醋酸亮丙瑞林粗產品的純化方法與流程

2023-12-05 10:27:21 2

本發明涉及藥物合成領域，具體而言，涉及一種醋酸亮丙瑞林粗產品的純化方法。

背景技術：

亮丙瑞林，製劑中文名稱為醋酸亮丙瑞林、抑那通或者簡稱亮丙瑞林。亮丙瑞林屬於gnrh類似物，作用同布舍瑞林。重複給予大劑量的促黃體生成釋放激素(lh-rh)或其高活性衍生物醋酸亮丙瑞林，在首次給藥後能立即產生一過性的垂體-性腺系統興奮作用(急性作用)，然後抑制垂體生成和釋放促性腺激素。它還進一步抑制卵巢和睪丸對促性腺激素的反應，從而降低雌二醇和睪丸酮的生成(慢性作用)。醋酸亮丙瑞林的促黃體生成激素(lh)釋放活性約為lh-rh的100倍，它的抑制垂體-性腺系統功能的作用也強於lh-rh。醋酸亮丙瑞林是高活性的lh-rh衍生物，由於它對蛋白分解酶的抵抗力和對lh-rh受體的親和力都比lh-rh強，所以能有效地抑制垂體-性腺系統的功能。

此外，醋酸亮丙瑞林又是一種緩釋製劑，它恆定地向血液中釋放醋酸亮丙瑞林，故能有效地降低卵巢和睪丸的反應，產生高度有利的垂體-性腺系統的抑制作用。對子宮內膜異位症、子宮肌瘤或絕經前乳腺癌患者，每4周1次皮下注射醋酸亮丙瑞林，使血清中雌二醇下降到接近絕經期的水平。因此本品有卵巢功能抑制作用，可抑制正常排卵和使月經停止。對前列腺癌患者皮下注射醋酸亮丙瑞林，每4周1次，使血清睪丸酮濃度降至去勢水平之下，表明本品有藥理學的去勢作用。對患有中樞性性早熟的男孩和女孩每4周1次，皮下注射醋酸亮丙瑞林後，血清中促性腺激素的水平降至青春期前的水平，表明對第二性徵有進行性抑制作用。

亮丙瑞林的適應症為子宮內膜異位症；伴有月經過多、下腹痛、腰痛及貧血等的子宮肌瘤；絕經前乳腺癌，且雌激素受體陽性患者；前列腺癌；中樞性性早熟症。臨床主要用於前列腺癌及子宮內膜異位症。在已發表的文獻和專利中，未有大規模生產、並且具有較高收率的純化工藝報導。

現有技術提供了一種亮丙瑞林的純化工藝，該工藝中使用磷酸三乙胺作為緩衝鹽，轉鹽過程中使用陰離子交換樹脂除去磷酸根，此工藝中沒有除去三乙胺鹽的方法，有三乙胺鹽超標的風險，且引入了新的鹽，使得質量控制更加複雜。

另一個技術也提供了一種亮丙瑞林的純化工藝，該工藝中使用磷酸二氫鈉作為緩衝鹽，使用醋酸銨除去磷酸鹽，此工藝中可以避免三乙胺的殘留，但醋酸銨的脫鹽能力有限，對於亮丙瑞林這種含鹼性基團較多的多肽存在陰離子超標的風險。

技術實現要素：

本發明的主要目的在於提供一種醋酸亮丙瑞林粗產品的純化方法，以解決現有醋酸亮丙瑞林粗產品的純化方法存在雜質超標的問題。

為了實現上述目的，根據本發明的一個方面，提供了一種醋酸亮丙瑞林粗產品的純化方法，該純化方法包括：第一洗脫，採用反相色譜柱對醋酸亮丙瑞林粗產品進行第一洗脫步驟，得到第一洗脫產物；其中第一洗脫步驟的洗脫條件包括：第一流動相為三氟乙酸水溶液，第二流動相為三氟乙酸乙腈溶液；及將第一洗脫產物依次經過轉鹽、脫鹽過程，得到醋酸亮丙瑞林產品。

進一步地，第一洗脫步驟為梯度洗脫，且在梯度洗脫過程中，第二流動相的濃度在18～28wt％之間進行正向變化，洗脫時間為60～80min。

進一步地，第一洗脫步驟中，反相色譜柱的固定相為十八烷基矽烷鍵合矽膠，第一流動相中三氟乙酸的濃度為0.02～0.10wt％，第二流動相中三氟乙酸的濃度為0.02～0.10wt％，檢測波長為220nm；優選地，反相色譜柱為動態軸向加壓柱，型號為ymc-ods-aq，柱子直徑和長度為150×250mm。

進一步地，轉鹽步驟包括：採用醋酸銨對第一洗脫產物進行衝洗，得到中間產物；及對中間產物進行第二洗脫過程，得到轉鹽產物；優選，醋酸銨的濃度為40～60mmol/l。

進一步地，衝洗過程中，醋酸銨的體積用量為3～5倍柱體積，衝洗時間為30～50min。

進一步地，第二洗脫過程包括：使用第二洗脫劑對中間產物進行第二洗脫過程，且第二洗脫劑選自含醋酸的乙腈水溶液，優選含醋酸的乙腈水溶液中，醋酸的濃度為0.5～1.5wt％，乙腈的濃度為60～70wt％。

進一步地，脫鹽步驟包括：將轉鹽產物與鹼性陰離子交換樹脂進行離子交換，得到醋酸亮丙瑞林產品。

進一步地，鹼性陰離子樹脂選自amberlitira-93和/或大孔弱鹼性苯乙烯陰離子交換樹脂。

進一步地，離子交換過程中，轉鹽產物的空間流速為5～10床體積/h。

進一步地，進行第一洗脫步驟之前，純化方法還包括：將醋酸亮丙瑞林粗產品與溶劑混合後進行過濾，得到濾液；將濾液進行第一洗脫步驟，得到第一洗脫產物；優選溶劑為乙腈、醋酸和水的混合液，優選混合液中乙腈、醋酸和水的體積比為8～12:1～2.:1～2。

應用本發明的技術方案，本申請提供了一種醋酸亮丙瑞林粗產品的純化方法。採用反相色譜柱對醋酸亮丙瑞林粗產品進行初步純化時，選用三氟乙酸作為流動相一方面能夠不引入新的反離子，從而有利於提高亮丙瑞林產品的純度；另一方面由於醋酸亮丙瑞林粗產品中還含有一部分與三氟乙酸形成的三氟乙酸鹽，在流動相中加入三氟乙酸還能起到緩衝鹽的作用，將第一流動相和第二流動相的ph限定在一個較為穩定的範圍內，這有利於減少色譜峰型拖尾，改善峰型。然後通過轉鹽和脫鹽過程得到醋酸亮丙瑞林產品。綜上所述，本申請提供的純化方法不引入新的反離子，且具有產品純度高、品質可控、成本低及操作簡便等優點。

具體實施方式

需要說明的是，在不衝突的情況下，本申請中的實施例及實施例中的特徵可以相互組合。下面將結合實施例來詳細說明本發明。

正如背景技術所描述的，現有的醋酸亮丙瑞林的純化方法存在雜質超標的問題。為了更好的解決上述技術問題，本申請提供了一種醋酸亮丙瑞林粗產品的純化方法，該純化方法包括：第一洗脫，採用反相色譜柱對醋酸亮丙瑞林粗產品進行第一洗脫步驟，得到第一洗脫產物，其中第一洗脫步驟的洗脫條件包括：第一流動相為三氟乙酸水溶液，第二流動相為三氟乙酸乙腈溶液；及將第一洗脫產物依次經過轉鹽、脫鹽過程，得到醋酸亮丙瑞林產品。

第一洗脫步驟中，採用反相色譜柱對醋酸亮丙瑞林粗產品進行初步純化時，選用三氟乙酸作為流動相一方面能夠不引入新的反離子，從而有利於提高亮丙瑞林產品的純度；另一方面由於醋酸亮丙瑞林粗產品中還含有一部分與三氟乙酸形成的三氟乙酸鹽，在流動相中加入三氟乙酸還能起到緩衝鹽的作用，將第一流動相和第二流動相的ph限定在一個較為穩定的範圍內，這有利於減少色譜峰型拖尾，改善峰型。然後通過轉鹽和脫鹽過程得到醋酸亮丙瑞林產品。綜上所述，本申請提供的純化方法不引入新的反離子，且具有產品純度高、品質可控、成本低及操作簡便等優點。

在一種優選的實施方式中，第一洗脫步驟為梯度洗脫，在梯度洗脫過程中，第二流動相的濃度在18～28wt％之間進行正向變化，洗脫時間為60～80min。將第一洗脫步驟限定為梯度洗脫，有利於根據待洗脫的目標物質的極性調整洗脫液的組成，進而縮短洗脫時間。而將洗脫時間限定在上述範圍內有利於將亮丙瑞林粗產品的中雜質洗脫完全，進而提高產品的純度。

本申請中，「第二流動相的濃度在18～28wt％之間進行正向變化」是指以第二流動相的濃度為18wt％作為起始濃度，隨著時間的變化第二流動相的濃度逐漸增大，且每個梯度上第二流動相的濃度以及梯度的個數可以進行調節。「洗脫時間」是指洗脫過程的總時間。

上述純化方法中，採用上述梯度洗脫的方式進行第一洗脫步驟，有利於提高產品的純度。在一種優選的實施方式中，第一洗脫步驟中，反相色譜柱的固定相為十八烷基矽烷鍵合矽膠，第一流動相中三氟乙酸的濃度為0.02～0.10wt％，第二流動相中三氟乙酸的濃度為0.02～0.10wt％，檢測波長為220nm，反相色譜柱的固定相為十八烷基矽烷鍵合矽膠為固定相。

將第一流動相和第二流動相中三氟乙酸的濃度可以相同或不同，但均在0.02～0.15wt％範圍內進行變化，這有利於進一步提高緩衝鹽的緩衝效果，進而有利於進一步提高雜質脫除率和亮丙瑞林產品的純度。

優選地，反相色譜柱為動態軸向加壓柱，型號為ymc-ods-aq，柱子直徑和長度為150×250mm。上述反相色譜柱具有動態軸向加壓的功能，因而採用上述色譜柱進行第一洗脫步驟時，洗脫過程能夠在一定的壓力下進行，進而有利於提高分離效率。

在一種優選的實施方式中，轉鹽步驟包括：採用醋酸銨對第一洗脫產物進行衝洗，得到中間產物；及對中間產物進行第二洗脫過程，得到轉鹽產物。

第一洗脫步驟中，通過醋酸銨對第一洗脫產物進行衝洗，能夠將第一產物中的部分三氟乙酸根轉化為醋酸根，進而將第一洗脫產物轉化為醋酸鹽(轉鹽產物)。優選醋酸銨的濃度為40～60mmol/l，這有利於使醋酸根有足夠的結合位點，進而有利於提高三氟乙酸根轉化為醋酸根的效率。由於醋酸銨為弱酸弱鹼鹽，因而採用醋酸銨作為轉鹽步驟的原料，有利於保持轉鹽過程中反應環境中ph的穩定性。

在一種優選的實施方式中，衝洗過程中，醋酸銨的體積用量為3～5倍柱體積，衝洗時間為30～50min。

在一種優選的實施方式中，第二洗脫過程包括：使用第二洗脫劑對中間產物進行第二洗脫過程，且洗脫劑包括但不限於醋酸乙腈的水溶液。第二洗脫過程中採用含醋酸的乙腈水溶液進行第二洗脫過程，這有利於降低醋酸鹽在洗脫過程因水解而損失，從而有利於提高醋酸亮丙瑞林產品的純度。同時由於轉鹽產物為極性物質，使用乙腈水溶液還能提高轉鹽產物的洗脫效率。而將醋酸與乙腈的重量比限定在上述範圍內不僅有利於提高第二洗脫過程的洗脫效果，還有利於進一步提高醋酸亮丙瑞林產品的純度。優選含醋酸的乙腈水溶液中，醋酸的濃度為0.5～1.5wt％，乙腈的濃度為60～70wt％。優選對轉鹽產物進行減壓旋蒸至3mg/ml，這有利於減少轉鹽產物的體積，從而縮短脫鹽過程的時間。

在一種優選的實施方式中，脫鹽步驟包括：將轉鹽產物與鹼性陰離子交換樹脂進行離子交換，得到醋酸亮丙瑞林產品。將轉鹽產物與鹼性陰離子樹脂進行離子交換過程，以去除轉鹽產物中剩餘的三氟乙酸根。優選上述鹼性陰離子樹脂包括但不限於amberlitira-93和/或大孔弱鹼性苯乙烯陰離子交換樹脂(d301r)。

上述鹼性陰離子樹脂優選弱鹼性陰離子交換樹脂。由於三氟乙酸根的鹼性強於醋酸根，因而通過弱鹼性陰離子樹脂進行離子交換有利於將轉鹽產物中的三氟乙酸根去除，同時還保留轉鹽產物上的醋酸根，進而得到較為純淨的醋酸亮丙瑞林產品。此外由於脫鹽過程中轉鹽產物僅包含少部分的三氟乙酸根，所以僅適用少量的弱鹼性陰離子樹脂就能夠將剩餘的三氟乙酸根進行脫除。因而大大節省了成本，簡化了操作，且產品品質易於操控。

優選在脫鹽過程中，將離子交換樹脂置於砂芯漏鬥中，用純水衝洗至中性，並收集餾分；然後將上述餾分轉移至凍幹瓶中凍幹以去除水分，得到所需的醋酸亮丙瑞林產品。

在一種優選的實施方式中，上述離子交換過程中的洗脫速率為5～10床體積/h。將離子交換過程中床體積限定在上述範圍內有利於進一步提高離子交換的效率，從而有利於進一步提高三氟乙酸根與醋酸根的交換效率。

在一種優選的實施方式中，進行第一洗脫步驟之前，上述純化方法還包括：將醋酸亮丙瑞林粗產品與溶劑混合後進行過濾，得到濾液；及將上述濾液進行第一洗脫步驟，得到第一洗脫產物。在進行第一洗脫步驟之前進行過濾有利於將醋酸亮丙瑞林粗產品中的雜質進行初步脫除，這有利於防止在後續的洗脫過程中雜質堵塞色譜柱。

優選溶劑包括但不限於乙腈、醋酸和水的混合液或丙醇、醋酸和水的混合液。優選為乙腈、醋酸和水的混合液作為溶劑，選用上述溶劑一方面有利於提高醋酸亮丙瑞林粗產品的溶解，同時由於後續的純化過程中也涉及乙腈和醋酸根，因而採用上述溶劑還不會引入新的雜質，進而有利於提高醋酸亮丙瑞林的純度。優選上述混合液中，乙腈、醋酸和水的體積比為8～10:1～2.:1～2。

以下結合具體實施例對本申請作進一步詳細描述，這些實施例不能理解為限制本申請所要求保護的範圍。

實施例1

樣品處理：

每克亮丙瑞林粗品溶於20ml溶劑(乙腈：乙酸：水體積比為8：1：1)，使用0.45um濾膜過濾後得到待測樣品，備用。

第一洗脫：

色譜條件：色譜柱以十八烷基矽烷健和矽膠為固定相的動態軸向加壓柱型號為ymc-ods-aq，柱子直徑和長度為150×250mm；第一流動相為0.05wt％三氟乙酸水溶液，第二流動相為0.05wt％三氟乙酸乙腈溶液，檢測波長220nm。

將上述色譜柱使用起始梯度(第二流動相為18wt％)進行平衡，注入5g待測樣品，並在上述色譜條件下進行梯度洗脫，且洗脫過程中第二流動相的重量百分含量從18升至28wt％，線性梯度洗脫60min。收集目標峰後備用，共收集2l，濃度為1.5mg/ml。

轉鹽：

將上述色譜柱使用純水平衡後，使用50mmol醋酸銨水溶液對其進行衝洗，衝洗量為3個柱體積(每個柱體積約10分鐘)，最後用乙腈佔60％的醋酸乙腈水溶液(醋酸的重量百分含量為0.5wt％)進行第二洗脫過程，收集洗脫液得到轉鹽產物，然後對上述轉鹽產物進行減壓旋蒸至3mg/ml。

脫鹽：

將3g陰離子交換樹脂(amberlitira-93)置於砂芯漏鬥中，用純水衝洗至中性。然後將轉鹽產物置於上述砂芯漏鬥中進行離子交換，得到脫鹽產物。然後將上述脫鹽產物轉移到凍幹瓶中凍幹，即可得到純度大於99.75％符合歐洲藥典的亮丙瑞林產品，收率70wt％。

實施例2

與實施例1的區別是第一洗脫步驟中第二流動相的重量百分含量在10～20wt％之間進行正向變化。產物為純度是99.66wt％的亮丙瑞林產品，收率為61wt％。

實施例3

與實施例1的區別是第一流動相和所述第二流動相中三氟乙酸的濃度0.02wt％。產物為純度是99.46wt％的亮丙瑞林產品，收率為68wt％。

實施例4

與實施例1的區別是第一流動相中三氟乙酸的濃度0.01wt％，第二流動相中三氟乙酸的濃度0.01wt％。產物為純度是99.22wt％的亮丙瑞林產品，收率為65wt％。

實施例5

與實施例1的區別是衝洗過程中，醋酸銨的用量為1柱體積，衝洗時間為30min。產物為純度是99.34wt％的亮丙瑞林產品，收率為66wt％。

實施例6

與實施例1的區別是脫鹽過程，陰離子交換樹脂為強鹼性陰離子交換樹脂(大孔強鹼性苯乙烯陰離子交換樹脂)。產物為純度是99.73wt％的亮丙瑞林產品，收率為62wt％。

實施例7

與實施例1的區別是脫鹽過程，在進行第一洗脫步驟之前的過濾過程中，溶劑為乙腈、醋酸和水的混合液，且乙腈、醋酸和水的體積比為3:1:1。產物為純度是99.47wt％的亮丙瑞林產品，收率為60wt％。

實施例8

與實施例1的區別是色譜柱的固定相為辛烷基矽烷鍵合矽膠。產物為純度是99.10wt％的亮丙瑞林產品，收率為60wt％。

對比例1

與實施例1的區別是第一流動相為磷酸三乙胺水溶液，第二流動相為磷酸三乙胺乙腈溶液。產物為純度為98.87wt％的亮丙瑞林產品，收率為58wt％。

對比例2

與實施例1的區別是第一流動相為磷酸二氫鈉水溶液，第二流動相為磷酸二氫鈉乙腈溶液。產物為純度為97.65wt％的亮丙瑞林產品，收率為45wt％。

從以上的描述中，可以看出，本發明上述的實施例實現了如下技術效果：採用本申請方法對醋酸亮丙瑞林粗產品進行純化時，純化過程中不引入新的鹽，質量控制簡單，且除鹽徹底，從根本上降低了鹽超標的風險；同時純化過程化中使用的溶劑較少，降低了廢液的排放量；更為重要的是，經上述方法純化後，醋酸亮丙瑞林產品不僅純度高，而且還具有較高的收率。

以上所述僅為本發明的優選實施例而已，並不用於限制本發明，對於本領域的技術人員來說，本發明可以有各種更改和變化。凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。