複合型生物組織及細胞晶片的製作方法
2023-12-02 00:50:36 3
複合型生物組織及細胞晶片的製作方法
【專利摘要】複合型生物組織及細胞晶片涉及分子生物學、臨床醫學、獸醫學、動物學、醫學形態教學等學科，目前，單一的組織晶片、細胞晶片在實驗研究和臨床診斷工作中受很大制約，不能進行組織及細胞間的比對研究，不能觀察細胞內部結構，浪費昂貴的抗體，浪費時間等，複合型生物組織及細胞晶片產品很好的解決了這個問題。它是把組織和細胞標本按照組織標本的處理方式進行固定、脫水、包埋成組織及細胞蠟塊，再按照課題設計進行二次取材，把組織及細胞標本柱列陣於同一載體上，再包埋、切片，同步進行後續的免疫組化等實驗。複合型生物組織及細胞晶片主要應用於科研活動中組織及細胞層面的比對研究，觀察細胞內部細胞器結構，對臨床細胞學標本進行批量檢測診斷，有著重大的科研意義及良好的社會經濟效益。
【專利說明】複合型生物組織及細胞晶片【技術領域】
[0001]本發明專利複合型生物組織及細胞晶片涉及分子生物學、臨床醫學中細胞學診斷、獸醫學、動物學、醫學形態教學等學科。
【背景技術】
[0002]生物晶片是把電子技術中晶片的概念引入到生物【技術領域】，它是把生物材料(可以是基因、蛋白質、細胞、組織)按照不同的要求，以一定的數量、順序排列在玻片、塑料、瓊脂等載體上，提供給醫學生物等領域做研究使用。目前，單一的基因晶片、蛋白質晶片、細胞晶片、組織晶片都有比較成熟的技術、產品和市場，而據查新結果，複合型生物組織及細胞晶片國內外尚無報導，屬國內外首創。
[0003]複合型生物組織及細胞晶片是把組織晶片和細胞晶片的技術相互加以融合創新，把組織和細胞標本按照組織標本的處理方式，同時列陣於同一載體上，同步進行後續的免疫組化等實驗。複合型生物組織及細胞晶片中的組織部分與現有組織晶片製作方法基本相同，而細胞晶片的製作與現有細胞晶片的製作技術完全不同。傳統的組織晶片、細胞晶片是分別把組織和細胞放置在不同的載體上，是在不同的實驗條件下進行的分項實驗，不能進行組織及細胞間的相互比對研究。細胞晶片只能以觀察細胞的外表面為目的進行實驗結果判定，不能深入到細胞內部，同時，在臨床細胞學檢查中，細胞晶片不能以高通量的形式進行，如血液病的診斷，不能進行批量病例的診斷工作，延長了病人等待結果的時間，浪費昂貴的免疫組化抗體；因此，單一的組織晶片、細胞晶片在實驗研究和臨床診斷工作中都受到很大的制約。複合型組織及細胞晶片很好的解決了這個問題，首先，理念上突破傳統單一組織或細胞的層面，把組織及細胞放置同一載體上進行實驗，相同的實驗條件和實驗內容，使組織及細胞間可進行比對研究，這也對傳統生物晶片在概念上有很大的創新。在製作複合型生物組織及細胞晶片過程中，細胞標本的處理，也完全不同於傳統細胞培養分離的方法，而是按照組織標本的處理方式處理細胞，以石蠟包埋，最終，可以得到細胞的切片，使細胞內部細胞器的形態觀察成為可能，給研究者提供更多的細胞內部信息，在臨床細胞學檢查中，可以批量細胞標本的實驗，給病人贏得寶貴的治療時間，大大降低免疫組化實驗中抗體的使用量。該項技術產品的推廣應用，將有巨大的經濟效益和社會效益。
【發明內容】
[0004]本發明主要解決三個問題:1、生物晶片中基因晶片、蛋白晶片、細胞晶片、組織晶片單一層面研究有很大的局限性，實驗條件不可控制因素多，質量控制難，浪費時間及實驗試劑、耗材等等，2、不同層面晶片實驗結果比較起來十分困難，不能進行比對研究，很大程度上影響了實驗結果的綜合分析判定，3、臨床惡性腫瘤疾病尤其血液病診斷工作中，單一病例實驗診斷，病人等待檢測結果耗時長，耗費昂貴抗體等問題。
[0005]按照這樣的理念，本專利提出全新的產品設計思想，把不同組織及細胞標本經處理後以列陣方式放置於同一載體上，明顯增加了標本放置數量，也由原來的單一組織或細胞標本，增加為兩類標本，一類是組織標本，一類是細胞標本。產品的實驗開始於細胞標本的固定，傳統的細胞固定尤其是血液細胞的固定，會受到細胞內外滲透壓的影響，很容易破裂，因此，要保存完整的細胞形態，以等滲中性甲醛為固定液，效果良好，組織的處理相對容易，按照傳統方式脫水、包埋即可。晶片的製備是第二個關鍵環節，單純細胞標本，沒有組織構架支撐，不易形成有形的形態，對製作複合型組織及細胞晶片的細胞再取材是很大的考驗，多個環節中都要按照組織取材式的目的，來進行細胞的脫水、浸蠟、包埋，最終才能達到細胞不至於散落，形成理想的細胞蠟塊待用。第三個環節是組織及細胞蠟塊的切片、裱片、烤片、染色，玻片的處理最為重要，處理好玻片，才能使晶片蠟塊上的毫米大小的組織及細胞標本在染色中不至脫落。經過多道程序處理玻片，使其能夠達到粗糙而不模糊，不影響鏡下的觀察，而後，進行裱片處理，完成晶片的製備。[0006]不同生物標本組織及細胞放置於同一載體上，進行相同的後續試驗，使得多層面的晶片比對研究成為了可能，而在此過程中，細胞的切片處理，完全充分暴露了細胞內部結構，觀察更為全面詳盡。多標本的列陣排列，數量的增加，能夠對臨床惡性腫瘤病例的進行批量實驗診斷，明顯縮短病人等待實驗結果的時間，儘早進入治療階段，贏得了時間，贏得了生命。
[0007]本發明優點在於:理念新，首次提出複合型生物晶片的概念，也可以對不同晶片進行比對研究，擴大了醫學及相關學科的研究範疇。實用性強，不同晶片的比對研究，給醫學基礎科研提供了很好的科研思維，將大大的增加研究信息的獲得。臨床惡性腫瘤病例批量實驗診斷，很好的解決了病人長時間等待實驗結果的問題。
[0008]實施方式
[0009]首先是進行複合型生物組織及細胞晶片的設計，按照不同的用途目的確定複合型生物組織及細胞晶片標本種類，病例(標本)數量的確定，標本的處理方式；其次，對組織及細胞標本的處理，先對細胞標本進行3000轉/分的離心、盥洗三次、然後，選擇多種傳統甲醛、等滲中性甲醛、丙酮等組織固定液，按不同配比試驗，最終，選取等滲中性甲醛為固定液固定細胞標本，固定8小時以上，然後進行脫水、包埋、切片、染色、診斷處理；組織的處理相對容易，按照傳統方式脫水、包埋即可。第三，製作空白蠟塊模，對玻片載體表面進行糙化處理，並進行複合型生物組織及細胞晶片製作前的再取材、包埋、切片，對處理好診斷明確的組織及細胞標本蠟塊進行再次取材，然後，把取出的組織及細胞柱放入空白蠟塊模中，再次包埋晶片蠟塊，形成晶片蠟塊，進行切片，以糙化後的玻片裱片，完成複合型生物組織及細胞晶片的製作。
【權利要求】
1.一種複合型生物組織及細胞晶片，其特徵是把人體細胞、組織，按照不同的目的要求，放置於同一載體上，製成相應的複合型組織及細胞晶片，首先進行複合型生物組織及細胞晶片的設計，按照不同實驗課題題目，不同臨床細胞學檢測目的，確定相應的組織及細胞標本數量種類，製作晶片空白蠟塊模備用，然後，分別對組織標本進行常規固定，對細胞標本使用等滲固定液固定，再一同進行透明，浸蠟，包埋處理，形成固體蠟塊，進行切片，以糙化處理的載體玻片對組織及細胞切片裱片，先進行HE染色，診斷，再以取樣針對確定的組織及細胞標本進行二次取材，取出的標本柱放置於備用的空白蠟塊模內，再包埋，切片，以糙化載體玻片裱片，完成複合型生物組織及細胞晶片的製備。
2.根據權利要求1所述的複合型生物組織及細胞晶片其特徵在於把不同層面的組織及細胞標本類別放置同一載體上，製作成複合型生物組織及細胞晶片，以便可以進行組織及細胞間的比對研究，而區別於傳統組織與組織間，細胞與細胞間的單一晶片，不能進行不同層面的組織與細胞的比較。
3.根據權利要求1所述的複合型生物組織及細胞晶片其特徵在於固定細胞標本的等滲固定液，等滲固定液是以等滲液體與中性甲醛配置而成，等滲固定液可以明顯降低細胞標本的溶解，保持更多有用的生物信息，這種液體的應用，也使得臨床細胞學診斷中細胞標本批量處理得以實現。
4.根據權利要求1所述的複合型生物組織及細胞晶片中糙化載體玻片的特徵是，將常規載玻片經過洗滌液盥洗、鹽酸浸泡、清水漂洗、再用酒精浸泡、擦乾備用，糙化玻片表面明顯粗糙但又不影響光學觀察，使用糙化玻片，使得細胞標本能夠有足夠的粘附係數，粘附於玻片上而不至於脫落，留存更多有用的生物信息。
【文檔編號】C40B40/02GK103509711SQ201210213057
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2012年6月27日 優先權日:2012年6月27日
【發明者】毛靜濤 申請人:毛靜濤, 姜文華