核酸序列分析的製作方法

2023-11-09 23:36:07 1

專利名稱：核酸序列分析的製作方法
發明範圍本發明涉及測定多聚核苷酸序列的方法。
背景技術：
測定多聚核苷酸有重要的科學意義。例如，全球正在雄心勃勃地進行的人類基因組計劃，便是為人類基因組中編碼DNA的30億個鹼基進行繪圖和測序。倘若完成，得到的序列資料庫可作為生物醫學研究空前有力的工具。成功完成該計劃的主要障礙與測序過程中使用的技術有關。
一般用於大範圍DNA測序的重要方法是鏈終止法。該方法由Sanger和Coulson提出(Sanger等人，美國國家科學院院報(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)1977；745463-5467)，需使用在聚合酶反應中摻入到新生的多聚核苷酸鏈中的四種核苷三磷酸的雙脫氧衍生物。摻入後雙脫氧衍生物使聚合酶反應終止，然後通過凝膠電泳將產物分離，分析特定雙脫氧衍生物在鏈中的摻入位置。
雖然該方法得到廣泛使用且結果可靠，但是此方法速度慢、工作量大而且昂貴。
EP-A-0471732提出了另一種測序方法，即通過光譜方法對核苷酸摻入到與靶鏈互補的新生多聚核苷酸鏈中的情況進行檢測。該方法需使用模板和引物的固定化複合物，該複合物與僅含有不同核苷酸的一種的液體接觸。然後採用光譜技術對隨聚合酶催化的模板拷貝的延長而增強的時間依賴性信號進行測量。上述光譜技術為可在倏逝波場內測量分析物中的變化的表面等離子體共振(SPR)光譜法，和螢光測量技術。然而該方法有局限性；SPR技術最嚴重的問題在於，當拷貝鏈的長度增加時，由於鏈的運動使信號的絕對值也超出了倏逝波場，不易檢測到增加。螢光測量技術的缺點是摻入到延長的新生多聚核苷酸鏈中的螢光團會造成背景幹擾。隨著鏈的延伸，背景「噪音」增加，檢測每個核苷酸摻入的所需時間也要增加。這就嚴重限制了該方法在大片段多聚核苷酸測序中的應用。
因此需要多聚核苷酸測序的改進方法，其可明顯提高對多聚核苷酸的測序速率，並優選通過自動化過程進行，從而降低現有方法的複雜性和成本。
發明概述本發明建立在以下認識的基礎上，即通過測量電磁或其他輻射，可以檢測核苷酸摻入到新生多聚核苷酸鏈中時聚合酶發生的構象和/或質量變化。
根據本發明，對多聚核苷酸測序的方法包括步驟(i)在聚合酶反應足以進行的條件下，使靶多聚核苷酸與固定在固體支持物上的聚合酶及不同的核苷酸進行反應；和(ii)通過測量輻射來檢測與靶多聚核苷酸互補的特定核苷酸的摻入。
可用多種技術測量樣品的輻射，包括表面敏感的檢測技術，其中用固體光學表面的光反應的變化表示在該表面的結合作用。在本發明的優選實施方案中，採用的技術為瞬間波光譜法，尤其是表面等離子體共振(SPR)光譜法。
在本發明的一實施方案中，本方法採用的核苷酸包括在3』端任選在5』端，有防止該核苷酸摻入到多聚核苷酸鏈中的封閉基團，但可將封閉基團選擇性地切除以允許進一步進行摻入。通過使用封閉的核苷酸，本方法可在任何時間內用反應中存在的全部核苷酸進行反應。以確保每個已摻入的核苷酸可被檢測的方式選擇性切除封閉基團。因此本方法可以在「實時」的基礎上進行，以實現快速序列分析。
附圖描述通過舉例的方式來描述本發明，僅參考下列附圖，其中

圖1是採用SPR光譜法進行多聚核苷酸序列分析的圖解性說明；和圖2表示每種不同的核苷酸聚合時檢測到的不同反應信號。
圖3表示雙封閉核苷酸的合成步驟。
發明描述用於測定多聚核苷酸序列的本方法包括對聚合酶、靶多聚核苷酸和互補核苷酸之間的動力學相互作用的分析。通過監測反應進行時造成的電磁或其他輻射的變化或吸收，來測量這種動力學相互作用。
此處使用的術語「多聚核苷酸」廣義上講，包括DNA和RNA，包括修飾的DNA和RNA，也包括其他雜交的核酸樣分子如肽核酸(PNA)。
一般地，通過採用電磁輻射、使用表面等離子體共振或核磁共振技術來實施本方法。也可考慮測量輻射變化的其他技術，例如通過全內反射螢光(TIRF)、衰減全反射(ATR)、破壞全反射(FTR)、Brewster角反射光度法、散射全內反射(STIR)或倏逝波橢圓偏振測量術進行光譜分析。
除了需要電磁輻射的技術外，也可考慮其他技術，尤其是光化學技術如化學發光法，和包括共振系統如表面聲波(SAW)技術和石英晶體微量秤(QCM)技術在內的比重測量技術。
一種優選方法是表面等離子體共振(SPR)光譜法，其通過檢測溶液的體相與倏逝波域之間折射指數的差異對溶液性質進行測量。入射的單色光以一定角度自對側的固體光學(傳感器晶片)表面反射到待測樣品。該光進入樣本中很短的一段距離，並受表面相互作用的影響。
合適的傳感器晶片在本領域已知。一般地，其包括光學透明材料如玻璃，和反射薄片如銀片或金片。SPR光譜法綜述見歐洲專利公開文本0648328(在此全部引入供參考)。
另一優選方法是核磁共振(NMR)光譜法，測量化合物的磁性。通過施加磁場和射頻輻射的結合使化合物的核能量定向。當施加給核的能量與自旋狀態之間的能差(與施加的場的方向平行或反平行取向之間的差別)相同時，即達到所謂的共振狀態。通過射頻接收器檢測與自旋狀態的變化有關的能量的吸收和隨後的發射。
本發明方法的一個重要方面是對固定在固體支持物上的聚合酶的使用。固定該酶為本方法獲得成功提供了幾點優勢。首先，大大減少了測量可溶性分子中的能量吸收時出現的隨機「噪音」問題。其次，由於聚合酶可維持在相對於測量區域的特定限制範圍內，減少了由任何無直接關係的底物(如核苷酸)與聚合酶作用而產生的噪音問題。這在用來測量輻射變化的技術需要測量螢光時尤為重要，如在TIRF中，其中背景螢光會隨新生鏈的延伸而增加。還有，使用SPR光譜法時，是在倏逝波場內維持聚合酶反應，因此不論多聚核苷酸的長度如何均可進行準確測量。最後，由於靶多聚核苷酸和寡聚核苷酸引物均非不可逆地與固體表面結合，更新該表面便變得相對簡單，從而可用同樣的固定化聚合酶進行更多的測序反應。
可用本領域已知的標準方法進行固定。具體地，可用標準的胺偶合方法進行固定，使連有配基的胺與，如，葡聚糖或N-羥基琥珀醯亞胺酯-活化的表面結合。在本發明的優選實施方案中，將聚合酶固定在維持該酶和傳感器表面緊密相連的SPR傳感器晶片表面上，該表面可測量折射指數的變化。將生物分子固定到光學傳感器上的方法示例見EP-A-0589867，和Lofas等人，生物傳感器與生物電子(Biosens.Bioelectron.)(1995)10813-822。
本發明使用的聚合酶可以是任何已知類型。例如，聚合酶可以是任何DNA依賴的DNA聚合酶。如果靶多聚核苷酸是RNA分子，則聚合酶可以是RNA依賴的DNA聚合酶，即逆轉錄酶，或RNA依賴的RNA聚合酶，即RNA複製酶。在本發明的一個優選實施方案中，聚合酶為Taq聚合酶。在本發明更優選的實施方案中，聚合酶是大腸桿菌(E.Coli)III型聚合酶全酶(McHenry，生物化學綜述年刊(Ann.Rev.Biochem.)1988；57519)、T7聚合酶(Schwager等人，分子與細胞生物學方法(Methods in Molecular and Celular Biology)(1989/90)；卷1(4)155-159)、或複合有大腸桿菌硫氧還蛋白的T7噬菌體基因5聚合酶(Tabor等人，生物化學雜誌(J.Biol.Chem.)(1987)；2621612-1623)。每種聚合酶都能以高忠實度與靶多聚核苷酸發生結合，並因此甚至在未發生有效聚合的時候維持聚合酶-多聚核苷酸複合物。
III型聚合酶全酶包括可產生加工酶的三個亞組(I)核心聚合酶，包括聚合酶α亞基；(II)β-二聚體亞基，其作為圍繞DNA的手鐲樣結構；和(III)含有τ和γ亞基的亞組，可結合併水解ATP以形成圍繞DNA的β-二聚體。
作為測序過程的第一步，可使靶多聚核苷酸與合適的引物在雜交/聚合緩衝液進行作用。一般地，緩衝液的溫度應足夠高以破壞(或融解)靶多聚核苷酸中存在的任何二級結構。冷卻時，引物與靶互補序列退火。再將該樣品與固定化的聚合酶進行作用，以形成靶多聚核苷酸/聚合酶複合物。
在本發明的一個實施方案中，控制核苷酸的添加，使不同的核苷酸順序加入聚合酶/靶複合物。例如，添加dGTP使之流過聚合酶/多聚核苷酸複合物；然後檢測任何摻入情況。未結合的dGTP流出反應位點，再導入另一種核苷酸。以這種方式，動力學相互作用的檢測可與其時出現的特定核苷酸有關，然後可以確定多聚核苷酸的序列。
不同的核苷酸同時存在時也可以實施本方法。為成功實施之，需要至少在核苷酸的3』位置導入一個封閉基團，但優選在3』和5』端均導入。封閉基團可以是光敏的，能用一定波長的光去除從而得到活性分子。若核苷酸的3』和5』端都摻入了封閉基團，則應能基於光譜吸收度對封閉基團加以區分，即應可通過使用特定波長的光選擇性去除一種封閉基團而不影響其他封閉基團。也希望去除3』端封閉基團所需的光照時間比去除5』端封閉基團長。這樣，封閉基團可通過光譜和時間的方式得以區分。
一般地，光敏性封閉基團在200nm到450nm波長範圍發生光裂解。封閉基團一般衍生自分子式為R1-[O-CO-]X的化合物，其中R1是光不穩定基團，X是離去基團。例如R1是鄰硝基苄基。特別優選的封閉基團包括WO-A-92/10092與WO-A-97/39151中描述的鄰硝基苄基保護基。這些基團包括硝基藜蘆基氧羰基(NVOC)、硝基胡椒基氧羰基(NPOC)、α-甲基-硝基藜蘆基氧羰基(MeNVOC)、α-甲基-硝基胡椒基氧羰基(MeNPOC)和1-芘基甲基氧羰基(PYMOC)。
合適的3』封閉基團為(4，5-二甲氧基-2-硝基苄基)氧羰基，其可通過核苷酸與式(I)的化合物反應形成
其中R是任何合適的酯化基，如甲基。可用360nm波長的光脈衝選擇性去除該封閉基團。
5』端合適的封閉基團是1-(2-硝基苯)乙基(II)
其中是R是任何合適的官能團，如滷素。可於260nm波長選擇性去除該封閉基團。
例如，將雙封閉的核苷酸注射到含有引物的多聚核苷酸上(已與高忠實度聚合酶複合物相結合)，在足以從每一核苷酸末端磷酸釋放封閉基團的波長下使單色光聚焦到聚合酶的上遊。將核苷酸流至結合的聚合酶上，摻入到新生的多聚核苷酸鏈中。然而，由於3』端的封閉基團仍處於結合狀態，只能摻入一種核苷酸。對這種動力學相互作用進行測量可得知摻入到新生鏈中的特定核苷酸的信息。使用的聚合酶應為在反應終止時不易從靶上解離的高忠實度聚合酶。另外，可使用競爭性抑制劑防止聚合酶從靶上解離。
測量完摻入的核苷酸後，將單色光脈衝聚焦到聚合酶催化位點內的封閉基團上，以去除3』端的封閉基團。單色光脈衝時間可比去除5』端所需時間長，這樣僅僅與聚合酶複合物中的核苷酸連接的封閉基團得以去除。這就減少了未與聚合酶複合物連接的核苷酸摻入的可能性。
一旦釋放3』端的封閉基團，另一核苷酸到達聚合酶反應位點時可以繼續聚合酶反應。通過改變去除封閉基團所需的光脈衝防止自由聚合。
儘管優選使用雙封閉核苷酸，如上所述，也可使用僅在3』端帶有封閉基團的核苷酸實施本方法。這種情況下，要用聚合酶的競爭性抑制劑來減少3』端沒有封閉基團的核苷酸摻入到新生鏈中的可能性。合適的聚合酶的競爭性抑制劑是羰基二膦酸酯(COMDP)。
參照附圖，用下述實施例說明本發明。實施例在改進的BIAcore2000系統(BIAcoreAB，Uppsala，瑞典)上進行以下分析，該系統以CM5傳感器晶片(研究級，BIAcoreAB)作為光學傳感器表面。該儀器帶有完整的μm-流體筒(IFC)，可以通過一次樣品注射在4個槽內進行分析。聚合酶的製備按照如所述方法(Millard等人，酶學方法(Methods Enzymol.)(1995)；26222)在纈氨醯-瓊脂糖上通過疏水相互作用色譜法製備大腸桿菌III型聚合酶全酶，並在高鹽濃度下純化。純化後，用Kirkcgaard等人在生物化學分析(Anal.Biochem.)(1972)；50122中所述的離子-過濾技術濃縮該酶。聚合酶的固定按照(Jonsson等人，生物技術(Biotechniques)(1991)；11620-627)所述，將聚合酶固定到傳感器晶片表面。簡言之，用Hepes緩衝液(10mMHepes、150mM氯化鈉、0.05％表面活性劑P20(BIAcoreAB，Uppsala，瑞典)、pH7.4)使傳感器晶片的環境平衡。將等體積的N-羥基琥珀醯亞胺(0.1M水溶液)和N-乙基-n』-(二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)(0.1M水溶液)混合，注射入晶片表面(CM5)使羧甲基化葡聚糖活化。將III型聚合酶核心亞組(160μl，500U)與10mM乙酸鈉(100μl，pH5)混合，注射入活化表面。最後，使傳感器晶片表面殘餘的N-羥基琥珀醯亞胺酯與乙醇胺(35μl，1M水溶液，pH8.5)反應，洗去表面上未結合的聚合酶。在25℃下用連續流動的Hepes緩衝液(5μl/分鐘)進行固定。寡聚核苷酸採用標準的氨基亞磷酸酯(Phosphoramidity)化學法合成寡聚核苷酸。把序列為SEQ ID No.1的寡聚核苷酸用作靶多聚核苷酸，序列為SEQ ID No.2的寡聚核苷酸用作引物。
CAAGGAGAGGACGCTGTCTGTCGAAGGTAAGGAACGGACGAGAGAAGGGAGAG SEQ ID No.1CTCTCCCTTCTCTCGTCSEQ ID No.2在雜交條件下使兩寡聚核苷酸反應形成靶-引物複合物。
再將帶有引物的DNA懸浮於緩衝液(20mM Tris-HCl，pH7.5、8mM氯化鎂、4％(v/v)甘油、5mM二硫蘇糖醇(DDT)、40μg牛血清白蛋白)中，該緩衝液含21μg ssDNA結合蛋白和形成手鐲樣結構所需的DNA聚合酶III亞組(1.6pmol-β-二聚體和195fmolγ亞基)。還有0.5mMATP和60μM羰基二膦酸酯(COMDP)。在此反應中，γ亞基作為分子媒體水解ATP，使β-二聚體亞基移到DNA上形成聚合酶亞組(Studwell等人，UCLA Symp.Mol.Cell.Biol.New Ser.1990；127153)。
將帶引物的DNA/亞組複合物以5μm/分鐘的流速注射到傳感器晶片表面的III型聚合酶上，並通過γ亞基的作用與聚合酶結合。
在本實驗中，需要鎂和ATP使聚合酶III與帶引物的DNA結合。但是鎂也可通過核驗性3』→5』核酸外切酶活性促使引物被切除。通過納入聚合酶活性的競爭性抑制劑羰基二膦酸酯可克服此問題(也可使用缺乏3』→5』核酸外切酶活性的III型聚合酶避免此具體問題)。
在晶片表面保持60μM羰基二膦酸酯的連續流動，防止核酸外切酶活性將引物從靶DNA上切除。摻入兩個封閉基團的核苷酸如圖3所示，每個核苷酸(dCTP、dTTP、dGTP和dATP)在5』端含有1-(2-硝基苯基)乙基封閉基團，3』端含有(4，5-二甲氧基-2-硝基苄基)氧羰基封閉基團。雙封閉核苷酸的合成如下階段1(4，5-二甲氧基-硝基苄基)氧羰基核苷三磷酸的合成。
全部同樣的方法應用於dGTP、dCTP、dTTP。室溫下在15mlDMSO中將dATP二水合物(0.4mmol)與約3mmol的4，5-二甲氧基-2-硝基苯基重氮甲烷混合液避光攪拌40小時，後者由900mg(4mmol)的4，5-二甲氧基-2-硝基苯腙新鮮製備而來(通過按照Wootton與Trentham，生物化學中的光化學探針(Photochemical Probes inBiochemistry)(Nielsen，P.E.，編)NATO ASI Ser.C，272卷，277-296頁(1989)中的方法通過用肼單水合物氯仿溶液處理藜蘆醛而合成)。通過氯仿/甲醇(5∶1v/v)溶劑系統中的TLC來監視反應，發現有Rf為0.54的點與籠閉核苷酸對應。通過60ml乙醚反覆提取來去除DMSO、未反應的重氮化合物和低極性的反應產物。將含有未反應的核苷酸和所需產物及其他物質的剩餘物質溶於最小量的氯仿中，並在矽膠柱(3×30cm)上用快速色譜法分離。用100％氯仿和甲醇/氯仿(95∶5v/v)洗脫去掉柱上的4，5-二甲氧基-2-硝基苯基重氮甲烷疏水性副產物。在旋轉蒸發器上乾燥級分。再凍幹78mg籠閉產物。總產率為45％。用製備性反相HPLC從粗品中直接分離出純度更高的3』封閉的4，5-二甲氧基-2-硝基苄基氧羰基dATP。階段25』1-(2-硝基苯基)乙基基團至3』4，5-二甲氧基-2-硝基苄基氧羰基封閉的dATP的添加。
室溫下在15ml DMSO中將4，5-二甲氧基-2-硝基苄基氧羰基5』dATP(0.4mmol)與約3mmol的1-(2-硝基苯基)重氮乙烷混合液避光攪拌40小時，後者由716.7mg(4mmol)2-硝基苯乙酮的腙與2.9g(30mmol)MnO2(90％)在20ml氯仿中按照Walker等人的方法新鮮製備而來(Walker等人，酶學方法1989；172288-301)，其中所述的腙通過用水合肼乙醇溶液處理2-硝基苯乙酮而合成。通過氯仿/甲醇(5∶1v/v)溶劑系統中的TLC來監視反應，發現Rf為0.68和0.58的一對點，分別與4，5-二甲氧基-2-硝基苄基氧羰基5』dATP的1-(2-硝基苯基)乙酯平伏式的兩個非對映異構體和軸向非對映異構體相對應。用50ml乙醚反覆提取來去除DMSO、未反應的重氮化合物和低極性的反應產物。
將含有未反應的4，5-二甲氧基-2-硝基苄基氧羰基5』dATP和所需的雙封閉dATP及其他物質的剩餘物質溶於最小量的氯仿中，並在3×30cm矽膠柱上用快速色譜法分離。用100％氯仿洗脫去掉柱上的1-(2-硝基苯基)重氮乙烷疏水性副產物。在旋轉蒸發器上乾燥產物。凍幹得到74mg籠閉化合物。總產率為57％。
聚合酶反應緩衝液(1mMTris-HCl pH8.8，5mM氯化鉀，0.15mM氯化鎂，0.01％(w/v)明膠)中每種核苷酸為0.2mM。DNA測序圖1表示SPR傳感系統和流體槽(7)，帶有施加電磁輻射(1)至在傳感器表面帶有固定化的聚合酶(3)的傳感器晶片(2)上裝置，並帶有使不同的核苷酸進入槽內的入口(4)和使脈衝單色光進入槽內的兩個聚焦部件(5)和(6)。
在25℃和10Hz的數據收集速度下，使不同的核苷酸以30μl/分鐘的流速進入流體槽(7)。當核苷酸經過聚焦部件(5)時，發射波長為260nm的單色光脈衝去除5』端的封閉基團。核苷酸然後流到傳感器晶片(2)上，與該處被β-二聚體亞基固定的靶多聚核苷酸/聚合酶複合物接觸。由於引物序列的3』端可以自由反應，核苷酸摻入到靶多聚核苷酸上的互補體時可發生聚合。再通過SPR設備中的p-極化的單色光檢測該摻入。因為已摻入的核苷酸在3』端帶有封閉基團，不會發生進一步的聚合。再在聚合位點通過聚焦部件(6)發射波長為360nm的單色光脈衝。流體槽內的高流速可確保未結合聚合酶的核苷酸在吸收足夠能量以釋放其3』端封閉基團之前從槽內流出。
一旦3』端的封閉基團從聚合的核苷酸中釋放出來，可以發生進一步聚合。
圖2表示測序實驗中摻入到待測新生鏈中的每一核苷酸的結果。結果表明其順序與SEQ ID No.1中的序列互補。
權利要求
1.一種多聚核苷酸的測序方法，包括步驟(i)在聚合酶反應足以進行的條件下，使靶多聚核苷酸與固定在固體支持物上的聚合酶及不同的核苷酸進行反應；和(ii)檢測與靶多聚核苷酸互補的特定核苷酸摻入後的作用結果。
2.權利要求1的方法，其中通過測量輻射來檢測步驟(ii)的作用。
3.根據權利要求1或2的方法，其中輪流使用每種不同的核苷酸來進行步驟(i)和(ii)，直到摻入得以檢測，然後重複上述步驟。
4.根據權利要求1或2的方法，其中在所有核苷酸均存在的情況下進行步驟(i)。
5.根據任一前述權利要求的方法，其中核苷酸包括聚合酶反應後被去除的3』封閉基團。
6.權利要求5的方法，其中可通過脈衝單色光選擇性去除封閉基團。
7.權利要求5或6的方法，其中核苷酸包括三磷酸鏈的末端磷酸基上的另一封閉基團，該封閉基團在3』封閉基團去除前被去除。
8.權利要求7的方法，其中上述另一封閉基團可在與去除3』封閉基團所需條件不同的條件下通過脈衝單色光選擇性去除。
9.權利要求8的方法，其中上述另一封閉基團通過使用與去除3』封閉基團所需持續時間不同的脈衝單色光去除。
10.任一前述權利要求的方法，其中步驟(i)還包括導入聚合酶的競爭性抑制劑。
11.任一前述權利要求的方法，其中步驟(i)的靶多聚核苷酸通過β2二聚體複合物結合到聚合酶上。
12.任一前述權利要求的方法，其中聚合酶為大腸桿菌DNA聚合酶III或T7聚合酶。
13.權利要求1到11中任一項的方法，其中聚合酶為Taq聚合酶。
14.權利要求1到11中任一項的方法，其中聚合酶為逆轉錄酶。
15.任一前述權利要求的方法，其中步驟(ii)包括在一段時間內對共振信號變化的檢測。
16.任一前述權利要求的方法，其中輻射為電磁輻射。
17.根據權利要求16的方法，其中電磁輻射在紅外光譜範圍內。
18.任一前述權利要求的方法，其中步驟(ii)包括使用表面等離子體共振。
19.根據權利要求16的方法，其中電磁輻射在射頻光譜範圍內。
20.根據權利要求19的方法，其中採用NMR檢測核苷酸的摻入。
21.任一前述權利要求的方法，其中多聚核苷酸為DNA。
22.一種上面固定有聚合酶的傳感器晶片。
23.一種3』端和三磷酸鏈的末端磷酸基帶有封閉基團的核苷酸，其中可通過不同波長的單色光去除這兩種封閉基團。
24.根據權利要求23的核苷酸，其中封閉基團衍生自式R1-[O-CO-]X的化合物，其中R1是光不穩定基團，X是離去基團。
25.根據權利要求23或24的核苷酸，其中3』端的封閉基團是鄰硝基苄基氧羰基。
26.根據權利要求23到25任一項的核苷酸，其中末端磷酸的封閉基團是鄰硝基苄基。
27.根據權利要求23到26任一項的核苷酸，其中3』端的封閉基團是(4，5-二甲氧基-2-硝基苄基)氧羰基。
28.根據權利要求23到27任一項的核苷酸，其中末端磷酸的封閉基團是1-(2-硝基苯基)乙基。
29.一種多聚核苷酸的測序裝置，包括光學傳感器晶片、光源、成像設備和光檢測器，其中傳感器晶片如權利要求22所限定。
全文摘要
本發明涉及測定多聚核苷酸序列的方法,該方法包括步驟:(i)在聚合酶反應足以進行的條件下,使靶多聚核苷酸與固定在固體支持物上的聚合酶及不同的核苷酸進行反應;和(ii)通過測量輻射來檢測與靶多聚核苷酸互補的特定核苷酸的摻入。
文檔編號C12N15/09GK1265158SQ9880762
公開日2000年8月30日 申請日期1998年7月24日 優先權日1997年7月28日
發明者D·H·登斯哈姆 申請人:醫療生物系統有限公司