葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感檢測方法

2023-11-05 01:00:47 2

專利名稱：葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感檢測方法
技術領域：
本發明涉及食品中金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測方法，特別是涉及葡萄球菌腸毒素A (SEA)和B (SEB)的檢測方法。
背景技術：
金黃色葡萄球菌是常見的食物中毒致病菌，能引起人和動物多種疾病，其致病性主要與其分泌的腸毒素密切相關。葡萄球菌腸毒素(SEs)是一組耐高熱的低分子量可溶性蛋白，其中SEB是食物中毒的重要致病因子，並被列為生物戰劑的主要毒素之一。SEB蛋白對熱穩定，引起食物中毒的最低濃度是200ng/100g食品，誤食被其汙染食品的人在4 他後引起噁心、嘔吐及腹瀉，因此，研究快速靈敏的檢測SEB和其他多種SEs，如SEA，SEC1, SEC2 等的方法顯得尤為重要，理想的食品檢測手段對SEB的檢測應該達到ng/mL級，而且樣品不需過多的處理。目前，SEs的檢測的方法有單、雙向瓊脂擴散法、反向間接血凝法(RPHA)、固相放射免疫法(RIA)和酶聯免疫吸附法(ELISA)等免疫學方法。血清學方法所需的抗體製備工藝繁雜，周期長，效價受到眾多生物因素的影響。RIA、ELISA和RPHA檢測靈敏度雖然可達ng 級，但其實驗條件要求苛刻，反應中有假陽性出現等缺點限制了其應用範圍。近年來又發展起來的基因探針檢測方法，由於放射性同位素標記探針的半衰期短及放射汙染等缺點限制了該技術的推廣應用。隨著科學技術的發展，出現了分子印跡技術(molecular imprinting technique, MIT)，該技術又稱分子烙印(molecular imprinting)，屬超分子化學中主客體化學範疇，是源於高分子化學、生物化學、材料科學等學科的一門交叉技術。該技術具有特異選擇性的聚合物的過程，當模板分子與聚合物單體接觸時會儘可能地同單體形成多重作用點，如果通過聚合，把這些多重作用點固定或「凍結」下來，當模板分子除去後，聚合物中就形成了與模板分子在空間和結合位點上相匹配的具有多重作用點的空穴。獲得的分子印跡聚合物(molecularly imprinted polymers, MIPs)具有模擬生物抗體的功能，被形象的稱為「人工抗體」，已成為當今研究的熱點課題之一，其製備過程簡單，成本低廉，物理化學性質穩定，並且具有效預定性、特異識別性和廣泛實用性。但傳統的印跡聚合物是三維塊體，一般密度較大，大分子模板難以達到和離開結合位點，不良的物質傳輸和永久的模板保留對識別性能產生負面影響，再由於常規的非生理性印跡條件和實驗中常用的有機溶劑都會使蛋白變性，使得三維的印跡技術並不適合識別大分子蛋白質。二維蛋白分子印跡僅使模板蛋白分子印跡在聚合物的表面，印跡位點也處於薄膜的表面，這可克服空間位阻的影響，便於除去模板和蛋白分子接近識別位點，而且使用的溶劑大多數是溫和型和水溶性溶劑，以及生物實驗中常用的緩衝液，可使得靶標蛋白質保持其生理活性和正常的空間結構。

發明內容
本發明的目的是克服現有技術中的不足，提供一種葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感檢測方法。本發明的技術方案概述如下一種葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感檢測方法，包括如下步驟(1)石英晶振電極表面活性處理；將三個表面鍍金的石英晶振電極浸入 0. 05-0. 2M的11-巰基醇酸的乙醇溶液中，浸泡8-16h，取出，用無水乙醇衝洗，氮氣吹乾，分別標記為A、B和C電極；(2)初始溶膠凝膠的製備將2 3mL原矽酸四乙酯，100 200 μ 1苯基三甲氧基矽烷，100 200 μ 1甲基三甲氧基矽烷，400 600 μ 1濃度為0. 05-0. 2Μ的HCl水溶液和2 3ml的H2O混合，超聲 20 30分鐘製備成初始溶膠凝膠；(3)含有SEA或SEB模板的印跡溶膠凝膠的製備取2 4mL初始溶膠凝膠和100 200 μ 1濃度為0. 1 0. 3mg/mL的SEA磷酸鹽緩衝液，混合均勻，超聲20-40分鐘，獲得含有SEA模板的印跡溶膠凝膠；取2 4mL初始溶膠凝膠和100 200 μ 1濃度為0. 1 0. 3mg/mL的S^磷酸鹽緩衝液，混合均勻，超聲20-40分鐘，獲得含有SEB模板的印跡溶膠凝膠；(4)對石英晶振電極表面進行塗布處理①以1000 3000轉/分鐘的轉速將所述含有SEA模板的印跡溶膠凝膠均勻塗布於所述A電極表面20 30秒，以1000 3000轉/分鐘的轉速將所述含有SEB模板的印跡溶膠凝膠均勻塗布於所述B電極表面20 30秒，靜置10 15分鐘，用水衝洗掉表面物理吸附的所述凝膠，用氮氣吹乾；②重複步驟①3-5次；得到表面結合有分子印跡聚合物膜的石英晶振電極，室溫下乾燥；③將步驟(2)獲得的初始溶膠凝膠，以1000 3000轉/分鐘的轉速均勻塗布於C 電極表面20 30秒，靜置10 15分鐘，用水衝洗掉表面物理吸附的所述凝膠，用氮氣吹乾；④重複步驟③3-5次；室溫下乾燥；(5)去除模板蛋白分子SEA和SEB 用40 50°C的雙蒸水對步驟中步驟②獲得的電極進行衝洗，去除模板蛋白， 用氮氣吹乾，得到包被有分子印跡膜的石英晶振電極A和B，並置於室溫下乾燥後備用；用40 50°C的雙蒸水對步驟中步驟④獲得的C電極進行衝洗，用氮氣吹乾， 得到參比電極，並置於室溫下乾燥後備用；(6)葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感器的構建及待測液檢測將包被有分子印跡膜的石英晶振電極A和B以及參比電極C分別置於三個加樣池中，並連接於石英晶體微陣列傳感器E4上，構建出葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感器，往各加樣池中加入200 μ 1 PBS，待其頻率穩定後分別向浸有包被有分子印跡膜的石英晶振電極A、B的加樣池中分別加入200 μ 1待測液，檢測頻率變化直至穩定，檢測待測液中葡萄球菌腸毒素SEA或SEB ；所述待測液的配製為下述兩種方法之一種方法一直接取液體樣品為待測液或按體積比為1 0. 5 1. 5的比例將液體樣品與PBS混合後為待測液或按體積比為1 0.5 1.5的比例將液體樣品與PBS混合後用濾器過濾，取濾液為待測液；方法二 按Ig 0. 5 1. 5ml的比例將粉碎後的固體樣品與PBS混合為待測液或按Ig 0.5 1.5ml的比例將粉碎後的固體樣品與PBS混合，用濾器過濾，取濾液為待測液。本發明的優點本發明的方法針對食品中毒重要致病因子葡萄球菌腸毒素中常見的SEA和SEB大分子蛋白進行快速檢測。摒棄了常規金黃色葡萄球菌腸毒素血清學和免疫學方法抗體製備工藝繁雜，周期長、實驗步驟繁瑣、成本高的不足，製備方法簡單、不需任何標記，檢測快速，受外界幹擾較小，成本低廉，結果獲得穩定可靠，整個檢測過程30分鐘內完成，在食品安全、衛生檢測、環境監測、臨床檢驗、生物恐怖監測等領域具有廣泛的應用前
旦
ο本發明以單片陣列式質量傳感器件為換能器，在石英晶振表面通過有機矽烷化自組裝溶膠凝膠法原位合成SEA和SEB分子的二維分子印跡聚合物，並洗掉模板，構建的多種葡萄球菌腸毒素檢測的二維分子印跡陣列式質量傳感器，取代生物抗體作為識別元件，通過分子識別，膜吸附樣品中的待測分子，進而使得MPs的質量發生變化，引起石英晶振振動頻率發生變化，以此對樣品中待測的靶標物進行檢測。


圖1為包被有SEA、SEB分子印跡膜和非印跡膜的石英晶振頻率隨時間變化的曲線。圖2為PBS緩衝液中不同濃度的SEA和SEB對包被有SEA、SEB分子印跡膜和非分子印跡膜的石英晶振所產生的濃度-頻率(Hz)變化曲線圖(n = 3)。圖3為葡萄球菌腸毒素檢測的二維分子印跡陣列式質量傳感器的特異度測定(a) SEA反應池中加入10 μ g/ml的SEB、SEC1、BSA、OVA和PBS的石英晶振頻率(Hz) 變化；(b) SEB反應池中加入100 μ g/ml的SEB、SEC」 BSA, OVA和PBS的石英晶振頻率(Hz) 變化。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明作進
實驗材料
巰基十一酸
TEOS(Tetraethyl orthosilicate)
PTMOS(phenyltrimethoxysilane)
MTMOS(methyl trimethoxysilane)
無水乙醇
鹽酸
SEA
SEB
實驗所用儀器如下
耗散型石英晶體微陣列傳感器(E4，Q-Sense)實施例1—種食品中多種金黃色葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感檢測方法，包括如下步驟(1)石英晶振電極表面活性處理；將三個表面鍍金的石英晶振電極浸入0. IM的 11"巰基醇酸的乙醇溶液中，浸泡12h，取出，用無水乙醇衝洗，氮氣吹乾，分別標記為A、B和 C電極；(2)初始溶膠凝膠的製備將2. 5mL原矽酸四乙酯，150 μ 1苯基三甲氧基矽烷，150 μ 1甲基三甲氧基矽烷， 500 μ 1濃度為0. IM的HCl水溶液和2mL的H2O混合，超聲25分鐘製備成初始溶膠凝膠；(3)含有SEA或SEB的模板的印跡溶膠凝膠的製備 取3mL初始溶膠凝膠和150 μ 1濃度為0. lmg/mL的SEA磷酸鹽緩衝液，混合均勻， 超聲30分鐘，獲得含有SEA模板的印跡溶膠凝膠；取3mL初始溶膠凝膠和150 μ 1濃度為0. lmg/mL的SEB磷酸鹽緩衝液，混合均勻， 超聲30分鐘，獲得含有SEB模板的印跡溶膠凝膠；(4)對石英晶振電極表面進行塗布處理①以2000轉/分鐘的轉速將所述含有SEA模板的印跡溶膠凝膠均勻塗布於所述 A電極表面25s，以2000轉/分鐘的轉速將所述含有SEB模板的印跡溶膠凝膠均勻塗布於所述B電極表面25s，塗布後靜置13分鐘，用水衝洗掉表面物理吸附的所述凝膠，用氮氣吹乾；②重複步驟①4次；得到表面結合有分子印跡聚合物膜的石英晶振電極，室溫下乾燥24小時；③將步驟( 獲得的初始溶膠凝膠，以2000轉/分鐘的轉速均勻塗布於C電極表面25s，靜置13分鐘，用水衝洗掉表面物理吸附的所述凝膠，用氮氣吹乾；④重複步驟③4次；室溫下乾燥M小時；(5)去除模板蛋白分子SEA和SEB 用45°C的雙蒸水對步驟中步驟②獲得電極進行衝洗，去除模板蛋白，用氮氣吹乾，得到包被有分子印跡膜的石英晶振電極A和B，並置於室溫下乾燥24h後備用；用45°C的雙蒸水對步驟(4)中步驟④獲得的C電極進行衝洗，用氮氣吹乾，得到參比電極，並置於室溫下乾燥24h後備用；(6)葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感器的構建及待測液檢測將包被有分子印跡膜的石英晶振電極A和B以及參比電極C分別置於三個加樣池中，並連接於石英晶體微陣列傳感器E4上，構建出葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感器，往各加樣池中加入200 μ 1 PBS，待其頻率穩定後分別向浸有包被有分子印跡膜的石英晶振電極A、B的加樣池中分別加入200 μ 1待測液，檢測頻率變化直至穩定，檢測待測液中葡萄球菌腸毒素SEA或SEB ；待測液的配製按體積比為1 1的比例將牛奶與PBS混合。按上述同樣的方法製備10個包被有分子印跡膜的石英晶振電極A和10個包被有分子印跡膜的石英晶振電極B。實施例2一種食品中多種金黃色葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感檢測方法，包括如下步驟(1)石英晶振電極表面活性處理；將三個表面鍍金的石英晶振電極浸入0. 05M的 11"巰基醇酸的乙醇溶液中，浸泡16h，取出，用無水乙醇衝洗，氮氣吹乾，分別標記為A、B和 C電極；(2)初始溶膠凝膠的製備將2mL原矽酸四乙酯，200μ 1苯基三甲氧基矽烷，100 μ 1甲基三甲氧基矽烷， 600 μ 1濃度為0. 05Μ的HCl水溶液和3mL的H2O混合，超聲20分鐘製備成初始溶膠凝膠；(3)含有SEA或SEB的模板的印跡溶膠凝膠的製備取2mL初始溶膠凝膠和100 μ 1濃度為0. 2mg/mL的SEA磷酸鹽緩衝液，混合均勻， 超聲20分鐘，獲得含有SEA模板的印跡溶膠凝膠；取2mL初始溶膠凝膠和100 μ 1濃度為 0. 2mg/mL的SEB的磷酸鹽緩衝液，混合均勻，超聲20分鐘，獲得含有SEB模板的印跡溶膠凝膠；(4)對石英晶振電極表面進行塗布處理①以1000轉/分鐘的轉速將所述含有SEA模板的印跡溶膠凝膠均勻塗布於所述A 電極表面20秒，以1000轉/分鐘的轉速將所述含有SEB模板的印跡溶膠凝膠均勻塗布於所述B電極表面20秒，塗布後靜置15分鐘，用水衝洗掉表面物理吸附的所述凝膠，用氮氣吹乾；20秒②重複步驟①3次；得到表面結合有二維分子印跡聚合物膜的石英晶振電極，室溫下乾燥M小時；③將步驟( 獲得的初始溶膠凝膠，以1000轉/分鐘的轉速均勻塗布於C電極表面20秒，靜置15分鐘，用水衝洗掉表面物理吸附的所述凝膠，用氮氣吹乾；④重複步驟③3次；室溫下乾燥M小時；(5)去除模板蛋白分子SEA和SEB用40°C的雙蒸水對步驟中步驟②獲得的電極進行衝洗，去除模板蛋白，用氮氣吹乾，得到包被有分子印跡膜的石英晶振電極A和B，並置於室溫下乾燥24h後備用；用 40°C的雙蒸水對步驟(4)中步驟④獲得的C電極進行衝洗，用氮氣吹乾，得到參比電極C，並置於室溫下乾燥24h後備用；(6)葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感器的構建及待測液檢測將包被有分子印跡膜的石英晶振電極A和B參比電極C分別置於三個加樣池中， 並連接於石英晶體微陣列傳感器E4上，構建出葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感器，往各加樣池中加入200 μ 1 PBS，待其頻率穩定後分別向浸有包被有分子印跡膜的石英晶振電極A、B的加樣池中分別加入200 μ 1待測液，檢測頻率變化直至穩定，檢測待測液中葡萄球菌腸毒素SEA或SEB ；待測液的配製按體積比為1 0. 5的比例將剩菜湯與PBS混合，用濾器過濾，取濾液為待測液。(本實施例也可以按體積比為1 05的比例將剩菜湯與PBS混合，用濾器過濾，取濾液為待測液。)實施例3一種食品中多種金黃色葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感檢測方法，包括如下步驟(1)石英晶振電極表面活性處理；將三個表面鍍金的石英晶振電極浸入0. 2M的 11"巰基醇酸的乙醇溶液中，浸泡他，取出，用無水乙醇衝洗，氮氣吹乾，分別標記為A、B和 C電極；(2)初始溶膠凝膠的製備將3mL原矽酸四乙酯，100μ 1苯基三甲氧基矽烷，200 μ 1甲基三甲氧基矽烷， 400 μ 1濃度為0. 2Μ的HCl水溶液和2ml的H2O混合，超聲30分鐘製備成初始溶膠凝膠；(3)含有SEA或SEB模板的印跡溶膠凝膠的製備 取4mL初始溶膠凝膠和200 μ 1濃度為0. 3mg/mL的SEA磷酸鹽緩衝液，混合均勻， 超聲40分鐘，獲得含有SEA模板的印跡溶膠凝膠；取4mL初始溶膠凝膠和200 μ 1濃度為 0. 3mg/mL的SEB的磷酸鹽緩衝液，混合均勻，超聲40分鐘，獲得含有SEB模板的印跡溶膠凝膠；(4)對石英晶振電極表面進行塗布處理①以3000轉/分鐘的轉速將所述含有SEA模板的印跡溶膠凝膠均勻塗布於所述A 電極表面30秒，以3000轉/分鐘的轉速將所述含有SEB模板的印跡溶膠凝膠均勻塗布於所述B電極表面30秒，塗布後，靜置10分鐘，用水衝洗掉表面物理吸附的所述凝膠，用氮氣吹乾；②重複步驟①5次；得到表面結合有分子印跡聚合物膜的石英晶振電極，室溫下乾燥24小時；③將步驟( 獲得的初始溶膠凝膠，以1000 3000轉/分鐘的轉速均勻塗布於 C電極表面30秒，靜置10分鐘，用水衝洗掉表面物理吸附的所述凝膠，用氮氣吹乾；④重複步驟③5次；室溫下乾燥M小時；(5)去除模板蛋白分子SEA和SEB用50°C的雙蒸水對步驟中步驟②獲得的電極進行衝洗，去除模板蛋白，用氮氣吹乾，得到包被有分子印跡膜的石英晶振電極A和B，並置於室溫下乾燥24h後備用；用50°C的雙蒸水對步驟(4)中步驟④獲得的C電極進行衝洗，用氮氣吹乾，得到參比電極，並置於室溫下乾燥24h後備用；(6)葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感器的構建及待測液檢測將包被有分子印跡膜的石英晶振電極A和B以及參比電極C分別置於三個加樣池中，並連接於石英晶體微陣列傳感器E4上，構建出葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感器，往各加樣池中加入200 μ 1 PBS，待其頻率穩定後分別向浸有包被有分子印跡膜的石英晶振電極A、B的加樣池中分別加入200 μ 1待測液，檢測頻率變化直至穩定，檢測待測液中兩種葡萄球菌腸毒素SEA或SEB ；待測液的配製將醬制食品研碎，再按Ig Iml的比例將粉碎後的醬製品樣品與PBS混合用濾器過濾，取濾液為待測液。
(也可以再按Ig 0. 5ml的比例或Ig 1. 5ml的比例將粉碎後的醬製品樣品與 PBS混合，其它步驟同本實施例)每次測定前電極和加樣池都用40°C的去離子水反覆衝洗，然後用氮氣吹乾。實施例4葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感器對葡萄球菌腸毒素的重複性測定將200 μ 1含有10 μ g/ml SEA的磷酸鹽緩衝溶液反覆10次注入浸有包被有分子印跡膜的石英晶振電極A的加樣池中，將200μ 1含有 ομ g/ml SEB的磷酸鹽緩衝溶液反覆10次注入浸有包被有分子印跡膜的石英晶振電極B的加樣池中，在同一條件下測定電極的頻率變化(Δ f)，以此對批內重複性進行檢測。接下來，使用實施例1製備的3個包被有分子印跡膜的石英晶振電極A和3個包被有分子印跡膜的石英晶振電極B，在同一條件下測定Δ f，以此對批間重複性進行檢測。結果如表1所示。表1葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感器檢測葡萄球菌腸毒素的批內和批間重複性比較
權利要求
1. 一種葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感檢測方法，其特徵是包括如下步驟(1)石英晶振電極表面活性處理；將三個表面鍍金的石英晶振電極浸入0.05-0. 2M的 11-巰基醇酸的乙醇溶液中，浸泡8-16h，取出，用無水乙醇衝洗，氮氣吹乾，分別標記為A、B 和C電極；(2)初始溶膠凝膠的製備將2 3mL原矽酸四乙酯，100 200μ 1苯基三甲氧基矽烷，100 200μ 1甲基三甲氧基矽烷，400 600 μ 1濃度為0. 05-0. 2Μ的HCl水溶液和2 3ml的H2O混合，超聲20 30分鐘製備成初始溶膠凝膠；(3)含有SEA或SEB模板的印跡溶膠凝膠的製備取2 4mL初始溶膠凝膠和100 200 μ 1濃度為0. 1 0. 3mg/mL的SEA磷酸鹽緩衝液，混合均勻，超聲20-40分鐘，獲得含有SEA模板的印跡溶膠凝膠；取2 4mL初始溶膠凝膠和100 200 μ 1濃度為0. 1 0. 3mg/mL的SEB的磷酸鹽緩衝液，混合均勻，超聲20-40分鐘，獲得含有SEB模板的印跡溶膠凝膠；(4)對石英晶振電極表面進行塗布處理①以1000 3000轉/分鐘的轉速將所述含有SEA模板的印跡溶膠凝膠均勻塗布於所述A電極表面20 30秒，以1000 3000轉/分鐘的轉速將所述含有SEB模板的印跡溶膠凝膠均勻塗布於所述B電極表面20 30秒，靜置10 15分鐘，用水衝洗掉表面物理吸附的所述凝膠，用氮氣吹乾；②重複步驟①3-5次；得到表面結合有分子印跡聚合物膜的石英晶振電極，室溫下乾燥；③將步驟( 獲得的初始溶膠凝膠，以1000 3000轉/分鐘的轉速均勻塗布於C電極表面20 30秒，靜置10 15分鐘，用水衝洗掉表面物理吸附的所述凝膠，用氮氣吹乾；④重複步驟③3-5次；室溫下乾燥；(5)去除模板蛋白分子SEA和SEB用40 50°C的雙蒸水對步驟中步驟②獲得的電極進行衝洗，去除模板蛋白，用氮氣吹乾，得到包被有分子印跡膜的石英晶振電極A和B，並置於室溫下乾燥後備用；用40 50°C的雙蒸水對步驟中步驟④獲得的C電極進行衝洗，用氮氣吹乾，得到參比電極，並置於室溫下乾燥後備用；(6)葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感器的構建及待測液檢測將包被有分子印跡膜的石英晶振電極A和B以及參比電極C分別置於三個加樣池中， 並連接於石英晶體微陣列傳感器E4上，構建出葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感器，往各加樣池中加入200 μ 1 PBS，待其頻率穩定後分別向浸有包被有分子印跡膜的石英晶振電極A、B的加樣池中分別加入200 μ 1待測液，檢測頻率變化直至穩定，檢測待測液中葡萄球菌腸毒素SEA或SEB。
全文摘要
本發明公開了一種葡萄球菌腸毒素的二維分子印跡陣列式質量傳感檢測方法，包括如下步驟(1)石英晶振電極表面活性處理；(2)初始溶膠凝膠的製備；(3)含有SEA和SEB的模板的印跡溶膠凝膠的製備；(4)對石英晶振電極表面進行塗布處理；(5)去除模板蛋白分子SEA和SEB；6)SEA和SEB檢測的分子印跡陣列式質量傳感器的構建，本發明針對食品中毒重要致病因子葡萄球菌腸毒素中常見的SEA和SEB大分子蛋白進行快速檢測。方法簡單、不需任何標記，檢測快速，受外界幹擾較小，成本低，結果穩定可靠，整個檢測過程時間短，在食品安全、衛生檢測、環境監測、臨床檢驗、生物恐怖監測等領域具有廣泛的應用前景。
文檔編號G01N27/327GK102565161SQ20111045980
公開日2012年7月11日 申請日期2011年12月31日 優先權日2011年12月31日
發明者劉楠, 李曉麗, 歐國榮, 陳翔, 馬新華, 高志賢 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所