具有抗腫瘤活性的乳菇菌素及其製備方法和應用的製作方法
2023-11-05 06:16:22 4
專利名稱：具有抗腫瘤活性的乳菇菌素及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種具有抗腫瘤活性的乳菇菌素及其製備方法和應用，屬於真菌的提取分離及製備抗腫瘤藥物應用技術領域。
背景技術：
癌症已經成為人類健康的主要威脅之一，且呈明顯上升趨勢，癌症在美國已經成為最主要的死亡因素，在我國癌症死亡率在城市中佔各種死因的首位。因而我國已把抗癌藥物的研究列為新藥開發的最重要的戰略性課題之一，研究新型的具有高效、低毒、高選擇性的抗癌藥物成為藥物研究工作者長期的目標和任務。
自然界提供了廣泛而專一有效的生物活性成分，在長期進化過程中許多有機體發展了一整套防禦機制來對抗競爭者。有機體所使用的"武器"越來越精緻，因此從自然資源中尋找新的活性成分或基本結構作為藥物或農藥是一個非常明智的做法。
在各種生物資源中，真菌屬於"創造係數"特別高的生物，含有大量結構多樣的次生代謝產物。人們通過實驗對比人為使之受傷和未受損的子實體，發現子實體在受傷後很快產生大量的次生代謝產物，這些產物具有抗真菌、殺蟲
等多種活性。其中一個典型的例子是乳菇屬Z^:^r/a/ 中無活性的stearoy，velutlnal (1)受損反應後立刻轉化為具有很強活性的抗生素1sove"Ileral (2)。近年來高等真菌愈來愈引起人們的重視。 一方面是因為從高等真菌中不斷發現結構新穎和具有顯著生物活性的化合物，且結構變化大。這種結構多樣性對於藥物(或農藥)的發現有重要意義。另一方面，高等真菌不僅可以直接採來作為研究材料用，而且可以較方便地通過菌絲體或孢子發酵培養，提供大量原料資源，為今後可能的工業化生產提供了保證，這也是一潛在的優勢。高等真菌中的倍半萜化合物是高等真菌中一大類化合物類型，其結構變化非常豐富，生物活性顯著。主要包括t薩，ane、 caryo。hyllane、collybla"I 、 protollluclanes 、 ma「asnwies 、 lacta「anes 、 cucumanes 、fomannosanes、 llluclanes、 1so1，ludanes、 hlrsutanes、 p"leurote，lanes、ceraplcanes 、 bulleranes 、 1solactaranes和nenj"lanes類倍半葩。Humu"lane倍半結本身在真菌中的存在非常稀少，目前只有申請人的研究小組發現一系列新的蛇麻烷Humulane倍半結，並具有較強的抗腫瘤活性，目前國內外還未見其他報導。
發明內容
本發明的目的是提供一類新的具有抗腫瘤活性的蛇麻烷Humu化ne倍半萜
化合物乳菇菌素(m1t1SSlO"lS)及其從細質乳菇(^C^廠貼/77/t/S57)71/5),毛腳
乳菇a^^r/^/7村7^s J.Z. Ylng)等子實體中提取乳菇菌素的方法；同時進一步提供以乳菇菌素為活性成分製備治療和預防抗腫瘤藥物方面藥物的應用方向。
本發明的技術方案是這樣實現的這種具有抗腫瘤活性的乳菇菌素，其特徵包括下述結構通式(I)的乳菇菌素
其中R!為氳、羧基、羥基或醛基；R2為氳、羥基、酯基或醯氨；R3為氫、羧基、羥基或醛基；f^為氳、羧基、羥基或醛基；R5為氯或羥基或5位為亞甲基或羰基；3， 4或6, 7或8, 9或10, 11位形成環氧或形成單鍵或形成雙鍵。
所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素，包括具有通式(I)特徵的蛇麻烷倍半萜乳菇菌素mltlsslols A-H結構如下
mitissimol A mitissimol B mitissimol C mitissimol D
mitissimol E mitissimol F mitissimol G mitissimol H
所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素，包括具有通式(I)特徵的蛇麻烷倍半
萜乳菇菌素11/ -19"-印oxy-4Z.7Z-hunjladlene-5"-ol結構如下所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素的製備方法所述具有抗腫瘤活性的乳
菇菌素是從高等真菌細質乳菇"^^帖歷/":^7;7i/s)的子實體中，用乙醇、
甲醇、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、石油醚其中一種或幾種溶劑提取，所得提取物反覆用矽膠柱層析分離得到的。
所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素的製備方法，包括如下步驟
A、 提取將1.6kg高等真菌細質乳菇(zw^廠/^歷/":^加/力粉碎，用15L的95%乙醇提取3次，再用乙酸乙酯4.5L萃取，溶剤回收至幹，稱重得33.5g ;
B、 進入200-300目矽膠柱層析分離
a、 用CHCVMeOH溶劑以100:0 , 98:2 , 95:5 ， 90:10 (VOl/vo1)梯度洗脫，在CHCl3-MeOH 100 : 0洗脫段得一組分，進一步進行矽膠柱層析，用石油醚-丙酮溶劑以25:1 ， 15:1 ， 10:1, 5:1梯度洗脫，在15 : 1部位得純品乳菇
菌素irritlsslmol A 66 mg ;
b、 在a步驟CHCl3-MeOH 95 : 5洗脫段得一組分，進一步進行矽膠柱層析，用石油醚-丙酮溶剤以10:1， 8:1， 6:1， 4 :1, 5:1， 2:1, 1:1梯度洗脫，在
10 : l部位得純品孚L菇菌素m1t1ss1mo"l B 8 mg ;
c 、在b步驟石油醚-丙酮2 :1部位迸一步矽膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯以20:1， 15:1, 10:1, 5 :1， 1:1， 1:5梯度洗脫，在石油醚-乙酸乙酯20:1組分得純品乳菇菌素mltlsslmol C 26 mg ;
d、 在步驟c石油醚-乙酸乙酯15:1組分進一步利用Se。hadex LH-20凝膠柱層析，CHCl3-MeOH 1:1為洗脫剤,純化得到乳菇菌素m1t1ss1mo"l D 5mg;
e、 在步驟c石油醚-乙酸乙酯10:1組分逬一步利用薄層製備層析，石油醚-丙酮4:1為展開劑，純化得到乳菇菌素m1t1ss1mo， E8mg;
f在步驟c石油醚-乙酸乙酯5:l組分得到乳菇菌素m1t1ss1mo1 F 17mg ;
g、 在步驟c石油醚-乙酸乙酯1:1組分得到乳菇菌素mltlsslmol G 4 mg ;
h、 在b步驟在石油醚-丙酮4 : l部位得純品乳菇菌素mltlsslmol 7 mg。
所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素的製備方法，所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素是從高等真菌毛腳乳菇U^^T7^/7/At7^sJ.z. Ylng)的子實體中，用
乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、石油醚其中一種或幾種溶剤提取，所得提取物反覆用矽膠柱層析分離得到的。
所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌勃勺製備方法，包括如下步驟
A、 提取:將6kg高等真菌毛腳乳菇(,^廠7^組7&"Z. Y1ng),粉碎，用20L的9淡乙醇提取3次，再用乙酸乙酯5L萃取，溶剤回收至幹，稱重得8.2 g ;
B、 200-300目矽膠柱層析分離用石油醚-丙酮梯度洗脫50:l， 20:1， 9:1，5:1, 1:1得5個組分,取石油醚-丙酮9:1組分反覆用RP-C18柱層析，用石油醚-氯仿重結晶，得到乳菇菌素2/ -3"-印oxy-6Z，9Z-humulac!1ene-8"-ol 22 mg。所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素作為製備抗腫瘤藥物的應用，包括臨床上用於製備以乳菇菌素為有效成分的抗腫瘤藥物。
所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素作為製備抗腫瘤藥物的應用，包括臨床上用於製備含有乳菇菌素為有效成分的組合物或化合物，製備含有乳菇菌素藥學上可接受的鹽、溶剤化物、或相應的結晶形態的物質為有效成分，並且加入藥物可接受的載體或輔助成分的抗腫瘤藥物。
本發明乳菇菌素經體外試驗表明具有較強的抗腫瘤活性，其中乳菇菌素
M化1ss1mo， D活性最強，對A549 (人肺腺癌細胞株)，HCT-8 (人結腸癌細胞株)，Bel-7402 (人肝癌細胞株)，Hela(人宮頸癌細胞株)的半數抑制濃度IOo分別為2.5， 11.0， 3.6， 4.6〃g/ ml ，與陽性對照藥齊,鉑幾乎相當，這一類化合物有望成為新的抗腫瘤藥物。
圖1是乳菇菌素mtlsslmol A的晶體衍射圖
圖2是乳菇菌素O/WM遊lb和乳菇菌素/W""遊la化學位移差值
具體實施例方式
實施例l :乳菇菌素m化化slols A-H的製備
A、提取:
將採自雲南省哀牢山(其菌種保存在中國科學院昆明植物研究所標本室)的1.6kg高等真菌細質乳菇a^^廠7^/77《7:s"57;7^)粉碎，用15L的95%乙醇提取3次，再用乙酸乙酯4.5L萃取，溶劑回收至幹，稱重得33.5g;
iiB、 進入200-300目矽膠柱層析分離
a、 用CHCV隨溶劑以100:0, 98:2， 95:5 , 90:10 (vol/vol)梯度洗脫，在CHCl3-MeOH 100 : 0洗脫段得一組分，逬一步迸行矽膠柱層析，用石油醚-丙酮溶剤以25:1， 15:1， 10:1, 5:1梯度洗脫，在15 : 1部位得純品乳菇
菌素mlt化slmol A 66 mg ;
b、 在d步驟CHC13-MeOH 95 : 5洗脫段得一組分，迸一步進行矽膠柱層析，用石油醚-丙酮溶剤以10:l， 8:1, 6:1， 4 :1, 5:1， 2:1， 1:1梯度洗脫，在
10 : l部位得純品乳菇菌素mUlsslmol B 8 mg ;
c 、在b步驟石油醚-丙酮2 :1部位進一步矽膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯以20:1， 15:1， 10:1, 5 :1, 1:1， 1:5梯度洗脫，在石油醚-乙酸乙酯20:1
組分得純品乳菇菌素mltlsslmol C 26 mg ;
d、 在步驟c石油醚-乙酸乙酯15:1組分進一步利用S印hadex LH-20凝膠柱層析,CHCl3-Me0H 1:1為洗脫剤,純化得到乳菇菌素mlt化slmolD 5mg;
e、 在步驟c石油醚-乙酸乙酯10:1組分進一步利用薄層製備層析，石油醚-丙酮4:1為展開剤，純化得到乳菇菌素mltlsslmol E 8mg ;
f 、在步驟c石油醚-乙酸乙酯5:l組分得到乳菇菌素m化化s1mo1 F 17mg ;g 、在步驟c石油醚-乙酸乙酯1:1組分得到乳菇菌素mltlsslmol G 4 mg ;
h、在b步驟在石油醚-丙酮4 : l部位得純品乳菇菌素mlt"isslmol 7 mg。
C、 乳菇菌素m化lsslo]s A-H理化性質
材料與儀器熔點用四川科學儀器廠生產的XRC-1型顯微熔點儀測定，溫度未校正；旋
光用SEPA-300儀測定；紅外在B1o-Rad FTS-135紅外光譜儀測定；紫外在
UV-210A紫外光譜儀上測定；NMR由Bruke「 AM-400和Bruker AM-500核磁共
振儀測定，四甲基矽烷(TMS)為內標；質譜由VGA Auto Spec-3000型質譜
儀測定。薄層層析和柱層析矽膠均為青島海洋化工廠產品，S印hadex LH-20
為Pharmacia公司產品。用10%硫酸-乙醇加熱顯色和碘蒸汽顯色。乳菇菌素mltlsslmol A:
無色糹吉晶(CHCl.,); mp 169-171。C; [。] 25 2-42.0 (c 0.40， CHC13); UV (CHCl.,) UV(CHC13)入鵬(logO 252 (4.30) nm; IR (KBr) : 3481， 2988， 2959， 2925， 2881, 1638, 1445， 1388, 1297， 1273,1045， 968， 900 cm1:'H—NMR (500 MHz， CDCL) S:4.22 (d， 1H，力IO. 0， 1-H), 5.69 (d， 1H， _/=16. 4，3-H)， 6,06 (d, 1H, j&16.4, 4-H)， 5.90 (brd, 1H, ^10.6, 7-H)， 2.47(m， 1H, 8-H丄2.28 (m，1H，8—Hm)'2. 37 (m， 1H, 9 — H。)， 2. 23(m, 1H, 9 — HP), 5.25(brd， 1H， J=10, 6， U—H)， 1. 14(s， 3H, 12"Qt)，1. 14(s， 3H' 13—CH:,)， 1. 79(brs， 3H, 14,), 1. 62(s， 3H, 15,) ;'3C NMR (CDC13， 500 MHz) ) S : 75. 6 (d)，42.0 (s)， 157.0 (d), 127.2 (d), 203.7 (s), 137.8 (s), 148.1 (d), 24.6 (t), 39.5 (t)， 138.6 (s),128. 0(d), 26. 6(q)， 17. 1 (q), 11. 7 (q)， 16. 0 (q); FABMS (pos) m/z 235 [M + l]'， 469 [2M +1]'; HRESffl(pos) tn/z 257. 1516 (實測it) (GMANa,理i侖值257.1517)。
圖1所示乳菇菌素mtlsslmol A的X晶體衍射結構分析C拋,M為234.33,空間群為2 (1) 2 (1)晶胞參數a=9 1505 (18) A， b =9 5977 (19)A， c =6.152(3) A;晶胞體積V =418.5(5) A3:晶胞內分子數Z =4;晶胞密度d二1.097Mg/m3 ;Rf和Rw值分別為0.0423和O. 1049。用/^>/ //^做^面探儀收集衍射強度數據，Z^/Tc^I射、石墨單色器。用co掃描方式，獲得獨立衍射點7350和2517個。在微機上用直接法(SHELXS86)解析晶體結構。CCDC號為601319 。表l、乳菇菌素mtlsslmol A的原子坐標
XyzU(eq)
0(1)-245(2)7361(3)1154(1)101(1)
0(2)7283 (2)7379(3)2172 (2)158(1)
C(l)974(3)7035(3)1666(1)71(1)
C(2)2341 (3)6959(3)1090(2)66(1)
C(3)3641(3)6947(3)1662(2)66(1)
C(4)4913(3)7591(3)1605(2)81(1)
C(5)5978(3)7548(3)2293(2)90(1)
C(6)5393 (3)7645(3)3138(2)75(1)
C(7)4268(3)8505(3)3266(2)71 (1)
C(8)3376(4)8725(4)4012(2)98(1)
C(9)1773(3)8896(4)3758(2)102(1)
C(IO)1303 (3)7771(3)3164(2)81(1)
C(ll)1166(2)8043(3)2357(1)69(1)
C(12)2290(4)5601 (3)588(2)112(1)
C(13)2374(4)8203 (3)503 (2)94(1)
C(14)6151(4)6816(4)3795(2)130(1)
C(15)1170(5)6336(4)3522(2)131(2)
H(l)-99073801436152
H(IA)8146109190585
H(3)35316397213280
H(4)5142讓112498
H(7)權9049281385
H(8A)37079552標118
H卿347779344382118
H(9A)116188634248122
H卿164097993499122
H(ll)11948978220982
H(12A)14095577266168
H(12B)23074819959168
H(12C)31205559226168
H(13A)3258畫183140
H(13B)23399051818140
H(13C)1547證139140
H(14A)590271824329195
H(14B)718968753716195
H(14C)584958603760195
H(15A)86756993097197
H(15B)46063413959197
H(15C)209960483738197表2、孚L菇菌素mt化slmol A的鍵長、鍵角值
鍵鍵長 (10_1咖鍵角鍵角值(。)鍵角鍵角值 (。)
o(i:-H(l)08200C(l)"O(l)-H(l)109.5C(7)"C(8)棉)109.1(2)
0(2:1.221(3)0(l)"C(ll)112.7(2)C(7)《(8)-H(8A)109.9
ca:"C(ll)1.487(3)0 (2)107, 00(18)C(lO)"C(ll)-H(ll)116.0
c(i:~C(2)1560(3)C(11)"C(1)"C(2)112.5(2)C(1)《(11)-H(ll)116.0
ca:-H(1A)098000(1)《(1)-H(1A)108. 1C(2)"C(12)-H(12A)109.5
c(2:"C(3)1.506(3)C(11)"C(1)-H(1A)108. 1C(2)^C(12)-H(12B)109.5
c(2:"C(13)1526(4)c(2)"C(1)-H(1A)108, 1H(12A)"C(12)-H(12B)109.5
C(2)"€(12)1.535(4)c(3)"C(2)"C(13)111.8(2)C(2)"C(12)-H(12C)109.5
C(3〕棉)1.320(3)c(3){(2)-C(12)110,0(2)H(12A)"C(12)-H(12C)109.5
C(3〕-H(3)0.9300c(13)"C(2)"C(12)109.7(2)H(12B)"C(12)-H(12C)109.5
C(4)"C(5)1.480(4)c(3)"C(2)-C(1)105. 58(17)C(2)"C(13)-H(13A)109.5
C(4)-H(4)0.彌c〔13)"C(2)"C(1)110.5(2)C(2)"C(13)-H(13B)109.5
C(5〕-C(6)1.468(4)c(12)-C(2)"C(1)109.3(2)H(13A)"C(13)-H(13B)109.5
C(6〕-C(7)1.335(4)c(4)"C(3)D130.5(3)C(2)-C(13)-H(13C)109.5
C(6){(14)1.497(4)c〔4)-C(3)-H(3)114.7H(13A)-C(13)-H(13C)109.5
C(7〕棉)1.470(4)c〔2)"C(3)-H(3)114,7H(13B)"C(13)-H(13C)脂.5
C(7:-H(7)0.9300c(3)棉)"C(5)121.0(3)C(6)~C(14)-H(14A)109.5
C(8)"C(9)1.533(4)c〔3)-C(4)-H(4)119.5C(6)-C(14)-H(14B)109.5
C(8)-H(8A)0.9700c(5)-C(4)-H(4)119.5H(14A)"C(14)-H(14B)109.5
C(8〕-H卿0.97000(2X(5)"C(6)120.9(3)C(6)"C(14)-H(14C)109.5
C(9)-C(IO)1.507(4)0〔2)"C(5)"C(4)121.8(3)H(14A)"C(14)-H(14C)109.5
c(6)"C(5)"C(4)117.2(2)H(14B)"C(14)-H(14C)109.5
c(7)棉)"C(5)117.7(3)C(10)"C(15)-H(15A)109.5
c(7)"C(6)-C(14)125. 1 (3)C(10)"C(15)-H(15B)109.5
c(5){(6)-C(14)117.1(3)H(15A)-C(15)-H(15B)109.5
c(6)"C(7)"C(8)130. 1 (3)C(10)"C(15)-H(15C)109.5
c(6)-C(7)-H(7)115,0H(15A)"C(15)-H(15C)109.5
c(8)"C(7)-H(7)115.0H(15B)"C(15)-H(15C)109.5
乳菇菌素mltlsslmol B:
無色針狀晶體(CHCL);卿200-20rC; [a],5-1.0 (c 0. 59， OiCl》；UV(CHCL)(log e ) 244 (3.43) ran; IR (KBr): 3507, 3011, 2995， 2962， 2924, 1651, 1641, 1466, 1386, 1294， 1271, 1061， 975, 911 cm1; 'HNMR (500 MHz， CDC13) S : 3.30(d, 1H， ，9.7, l-H), 5.93(d, 1H, ,16.4, 3—H)， 6.25(d, 1H，月6.4， 4-H), 6.05 (brd, 1H, ,8.7， 7-H), 2.41 (m， 2H， 8-H) ， 2. 28 (ddd, 1H, J=13.4, 3.9， 2.8，9-Hj， 1.38(td, 1H,J=13.4， 7.1, 9-He), 2.75 (d, 1H， J=9. 7, 11~H), 1. 16(s, 3H， 12-Cft)， L24(s， 3H， 13^01,)， 1.85(brs， 3H, 14"Ofc)， L29(s， 3H, 15，; 13C臓(CDC13, 500 MHz) ) S : 76.1 (d), 40.4 (s)， 155.9 (d)， 129.2 (d)， 202.5 (s), 139.2 (s), 147.0 (d)， 24.5 (t)， 38.0 (t)， 63.5 (s), 65.8(d), 26.8(q)， 17. 1 (q)， 12.0 (q)， 16.7 (Q); ESIMS (pos) m/z 273 [M + Na]+， 523 [2M + Na]+;冊ESIMS (pos) m/z
15273,1474 (實領(K直)(G&O^Na,理論值273. l鄰6)。
乳菇菌素mltlsslmol C:
無色糹吉晶(MeOH); rap 193-196°C; [a ]D2"+99. 0 (c 0. 64， MeOH); UV(MeOH) A鵬(log E )252(4. 11) nm; IR (KBr): 3424 (OH)， 3037, 2962， 2928, 1647 (C=CO0C=C)， 1477， 1386， 1099, 1026， 994, 901 cm'; 'H, (400 MHz, CD30D) S: 4, 19(d， 1H, ,10.7, l-H)， 5.84(d, 1H, ^16.5， 3-H)， 6.07(d, 1H， 力16.5' 4-H), 5.73(brd, 1H， ,10.0, 7-H)， 4,61 (ddd， 1H, ,10.4， 10.0， 5.5, 8-H), 2.70(dd，lH, 月1.4， 5.5， 9-H。), 2.12 (dd， 1H' ,11.4， 10.4， 9-HP), 5.30 (brd, 1H,戶10, 7， ll-H)， l.ll(s， 3H， 12-CH,)， 1. 13(s, 3H， 13H:H3)， 1.858(brs， 3H， 14"Qt)， 1. 65 (s， 3H， 15~CH3); "CNMR (CW)D， 400鵬z) ) S: 76.0 (d)， 43.8 (s), 161.4 (d)， 128.0 (d), 206.5 (s)， 140.7 (s), 147.8 (d), 65,6 (d)' 52.0 (0, 135. 8(s), 130.9 (d)， 26.9 (q)， 17.6(q)， 12. l(q)， 17.3(q); ESIMS (pos) [M + Na]1 273， [2M + Na]' 523;鵬IMS (pos) m/z 273.1467 [M + Na]'(實測^D (G&O3Na，理論值273. 1466)。
乳菇菌素mUlsslmol D:
白色粉末；m.p. 193-196°C (Me0H); [a]D25+138.0 (c 0. 51， Me0H); UV(Me0H)入max (log e) 230 (3.93); IR (KBr): 3338(0H)， 3039， 2961， 2928， 1665 (C=CC0C=C), 1388, 1359， 1126, 1031， 982, 909 cm'; 'HNMR (500 MHz, CD30D) 53.25(d, 1H,力9. 7' 1-H)， 6. 12(d， 1H, ,16.4, 3-H)， 6.28(d, 1H, 力16.4' 4-H)， 5.92(brd， 1H, ,9.9, 7_H)， 4.53(ddd'lH， ^12.1, 9.9' 5.3， 8—H)， 2.51(dd， 1H， _M2. 7， 5.3， 8—H》，1.27 (dd, 1H， ，12.7， 12.1, 8—H。)， 2.79(d， m，月.7， 11—H), 1.22(s, 3H, 12 —Qt), 1. ll(s' 3H， 13-Cft), 1.95(brs， 3H， 14-01,), L29(s， 3H， 15"Ot); 。C NMR (CD30D ) S : 76. 9 (d), 41.9 (s), 160.1 (d)， 130.5 (d), 205.3 (s), 142.8 (s)， 146.8 (d)， 65,2 (d), 48.4 (t), 61.8 (s), 66.7 (d)， 27.2 (q)， 17.7 (q), 12.5 (q), 18.0 (q); ESI—MS (pos) m/z [M+Na]+289, [2M+Na]+555; HRESI-MS (pos) m/z 289.1408 (實澳!l值)(calcd for C^LANa,理i侖值289.1415)。
乳菇菌素mUlsslmol E:
白色粉、末；m.p. 80-82°C (MeOH); [a]D18-41.5 (c 0. 5, MeOH); UV(MeOH) "ax (log O 233 (3.84); IR (KBr): 3442 (OH)， 2967, 2929， 1687, 1637 (C=0C=C) ， 1467， 1389， 1365， 1055， 966, 916 cm1: 'HNMR (400 MHz, CD30D) S : 3.39 (d, 1H,月.8' 1-H)， 6.08(d， 1H，力17. 2， 3-H), 6.80(d， 1H， ,17.2， 4-H), 2.81(d, 1H,屮9.1， 7-H)， 3.77(ddd，lH, ，11.6'9.1, 3. 6， 8-H)， 2,44(dd， 1H，力13.4， 3.6, 8-H。)， 1.40(dd, 1H' ,13.4， 11.6， 8-HH。)， 2.77(d， 1H，月.8, 1卜H)， L20(s， 3H， 12^Cft)， 1.18(s， 3H, 13"Cft)， 1.69 (s， 3H， 14"Cft)， 1.46(s, 3H， 15"Ot); 13C NMR (CW)D ) 6 : 76.1 (d), 41.8 (s), 158.9 (d), 128.1 (d), 200.4 (s), 67.0 (s)， 66.9 (d), 66.0.4(d), 46.7 (t)， 60.6 (s), 66.0(d), 27. 5 (q), 18. l(q)， 16. 7 (q), 18. 9 (q); ESI-MS (pos) m/z [M+Na]+ 305， [2M+Na]' 587; HRESI-MS(pos) m/z 305.1365 (實測働(Cft^OsNa,理論值，305.1364)。
乳菇菌素mltlsslmol F:
無色月交狀物質，m.p, 148—15CTC (Me0H); [a]D251 — 37.7 (c 0, 55， Me0H); UV(MeOH)入,股(log O 235(3.48); IR (KBr): 3441, 2968， 2927， 1676, 1617, 1453, 1395, 1150， 1116， 1064, 994， 901 cm' cm—'; 'H蘭(CD30D) S : 3.34(d， 1H， ,10,0， l-H)， 6,20(d， 1H'戶16. 1, 3-H)， 7. ll(d， 1H， ,16. 1, 4-H)， 2.52(dd, 1H，力13.4， 9.2， 7-H ), 1.23(dd， 1H， ,13.4， 5.2,7-Hs)， 2,43(ddd， 1H， ,9.2, 5.2， 2.4, 8—H)， 2.68(d， 1H， ,2.4， 9一H)， 2.81(d, 1H， j&10.0, 11—H)， 1.22(s， 3H, 12"CH》，1. 13(s， 3H， 13—Qfc)， 1.40(s, 3H, 14"Ot), 0,95(s， 3H， 15"CH3); 13C NMR (CDsOD ) S : 72.9 (d), 43.2 (s)， 150.7 (d), 129,8 (d)' 209.5 (s)， 79.4 (s)， 44.8 (t)， 52.4(d), 60,3 (d), 61.8 (s)， 62,3 (d), 27.1 (q), 18.3 (q)， 27.9 (q)， 11.9 (q) ; ESI-MS (pos) [M+Na]+ 305， [2M+Nar587; HR-ESI-MS (pos) /b/z 305.1373 (實測HD (CufeOsNa,理論值305. 1364)。
利用Mosher試劑的方法來測定乳菇菌素mUlsslmol F的絕對構型: Mosher方法是近年來發展起來的用W WR測定仲醇類化合物絕對構型的方法。 它是利用2-甲氧基-2-(三氟甲基)-2-苯基-乙酸(MTPA)的R構型和S構型 化合物與仲醇形成酯，根據^NMR上A (A=S-R)為正值或負值及可能的兩個 異構體的分子模型來確定仲醇的絕對構型。根據圖2所示實驗結果，乳菇菌素 (R)-MTPA ((2-甲氧基-2-(三氟甲基)-2-苯基-乙酸)(2-甲氧基-2-(三氟甲 基)-2-苯基-乙酸))酯la的H-C (3), H-C (4)， CH2 (7) ，H-C(8) ， Me(12), Me(13)和Me Q4)的化學位移比乳菇菌素(S) -MTPA ((2-甲氧基-2-(三氟甲基) -2-苯基-乙酸)(2-甲氧基-2-(三氟甲基)-2-苯基-乙酸))酯lb在更高場， 而H-C(9)， H-C(11)和Me (15)的化學位移在更低場。因此，乳菇菌素 mltlsslnol F在C-l的絕對構型是S構型。具體方法:如下 MTPA (2-甲氧基-2-(三氟甲基)-2-苯基-乙酸)與mlt化slmol F酯化反應取2.82 mg乳菇菌素nrMsslmol F, 11.2 mg(5)-MTPA在CHCl2 10 ml溶液中 溶解，再加(5)-町PA 11.2 mg, N, N- 二環己基碳二亞胺 N,N'-dlcyclohexylcarbodllmde (DCC) 9.9 mg和4-二甲氨基D比啶 4-dlnethylamlnopyrldlne (DMAP) 2 mg於50ml圓底燒瓶中。將圓底燒瓶放 置於磁力攪拌器上攪拌，在室溫下反應12h。反應液用製備TLC (薄層層析) 得乳菇菌素(6)-MTPA酯la3.1mg;取2.60mg乳菇菌素nrlt1ssi'mo1 F, 11.2 mg(R)-MTPA在CHCl2 10 ml溶液中溶解，再加(R)-MTPA 10.8 mg， N， N-二環 己基碳二亞胺N，N'-dlcyclohexylcarbodllmlde (DCC) 8.7陽和4-二甲氨基 吡啶4-dlmethylamlnopyndlne (DMAP) 2 mg於50m"l圓底燒瓶中。將圓底燒 瓶放置於磁力攪拌器上攪拌，在室溫下反應12h。反應液用製備TLC (薄層層 析)得乳菇菌素(R) -MTPA酯la 3 1 mg ，得乳菇菌素("-MPTA ester lb 2 6 mg。
乳菇菌素W-(2-甲氧基-2-(三氟甲基)-2-苯基-乙酸)遊la:
無色無定形粉末；^隨d 7.180QH, d, J16.3Hz, H-4). 6.231 QH, d. Hz， H-3), 5.087(1H, d, J10.0Hz, H-l). 2.947(1H, d, J10.0Hz, H-ll). 2.賺(1H, d,H-9), 2.540(1H, dd, ^13.2, 4.9 Hz, H-7a), 1,224(1H,br d,》9.7 Hz, H-7/ ), 2.474(1H， br d, J=8.2 Hz, H-8), 1.403(3H, s. H-14), 1.244(3H, s, H-12), 1.117(3H, s, H-13), 0-896(3H, s, H-15); FABMS歷/z499關'。
乳菇菌素0-//7網(2-甲氧基-2-(三氟甲基)-2-苯基-乙酸))衝lb: 無色無定形粉末；'HNMR d 7.149(1H, d,》16.2 Hz, H-4), 6.197QH, d.Hz. H-3),formula see original document page 19將採自雲南省哀牢山(其菌種保存在中國科學院昆明植物研究所標本室)
的高等真菌毛腳乳菇汰g粉碎，用20L的9戰乙S對是取3次，再用乙酸乙酯5L 萃取，溶劑回收至幹，稱重得8.2 g ;
B 、 200-300目矽膠柱層析分離用石油醚-丙酮梯度洗脫50:1 ， 20:1 ， 9:1 ， 5:1， 1:1得5個組分，取石油醚-丙酮9:1組分反覆用RP-C18柱層析，用石油 醚-氯仿重結晶，得到乳菇菌素2/ -3"-印oxy-6Z,9Z-humuladlene-8"-ol 22 mg。
C、乳菇菌素11/ -19"-epoxy-4Z，7Z-humulad1ene-5"-o"l的理化性質 孚L菇菌素11/ -19"-印oxy-4Z,7Z-humulacl1ene-5"-01 :
無色針狀晶體；mp 189-191'C; [a]D25-21. 3 (c 0. 32， CHC13);IR (KBr): 3296' 2594, 1640， 1610， 1452, 1387, 1360， 1297， 972 era—'; 'H腿(500MHz' CDC13) S : 1. 59(d, 1H，戶14. 3, 1—Ha ), 1. 34(dd， 1H， 力14.3， 9,8， 1-H e ), 5.37(d， 1H, ,16.1， 3-H)，5.72 (dd， 1H， ,16.1，6.9，4-H),4.69(m, 1H，5-H),5.44(m, 1H，7-H), 2. 46(m, 1H， 8-H a ), 2.08(m，lH， 8-H P )， 2.02,1. 16(m， 2H, 9-2H)， 2.56(d， 1H, ,9.8,11-H)， 1, 70(s， 3H, 14"Ofc), 1. 16(s， 3H， 13,, 1. 02 (s， 3H, 12"CH3), 1. 16(s, 3H, 15,); '3C腿(CDC13， 500 MHz) ) S: 40.4(t), 35,1 (s)， 139.3 (d)， 132.1 (d)， 78.1 (d)， 143.1 (s)， 124.9 (d), 22.7 (t)， 37.9 (t), 61.4 (s), 63.3(d), 30.5 (q), 16.1 (q)， 12.9 (q), 23.0 (q); HRESIMS (pos) m/z 236.1757 (實測值)(d晶"，理論值236.1776)。
附四唑鹽(MTT)還原法檢測上述乳菇菌素的抗腫瘤活性試驗 1 、實驗材料和試剤
l-l 、四唑鹽(MTT):用0.01mol/L的磷酸鹽緩衝液溶解噻唑蘭 MTT(3-(4,5-dlmrthythlazol-z-yl) 2,5-dlphenytetrazollum bromide, SIGMA公司)濃度為5mg/m，，過濾除菌，分裝後4。C避光保存。 l-2、四唑鹽裂解液的配置80g的十二院基磺酸鈉(SDS,華美生物工程公司)溶解在200 ml的N-N-二甲基二醯氨(北京化工廠)中，水浴加熱助溶，加入 200 ml蒸餾水，用80《乙酸與1N鹽酸(1:1)混合調PH至4.7。
1- 3、細胞株選用A549人肺腺癌細胞株，HCT-8人結腸癌細胞株，Be]-7402 人肝癌細胞株，Hela人宮頸癌細胞株
2 、實驗方法
2- 1、取培養4-5天，處於指數生長期的細胞培養一瓶，加入 0.05。/ary。s1n-EDTA液，使貼壁細胞脫落，用10ml含5湖臺牛血清的RPMI1640
(購自美國G1bco公司)培養液配成混懸液； 2-2、用臺盼藍染色後在血球記數板上做細胞記數； 2-3、用細胞培養基(購自美國G1bco公司)稀釋細胞混懸液，配成每lOQril 含10000或20000個細胞。
2-4 、取96孔平板，每孔加細胞混懸液100 " "1 ，將平板置於37。C二氧化碳培 養箱培養24小吋，
2-5、供試化合物設為5個濃度梯度，依次為6.25ug/ml， 12.5ug/ml， 25ug/ml,
50 ug/ml， 100 ug/m，； 2-6、將平板在37。C，含戰C02空氣及10(^溼度的烘箱中培養2-3天； 2-7、四唑鹽用無血清RPMI1640 (購自美國G1bco公司)培養液配置成lmg/ml, 每孔加50"1， 37。C溫育4小吋，使M丌還原為甲臢(Formazan); 2-8、吸取上清液，加入150;ul二甲基亞碸使甲職翻？，用平板搖床搖勻； 2-9、酶標儀檢測各孔吸收度0D值(/^570 nm);2-10、
3、實驗結果
說明書第17/20頁
2活力曲線圖，求出半熟
;度ICa值。；u g/ ml
IQo(ug/ ml)
AS頓^i細胞株人結腸癌細胞株人肝癌細胞株
A549 HCT-8 Bel-7402
人宮頸癌細胞株 Hela
上述數據表明本發明乳菇菌素經體外試驗表明對癌細胞有強烈的抑制作 用，所測試的9個蛇麻烷型乳菇菌素都具有較強的抗腫瘤活性，其中乳菇菌素
mtlsslmol D活性最強,對A549 (人肺腺癌細胞株)，HCT-8 (人結腸癌細胞株)， Bel-7402 (人肝癌細胞株)，He化(人宮頸癌細胞株)的半數抑制濃度ICs)分別 為2.5， 11.0, 3.6， ml,與陽性對照藥剤順鉑幾乎相當,這一類化合
物有望成為新的抗腫瘤藥物，顯示出良好的應用價值。
針對上述試驗結論本發明提供這種具有抗腫瘤活性的乳菇菌素作為製備 抗腫瘤藥物的應用，包括臨床上用於製備以乳菇菌素為有效成分的抗腫瘤藥 物。製備含有乳菇菌素藥學上可接受的鹽、溶剤化物、或相應的結晶形態的物 質為有效成分，並且加入藥物可接受的載體或輔助成分的抗腫瘤藥物。
以本發明具有抗腫瘤活性的乳菇菌素為主要有效成分的藥物制剤還可包 括添加藥物可接受的載體製成藥物組合物制剤形式，包括片剤、糖衣片剤、 薄膜衣片劑、腸溶衣片剤、膠囊剤、硬膠囊剤、軟膠囊剤、口服液、口含劑、
乳恭菌素Mitissimol A 67.9 5.5 176.2
乳菇菌素Mitissimol B 47.3 66.9 219.8
乳燕菌素Mitissimol C 55,8 27.5 156.8
乳恭菌素Mitissimol D 2.5 11.0 3.6
乳燕菌素Mitissimol E 23.9 56.3 336.8
乳恭菌素Mitissimol F 32.5 66.8 /
乳菇菌素Mitissimol G 41.2 42.5 /
乳菇菌素Mitissimol H 52.6 77.8 55.2
乳菇菌素11 A -19 ff 18,6 23.2 8.7顆粒劑、衝剤、丸剤、散剤、膏剤、丹剤、混懸劑、溶液剤、注射劑、栓剤、 軟膏劑、硬膏剤、霜剤、噴霧剤、滴剤、貼剤、緩釋制剤、控釋制剤。本發明 的製劑，優選的是注射剤型，如凍乾粉針剤，注射液，大輸液，小水針，注 射用乳劑等。
以本發明具有抗腫瘤活性的乳菇菌素為主要有效成分的藥物制剤，可按照 製劑學常規技術製備。
以本發明具有抗腫瘤活性的乳菇菌素為主要有效成分的藥物製劑，其口服
給藥的製劑可含有常用的賦形剤，諸如粘合剤、填充劑、稀釋劑、壓片剤、潤 滑剤、崩解劑、著色劑、調味剤和溼潤剤，必要時可對片剤進行包衣。
適用的填充剤包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑。適宜的 崩解剤包括澱粉、聚乙烯吡咯烷酮和澱粉衍生物，例如羥基乙酸澱粉鈉。適宜 的潤滑劑，例如硬脂酸鎂。適宜的藥物可接受的溼潤劑包括十二烷基硫酸鈉。
可通過混合，填充，壓片等常用的方法製備固體口服組合物。進行反覆混 合可使活性物質分布在整個使用大量填充剤的那些組合物中。
以本發明具有抗腫瘤活性的S虛菌素為主要有效成分的藥物製劑，可以是 水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿剤或酏剤，或者可以是一種在使用前可 用水或其它適宜的載體復配的乾燥產品。這種液體製劑可含有常規的添加剤， 諸如懸浮剤，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基 纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪，乳化剤，例如卵磷脂、脫水山梨醇一 油酸酯或阿拉伯膠；非水性載體(它們可以包括食用油)，例如杏仁油、分餾椰子油、諸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剤，例如對羥基苯甲酯 或對羥基苯甲酸丙酯或山梨酸,並且如果需要，可含有常，見的香味劑或著色剤。
以本發明具有抗腫瘤活性的乳菇菌素為主要有效成分的注射剤，可以將此 配合物懸浮或者溶解，溶液的製備通常是通過將活性物質溶解在一種載體中， 在將其裝入一種適宜的小瓶或安瓿前過濾消毒，然後密封。輔料例如一種局部 麻醉劑、防腐劑和緩衝劑也可以溶解在這種載體中。為了提高其穩定性，可在 裝入/」艦以後將這種組合物冰凍，並在真空下將水除去。
以本發明具有抗腫瘤活性的乳菇菌素為主要有效成分的藥物製劑，在製備 成藥劑時可選擇性的加入藥物可接受的載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸
鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素c、
EDTA 二鈉、EDTA鈣鈉， 一價鹼金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、
鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、胺基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、麥芽
糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、澱粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、矽衍 生物、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、Bj膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土溫80、
瓊脂、碳酸鈣、碳酸氳鈣、表面活性剤、聚乙二醇、環糊精、A—環糊精、磷
脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。
以本發明具有抗腫瘤活性的乳菇菌素為主要有效成分的藥物制剤，在使用 時根據病人的情況確定用法用量。
以本發明具有抗腫瘤活性的乳菇菌素為主要有效成分的藥物制剤，可以是 單位劑量形式，在製成藥剤B寸，單位剤量的藥剤可含有本發明的具有抗腫瘤活性的乳菇菌素或其藥學上可接受的鹽、溶剤化物、和相應的結晶形態的物質
0.1-1000mg,佔單位制剤總重量的0.1-99.淑，其餘為藥學上可接受的載體， 藥學上可接受的載體以重量廿可以是制剤總重量的0 1-99.9% 。
本發明列舉的實施例旨在更進一步地闡明這一類具有抗腫瘤活性的乳菇 菌素的結構、製備方法、製劑方法和應用方向，而不對本發明的保護範圍構成 任何限制。
2權利要求
1、具有抗腫瘤活性的乳菇菌素，其特徵包括下述結構通式(I)的乳菇菌素其中R1為氫、羧基、羥基或醛基；R2為氫、羥基、酯基或醯氨；R3為氫、羧基、羥基或醛基；R4為氫、羧基、羥基或醛基；R5為氫或羥基或5位為亞甲基或羰基；3，4或6，7或8，9或10，11位形成環氧或形成單鍵或形成雙鍵。
2、根據權利要求1所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素，包括具有通式(I) 特徵的蛇麻烷倍半萜乳菇菌素mlt化slols A-H結構如下mitissimol A mitissimol B mitissimol C mitissimol D
3、根據權利要求1所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素，包括具有通式(I )特徵的蛇麻烷倍半萜乳菇菌素11/9-19"-印oxy-4Z,7Z-h圓ladlene-5"-ol結構 如下
4 、根據權利要求1或2所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素的製備方法，其 特徵包括所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素是從高等真菌細質乳菇("c&r/"5 /77/t想7)T^)的子實體中，用乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、石油醚其 中一種或幾種溶剤提取，所得提取物反覆用矽膠柱層析分離得到的。
5 、根據權利要求4所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素的製備方法，其特 徵包括如下步3聚A、 提取將1.6kg高等真菌細質乳菇a^^廠肱/7^/w加/s)粉碎，用 151_的95%乙醇提取3次，再用乙酸乙酯4.5L萃取，溶剤回收至幹，稱重得 33.5g ;B、 進入200-300目矽膠柱層析分離a、 用CHC，3-國溶剤以100:0, 98:2， 95:5， 90:10 (VOl/VOl)梯度 洗脫，在CHCVMeOH 100 : 0洗脫段得一組分，進一步進行矽膠柱層析，用 石油醚-丙酮溶剤以25:1， 15:1, 10:1， 5:1梯度洗脫，在15 : 1部位得純品乳菇菌素mltlsslmol A 66 mg ;b、 在a步驟CHC13-MeOH 95 : 5洗脫段得一組分，進一步進行矽膠柱層 析，用石油醚-丙酮溶劑以10:1， 8:1， 6:1， 4 :1, 5:1， 2:1, l:l梯度洗脫，在10 :1部位得純品乳菇菌素mltlsslmol B 8 mg ;c、 在b步驟石油醚-丙酮2 :1部位進一步矽膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯以20:1， 15:1， 10:1， 5 :1, 1:1， l:5梯度洗脫，在石油醚-乙酸乙酯20:1組分得純品乳菇菌素mltlsslmol C 26 mg ;d、 在步驟c石油醚-乙酸乙酯15:1組分進一步利用S印hadex LH-20凝 膠柱層析，CHCl3-MeOH 1:1為洗脫劑，純化得到乳菇菌素mltlsslmol D 5 mg ;e 、在步驟c石油醚-乙酸乙酯10:1組分進一步利用薄層製備層析，石油 醚-丙酮4:l為展開劑，純化得到乳菇菌素mlt化slmol E 8mg ;f 、在步驟c石油醚-乙酸乙酯5:1組分得到乳菇菌素mltlsslmol F 17mg ;g在步驟c石油醚-乙酸乙酯1:1組分得到乳菇菌素mltlsslmol G 4mg ; h 、在b步驟在石油醚-丙酮4 :1部位得純品乳菇菌素mltlsslmol 7 mg 。
6 、根據權利要求3所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素的製備方法，其特徵包括所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素是從高等真菌毛腳乳菇("c&r/M 艦toJ.Z.Y1ng)的子實體中，用乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、石 油醚其中一種或幾種溶劑提取，所得提取物反覆用矽膠柱層析分離得到的。
7 、根據權利要求6所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素的製備方法，其特徵 包括如下步驟A、提取:將汰g高等真菌毛腳乳菇(^rf^7w/7//t7^^ J.Z. Y1ng)，粉 碎，用20L的95 ^乙醇提取3次，再用乙酸乙酯5L萃取，溶劑回收至幹，稱 重得8.2g;B 、 200-300目矽膠柱層析分離用石油醚-丙酮梯度洗脫50:1, 20:1 ， 9:1， 5:1， 1:1得5個組分，取石油醚-丙酮9:1組分反覆用RP-C18柱層析， 用石油醚-氯仿重結晶，得到乳菇菌素2/ -3"-印oxy-6Z,9Z-huiruladlene-8"-o1 22 mg。
8 、根據權利要求1所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素作為製備抗腫瘤藥物 的應用，其特徵包括臨床上用於製備以乳菇菌素為有效成分的抗腫瘤藥物。
9 、根據杈利要求8所述具有抗腫瘤活性的乳菇菌素作為製備抗腫瘤藥物 的應用，其特徵包括臨床上用於製備含有乳菇菌素為有效成分的組合物或 化合物，製備含有乳菇菌素藥學上可接受的鹽、溶劑化物、或相應的結晶形 態的物質為有效成分,並且加入藥物可接受的載體或輔助成分的抗腫瘤藥物。
全文摘要
本發明提供一種具有抗腫瘤活性的乳菇菌素，其製備方法是從高等真菌細質乳菇(Lactarius mitissimus)，毛腳乳菇(Lactarius hirtipes J.Z.Ying)等子實體中，用乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、石油醚其中一種或幾種溶劑提取，所得提取物反覆用矽膠柱層析分離得到的。本發明還給出了這種乳菇菌素作為製備抗腫瘤藥物的應用方向，包括臨床上用於製備以乳菇菌素為有效成分的抗腫瘤藥物。本發明乳菇菌素經體外試驗表明具有較強的抗腫瘤活性，其中乳菇菌素Mitissimol D活性最強，對A549(人肺腺癌細胞株)，HCT-8(人結腸癌細胞株)，Bel-7402(人肝癌細胞株)，Hela(人宮頸癌細胞株)的半數抑制濃度IC50分別為2.5，11.0，3.6，4.6μg/ml，與陽性對照藥劑順鉑幾乎相當，這一類化合物有望成為新的抗腫瘤藥物。
文檔編號C07C49/717GK101475458SQ20081008013
公開日2009年7月8日 申請日期2008年12月16日 優先權日2008年12月16日
發明者唐宏亮, 師耀龍, 曹自然, 梁舒鵑, 潔 王, 羅都強 申請人:河北大學