阿爾茨海默病的新型診斷製劑的製作方法

2023-12-01 22:48:41 2

專利名稱：阿爾茨海默病的新型診斷製劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及痴呆領域並且特別涉及神經退行性疾病領域，本發明主要針對阿爾茨海默病。更特別地，本發明涉及阿爾茨海默病臨床前和臨床中預兆的領域。本發明更特別地涉及一種來自待測的受試者或者患者的樣本中的具體參數的新型神經化學方法或新型神經化學分析方法，其中實現了對阿爾茨海默病的發生或發展的預測的顯著提高或推斷出阿爾茨海默病的存在或者推斷出阿爾茨海默病的臨床前和臨床中的預兆。更特別地，本發明涉及將來自受試者或者患者的體液樣品中兩種不同的澱粉樣β_肽的定量比值用於測定他或她罹患阿爾茨海默病的概率，或者用於測定他或她罹患阿爾茨海默病的預兆。此外，本發明涉及可能用於測定受試者或者患者罹患阿爾茨海默病的概率的相應方法，或者用於推斷所述疾病存在的相應方法。最後，本發明涉及一種試劑盒，該試劑盒提供測定患者或者受試者罹患阿爾茨海默病的概率的工具，或者提供測定所述受試者或者患者的臨床前和臨床中預兆存在的工具。
背景技術：
·痴呆通常是指在所述受試者或者患者中存在的與認知、情緒和社交技能有關的缺陷，隨著疾病發展的影響該缺陷有時導致個人日常生活嚴重受損。痴呆的主要特徵是喪失已經獲得的技能，並且這可以特別地影響語言、運動技能和人格結構。痴呆通常與短期記憶明顯惡化和智力水平嚴重退化相關。大部分的痴呆被稱為神經退行性疾病，例如所討論的阿爾茨海默病、額顳葉痴呆和路易體痴呆.神經退行性疾病通常是指一組中樞神經系統發展緩慢的疾病，其具有遺傳性或偶發性來源或遺傳性或偶發性原因。所述疾病的一個明顯特徵是神經細胞提前喪失，從而導致各種神經學病症。雖然患所述疾病的風險隨著年齡的增長顯著增加，但神經退行性疾病原則上可以發生在生命的各個階段。神經退行性疾病一般有擴散或者全身化的過程並且通常每個人伴隨著特有的組織學損害類型。神經退行性疾病最常見的形式之一是阿爾茨海默病，它通常並且在下文也縮寫簡稱為「AD」。阿爾茨海默病同樣也是一種神經退行性疾病，其常在老年人中發生。因此，雖然阿爾茨海默病的相應預兆形式或者阿爾茨海默病的臨床前和/或臨床中的預兆形式也可以更早地發生，但是阿爾茨海默病中最常見的形式發生在65歲以上的人群中。神經退行性疾病，尤其是阿爾茨海默病的患病率正在顯著增加。因此，到2009年底全球受阿爾茨海默病影響的人數估算約為3，500萬人，並且照這樣下去，據估計到2050年受阿爾茨海默病影響的人數將超過I億。
全球神經退行性痴呆的患病率正持續地增加，因此公共衛生系統在未來將承受嚴重的社會經濟壓力。就此而論，阿爾茨海默病是痴呆的最常見類型。關於阿爾茨海默病的起因和分布，發現存在一定程度的家族聚集性，這是因為約15%到20%所測定的阿爾茨海默病例與特定的家族聚集性有關。所述病例尤其是這樣一種情況，除了自身罹患阿爾茨海默病的他或她之外，那些來自該家族的兄弟姐妹、父母和祖父母等等也會受阿爾茨海默病的侵襲。僅在非常少量的患者中遺傳因素也是很重要的，其具體包括在早老基因和APP基因(澱粉樣蛋白前體基因)中的變異。然而，關於阿爾茨海默病的全部病例，與遺傳相關的比例小於O. 5%，所以結論是所有阿爾茨海默病病例的絕大部分是偶發性的。阿爾茨海默病另一個特徵是它與認知表現衰退相關，患病一段時間後，衰退增加，並且通常與日常活動的減少、行為古怪以及神經心理學症狀相關聯。就此而言，參考文獻中也經常稱阿爾茨海默病為阿爾茨海默型痴呆。在一定程度上，阿爾茨海默型痴呆是阿爾茨海默病的後果或者結果，用來描述疾病的進程。因此當腦損害的程度是如此之大從而導致 認知缺陷不能再通過仍然完整的神經元成功地補償時，首先是指阿爾茨海默型痴呆。一般而言，術語「阿爾茨海默病」涵蓋術語「阿爾茨海默型痴呆」。阿爾茨海默病能判定診斷的特異病症性特徵是在患者大腦中形成斑塊，這些斑塊以錯誤摺疊的澱粉樣β_肽和在神經元中堆積的神經元纖維為關鍵特徵。胞內神經元纖維束基本上由微管相關蛋白組成，當過度磷酸化時微管相關蛋白隨後聚集形成所述纖維。在患病期間，神經元的死亡導致腦萎縮現象；此外，不再產生足夠量的乙醯膽鹼信使，其具體原因也是乙醯膽鹼轉移酶含量減少。澱粉樣β_肽，其也可被稱為β_蛋白、β_肽、A-β肽或Αβ肽，其形成於膜本體蛋白的澱粉樣前體蛋白(APP)。APP為與氨基端一起存在於細胞外側的I型跨膜蛋白。蛋白的羧基端相應地在細胞內側。APP被稱為分泌酶的特定蛋白酶裂解，並且所述分泌酶特別地是β-分泌酶和Y-分泌酶。在澱粉樣蛋白途徑過程的第一步中利用細胞外側的β_分泌酶裂解APP時，APP裂解導致β-肽從前體蛋白中釋放。隨後，通過Y-分泌酶產生進一步裂解，該裂解產生在APP的跨膜區並導致Αβ-肽釋放。由於β-分泌酶和Y-分泌酶的活性，Αβ_肽因此是形成於澱粉樣前體蛋白的潛在神經毒性片段，該A β -肽通常具有37至42個胺基酸的長度。由此形成的A β -肽主要類型是具有40個胺基酸長度的A β (1-40)，而形成一小部分相應地具有42個胺基酸的Αβ (1-42)。長的Αβ (1-42)比短的Αβ (1-40)具有更高的聚集趨勢。此外，可以形成許多更進一步的A β -肽，例如切除氨基端的A β -肽，例如A β (2-40)和A β (2-42)。現有技術中，Αβ -肽與阿爾茨海默病的病理學發展相關。在這一背景下，現有技術中已經嘗試實施許多治療方法，並試圖使所述方法實現治療阿爾茨海默病的目的。因此，治療重點的一個方面是實現對上述A β -肽的免疫，尤其與在這方面特異的抗體的生物合成的誘導有關。進一步治療方法包括發展和使用特異分泌酶抑制劑，特別地，預望該特異分泌酶抑制劑特異於前述β_分泌酶或者Y-分泌酶。然而，從治療的角度來看，該方法在這方面仍無法令人滿意或者該方法有時與嚴重的副作用相關聯。進一步的治療方法為乙醯膽鹼酯酶抑制劑的控制給藥，這種治療方法應該會減少乙醯膽鹼酶裂解，但這種情況在阿爾茨海默病患者中極少發生。然而，這不是影響疾病本身的治療方法。這是因為乙醯膽鹼酯酶抑制劑例如多奈哌齊、利伐斯的明和加蘭他敏的給藥目的是對阿爾茨海默病的對症治療。在此方法的基礎上，其可能僅僅是在有限時間內輕度地改善認知表現，或者保持在不變的水平。總之，迄今為止在現有技術中沒有發現可以用於治癒阿爾茨海默病的治療方法。尤其在目前缺少有效的治療阿爾茨海默病方法的背景下，對該疾病非常早期的診斷顯得尤為重要，並且該診斷需要在阿爾茨海默病的早期臨床或者甚至臨床前階段時作出。這是因為它不僅首先可能基於預測或確定受試者或者患者是否罹患阿爾茨海默病的概率，而且其次可能基於在非常早期阻止該疾病的進一步發展。例如，人們普遍認為，例如常規運動、有針對性的記憶練習和有針對性的優化生活方式可以延緩或者減緩疾病的進程，並能延遲病情發作，即阿爾茨海默病的臨床診斷。已經在臨床前或者早期臨床預兆水平中提出的阿爾茨海默病的早期診斷，對於治療阿爾茨海默病的新療法也具有重大意義。在這一背景下，現有技術中已經研究了大量預期實現非常早的診斷阿爾茨海默病的方法。例如，就此而言，普遍確立的臨床方法非常重要，它們主要基於不同的診斷方法，包 括特別設計的認知能力測試以及家族記憶力(heteroanamnesis)測試，即考慮對患者的家族成員的觀察。成像方法，例如也可以使用計算機X射線斷層術或者磁共振體層攝影術，從而能夠診斷阿爾茨海默病。然而，影響前述方法的缺陷在於它們首先常常涉及複雜的設備並且通常直到較晚或者晚期臨床階段才能診斷阿爾茨海默病。早期診斷阿爾茨海默病的還一方法包括分析受試者或者患者的體液，特別地，使用腦脊液(CSF)進行分析。這主要針對特定生物標記的分析，同時在本文中也針對體液中的特定的Αβ-肽的分析。然而，缺點是必須通過複雜的穿孔來獲取樣品，這樣存在風險並且時常伴有疼痛，同時也時常與不希望的感染相關聯。因此，體液取樣僅可有限的用於研究可能的阿爾茨海默病的初次懷疑，並且例如，同樣地存在於輕微的認知受損的患者中，僅有限的用於評估患有阿爾茨海默型痴呆的風險。現有技術已經在腦脊液中鑑別出痴呆的特定生物標記，因此早期甚至臨床前階段的阿爾茨海默病的可靠檢測的診斷精確度據信已提高至一定水平。與血液分析相比，用於確認痴呆的神經化學CSF診斷方法(基於CSF神經化學痴呆診斷(CSF-NDD))具有高度侵入性並且更加疼痛、更為昂貴以及更加耗費時間。因此不能用於以繼續檢查為目的而進行的常規重複分析。因此非常需要取樣簡便且壓力較小的替代檢測方法，另外該方法也應該能夠監測疾病過程或者治療進展。

發明內容
因此，在上述背景下，本發明的目的在於對特定的方法和應用提供新的有效的概念，在此基礎上能夠在非常早尤其是在臨床前或者早期臨床階段對阿爾茨海默病的存在或者對可能罹患阿爾茨海默病的預後出具報告。更特別地，在本發明內容中，提供容易操作並具有最小水平副作用的相應概念或者方法。同時，在本發明內容中，也應當確定用於本發明構思的目的的待分析樣品的提供或者取樣與受試者最輕的疼痛和最小副作用相關聯，如果有任何這樣的疼痛和副作用的話。
本發明另一目的是提供一種試劑盒，該試劑盒可以用於實現本發明構思的簡單標準化操作，所述構思用於測定阿爾茨海默病，尤其測定阿爾茨海默病的早期形式。最後，本發明的根本目的是提供前述類型的方法和應用以及試劑盒，它們各自能夠避免或至少減少現有技術中存在的缺陷。 更特別地，在本發明內容中，來自特定樣本的特定生物標記將以可控的形式進行使用，從而在此基礎上能夠對阿爾茨海默病的存在或任何發展作出非常早期的報告。更特別地，基於本發明，該目的也是以簡單安全的方式實現觀察已經確定的阿爾茨海默病進程或者了解治療方法有效性。為了實現上述目的，如權利要求I所述，本發明提出(根據本發明的第一方面)將受試者或者患者體液樣本中的兩種不同澱粉樣β_肽的至少一個定量比值用於測定他或她 罹患阿爾茨海默病的概率，或者測定他或她患有阿爾茨海默病的預兆症狀；此外，本發明這一方面的有利形式是它的從屬權利要求的內容。如權利要求31所述或如權利要求32所述，本發明還提供了(本發明的另一方面)測定受試者或者患者罹患阿爾茨海默病的概率的方法；此外，本發明這些方面的另一個有利形式是所述權利要求的從屬權利要求的內容。最後，本發明還提供(本發明的還一方面)如權利要求34所述的試劑盒，該試劑盒能夠特定地用於測定患者或者受試者罹患阿爾茨海默病的概率，或者可以特定地用於測定他或她患有阿爾茨海默病的預兆症狀；此外，本發明這方面的有利形式是所述權利要求的從屬權利要求的內容。將可以預見到僅與本發明一個方面相聯繫的具體形式、實施方案等等的描述在下文中也相應地用於本發明的其它方面，而不需要詳細提及。此外，以下引用的所有實驗調查或研究等基本上可以通過本領域技術人員公知的或標準化的或明確說明的方法或步驟進行操作。因此，本發明的第二方面提供了將受試者和/或患者體液樣本中的兩種不同澱粉樣肽(Α-β ;Αβ)的至少一個定量比值(係數)用於測定他或她罹患阿爾茨海默病(AD)的概率(風險)和/或測定(診斷)他或她患有阿爾茨海默病的預兆症狀的應用，其中澱粉樣β_ 肽選自(a)A@ (1-42)、α)Αβ (2-40)和(c)A@ (2-42)並且其中形成(a) / (b)或(b) / (a)和/或(a) / (c)或(c)/ (a)的定量比值。因此，在本發明內容中，令人十分驚訝的是可以通過上述的基於特定澱粉樣β -肽的比例的發明應用實現本發明的目的。在本文中，同樣出乎意料的是可以使用所述比例，可靠地測定阿爾茨海默病的存在，或為了可靠地預測性地測定阿爾茨海默病的進展。現有技術基本上公開了這種澱粉樣肽的存在和阿爾茨海默病之間的聯繫，並且在現有技術中澱粉樣β_肽應用的普遍方面也被認為與阿爾茨海默病的診斷有關；然而，直至本發明的出現，現有技術中還沒有任何考慮本發明的所述澱粉樣肽的特定比例的構思(並且此外，更特別地，基於非常特定的樣本的使用，如下文將要詳述的)從而由此確保對阿爾茨海默病的存在有理由充足或可靠的報告或可靠預測或預知受試者/患者的阿爾茨海默病的形成或進展。在本發明內容中，令人十分驚訝的是特定澱粉樣β -肽的具體比例與阿爾茨海默病的存在有顯著關聯，因此，特定澱粉樣β-肽的具體比例可用作阿爾茨海默病存在的可靠指標，甚至在疾病的早期，例如阿爾茨海默病的臨床前和早期臨床形式。本發明的範圍包括一種基於體液的有效樣本尤其是基於血液樣本的可以體外或體內操作的用途或方法，其確保了有簡單可行性的良好標準化。此外，本發明構思顯著地減少了受試者/患者的壓力，因為可以獲得潛在的尤其基於血液的樣本，而沒有任何顯著的損害或者副作用。因此，本發明的一個基本概念是在測定兩種特定澱粉樣β -肽的定量比值的基礎上，針對阿爾茨海默病的發展，使有意義或者可靠的預知或者預測成為可能。然而在本發明內容中，不僅是有意義的預測或預知阿爾茨海默病的發展或者進展的可能；而且還在分析有效樣本中兩種特定澱粉樣β_肽的定性比例的基礎上，本發明允許有意義的測定或者診斷阿爾茨海默病或者阿爾茨海默型痴呆的任何存在-並且已經在疾病非常早期階段，因此這已經可以在臨床前或者早期臨床階段進行測定。在本文中，申請人已經十分驚訝地發現，來自體液優選血液樣本的一方面的澱粉 樣β-肽Αβ (1-42)與澱粉樣β-肽Αβ (2-40)的精確地特定比例或另一方面澱粉樣β-肽Αβ (1-42)與澱粉樣β-肽Αβ (2-42)的精確地特定比例，對阿爾茨海默病存在的分析或阿爾茨海默病發生的預知具有非常有意義的結果。因此本發明基本原理集中於體液尤其是基於血液樣本的前述特定澱粉樣β_肽作為針對阿爾茨海默病或其前期症狀預兆的生物標記的神經化學分析，從而以這種方式使對受試者或者患者的阿爾茨海默病的前述報告成為可能。在本發明內容中，同樣可能的是能夠排除其它痴呆類型從而使鑑別診斷阿爾茨海默病成為可能，因為(以一種完全意外的方式)申請人已經發現在確定樣本中的前述澱粉樣β_肽的非常特定的比例對阿爾茨海默病或其預兆或早期形式是非常特異的。這被認為是本發明的另一主要優點。根據本發明，前述特定澱粉樣肽(即一方面是Αβ (1-42)，和另一方面是Αβ(2-40)或者Αβ (2-42))作為指示的生物標記起作用，由於以它們各自特定濃度而從中得到的相互之間的特定比例對患者或者受試者的阿爾茨海默病的存在是特定的。因此，所述澱粉樣β_肽及其在樣本中的特定濃度或特定量與阿爾茨海默病相關聯。因此，在一定程度上，所述澱粉樣β-肽是阿爾茨海默病期間病理過程的指示物。本發明構思是非常有意義的，首先是因為它基於確定的樣本中確定的神經化學生物標記的分析，這些生物標記直接與阿爾茨海默病相關聯。此外，其次，與在現有技術中使用的方法例如心理測驗方法、神經影像方法等等相比，將在下文中詳細描述的本發明的用途和方法可以以非常簡便和低廉的方式進行操作。在應用上述類型的特定生物標記或者生物指示劑的基礎上(除了涉及在受試者或者患者中是否存在阿爾茨海默病或者涉及關於受試者或者患者是否具有一定的概率將罹患阿爾茨海默病的報告之外)，也可能做出關於任何治療活性物質對阿爾茨海默病的過程有積極效果的治療程度的進一步報告，這意味著同樣可以將生物標記用作任何藥物效果的指示物。在本發明構思的基礎上，本發明的特徵在於能夠對阿爾茨海默病或者該疾病的發生概率進行快速且具有意義的分析，另外，對於患者更特別地是對於樣本準備，如果有任何壓力的話，其僅與低水平的壓力相關。因為由本發明所提出的在臨床前或者早期臨床階段時測定阿爾茨海默病的可能性，或者由於隨後對受試者或者患者生命中任何阿爾茨海默病的發生作出報告的可能性，甚至可能在非常早的階段，或者為了預防的目的，對可能的阿爾茨海默病作出反應，例如對受試者或者患者的生活方式作出相應的優化，或者對藥物進行定向給藥，其可以例如改善受試者或者患者的認知能力或者延遲疾病的進展。特別地，下面的肽A β (1-42)是具有42個胺基酸長度的澱粉樣β_肽，其第一位置或者氨基端由天冬氨酸形成，而Αβ (2-40)和Aβ (2-42)分別是具有40個胺基酸和42個胺基酸長度的澱粉樣β_肽，其各自去除了氨基端。上述特定澱粉樣β_肽的結構和命名對本領域技術人員來說是公知的，因此在這一方面不需要進行任何進一步的詳述。特別地，本發明內容中使用的術語「定量比值」或者「係數」指的是所述澱粉樣β -肽彼此之間的相對濃度或相對量，因此指的是上述澱粉樣β -肽的相對定量。相應澱粉樣β_肽的濃度或量及由此產生的比值測定可以在本領域技術人員公知的分析方法的基 礎上確定或者發現。一種根據本發明測定各自比例的優選方法將在下文中進行詳細舉例，該方法基於利用隨後的蛋白分離和測定方法的免疫沉澱法。在本發明內容中，受試者或者患者通常可以是人類或者動物生命形式，更特別地是哺乳動物。更特別地，受試者或者患者是人類。對於來自受試者或者患者的樣本或體液，以非限制的形式，可以包括來自或形成於受試者身體的體液。特別地，該樣本或者體液可以是血液、血漿、淋巴液、尿液和/或腦脊液。如在下文中更詳細的說明，在本發明內容中，基於應用例如血漿或者血清的血液的體液是特別有利的，尤其是因為在這一基礎上(以十分令人驚訝的方式)可能得到特別有意義的結果，並且又簡化取樣。此外，基於根據本發明的用途或方法，在本發明內容中將分析來自於受試者或者患者的體液樣本，所述受試者或者患者可能有腦部功能衰退的症狀，特別是患有輕微的腦部功能衰退，優選記憶力衰退，特別是達到輕微的記憶力衰退。此外，特別地，受試者或者患者可能有輕度認知損傷症狀(MCI)。特別地，輕度認知損傷(MCI)可能是初期的痴呆或者單獨的記憶力損傷。一般而言，在本發明用途或方法中待進一步考慮或檢查的受試者或者患者具有認知損傷或認知缺陷，這在年齡和體質相仿的個體中更為顯著。更特別地，輕度認知損傷(MCI)的特徵在於該症狀並不(到目前為止)顯著到在受試者或者患者的日常活動中引起持續的損傷。特別地，本發明用途或者方法尤其涉及罹患輕度認知損傷(MCI)的患者或受試者，因為罹患輕度認知損傷的人通常具有更高的後續患阿爾茨海默病的概率。因此，研究顯示每年有10%到15%受輕度認知損傷影響的人患上阿爾茨海默病。然而，本發明通常不限於罹患輕度認知損傷(MCI)的受試者或者患者，為此，可以使用本發明用途或方法對阿爾茨海默病是否存在和阿爾茨海默病是否有後續發展的風險的診斷說明。此外，還可以檢查那些沒有認知損傷特定症狀的受試者或者患者或者(更特別地對鑑別診斷)那些至少懷疑有除了阿爾茨海默病以外的痴呆的患者或受試者。對於在本發明的基礎上可以被測定或者診斷的阿爾茨海默病的預兆，尤其是阿爾茨海默病臨床前或者亞臨床階段。特別地，阿爾茨海默病的臨床前預兆可以是初期或前期的阿爾茨海默病，其也被稱作AD初期。換言之，在本發明內容中，阿爾茨海默病的預兆可以是初期阿爾茨海默病或可能的阿爾茨海默病。更特別地，初期的阿爾茨海默病可以是利用現有技術確立的診斷方法還不能在這一疾病階段被診斷為阿爾茨海默病的阿爾茨海默病的預兆。根據本發明，可以在本發明的用途或者方法的基礎上測定的阿爾茨海默病預兆也可以是阿爾茨海默病的臨床階段。更特別地，阿爾茨海默病的預兆也可以是阿爾茨海默病早期，它也可以被稱作AD早期。更特別地，阿爾茨海默病早期可以是在現有技術已知方法的基礎上已經可以臨床上診斷的阿爾茨海默病早期階段。更特別地，阿爾茨海默病預兆可以是患有認知缺陷的阿爾茨海默病晚期階段，但是其中的認知缺陷還沒有發展到給受試者或者患者的日常生活造成嚴重損害的程度。根據本發明，更特別地考慮以上對於術語「阿爾茨海默型痴呆」的評論，因此在本發明構思的基礎上能夠對受試者或者患者中的阿爾茨海默型痴呆的存在或進一步發展作出報告，更特別地是在阿爾茨海默型痴呆的相應臨床前和/或臨床階段基礎上，該阿爾茨 海默型痴呆是在潛在的阿爾茨海默病的基礎上和/或由於潛在的阿爾茨海默病而導致的。基於此，本發明的用途或者方法因此甚至可以在能夠延遲或減緩阿爾茨海默病進展的早期階段的初始方法背景下進行，為了由此能夠儘可能長時間的維持患者或者受試者的生活質量。在優選的方式中，所述澱粉樣β -肽的比例是基於量或者濃度的比例。根據本發明，當(a)AP(1-42)/ α)Αβ (2-40)的比值[即 A β (1-42) /Αβ(2-40)的比值或(a)/ (b)的比值]和/或(a)Ai3 (1-42)/ (ο)Αβ (2-42)的比值[即Αβ (1-42)/A β (2-42)的比值或者(a)/ (c)的比值]，優選(a)AM (1-42)/ α)Αβ(2-40)的比值[即Αβ (1-42)/Aβ (2_42)的比值或者(a) / (c)的比值]形成時，可以在阿爾茨海默病的鑑別或者患阿爾茨海默病風險的測定方面得到特別好的結果。根據本發明同樣特別優選的是將受試者或者患者的血液用作測定所述澱粉樣β_肽的定量比值的樣本。在本文中，將本發明內容中將受試者或者患者的血漿(血漿)或者血清(血清)、優選血漿(血漿)用作樣本是特別有利的。換句話說，在本文中令人十分驚訝的是在受試者或患者的血液中、尤其在血漿或血清中存在與阿爾茨海默病相關的特定的所述澱粉樣β_肽的比例的顯著變化(並且也尤其與疾病的早期階段相關)。因此，在本文中，本發明是基於申請人十分驚訝的發現(不希望對該理論做任何限制):在阿爾茨海默病過程中(並且甚至也在該疾病的早期階段)，在某種程度上，整個有機體或者身體中有整體或主要的病理學上的「變化」，這也與血液中的所述澱粉樣β_肽的各自濃度的顯著變化相關。所有物質的血液或血漿和/或血清可以被用於診斷阿爾茨海默病存在的事實令人更加驚訝的是，到目前為止至關重要的是人們已經假設在該疾病過程中，血液中的澱粉樣肽本身沒有受到影響，而主要在腦組織本身或與腦相聯繫或相關的體液中的澱粉樣β -肽受到影響，例如腦脊液，並且因此在某種程度上，獨立於腦本身的次要的體液的血液，在現有技術中還未被引作澱粉樣β-肽變化的關鍵指示物。作為待分析的樣本的血液或者血漿和/或血清的應用的令人十分驚訝的適用性也是基於申請人十分驚訝的發現更特別地也是在阿爾茨海默病的早期，在受該疾病影響的患者體內有特定生理參數的根本「變化」，並且也在受影響的患者血液中以特定的方式反映出來，特別地涉及前述特定澱粉樣β-肽的比例。同樣地，在本文中令人十分驚訝的尤其是可以使用特定的澱粉樣β_肽Αβ(2-40)，因為在許多其它組織或身體組成中並不能以這種方式檢測到特定的澱粉樣β -肽Αβ (2-40)。也是在這一亮點中，本發明內容中完全出乎意料的是，為了能夠對阿爾茨海默病的測定或者患所述疾病概率的測定作出可靠的報告，可以使用血液或者血漿和/或血清中特定的澱粉樣β_肽的比例，即，該特定的澱粉樣β_肽一方面是Αβ (1-42)以及另一方面是 Αβ (2-40)或者 Αβ (2-42)。另一個優點是可以通過簡單的方式獲得血液，並且血液取樣對患者或者受試者來說是無痛並基本無風險。這被認為是本發明的另一個至關重要的優點。在本發明的優選實施方案中，更特別地，因此提供基於血液或者基於鑑定痴呆的血液檢查的神經化學分析或者測定，這在例如本文的相應診斷方法中是可用的(基於血液的神經化學痴呆診斷學(血液-NDD))。因此，本發明構思的特徵是，首先，對阿爾茨海默病的測定非常有意義的構思(儘管樣本中待分析的澱粉樣β -肽的濃度普遍低)以及，其次，給患者提供溫和的方式的構思，且適於重複使用，例如為了後續檢查的目的等等。對於關於分析樣品以測定相關比例的操作，可使用現有技術中已知的大量純化和分析方法。·當以逆流純化或者分離步驟、尤其通過免疫沉澱法將澱粉樣β_肽(尤其是一方面(a)Ai3 (1-42)和另一方面(b)Ai3 (2-40)和/或(c) Αβ (2-42))從樣本中有效地移出或者分離時，可以獲得特別好的結果。該純化可以通過從潛在樣本中有效的採集不同類型的澱粉樣β-肽進行操作，該澱粉樣β-肽包括(a) Αβ (1-42)和(b)Ai3 (2_40)和/或(c)Ai3 (2-42)。這提高了分析精確度。在本文中，在免疫沉澱過程中尤其可能使用至少一個特異於澱粉樣β_肽或與之結合的配體，優選至少一個抗體。在這一方面,至少一種配體,優選至少一個抗體,可能特異於(a)AP (1-y)和/或Αβ (2-y)型澱粉樣β-肽，其中y是從37到43的整數。在本文中，特別地，變量y表示與其羧基端有關的肽的長度。此外，根據本發明，優選特異於(a) Αβ (1-42)和/或(b)Ai3 (2-40)和/或(c)Αβ (2-42)的配體或者抗體。此外，至少一種配體、優選抗體，可能特異於(a)Ai3 (1_42)和/或(b)A β (2-40)和/或(ο)Αβ (2-42)的氨基端。更特別地，根據本發明，可以使用至少對所述特定澱粉樣β-肽Αβ (1-42)、Αβ(2-40)和Αβ (2-42)至少有基本上相同的靈敏度或者特異性的配體或者抗體，與之相關的優點在於在純化步驟過程中僅需使用單個配體或者抗體類型。然而，此外，也可能使用對待分離或分析的澱粉樣β_肽分別有特異性的幾種不同類型的配體或者抗體。例如，根據本發明，可能使用1Ε8型抗體。該抗體對澱粉樣β_肽特別敏感，所述澱粉樣β-肽的胺基酸序列在第I位有天冬氨酸，例如(a)Ai3 (1-42)，或者在第2位有丙氨酸，例如(b)Ai3 (2-40)或者(c)A β (2-42)。1Ε8型抗體例如可以在商業地從德國柏林拜耳先靈製藥股份公司購買。更特別地，根據本發明，優選的抗體在EP 1270592Α1中描述，它的全部內容通過引用納入本文。此外，關於所述樣本分析，更特別地是在離析或分離或純化經過預處理的待測定的澱粉樣β_肽後，各個澱粉樣β_肽、尤其是一方面的(a) A β (1-42)和另一方面的(b)Αβ (2-40)和/或(c)A0 (2-42)的測定，特別是量或者含量和/或濃度的測定，可以在蛋白分離方法或者免疫檢測性蛋白檢測方法、尤其是免疫檢測性蛋白檢測方法，優選為蛋白分離方法和免疫檢測性蛋白檢測方法組合、尤其是定量免疫檢測性蛋白檢測方法的基礎 上進行。根據本發明，特別地可以以這樣一種方式進行對上述純化方法過程中獲得的包括各種澱粉樣β-肽的組分相應地進行進一步處理或分析。在本文中，所使用的蛋白分離或者蛋白檢測方法可以，例如是凝膠電泳法，尤其是雙向凝膠電泳，優選為基於尿素的雙向凝膠電泳。此外，所使用的蛋白分離或者蛋白檢測方法可以是蛋白印跡法。當所述特定澱粉樣β_肽的檢測是在雙向凝膠電泳尤其基於尿素的雙向凝膠電泳與下遊蛋白印跡法組合(2D-Ai3 -WIB)的基礎上進行時，可以得到特別有利的結果。此外，對於在本發明內容中所使用的蛋白分離或者蛋白檢測方法，也可能在免疫檢測性蛋白檢測法的過程中、尤其是定量免疫檢測性蛋白檢測方法，優選在蛋白印跡法中，使用至少一種配體、優選抗體，對澱粉樣β_肽進行標記，尤其是通過與所述澱粉樣β_肽直接結合或者直接作用的第一配體或者第一抗體首先標記步驟的方式。在本文中，至少一種配體、優選抗體應當特異於Aβ (1-y)和Αβ (2-y)形式的澱粉樣β -肽,其中y是從37至43中的整數。此外，在免疫檢測性蛋白檢測方法、尤其是定量免疫檢測性蛋白檢測方法過程中使用的配體或者抗體，應當特異於(a)A0 (1-42)和/或(b)A0 (2_40)和/或(c)Αβ (2-42)。此外，至少一種配體、優選抗體，應當對(a)Ai3 (1_42)或者(b) Aβ (2-40)和/或(c)A0 (2-42)的氨基端是特異的。對前述澱粉樣β_肽，使用至少有基本上相同的靈敏度的配體類型或抗體類型是可能的，這也是免疫檢測性蛋白檢測方法、尤其是定量免疫檢測性蛋白檢測方法的例子。例如，可使用上述1Ε8型抗體。此外，也可使用分別對單個的澱粉樣β_肽有特異靈敏度的各種類型的配體或者抗體。可以通過使用本領域技術人員已知的相應的第二配體或者第二抗體進行特異性檢測，為了檢測，可以將酶或者染料、尤其是螢光染料，連接到它們上，所得結合物能夠發出可檢測且可評價的測量信號。例如，根據參照追蹤，可以進行特定澱粉樣β -肽的鑑別或分配。基本原理對本領域技術人員來說是眾所周知的。對於為了進一步詳細說明可在本發明文中使用的所述樣本分析方法，特別地可以參考 Maler, J. Μ.發表的科學出版物「Urea basedtwo-dimensional electrophoresisof beta-amyloid peptides in human plasma!Evidence for novel Αβ species」，Proteomics, 2007，7，3815-3820，其全部內容通過引用納入本文。在用於樣本中所述澱粉樣β_肽的定量測定的上述引用組合的基礎上，基於上遊免疫沉澱反應和下遊、尤其是定量，免疫檢測性蛋白檢測方法，確保了對各個澱粉樣β -肽定量測定的高精確度。由於本發明文中用於樣本中澱粉樣β-肽定量測定的方法規則，檢測或者記錄極低濃度的所述肽類是可能的，並且甚至能檢測渺摩爾範圍內的數量或含量。在關於受試者或者患者罹患阿爾茨海默病的概率(風險)或者他或她有阿爾茨海默病預兆的測定的樣本分析過程中建立起來的對所述澱粉樣β-肽特定比例的評價或分類，在本發明文中以這樣一種方式進行可能是有利的將兩個不同澱粉樣β_肽的定量比值，尤其是如上定義的，與相應的參照比值相聯繫或相比較，或者將其分配給這些參照比值。換言之，從分析的樣本獲得的澱粉樣肽的比例的分類可以在與參考系統或參考數值或參考數值範圍比較的基礎上進行，如下將描述的相應參考參數，所述參數以統計數據的形式獲得，例如將一組受試者或者患者作為參考。這可以通過這樣的方式完成例如,在現有技術已知的診斷方法、如心理測驗、神經化學和/或神經影像方法的基礎上，初次檢查一組參考受試者的認知衰退或阿爾茨海默 病預兆的存在，任選地可追溯的包括阿爾茨海默病的後續實際發展，並以此作為基礎進行有關診斷發現的表型或者歸類到具有特定的臨床症狀或診斷的特定參照組，以及，在這些預先測定或形成的參照組中，也以同樣的方式分析樣本中澱粉樣β_肽的特定比例並且特別地進行統計概括。隨後將基於所述受試者或者患者中發現的特定比例與所述參照組中發現的同樣類型比例的相互關係或比較,對待檢查的受試者或者患者進行分配。例如，在本發明內容中的步驟可以使用定量比值與相應參照比值的比較或相互關係來確定患阿爾茨海默病的概率，和/或確定或診斷有阿爾茨海默病預兆的存在。在本文中，在一方面待檢查的受試者或者患者與另一方面的參照組比較的比值的情況下使用的術語「相應地」，尤其是指相同或可比較的比值，即，尤其是指相同的澱粉樣β-肽的相應比值。例如，以一種非限制性的方式,受試者的(a)AP (1-42)/ α)Αβ(2-40)的比例可以與參照組的相關測定的比例(a)Ai3 (1-42)/ (b)A^ (2_40)相比較。特別地，參照組測定的比例是一組屬於參照組的患者的統計(平均)值或者數值範圍。從基於例如可能預先已經確定的眾多受試者的統計比例意義上說，測得的參照比例因此尤其是與一組參照受試者或者參照患者有關的測得的數值或數值範圍。在本文中，所測定的數值或者數值範圍尤其是具有相應標準差的統計學測定的數值範圍或者統計平均值，該標準差可能是分類的基礎。在本發明內容中，優選在受試者和/或患者的參照組的定量參照比例的基礎上進行測定，或將其作為基礎進行測定。在本文中，更特別地為了生物統計評價的目的，可以檢查受試者參照組的參照受試者或者患者參照組的參照患者的輕度認知損傷(MCI)和/或阿爾茨海默病臨床前預兆、尤其是初期的或者前期的阿爾茨海默病(AD初期)，和/或阿爾茨海默病的臨床預兆、尤其是早期的阿爾茨海默病(AD早期)的存在與否。此外，在本發明內容中，在選自神經化學方法、神經影像方法、心理測驗方法以及至少兩種前述方法組合的檢查方法的基礎上可以進行檢查或者評價，優選在所有前述方法組合的基礎上。在某種程度上，以這種方式將相應的參照受試者或者參照患者的臨床症狀分類是可行的。此外,在本發明內容中優選對受試者參照組或者患者參照組的檢查或評價在至少一個黃金標準(GS)、尤其選自臨床黃金標準、神經化學黃金標準、心理測驗黃金標準和至少兩個前述黃金標準的組合的基礎上進行，優選在所有前述黃金標準組合的基礎上。如在本發明內容中使用的術語「黃金標準」(也稱作GS)特別地涉及(檢查)標準，其通常在特定的檢查時間得到認可並且在「最佳實踐」的情況下得到對疾病診斷特別有意義的結果。因此黃金標準通常構成實際或重要標準。本發明內容中使用的關於分析參照受試者或者參照患者的黃金標準對本領域技術人員來說是眾所周知的。更特別地，對於參照數值的測定或評價可以在包括心理測驗、神經化學或者神經影像方法或參數的黃金標準的基礎上進行。例如，可以在神經化學方法的基礎上進行測定或評價，神經化學方法包括腦脊液(CSF)參數的測定；更特別地，可以測定Αβ (χ-42)/Αβ (χ-40)的比例[Αβ比TGC]，其 中X可以獨立地假定為數值I或者2，和/或Αβ (1-42)的含量[Αβ142Ιηη]和/或tau蛋白的總含量和/或磷酸-tau蛋白181的含量。此外，在參照受試者或者參照患者分類的情況下，也可能使用神經影像方法，特別地，該神經影像方法包括腦萎縮檢查，優選基於成像方法，優選SPECT (單光子發射體層成像)和/或MRI (核磁共振成像)。此外，根據本發明使用的心理測驗方法可以包括基於麗SE (細微精神狀態檢查)的研究。更特別地，如果使用前述診斷方法不能全面的測定，對於測定或評價，隨後發生的阿爾茨海默病可以結合各自參照受試者或者參照患者檢查期間的診斷，尤其是在檢查期間對阿爾茨海默病臨床前預兆存在的評估。基於在參照患者或者參照受試者中進行的檢查或者診斷的，因此可能將參照人分配到有相應臨床症狀的特定分類中，例如分配到包括患有認知損傷(MCI)的患者的組中去，並分配到其參照受試者或者參照患者罹患阿爾茨海默病預兆的至少另一組中。例如，這可以在各自診斷方法評價的基礎上進行，例如可能用來確定分等級的數值或者所謂的閾值，這在一定程度上作為用於前述組中的一個組的分配的各自臨界值。更特別地，在本發明內容中可以根據在測定或評價的基礎上作出的診斷，將參照受試者或者參照患者分成各種參照組。在本文中，各自的參照組(A )和(B )可以形成於(A )沒有被診斷出阿爾茨海默病或者沒有被診斷出阿爾茨海默病預兆和(B)被診斷出阿爾茨海默病或者被診斷出阿爾茨海默病預兆，尤其是臨床前阿爾茨海默病預兆，尤其是初期或者前期阿爾茨海默病(AD初期)，和/或阿爾茨海默病臨床預兆，尤其是早期阿爾茨海默病(AD早期)的參照受試者或者參照患者。對於診斷為阿爾茨海默病或者診斷的阿爾茨海默病預兆的組(B)，可能在這一方面作進一步區分例如，有阿爾茨海默病臨床前預兆、尤其是初期的或者前期的阿爾茨海默病(AD初期)的參照組(BI)，可能形成另一個有阿爾茨海默病臨床預兆、尤其是早期的阿爾茨海默病(AD早期)的參照組(B2)，以及任選的診斷為極晚期的阿爾茨海默病的第三參照組(B3)。
如上所述，兩種不同的澱粉樣β -肽的定量參照比值(參照係數)，尤其如上所定義的，可以測定來自體液的樣本，尤其如上所定義的，來自屬於參照組的各自參照受試者或者參照患者並編輯各個參照組。更特別地，為了與來自各個參照組的所述參照患者或者參照受試者相關聯的目的所使用的樣本同樣是血液或者血漿和/或血清。就此而言，在本發明內容中，尤其如上所定義的，該步驟尤其可以是與相應的參照組相關聯或者相比較兩種不同澱粉樣肽的定量比值，或者將其分配到相應的參照組中，為了通過這種方式測定患者或者受試者患阿爾茨海默病的概率，或者為了通過這種方式測定患者或者受試者是否有阿爾茨海默病預兆。換句話說，在本發明內容中，該步驟尤其是測定血液樣本或者血清和/或血漿樣本中(a)AP (1-42)/ α)Αβ (2-40)的定量比值或者(a) A β (1-42 )/ (ο)Αβ (2-42)的定量比值，並將其與來自相應的參照組的血液樣本或者血清或者血眾樣本的各自相應的參照數值相關聯，尤其是統計參照數值(即，特別地，與已經從各個參照組的大量個體中獲得的同樣種類的相應比例相關聯)，並將其分到相應的參照組中。各個澱粉樣β_肽的相應的定量比值的分類或者關聯特別地受通過將它們分配到已經對各個參照組進行測定的可比較的數量級範圍內影響。將要被比較或者關聯的一方面受試者或者患者和另一方面參照組的比例，因此優選同樣數量級範圍的相應比例，即，當對受試者或者患者測定的數值落入各自的參照組數值範圍內時，可以將對受試者或者患者測定的比例分配至相應的參照組比例的數值範圍。在該關聯的基礎上，當對受試者或者患者測定的比例落入沒有診斷出阿爾茨海默病和/或沒有診斷出阿爾茨海默病預兆的參照組(A)相應參照比例的範圍內時，例如可能確定受試者或者患者罹患阿爾茨海默病的概率相對較低或者沒有患病(即不存在)，或者可以發現受試者和/或患者沒有阿爾茨海默病臨床前階段、尤其是初期的和/或前期的阿爾茨海默病(AD初期)，和/或阿爾茨海默病臨床預兆、尤其是阿爾茨海默病早期(AD早期)。此外，在本發明內容中，當對受試者或者患者測定的比例落入診斷出阿爾茨海默病或診斷出阿爾茨海默病預兆的參照組(B)的相應的參照比例的範圍內時，可以確定受試者或者患者患阿爾茨海默病的概率升高，或者可以發現受試者或患者有阿爾茨海默病臨床前階段、尤其是初期的和/或前期的阿爾茨海默病(AD初期)，或者有阿爾茨海默病臨床預兆、尤其是早期的阿爾茨海默病(AD早期)。在上述報告的基礎上，當前述的如上定義的組(B)，被進一步分為亞組(BI)和(Β2)以及任選的(Β3)，S卩，分為患有阿爾茨海默病臨床前階段、尤其是有初期的或者前期的阿爾茨海默病(AD初期)的第一亞組(BI)，以及有阿爾茨海默病臨床預兆、尤其有早期的阿爾茨海默病(AD早期)的第二亞組(Β2)時，同樣可能進行進一步分配或者細分。一般而言，根據本發明，當基於前述平均值，對受試者或者患者測定的比例與各自參照組的參照比例的統計平均值相差最多40%，尤其最多30%，優選最多25%，更優選最多20%，特別優選最多10%時，可以將對受試者或者患者測定的比例分配至上述參照組中的一個(即，尤其是參照組(A )、( B )或(BI)、( Β2 )或任選的(Β3 ))。同樣地，如上所述，當對受試者或者患者測定的比例在對特定參照組統計學上測定的數值範圍級別的範圍內，或者在對特定參照組測定的統計平均值的計算標準差範圍內時，可以確定對受試者或者患者測定的比例為上述參照組中的一個。
根據本發明，在上述分類的基礎上，因此可能對關於各受試者或者患者的臨床症狀或者疾病的預兆性過程出具報告。更特別地，當α)Αβ (2-40)和 / 或(C)AP (2-42)、尤其(b) A β (2-40)的量和/或濃度與沒有診斷出阿爾茨海默病和/或沒有診斷出阿爾茨海默病預兆的參照組的相應的量和/或濃度相比提高，並且因此(a)A0 (1-42)/ (b)A0 (2_40)或者(a)Aβ (1-42)/ (ο)Αβ (2-42)比例同時降低時，在本發明內容中也可能確定受試者和/或患者罹患阿爾茨海默病的概率升高，或者發現受試者和/或患者患有阿爾茨海默病的臨床前階段、尤其有初期的和/或前期的阿爾茨海默病(AD初期)，和/或有阿爾茨海默病臨床預兆、尤其有早期的阿爾茨海默病(AD早期)。換句話說，如果前述所述澱粉樣β -肽的個體數值同相應的參照組數值相比較增力口，並且如上定義的比例因此降低，罹患阿爾茨海默病或者所述疾病，尤其是前述的臨床前和臨床預兆的風險就會增加。在本發明的實施方案中，因此實際上可能關注所述澱粉樣
肽的各個細節。 這是因為在本文中申請人已經驚訝地發現尤其2_y型去除氨基端的澱粉樣β-肽、例如所述澱粉樣β-肽Αβ (2-40)和Αβ (2-42)的量或者濃度升高，尤其在患有與輕度認知損傷(MCI)相關的早期阿爾茨海默病預兆、尤其是阿爾茨海默病的臨床前或者臨床預兆的患者血液中。此外，當與沒有診斷出阿爾茨海默病和/或沒有診斷出阿爾茨海默病預兆的參照組的相應參照比例相比較，Αβ (1-42)/Aβ (2-y)(其中y為37到43中的整數、尤其為40或者42的整數)的相對比降低時，和/或當與沒有診斷出阿爾茨海默病和/或沒有診斷出阿爾茨海默病預兆的參照組的相應參照比例相比較，(a)Ai3 (1-42)/ (b)A^ (2-40)和 / 或(a)A@ (1-42)/ (c)A@ (2-42)，尤其是(a) A β (1-42)/ (b)A^ (2-40)的相對比降低時，在本發明用途的背景下也可能確定受試者和/或患者患阿爾茨海默病的概率升高，和/或認為受試者和/或患者有阿爾茨海默病的臨床前階段、尤其有初期的和/或前期的阿爾茨海默病(AD初期)，和/或阿爾茨海默病臨床預兆、尤其有早期的阿爾茨海默病(AD早期)。在該根據本發明的優選實施方案中，因此重點分析各個澱粉樣β -肽的前述的特定比例。這是因為，除了上述對個體數值作出的報告外，申請人也已經十分驚訝地發現臨床前或者臨床阿爾茨海默病、尤其初期的或者前期的阿爾茨海默病，與尤其血液中的前述比例的顯著減少相關。由申請人首先公開的這一相關性，相對於以下背景還是十分令人驚訝的一般而言，在身體其它組分例如腦脊液中相應的痴呆生物標記與在血液中特別發現的前述類型澱粉樣β_肽的特定比例沒有直接的相關性。特別通過在參照組分類的背景下的特定診斷方法的選擇性組合，在本發明的背景下已經有可能顯示前述澱粉樣β -肽和相應的血液中的特定比例、尤其和特定的阿爾茨海默病初始形態的相關性和關係，以至於在本發明的背景下，這樣的關係是使用標準化方法進行並基於對存在阿爾茨海默病或者相應預兆的血液分析的有意義試驗的基礎上。本發明用途中尤其在血液樣本的基礎上澱粉樣β_肽的特定比例的適用性是更令人驚訝的，這是因為公知常識是例如腦脊液中的特定痴呆生物標記與血液中的特定痴呆生物標記沒有特別直接關係。就此而言，還時值得注意的是，與所述血液有關的眾多周圍細胞系統或者細胞群、例如肝細胞、血小板、單核細胞等等，可以影響所述比例，並且因此實際上通常不可能從腦脊液中的Αβ -肽的特殊形式中得出結論，因為這些比例存在於血液中，或者反之亦然。因此，根據本發明，並不能預見在血液樣本分析的基礎上，關於前述類型的阿爾茨海默病預兆存在的持久並相對可靠的報告是可能的。本發明應用也可以與另一種分析方法組合進行，例如與Αβ (1-42)/Aβ (1-40)的比例的特定分析的組合，更特別地是在腦脊液中的，並且這使其變得更有意義。本發明還提供了(本發明的第二方面)一種測定受試者和/或患者患阿爾茨海默病(AD)的概率(風險)的方法，其中測定來自受試者和/或患者的體液樣本中兩種不同澱粉樣β_肽(Α-β ;Αβ)的至少一個定量比值(係數)，其中所述澱粉樣β_肽選自(a)Ai3(l-42)、(b)Ai3 (2-40)和(c)Ai3 (2-42)並且其中形成(a) / (b)或(b) / (a)，和 / 或
(a)/ (c)或(c)/ (a)的定量比值。本發明同樣涉及(本發明的重i方面)測定受試者和/或患者罹患阿爾茨海默病(AD)概率(風險)的發明方法，尤其如上所定義的，(a)其中測定來自受試者和/或患者體液樣本中的兩種不同澱粉樣肽(A-β ；Αβ )的至少一個定量比值(係數)，其中澱粉樣β-肽選自(a)A0 (1-42)、α)Αβ (2-40)和(c)Ai3 (2-42)並且其中形成(a)/ (b)或(b)/ (a)，和 / 或(a)/ (c)或(c)/ (a)的定量比值；(b)其中由此獲得的比例與相應參照比例進行比較和/或關聯，和/或其中由此獲得的比例確定為相應的參照比例；並且(c)其中，在比較和/或關聯和/或分類的基礎上，隨後測定患者和/或受試者患阿爾茨海默病的概率。為了進一步詳細說明，而避免不必要的重複，可以參考本發明的其它方面，其應用相應地涉及本發明方法。最後，本發明進一步提供了(本發明的第四方面)一種本發明的試劑盒，尤其用於測定患者和/或受試者患阿爾茨海默病(AD)的概率(風險)和/或尤其用於測定(診斷)他或她有阿爾茨海默病預兆，其中該試劑盒包括用於測定來自受試者和/或患者體液樣本中的兩種不同澱粉樣肽(Α-β ;Αβ)的定量比值(係數)的成分和/或組成，其中為了測定(a)/ (b)或(b)/ (a)、和/或(a)/ (c)或(c)/ (a)的定量比值的目的，選擇能夠定量測定來自組(a)A0 (1-42)、α)Αβ (2-40)和(c)A0 (2-42)的澱粉樣β -肽的成分和/或組成。本發明試劑盒的成分或者組成尤其可以是用於純化、濃縮、分離等待檢測的澱粉樣β_肽的成分或者組成。也可用於這一方面的是本領域技術人員熟悉的用於蛋白分離的成分或者組成，例如，在已知的免疫檢測法或者分離方法，例如凝膠電泳方法的背景下使用的成分或者組成。更特別地，然而該成分或者組成也可以是標記待分析的澱粉樣β -肽或者與之相互作用的物質，例如配體或者抗體。就此而言，本發明的試劑盒可以包括至少一種配體、優選抗體，其對澱粉樣肽特異和/或與之結合。在這一方面，至少一種配體、優選抗體，可以特異於A β (1-χ)和A β(2-y)型的澱粉樣β -肽，其中y是從37到43中的整數。此外，至少一種配體、優選抗體，可以特異於(a)Ai3 (1_42)和/或(b)Aβ (2-40)和 / 或(c)A@ (2-42)。此外，至少一種配體、優選抗體，可以特異於(a)Ai3 (1_42)和/或(b)Aβ (2-40)和/或(ο)Αβ (2-42)的氨基端。關於本發明試劑盒的進一步詳細說明，可以參考上述關於本發明用途和發明方法的說明，其同樣以相應方式應用於本發明的試劑盒。從隨後的說明中可以看出本發明的進一步優點、特徵、性質和外觀是明顯的，其連同隨後的操作實施例以及附圖
一起詳細地描述本發明構思。
關於樣本分析，為了檢查來自早期或者初期的阿爾茨海默病(eiAD，n=21)和對照受試者(Con,n=21)的受試者(n=42)的EDTA血楽:中絡合的β -澱粉樣蛋白標記,本發明的焦點尤其集中於具有渺摩爾靈敏度的用於氨基端選擇性免疫沉澱法的方法或者步驟，尤其是基於尿素的二維蛋白免疫印跡(2D-Ai3-WIB)。更特別地，本發明涉及血液中特定Αβ-肽比例(Α β-蛋白係數)的鑑別，這些在eiAD和Con患者之間表現出非常顯著的差異。更特別地，Αβ (2-y)種類形成的提高與eiAD患者中Αβ (1_42)有關。令人驚訝地，所提到的效果在臨床前階段(AD初期)特別明顯，例如根據患者腦脊液的痴呆生物標記種類，在有前期的阿爾茨海默病的輕度認知損傷(MCI)患者中特別明顯。因此，根據本發明可以通過體液、優選血液的分析使用Αβ (1-42)與特定Αβ(2-y)種類的特定 Αβ-肽比例，尤其 Αβ (1-42)/Αβ (2-40)和 Αβ (1_42)/Αβ (2-42)比例，用於早期和/或初期阿爾茨海默病的神經化學診斷(例如與Aβ (1-42)/Αβ (1-40)比例組合)。更特別地，這使基於血液的或者基於血液檢查的初期(臨床前/前期的)阿爾茨海默病(AD)的神經化學痴呆診斷成為可能。因此本發明也使得對於二級預防治療的新的定向策略成為可能，尤其對於高風險患者。就此而言，作為發明的證據，為了檢查包括早期或者初期的阿爾茨海默病(eiAD，n=21)和疾病對照組(Con，n=21)病例的受試者(n=42)的EDTA血漿中絡合的β-澱粉樣蛋白標記，申請人已經進行了具有渺摩爾靈敏度的基於尿素的二維蛋白免疫印跡(2D-Ai3 -WIB)的氨基端選擇性免疫沉澱法。罹患阿爾茨海默病患者的臨床表型由CSF-NDD以及在大部分例子中由神經影像方法(MRI/SPECT)所支持。對於生物統計學評價，根據臨床黃金標準、神經化學黃金標準、組合心理測驗(MMSE)和神經化學參數(CSF痴呆生物標記)的黃金標準(GS)以及神經化學參數(CSF痴呆生物標記)和神經影像過程參數(SPECT)，將患者分級或分類。為了完成對患者的客觀分類，使用生物標記促進的黃金標準(神經化學GS ;組合的神經化學GS和SPECTGS)，從而完成早期或者初期阿爾茨海默病臨床支持表型的交叉驗證。Αβ -免疫反應性肽的血液標記的2D-Ab_WIB分析顯示出18個區域(點)的穩定類型，已經參考A β -標準肽混合物對其進行定量化。生物統計學分析顯示出各個單獨的A β免疫反應區在eiAD和Con患者組之間沒有顯著的差異。僅有對應Αβ (1_42)的區域4顯示出特定疾病差異的趨勢。特定Αβ-肽的比例在eiAD和Con患者之間顯示出高度顯著差異。最初通過Αβ (1-42)(區域4)與其它Αβ-肽種類的比來測定這一效果，所述其它Αβ-肽種類的第一個胺基酸的氨基端被去除，在這一例子中是天冬氨酸(Αβ (2-χ)種類)。因此，Αβ (1-42)與 Αβ 種類(2-42)(區域 14)、(2-40)(區域 15)、(2-39)(區域 16)、(2-38)(區域17)和(2-37)(區域18)的總和的比例使eiAD和Con組之間顯著區別，然而這並不是其它Αβ (l-χ)種類(例如Αβ (1_40))與Αβ (2_χ)種類總和或者個別Aβ (2_χ)種類的比例。在Αβ (1-x)肽的組中，僅僅Αβ (1-42)(區域4)與Αβ (1-40)(區域5)的比例有eiAD和Con患者組的統計學上的顯著區別。精確的數據分析顯示Αβ (1_42)與Αβ(2-χ)種類總和的比的改善的診斷表現首先通過A β (1-42)與Αβ (2-40)的比(區域4/15的比例)、然後由Αβ (1-42)與Αβ (2-42)的比(區域4/14的比例)所解釋。Αβ (1-42)/Αβ (2-40)的比例(區域4/15比例)的診斷精確度明顯優於Αβ (1-42)/Αβ (1_40)的比例(區域4/5)，該Αβ (1-42)/Αβ (1-40)的比例(區域4/5)現在作為用於識別痴呆、尤其是阿爾茨海默病的基於血液的神經化學診斷方法的黃金標準。
此外，相關分析得出結論:Αβ (1-42)與去除氨基端的Aβ (2_χ)種類的比例、尤 其是 Αβ (1-42)/Αβ (2-40)(區域 4/15 的比例)，比 A β (1_42)/Αβ (1-40)比例與用於痴呆的CSF生物標記更相關。A β (1-42)/Αβ (2-40)比例(區域4/15的比例)與tau蛋白(總tau蛋白)總含量的關係是最強的。此外，觀察到Αβ (1-42)/Αβ (2_40)比例(區域4/15的比例)與常規腦灌流SPECT分析(99mTc SPECT)的顯著相關性，然而對於A β(1-42)/Αβ (1-40)比例(區域4/5的比例)，不能觀察到所述相關性。此外，Αβ (1-42)/Αβ (2-40)比例(區域4/15的比例)比Αβ (1_42)/Αβ (1_40)比例與證實為阿爾茨海默病風險因子的ApoE-e4基因型更相關。其次，Αβ (1_42)/Αβ (2-40)(區域4/15的比例)比Αβ (1-42)/Αβ (1-40)比例與患者年齡更顯著相關。在年齡和總tau蛋白之間也觀察到顯著的相關性，這已經從文獻中獲知。因為eiAD和Con患者組年齡不同，不能排除一些觀察到的現象可以首先通過年齡而不是疾病相關的差異來解釋。然而年齡，是已知的阿爾茨海默病最大的風險因素，並且總tau蛋白最近已經被鑑定為預測MCI患者中初期的阿爾茨海默病表現最佳的個體CSF生物標記。這一效果也不依賴於MCI患者的年齡。此外，另一個當前的腦灌流SPECT研究顯示，在阿爾茨海默病早期和MCI發生時，在識別痴呆的CSF生物標記中(磷酸-tau蛋白、總tau蛋白、A β(1-42))中，除Αβ (1-42)外的總tau蛋白和磷酸_tau蛋白與灌流的局部破壞(左頂葉皮層)有顯著的關聯性。令人意外的是，申請人可以觀察到在患前期的阿爾茨海默病(初期的阿爾茨海默病)的MCI患者血液中A β (1-42)/Αβ (2-40)比例(區域4/15比例)的顯著減少，阿爾茨海默病通過CSF生物標記來指示。對於血液中的A β (1-42)/Αβ (1-40)比例(區域4/5的比例)不能觀察到這一發現。從來自人類阿爾茨海默病各種類的不同疾病階段的腦組織的β-澱粉樣斑塊的生物化學分析中得到的指示清楚地表明去除氨基端的A β -肽種類的形成在阿爾茨海默病的分子發病機制中是非常早期的事件。因此，在臨床前階段(初期的阿爾茨海默病)與Αβ (1-42)有關的Αβ (2-χ)種類的升高的形成可以被特定的標記，例如在有前期的MCI阿爾茨海默病的MCI患者中。在這一關係中，與作為將要被分析的樣本的血液或者血漿和/或血清有關的Αβ-肽的量或者含量的表現是這樣的其中發現的Αβ-肽的量或者含量與CSF Αβ-肽沒有顯著的關聯，即Αβ -肽血液分析不能被認為是一種「稀釋的」CSF分析。此外，血液中Αβ-肽的量或者含量以更複雜的方式依賴於除CSF類型外的因素，因為多數的周圍細胞系統或者細胞群(肝細胞、血小板、單核細胞等)有助於或者影響該類型。相應地，從對已經被鑑定為對於血液或者血液檢查作為識別痴呆的CSF生物標記的Αβ -肽的研究中轉移或者概括發現或關係是不可能也是不正當的。例如(不同於血液)在CSF樣品中沒有發現同樣高濃度的Αβ (2-40)(相對於Αβ (1-42)或者Αβ-肽的總含量)的指示。區域4/5、4/14和4/15的比例的比較ROC分析(圖5)清楚地表明區域4/5、4/14和4/15的比例的組合應用具有提高的診斷價值在適度敏感性(例如70到80%)的情況下，區域4/15的比例顯示出增強的特異性，然而，在高敏感性(90到100%)的情況下，區域4/5和4/14的比例給出更好的結果。為了通過臨床或者神經化學黃金標準對患者進行分類，使用邏輯回歸分析(Statistical Package of Social Sciences, SPSS,第 17 版)時,上述結果變得特別清楚(沒有示出精確的分析)。當使用所有的三個比例時，通過臨床或者神經化學黃金標準對81%或者85. 7%的患者進行準確地分類。如果僅使用區域4/5的比例，則通過臨床或者神經化學黃金標準僅有66. 7%或者61. 9%的患者被準確的分類。
具體實施例方式I.方法I. I患者同期組群和臨床表型·
檢查42個受試者的EDTA血楽:中的絡合的β -澱粉樣蛋白標記。所有的患者在德國埃朗根/紐倫堡大學的精神病系招募。已經將研究人群分級或者劃分為21個患早期或者初期的阿爾茨海默病(eiAD ;D_代碼_1 = I)的患者和21個對照患者(Con ;D_代碼_1=0)。該對照病例中包括有不同的神經精神性疾病，包括其他痴呆的患者。用於識別痴呆的基於CSF的神經化學診斷方法對於研究中的所有患者都是有效的。用於42個患者表型的臨床黃金標準(臨床GS)、預分析的樣本處理和用於痴呆識別的CSF支持的神經化學診斷方法(CSF-NDD)由德國痴呆症協作網的國際診斷指南(www. kompetenznet-demenzen. de ；Kornhuber 等「Early anddifferential diagnosis of dementia and mild cognitiveimpairment:design andcohort baseline characteristics of the German dementiaCompetenceNetworkDement. Geriatr. Cogn. Disord. , 2009, 27, 404-417 ；ffiltfang 等「Consensus paper of the WFSBP Task Force on Biological Markers ofDementia:therole of CSF and blood analysis in the early and differential diagnosis ofdementia」，World J. Biol. Psychiatry,2005,6,69-84 ；Lewczuk 等「The GermanCompetence Net Dementias:standardoperating procedures for the neurochemicaldementia diagnostics.，，，J. Neural Transm. , 2006, 113, 1075-80 ;Lewczuk 和Wiltfang: 「Neurochemical dementia diagnostics:State of the art and researchperspectives. 」Proteomics 2008,8,1292-301)指導。此外，為了進一步證實阿爾茨海默病的診斷，在研究中優先包括的有早期/初期阿爾茨海默病(eiAD)的患者是那些由神經影像方法(SPECT和/或cMRI)證明罹患阿爾茨海默病診斷的患者。神經影像表明存在其它痴呆(例如血管性痴呆或者額顳痴呆)的eiAD患者並不包括在這一研究中。為了確保對常規神經影像方法的數據的實質上標準化的解釋，使用以下劃分標準-I. 5T (tesla) MRI或者99mTc SPECT分數「3」 :額顳頂骨瓣萎縮，額顳頂骨瓣灌流不足，將症狀分類為典型的阿爾茨海默病、沒有顯著損害、沒有腫瘤；-分數「2」:其它腦萎縮，廣義萎縮，損害顯著，表明有腫瘤；-分數「I 」 :其它病理檢查發現；-分數「O」:沒有病理檢查發現。MRI和SPECT神經影像方法分別對39和37個患者是有效的。此外，研究中優選包括的eiAD患者是那些臨床診斷由阿爾茨海默病的CSF痴呆生物標記典型類型所支持的患 者(Αβ (1-42),Aβ 42/Αβ 40比例降低；總tau蛋白，磷酸-tau蛋白181升高)。相反地，排除有CSF-NDD類型的阿爾茨海默病的對照病例。對於患者，當他們已經表現出指示阿爾茨海默病的CSF痴呆生物標記類型和指示輕微認知損傷的認知缺陷類型時，發現存在初期阿爾茨海默病的風險。除了臨床黃金標準之外，使用用於識別痴呆的基於CSF生物標記的神經化學黃金標準。神經化學黃金標準考慮由所有四個識別痴呆的CSF生物標記(總tau蛋白、磷酸-tau蛋白181、Αβ (1-42)和Αβ (1-40))提供定量數據。為了獲得NDD分數(順序標度)和衍生的對分NDD代碼，使用該數據。為了獲得或者證明識別痴呆和認知代碼的神經化學診斷方法(NDD_Cog-代碼)，該NDD代碼與細微精神狀態檢查(MMSE )的結果組合。所有代碼基於他們的分子和/或認知生物標記數據，確保患者的表型是客觀的(NDD_代碼；n=42)或者基本上客觀的(NDD_Cog代碼；n=38)。由於已經使用CSF生物標記的定性評價以支持臨床黃金標準(參見上文)，所以在臨床和神經化學黃金標準之間達成高度一致。對NDD代碼和NDD_Cog代碼的定義在下文中進行詳細解釋。最後，為了獲得NDD_SPECT分數(範圍-1到+5 ;n=37)，對NDD分數(範圍-1到+2)和SPECT分數(範圍0到3)進行組合。NDD_SPECT分數相當於NDD和SPECT分數的總和。I. 2分子表型和神經化學黃金標準NDD分數的衍牛阿爾茨海默病早期(AD)的臨床診斷的不準確是顯著的。根據支持解剖的研究，甚至在中期到晚期階段的阿爾茨海默病的精度最高為85至90%。由於阿爾茨海默病早期階段的臨床症候群仍是非常不同的，所以在這種情況下的臨床診斷精確度將不會超過85%。有來自一些大型國際多中心研究的薈萃分析和來自支持解剖的研究的大量證據證明腦脊液(CSF)中的用於痴呆的特定生物標記信號極力支持早期甚至初期的(臨床前)阿爾茨海默病的正確診斷。這解釋了為什麼用於識別痴呆的CSF支持的神經化學診斷方法(CSF-NDD)在2010被引入用於早期痴呆的改進診斷的德國神經精神S3指南。CSF-NDD的臨床關聯性由大量文獻證據所指出(Hansson等,Associationbetween CSFbiomarkers and incipient Alzheimer』 s disease in patients withmildcognitive impairment:a follow-up study.，，，Lancet Neurol. , 2006, 5, 228-234 ;Engelborghs等,Neuropsychological and behavioural correlatesof CSF biomarkersin dementia.，，，Neurochem. Int. , 2006, 48, 286-295 ;Engelborghs 等「No associationof CSF biomarkers with AP0Eepsilon4, plaque and tangle burden in definiteAlzheimer』 s disease. 」 Brain, 2007,130, 2320-2326)。由於此處描述的研究中檢查的患者同期組群主要由患早期或初期的(臨床前/前期的)阿爾茨海默病的患者組成，來自用於痴呆的CSF生物標記信號的信息被用作客觀診斷分級或者劃分患者組的判斷基礎(神經化學黃金標準)，其獨立於常規的臨床階段。這通過神經化學痴呆代碼(NDD代碼)的建立或確立來實現，其依次從痴呆的平均神經化學診斷分數(平均NDD分數)獲得。NDD分數是基於來自腦脊液(CSF)中的下列四個用於痴呆症的生物標記的信息-A β - A β (χ-42)與Αβ (χ_40)的比例(Αβ比TGC)。為了該測定，使用兩種來自蘇黎世的基因公司的ELISA測試，其並不特定地測量A β (1-42)和A β (1_40)肽，但也測量其去除氨基端的種類； -Aβ (1-42) (Αβ 142Ιηη):來自 INN0GENETICS，Gent 的 ELISA 測試，特定地測量Αβ (1-42)；-總tau 蛋白(來自 INN0GENETICS 的 ELISA 測量)；-磷酸-tau蛋白 181 (來自 INN0GENETICS 的 ELISA 測量)。用於痴呆的CSF生物標記信息對所有患者是有效的,但不是對所有患者的所有生物標記有效(總 tau 蛋白n=42, A β 142Inn :n=42,磷酸-tau 蛋白η=29,Αβ 比 TGC:n=20)。以任選或自由選擇的方式將有高標準濃度範圍內的痴呆CSF生物標記的患者確定為「-I」的NDD得分。相反，接近於閾值、閾值之上和遠超閾值的CSF痴呆生物標記的病理學數值的患者分別被確定為和「2」的NDD分數。因為並不是所有四個生物標記都對每個個體患者的痴呆識別有效，所以計算出一個平均NDD分數(平均NDD分數)，S卩，Σ分數/η。-I和+2的平均NDD分數分別對應於初期或者明顯的臨床阿爾茨海默病的最小和最大風險。為了獲得對分NDD代碼，使用順序的平均NDD分數獲得〈I的平均NDD分數對應低風險的初期或者明顯的臨床阿爾茨海默病(NDD代碼=0)，然而> I的平均NDD分數對應高風險的初期或者明顯的臨床阿爾茨海默病(NDD代碼=1)。定義NDD分數分類範圍的閾值取自文獻或者來自我們自己的實驗室工作(例如Αβ 比 TGC):總 tau 蛋白=350pg/ml ;憐酸-tau 蛋白 181=60pg/ml ；Αβ 142Inn=530pg/ml ；Αβ比TGC=O. 09。定義不同NDD分數數值的識別痴呆CSF生物標記的濃度範圍在表I中概括。表I :證明NDD分數的CSF痴呆生物標記數值
參數參數範圍(pg/ml): 分數
磷酸TAU蛋白181 0-50~
磷酸TAU蛋白181 >50和〈60O
權利要求
1.來自受試者和/或患者體液的樣本中的兩種不同澱粉樣β-肽(Α-β;Ab)的至少一個定量比值(係數)用於測定他或她患阿爾茨海默病(AD)的概率(風險)和/或測定(診斷)他或她罹患阿爾茨海默病預兆的用途，其中澱粉樣肽選自(a)Ab (l-42)、(b)Ab (2-40)和(c)Ab (2-42)，並且其中形成(a)/ (b)或者(b)/ (a)、和 / 或(a)/ (c)或者(c)/ (a)的定量比值。
2.如權利要求I所述的用途，其中受試者和/或患者具有大腦功能衰退症狀，特別是輕度大腦功能衰退症狀，優選記憶力衰退，特別是輕度記憶力衰退，和/或其中受試者和/或患者具有輕度認知損傷(MCI)的症狀。
3.如權利要求I或者2所述的用途，其中阿爾茨海默病預兆是阿爾茨海默病的臨床前階段和/或其中阿爾茨海默病預兆是初期的和/或前期的阿爾茨海默病(AD初期)。
4.如前述任意一項權利要求所述的用途，其中阿爾茨海默病預兆為阿爾茨海默病的臨床階段和/或其中阿爾茨海默病的預兆為早期的阿爾茨海默病(AD早期)。
5.如前述任一項權利要求所述的用途，其中比例為依賴量和/或濃度的比例。
6.如前述任一項權利要求所述的用途，其中形成 (a) Ab (1-42)/ (b)Ab (2-40)的比例[即，Ab (1-42)/Ab (2-40)的比例或者(a) /(b)的比例]和/或 (a) Ab (1-42)/ (C)Ab (2-42)的比例[即，Ab (1-42)/Ab (2-42)的比例或者(a)/ (c)的比例]，優選地 (a)Ab (1-42)/ (b)Ab (2-40)的比例[即，Ab (1-42)/Ab (2-42)的比例或者(a)/ (c)的比例]。
7.如前述任一項權利要求所述的用途，其中將來自受試者和/或患者的血液用作樣本。
8.如前述任一項權利要求所述的用途，其中將來自於受試者和/或患者的血漿(血漿)和/或血清(血清)，優選血漿(血漿)，用作樣品。
9.如前述任一項權利要求所述的用途，其中將澱粉樣β_肽，尤其一方面的(a)Ab(1-42)和另一方面的(b)Ab (2-40)和/或(C)Ab (2_42)，從樣品中移出和/或分離，尤其通過免疫沉澱法。
10.如權利要求9所述的用途，其中使用對澱粉樣β_肽特異和/或與之結合的至少一種配體、優選抗體，尤其其中至少一種配體、優選抗體，對Ab (Ι-y)和Ab (2_y)形式的的澱粉樣β -肽特異，其中y是37到43中的整數，和/或尤其其中至少一種配體、優選抗體對(a)Ab (1-42)和/或(b)Ab (2-40)和/或(c) Ab (2_42)特異，和/或尤其其中至少一種配體、優選抗體對(a) Ab (1-42)和/或(b) Ab (2-40)和/或(C)Ab (2_42)的氨基端特異。
11.如前述任一項權利要求所述的用途，其中各澱粉樣β_肽，尤其一方面的(a)Ab(1-42)和另一方面的(b) Ab (2-40)和/或(c) Ab (2_42)的測定，尤其量和/或含量和/或濃度的測定，是在蛋白分離方法和/或定量免疫檢測性蛋白檢測方法，尤其定量免疫檢測性蛋白檢測方法的基礎上，優選在蛋白分離方法和/或定量免疫檢測性蛋白檢測方法組合，尤其定量免疫檢測性蛋白檢測方法的基礎上進行。
12.如權利要求11所述的用途，其中使用的蛋白分離方法為凝膠電泳方法，尤其雙向凝膠電泳，優選基於尿素的雙向凝膠電泳，和/或其中使用的蛋白檢測方法為蛋白質印跡法，和/或其中檢測是在特別的基於尿素的雙向凝膠電泳與下遊蛋白質印跡法(2D-Ab-WIB)組合的基礎上進行的。
13.如權利要求11或12所述的用途，其中免疫檢測性蛋白檢測方法，尤其定量免疫檢測性蛋白檢測方法，優選蛋白質印跡法，包括使用至少一種配體、優選抗體用於澱粉樣β-肽(第一配體和/或第一抗體)的標記，尤其其中至少一種配體、優選抗體，對Ab (1-y)和Ab (2-y)形式的澱粉樣β-肽特異，其中y為37到43中的整數，和/或尤其其中至少一種配體、優選抗體，對(a)Ab (1-42)和/或(b)Ab (2-40)和/或(C)Ab (2_42)特異，和/或尤其其中至少一種配體、優選抗體，對(a) Ab (1-42)和/或(b) Ab (2-40)和/或(c)Ab (2-42)的氨基端特異。
14.如前述任一項權利要求所述的用途,其中尤其如權利要求1、5和6中任一項所定義的兩種不同澱粉樣β -肽的定量比值，與相應的參照比例相關聯和/或比較和/或將其確定為這些參照比例。
15.如權利要求14所述的用途，其中定量比值與相應的參照比例的比較和/或關聯被用於測定罹患阿爾茨海默病的概率和/或測定和/或診斷阿爾茨海默病預兆的存在。
16.如權利要求14或15所述的用途，其中定量參照比例是在受試者參照組和/或患者參照組的基礎上和/或基於受試者參照組和/或患者參照組進行測定的。
17.如權利要求16所述的用途，其中更特別地為了生物統計評價輕度認知損傷(MCI)和/或阿爾茨海默病臨床前預兆、尤其初期的或者前期的阿爾茨海默病(AD初期)，和/或阿爾茨海默病的臨床預兆、尤其早期的阿爾茨海默病(AD早期)的存在或者不存在的目的，檢查參照受試者組和/或參照患者組的參照受試者和/或參照患者。
18.如權利要求17所述的用途，其中檢查和/或評價在選自神經化學方法、神經影像方法、心理測驗方法以及至少兩種前述方法組合的組的檢查方法的基礎上，優選在所有前述方法組合的基礎上進行。
19.如權利要求17或18所述的用途，其中檢查和/或評價在至少一個黃金標準，尤其在選自臨床黃金標準、神經化學黃金標準、心理測驗黃金標準和至少兩個前述標準組合的組的基礎上，優選在所有前述標準組合的基礎上進行。
20.如權利要求17至19任一項所述的用途，其中檢查和/或評價是在包括心理測驗、神經化學和/或神經影像方法和/或參數的黃金標準的基礎上進行的。
21.如權利要求17至20任一項所述的用途，其中神經化學方法包括腦脊液(CSF)參數的測定，更特別地，其中測定Ab (x-42)/Ab (x-40)的比例[Ab比TGC]，尤其其中X可以獨立地假定為I或2的數值，Ab (1-42)的含量[Abl42Inn]，tau蛋白的總含量和/或磷酸-tau蛋白181的含量。
22.如權利要求17至21任一項所述的用途，其中神經影像方法尤其包括腦萎縮研究，優選基於成像方法，優選SPECT (單光子發射體層成像)和/或MRI (核磁共振成像)。
23.如權利要求17至22任一項所述的用途，其中心理測驗方法包括基於MMSE(細微精神狀態檢查)的研究。
24.如權利要求17至23任一項所述的用途，其中根據在測定和/或評價的基礎上進行的診斷將參照受試者和/或參照患者劃分至各種參照組，尤其其中各自的參照組形成於參照受試者和/或參照患者(A)沒有被診斷出阿爾茨海默病和/或沒有被診斷出阿爾茨海默病的預兆和(B)被診斷出阿爾茨海默病和/或有被診斷出阿爾茨海默病預兆，尤其有阿爾茨海默病的臨床前預兆、尤其為初期的和/或前期的阿爾茨海默病(AD初期)，和/或有阿爾茨海默病的臨床預兆、尤其為早期的阿爾茨海默病(AD早期)。
25.如權利要求17至24任一項所述的用途，其中兩種不同澱粉樣β-肽(Α-β；Αβ )的定量參照比例(參照係數)，尤其如權利要求1、5和6中任一項所定義的，由體液樣本測定，尤其如權利要求7或8所定義的，來自屬於參照組的各自參照受試者和/或參照患者並編輯各個參照組。
26.如權利要求17至25任一項所述的用途，其中為了通過這種方式測定患者和/或者受試者患阿爾茨海默病的概率和/或為了通過這種方式測定患者或者受試者是否有阿爾茨海默病預兆，將兩種不同澱粉樣β_肽的定量比值，尤其如權利要求1、5和6中任一項所定義的，與相應的參照組相關聯和/或相比較和/或將其確定為相應的參照組。
27.如權利要求17至26任一項所述的用途，其中當測定的受試者和/或患者的比例落入參照組(A)沒有診斷出阿爾茨海默病和/或沒有診斷出阿爾茨海默病預兆的相應參照比例範圍內時，確定受試者和/或患者患阿爾茨海默病的概率相對低或者沒有，和/或其中發現受試者和/或患者沒有阿爾茨海默病的臨床前階段、尤其初期的和/或前期的阿爾茨海默病，和/或阿爾茨海默病的臨床預兆、尤其早期的阿爾茨海默病(AD早期)。
28.如權利要求17至27任一項所述的用途，其中當測定的受試者或者患者的比例落入參照組(B)診斷出阿爾茨海默病和/或診斷出阿爾茨海默病預兆的相應參照比例的範圍內時，確定受試者和/或患者患阿爾茨海默病概率升高，和/或其中發現受試者和/或患者有阿爾茨海默病臨床前階段、尤其初期的和/或前期的阿爾茨海默病，和/或阿爾茨海默病臨床預兆、尤其早期的阿爾茨海默病(AD早期)。
29.如前述任意一項權利要求所述的用途，其中當(b)Ab(2-40)和/或(C)Ab (2-42),尤其(b)Ab(2-40)的量和/或濃度與沒有診斷出阿爾茨海默病和/或沒有診斷出阿爾茨海默病預兆的參照組的相應量和/或濃度相比提高，並且因此(a)Ab (1-42)/ (b)Ab (2-40)和/或(a) Ab (1-42)/ (C)Ab (2_42)的比例降低時，確定受試者和/或患者患阿爾茨海默病的概率升高，和/或其中發現受試者和/或患者有阿爾茨海默病臨床前階段、尤其初期的和/或前期的阿爾茨海默病，和/或阿爾茨海默病的臨床預兆、尤其早期的阿爾茨海默病(AD早期)。
30.如前述任意一項權利要求所述的用途，其中當與沒有診斷出阿爾茨海默病和/或沒有診斷出阿爾茨海默病預兆的參照組的相應參照比例相比較，Ab (1-42)/Ab (2-y)(其中y為37到43、尤其40或者42中的整數)的相對比降低時，和/或當與沒有診斷出阿爾茨海默病和/或沒有診斷出阿爾茨海默病預兆的參照組的相應參照比例相比較，(a) Ab(1-42)/ (b)Ab (2-40)和 / 或(a)Ab (1-42)/ (C)Ab (2-42)，尤其(a)Ab (1-42)/ (b)Ab (2-40)的相對比降低時，確定受試者和/或患者患阿爾茨海默病的概率升高，和/或其中發現受試者和/或患者有阿爾茨海默病的臨床前階段、尤其有初期的和/或前期的阿爾茨海默病，和/或有阿爾茨海默病臨床預兆、尤其有早期的阿爾茨海默病(AD早期)。
31.一種測定受試者和/或患者患阿爾茨海默病(AD)的概率(風險)的方法，其中測定來自受試者和/或患者的體液樣本中的兩種不同澱粉樣β -肽(A-b ；Ab)的至少一個定量比值(係數)，其中澱粉樣β_肽選自(a) Ab (l-42)、(b)Ab (2-40)和(c)Ab (2-42)，並且其中形成(a)/ (b)或(b)/ (a),和/或(a)/ (c)或(c)/ (a)的定量比值。
32.一種測定受試者和/或患者患阿爾茨海默病(AD)概率(風險)的方法，尤其如權利要求31所述， (a)其中測定來自受試者和/或患者體液樣本中的兩種不同澱粉樣β-肽(Α-β；Ab)的至少一個定量比值(係數)，其中澱粉樣β-肽選自(a) Ab (1-42)、(b) Ab (2-40)和(c)Ab (2-42)，並且其中形成(a) / (b)或(b)/ (a)，和/或(a) / (c)或(c)/ (a)的定量比值； (b)其中由此獲得的比例與相應參照比例進行比較和/或關聯，和/或其中由此獲得的比例被確定為相應參照比例；並且 (c)其中，在比較和/或關聯和/或分類的基礎上，然後測定患者和/或受試者患阿爾茨海默病的概率。
33.如權利要求31或32所述的方法，特徵在於具有一個或多個權利要求I至30的特徵。
34.一種試劑盒，尤其用於測定患者和/或受試者患阿爾茨海默病(AD)的概率(風險)和/或尤其用於測定(診斷)他或她有阿爾茨海默病預兆，其中所述試劑盒包括用於測定來自受試者和/或患者體液樣本中的兩種不同澱粉樣β_肽(Α-β ;Ab)的定量比值(係數)的成分和/或組成，其中為了測定(a)/ (b)或者(b)/ (a)，和/或(a)/ (c)或者(c)/ (a)的定量比值，選擇能夠定量測定來自(a) Ab (1-42)、(b) Ab (2-40)和(C)Ab (2_42)組的澱粉樣β-肽的成分和/或組成。
35.如權利要求34所述的試劑盒，其中所述試劑盒包括至少一種配體、優選抗體，其對澱粉樣β -肽特異和/或與之結合，尤其其中至少一種配體、優選抗體，對Ab (1-χ)和Ab(2-y)形式的澱粉樣β -肽特異，其中y是37到43中的整數，和/或尤其其中至少一種配體、優選抗體，對(a) Ab (1-42)和/或(b) Ab (2-40)和/或(c) Ab (2_42)特異，和/或尤其其中至少一種配體、優選抗體，對(a) Ab (1-42)和/或(b) Ab (2_40)和/或(c) Ab(2-42)的氨基端特異。
36.如權利要求34或35所述的試劑盒，特徵在於具有一個或多個權利要求I至33的特徵。
全文摘要
本發明涉及受試受試者和/或患者的體液樣本中的彼此不同的兩種澱粉樣β-肽(Aβ；Ab)的至少一個定量比值(係數)的用途，用以測定所述受試受試者和/或患者患阿爾茨海默病(MorbusAlzheimer，AD)的概率(風險)和/或測定(診斷)有阿爾茨海默病的早期階段，其中澱粉樣β-肽選自(a)Ab(1-42)、(b)Ab(2-40)和(c)Ab(2-42)，並且其中形成(a)/(b)或者(b)/(a)，和/或(a)/(c)或者(c)/(a)的定量比值。本發明還涉及用於這一點的相應方法和試劑盒。
文檔編號G01N33/68GK102933966SQ201180028676
公開日2013年2月13日 申請日期2011年4月7日 優先權日2010年4月9日
發明者赫爾曼·埃塞爾曼, 特哈·W·格羅梅, 約翰內斯·科恩胡貝爾, 彼得·萊夫丘克, 胡安·曼努埃爾·馬勒, 延斯·維爾特範 申請人:杜伊斯堡-艾森大學, 埃爾朗根-紐倫堡弗裡德裡希·亞歷山大大學, 中央精神衛生研究所, 埃爾朗根大學附屬醫院