1.4×106IU/35min i.v.。Robinson在Wo84-01786報導了對於患有中度血栓病人給予0.10-1.0mg/kg改變的t PA注射到8個劑量，該t PA是天然分子中缺少部分碳氫化合物的。
對於急性心肌梗塞的患者，藥物的劑量單位是藥團或注射劑，如備用給藥的小藥囊、安瓿、藥水或含有直到10毫升的注射劑，t PA的濃度為1-15mg/ml。象藥團型的注射可以用靜脈注射的方式進行，內含t PA0.1-15mg/ml。對於其它表現，如正在形成的心肌梗塞、深度血管的血栓形成(DVT)和肺栓塞(PE)，典型的藥物劑量單位是靜脈注射形式，如i.v.袋或瓶能按常規方法與靜脈套管結合。
因而，最好的藥用劑量單位是藥團形式，可以保存在藥水中、小藥囊中、安瓿或注射劑中，可備用於急症情況。
最好的藥用劑量單位含有t PA1-10mg/ml的1-10ml，最好為2-6mg/ml的2-6ml。這些藥團形式的劑量單位用於簡單注射時，被配製成含有2-50mg，最好是5-30mg和更好是10-20mg的t PA。另一個最好的藥用劑量單位是靜脈注射形式，它可以保存在大的容器中(100-1000毫升)。一個單位最好含有t PA0.1-10mg/ml，更好是0.5-5mg/ml，如在簡單的注射器內，含有t PA是10-1000mg，最好是50-500mg。本發明第三個最好的具體表現結合了兩個特性，如藥水、注射劑或其它藥團類型結合成注射劑形式。
凍幹的t PA可以含有以凍幹的形式藥物上可接受的緩衝劑，它是用於在無緩衝劑的溶液中最後再組合，或當凍幹化的賦形劑是醋酸銨時，凍乾產品可以在緩衝溶液中重新組合。不管怎樣，凍乾產品可以保存在無菌的安瓿或其它容器中，為了與一個無菌容器中的溶液配製成重新組合溶液及用於以注射或注入方式進行最後的或直接的靜脈給藥。因而，本發明第四個具體的優點是，本發明是一整套包括用一個或多個凍幹形式t PA的無菌容器與一個或多個獨立的有溶液的無菌容器重新組合的用具。重新組合的溶液，t PA的用量與在簡單的用具中，溶液的用量是有選擇的，以便提供一個最後的重新組合產品，此產品含量為0.1-15mg/ml，PH的選擇可以參照本發明，最好的重新組合溶液是一個5%的葡萄糖水溶液。t PA的量和用於重新組合的溶液量是有選擇的提供給一個最後的重新組合產品，或是前面所述的最好象液體注射或注入形式的劑量單位。於是一套製備一個最好的藥團形式的用具包括在一個或多個無菌容器內含有t PA2-50mg，最好是5-30mg，在一個或多個第二種容器內有1-10ml溶液，最好是2-6ml，重新組合，以致於二個容器內的成份結合，得到一個包括t PA濃度從1-10mg/ml，最好是2-6mg/ml的產品。一套有關製備最好的注入劑形式的用具是包括一個或多個無菌容器，內含t PA10-1000mg，最好是50-500mg，和1個或多個其它無菌容器內有100-1000ml溶液，重新組合，以致使容器內的成份結合，得到一個包括t PA濃度在0.1-10mg/ml，最好是0.5-5mg/ml的產品。最好是對於一個劑量單位的全部t PA放在一個單一的容器中及用於作為這劑量單位的重新組合的全部溶液是放在第二個單一的容器內。一套用於製備本發明的藥用劑量單位的用具可以包括一個多層的無菌容器，例如一個二層的容器，其中一層含有凍幹的t PA，第二層含有用於重新組合溶液，二層之間用一個易碎的擋板隔開，以致可以通過敲碎擋板來無菌混合每一個組成。上述的一套方法已被Univial無菌的二層藥水(Abbot Laboratories，North Chicago，Illinois)及Hypak的液體/固體乾燥物TM注射器所例證。指出t PA和用於重新組合的用量以及施藥方案的標籤或插入說明也包括在內。
下面的實例從表1-9是本發明藥用劑量單位的例證。
例1一個用無菌溶液注滿的無菌注射器，其中含有t PA 5mg100mM醋酸/醋酸銨 5ml氯化鈉 0.5%(調節到等滲)PH 4.0例2一個用無菌溶液注滿的無菌注射器，其中含有t PA 50mg60mM醋酸/醋酸銨 5ml葡萄糖 3%(調節到等滲)氯丁醇 0.5%PH 3.5例3一個用無菌溶液注滿的無菌注射器，其中含有t PA 5mg100mM檸檬酸/檸檬酸鈉 10ml氯化鈉 0.13%(調節到等滲)對甲苯 0.1%PH 5.5例4一個用無菌溶液注滿的無菌注射器，其中含有t PA 5mg
100mM檸檬酸/檸檬酸鈉 10ml甘露醇 0.8%(調節到等滲)對甲苯 0.1%PH 5.5例5一個用無菌溶液注滿的用於靜脈注入的無菌器，其中含有t PA 100mg50mM穀氨酸/穀氨酸鈉 1000ml氯化鈉 0.7%(調節到等滲)PH 4.5例6一個用無菌溶液注滿的用於靜脈注入的無菌器，其中含有t PA 500mg50mM脂肪酸/脂肪酸鈉 500ml乙汞硫代水楊酸鈉 0.005%氯化鈉 0.7%(調節到等滲)PH 4.0例7一個用無菌溶液注滿的用於靜脈注入的無菌器，其中含有t PA 1000mg100mM醋酸/醋酸銨 100ml葡萄糖 3%(調節到等滲)PH 4.0例8一個用具包，包括(1)一個內含10mgt PA的無菌藥水，此t PA是一個包括t PA(10mg/ml)在100mM醋酸銨(PH4)和30%甘露醇的凍幹賦形劑，(2)一用於重新組合的無菌藥水，內含100mM醋酸銨10mlPH4.0。
例9一個用具包，包括(1)一個內含1000mgt PA的無菌藥水，此t PA是一個包括t PA(15mg/ml)在100mM醋酸銨(PH4)和19%甘酸氨的凍幹賦形劑，(2)一個無菌的藥瓶，內含用於重新組合的100mM醋酸銨1000mlPH4.0。
例10取1ml內含10mg/ml t PA的0.1M醋酸銨溶液加進一個20ml凍幹藥水，然後分別取出4ml按式A及B配製成兩個賦形劑，如下表示A B(毫克/藥水) (毫克/藥水)PVP(聚乙烯吡咯烷酮C-30) 64 64L-穀氨酸單鈉鹽 16 -脂肪酸 6.4 6.4t PA 10 10PH(本體溶液) 4.3 4.2＊＊PH是用氫氧化鈉調節的。
上述配製的溶液可以按下式凍幹藥水在-50℃過夜擱架凍結。
循環乾燥按下法進行(1)-25℃，100um Hg(13巴)，84小時;(2)O℃，100um Hg(13巴);8小時和(3)25℃，10-30um Hg(1.3-3.9MPa)，24小時。
t PA的調節溶液(t PA1.0mg/ml在0.1M醋酸銨中)可以在5℃保存。例1樣品(Ⅰ)凍幹形式可以在-15℃保存23天，然後重新組合併在24小時後用S-2251分析儀分別在5℃，25℃和40℃進行分析。-15℃時的凍幹塞與重新組合溶液在5℃時幾乎不用保存，也就是說，重新組合與分析立即進行凍幹。例2樣品(Ⅱ)可以在40℃凍幹形式保存23天，然後重新組合，在24小時以後，用S-2251分析儀分別在4℃和25℃進行分析。例3樣品(Ⅲ)在40℃凍幹形式保存3個月，然後重新組合，在24小時以後，用S-2251分析儀分別在4℃和25℃分析。所有的實例樣品均用5%葡萄糖重新組合到1.0mg/ml。重新組合的溶液第23天40℃時的PH是A式PH4.5;B式PH4.3。A式和B式溶液的滲透性是A為298mosm;B為274mosm。樣品的活性以百分比對照，如下表報導。
樣品Ⅰ 樣品Ⅱ 樣品Ⅲ24小時 24小時 0小時 24小時5℃ 25℃ 40℃ 4℃ 25℃ - 4℃ 25℃A 93 99 90 96 91 91 91 90B 99 90 93 90 95 91 93 91對照 10011001100210031 6.87×105IU/mg2 6.08×105IU/mg3 5.67×105IU/mg例11式A和式B兩個t PA試驗實質上是象前面所述方法製備的，裝進5ml藥水，每份藥水內含A BPVP(聚乙烯吡咯烷酮c-30) 6.4mg 6.4mgL-天冬氨酸 1.5mg -脂肪酸 0.7mg 0.2mgt PA 1.0mg 1.0mgPH(本體溶液) 4.4 4.1
每份藥水的總體積 0.5ml 0.5ml＊PH是用氫氧化鈉調節的這藥水實質上是按前面所述方法凍幹的。一批在-15℃保存到第7天，在凍幹後重新組合併分析，立即進行凍幹，接著重新組合，在重新組合於室溫(20-25℃)24小時後進行分析。另一部分藥水保存在40℃，然後與上述相似的方法重新組合併分別在凍幹後七天、三周、一個月進行分析。所有的凍幹塞用水再生，其PH約為4.2-4.6。每一點的活性可以與一個含有t PA1mg/ml在醋酸銨緩衝劑內的，PH4.0保存於5℃的對照配液相比較，結果以百分比對照報導如下0天 7天 3周 1個月0小時 24小時 0小時 24小時 0小時 24小時 0小時 24A 107 93 100 97 98 97 91 97B 104 97 107 92 103 100 92 94例12實質上是按上述例10與例11的描述方法，10ml的藥水製備含有明膠 5mg穀氨酸單鈉鹽 5mg甘露醇 15mg氯化鈉 1.7mgt PA 0.1mg每份藥水總體積 1.2ml藥水進行凍幹，用0.1ml的0.1M醋酸銨(PH4)再生並立即分析。該藥水保存於40℃，分別在第10天、第16天和一個月時進行分析，與一個對照關配液(0.1mg/mlt PA在0.1M醋酸銨緩衝劑中PH4，5℃)比較活性，其中對照的活性百分比報導如下0天 10天 16天 1個月
0小時 24小時 0小時 24小時 0小時 24小時 0小時 24小時89 82 105 83 91 83 99 78例13實質上是按上述例10和例11所描述的方法，5ml的藥水配製內含PVP(聚乙烯吡咯烷酮C-30) 6.4mgL-穀氨酸單鈉鹽 1.6mg脂肪酸 0.4mgt PA 1.0mgPH(本體溶液) 4.4每份藥水總體積 0.5ml藥水進行凍幹，然後用1.0ml0.1M的醋酸銨(PH4)再生並立即分析，將藥水保存在40℃，然後在第8天和1個月時分析，與一個對照配液(1mg/ml t PA在0.1M醋酸銨緩衝劑中，PH4.0，5℃)進行活性比較，結果以百分比報導如下0天 8天 1個月0小時 24小時 0小時 24小時 0小時 24小時106 112 101 109 100 100從上述例10、11、12、13證明了t PA的配製中含有聚合的低溫防護劑，尤其是聚乙烯吡咯烷酮和明膠，經過凍幹和隨即再生增加了穩定性。
上面的敘述和實例充分地公開了本發明，最好由其具體化。但本發明並不受其限制，特別是這裡的附圖，更確切地應是包括所有的改進及下述權利要求
的範圍。〉
權利要求
1.一種用於腸胃外給藥的tPA無菌的藥用劑量單位，包括藥物可接受的0.1-15mg/mltPA的PH為3.5-5.5的緩衝劑水溶液。
2.按權利要求
1所述的藥用劑量單位是一種藥團形式，其中含有1-10ml濃度為1-10mg/ml的t PA，並且t PA為2-50mg。
3.按權利要求
1所述的藥用劑量單位是在一個容器裡一種藥團形式，其中含有2-6ml濃度為2-6mg/ml的t PA並且t PA量為5-30mg。
4.按權利要求
1所述的藥用劑量單位是在一個容器裡一種藥團形式，其中含有100-1000ml濃度為0.1-10mg/ml的t PA，並且t PA量為10-1000mg。
5.按權利要求
1所述的藥用劑量單位是在一個容器裡一種藥團形式，其中含有100-1000ml濃度為0.5-5mg/ml的t PA，並且t PA量為50-500mg。
6.按權利要求
1所述的藥用劑量單位，其進一步包括一個一定量的低溫防護劑，它在穩定t PA中是安全而有效的。
7.按權利要求
6所述的藥用劑量單位，其低溫防護劑是明膠或聚乙烯吡咯烷酮。
8.按權利要求
7所述的藥用劑量單位，其低溫防護劑是分子量為40，000的聚乙烯吡咯烷酮，其用量為每毫升t PA為1-15毫克。
9.按權利要求
1，2，4，6，7或8，所述的藥用劑量單位，其PH為4.0-5.0。
10.按權利要求
1，2，4，6，7或8，所述的藥用劑量單位，其同一個藥物上能接受的醋酸鹽、脂肪酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、天門冬氨酸鹽或穀氨酸鹽)緩衝到PH為4.0-5.0。
11.按權利要求
10所述的藥用劑量單位，其中鹽的陽離子是鈉或銨。
12.按權利要求
10所述的藥用劑量單位，其中是同醋酸鈉或醋酸銨緩衝的。
13.按權利要求
1，2或4所述的藥用劑量單位，包括每毫克t PA使用4-10毫克分子量為40.000的聚乙烯吡咯烷酮，並且用脂肪酸緩衝到PH為4.4-4.8。
14.一套用具，其中包括一個或多個凍幹形式t PA的無菌容器和一個或多個用於重新組合的無菌容器，其中提供給一個或二個容器緩衝劑，在這裡緩衝劑用於重新組合的溶液，t PA的量和用於重新組合溶液量是根據容器中的各種成份結合選擇的以便提供給重新組合的產品，該重新組合的產品是一個用於腸胃外給藥的藥物劑量單位，包括0.1-15mg/ml的t PA，a該t PA是在一個緩衝的藥物上可接受的溶劑裡，PH為3.5-5.5。
15.一套按權利要求
11所述的用具包括在一個或多個無菌容器中有2-50mg的t PA和在一個或多個無菌容器中有用於重新組合的溶液1-10ml。
16.一套按權利要求
11所述的用具，包括在一個或多個無菌容器中有5-3mg t PA和在一個或多個第二個無菌容器中有用於重新組合的溶液2-10ml。
17.一套按權利要求
11所述的用具，包括在一個或多個無菌容器中有10-1000mg t PA和在一個或多個第二個無菌容器中有用於重新組合的溶液100-1000ml。
18.一套按權利要求
11所述的用具，包括在一個或多個無菌容器中有50-500mgt PA和在一個或多個第二個無菌容器中有用於重新組合的溶液100-1000ml。
19.一套按權利要求
14所述的用具，其中包括在一個或多個t PA的容器中，或者在一個或多個用於重新組合的溶液容器中，或者在雙方這些中含有一個低溫防護劑，在再生產品中含有一定的低溫防護劑，這低溫防護劑在穩定t PA裡，它是安全和有效的。
20.一套按權利要求
19所述的用具，其中低溫防護劑是明膠或聚乙烯吡咯烷酮。
21.一套按權利要求
20所述的用具，其中低溫防護劑是分子量為40，000的聚乙烯吡咯烷酮，它的用量是每毫克t PA為1-15毫克。
22.一套按權利要求
14、15、17、19、20或21所述的用具，其中重新組合產品具有PH4.0-5.0。
23.一套按權利要求
14、15、17、19、20或21所述的用具，其中緩衝劑是藥物上可接受的醋酸鹽、脂肪酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、天門冬氨酸鹽或穀氨酸鹽，緩衝重新組合的產品到PH為4.0-5.0。
24.一套權利要求
23所述的用具，其中緩衝劑中的陽離子是鈉或銨。
25.一套權利要求
23所述的用具，其中緩衝劑是醋酸鈉或醋酸銨。
26.一套權利要求
14、15或17所述的用具，其中一個或多個t PA的容器包括分子量為40，000的聚乙烯吡咯烷酮，它的用量是每毫克t PA和脂肪酸為4-10毫克，這樣，重新組合時，重新組合的產品的PH是4.4-4.8。
27.一種用於病人溶解血栓治療的治療方法，其中包括腸胃外給於病人按上述權利要求
1到13中的任何一項的藥用劑量單位。
28.一種用於腸胃外給藥的t PA的無菌藥用劑量單位的製備方法，其中包括在PH3.5-5.5下將t PA溶於藥物上能接受的水溶性劑中，成為一個濃度為每ml溶液中含0.1-15mg的t PA。
29.按權利要求
28所述的方法，其中包括向t PA溶液中加進一個低溫防護劑。
30.按權利要求
29所述的方法，其中包括凍幹含有t PA0.1-15mg/ml的大量水溶液配液，同一個有機酸和它的鹽緩衝到PH為3.5-5.5，並含有一個低溫防護劑，然後將凍幹的產品與一個被腸胃給藥所接受的水溶性溶劑重新組合，其PH保持在3.5-5.5。
31.按權利要求
28、29或30所述的方法，其中計量單位用一個或多個脂肪酸、穀氨酸、檸檬酸、醋酸、琥珀酸、乳酸、酒石酸、天門冬氨酸及它們的鹽緩衝到PH4.0-5.0，並且其中的低溫防護劑是聚乙烯吡咯烷酮或明膠。
32.按權利要求
31所述的方法，其中藥用劑量單位用脂肪酸、琥珀酸或醋酸及它們的鹽作緩衝劑。
33.一種用於腸胃外給藥的t PA藥用劑量單位的製備可以按權利要求
28、29、30、31或32中任一項方法。
專利摘要
一種人體組織纖維蛋白溶酶原活化劑(t PA)的藥用劑量單位，包括t PA在pH為3.5-5.5的緩衝溶液中。
文檔編號A61K38/49GK86105526SQ86105526
公開日1987年2月4日 申請日期1987年7月28日
發明者託馬斯·羅伯特·馬萊菲特, 切斯特·艾倫·邁耶斯 申請人:史密絲克萊恩貝克曼公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan