黃酮苷類化合物及其製備方法
2023-12-05 18:04:01
專利名稱：黃酮苷類化合物及其製備方法
技術領域：
本發明屬醫藥及天然產物化學領域，具體涉及黃酮苷類化合物及其製備方法。
背景技術：
黃酮及黃酮苷類是一大類天然化學產物，在植物界分布廣泛，從植物中提取的該類化學產物具有保護心腦血管、抗炎、抗氧化、雄性或雌性激素樣作用等多種生理活性，它是許多中草藥的主要活性成分，其中有許多被開發成新型植物藥，如銀杏總黃酮、大豆異黃酮等，獲得良好效果，但是研究人員仍在不斷探索，以求獲得更多的該類化合物的活性成份，滿足人們對中草藥日益增多的需求。
發明內容
本發明的目的在於提供黃酮苷類化合物。
本發明的另一個目的在於提供從天然植物材料中分離製備上述黃酮苷類化合物的方法。
本發明的再一個目的在於提供上述黃酮苷類化合物的應用領域。
本發明所提供的黃酮苷類化合物的化學名稱分別為高聖草素-7，4』-雙-O-β-D-葡萄糖苷(homoeriodictyol 7，4′-di-O-β-D-glucopyranoside，化合物1)及聖草素-7，4』-雙-O-β-D-葡萄糖苷(eriodictyol 7，4′-di-O-β-D-glucopyranoside，化合物2)，其化學結構式如下所示 1 R＝OCH3高聖草素2 R＝OH聖草素上述黃酮苷類化合物具有下述化學及光譜學特徵化合物1高聖草素，淡黃色無定型粉末，鹽酸-鎂粉及Molish反應均呈陽性，AlCl3反應呈黃綠色螢光。UV(MeOH)λmax(nm)286，326sh；IRυmax(KBr，cm-1)3423，2924，1641，1579，1524，1500，1448，1352，1296，1273，1198，1173，1115，1074，1022，864，816高分辨質譜給出分子離子峰ESI-MS(m/z)649.1740([M+Na]+，計算值649.1735)，分子式C28H34O16；1HNMR(DMSO-d6，500MHz)δ12.05(1H，d，J＝2.2Hz，OH)，9.08(1H，br s，OH)，9.03(1H，br s，OH)，6.88(1H，br s，H-2′)，6.76(2H，br s，H-5′and H-6′)，6.14(1H，d，J＝2.5Hz，H-8)，6.13(1H，d，J＝2.5Hz，H-6)，5.34(1H，dd，J＝12.5，3.0Hz，H-2)(1H，br d，J＝12.5Hz，H-2)，4.97(1H，dd，J＝12.0，7.8Hz，H-1″)，3.68(1H，br d，J＝3.6Hz，H-6″eq)，3.65(1H，br d，J＝4.7Hz，H-6″ax)，3.20-3.46(4H，m，H-2″，H-3″，H-4″，H-5″)，3.14(1H，dd，J＝17.1，12.5Hz，Htrans-3)，2.73(1H，dd，J＝17.1，3.0Hz，Hcis-3)；13CNMR(DMSO-d6，125MHz)數據見表1；基於以上數據確定化合物1的化學結構及其名稱為高聖草素-7，4』-雙-O-β-D-葡萄糖苷(homoeriodictyol 7，4′-di-O-β-D-glucopyranoside)。
化合物2聖草素，淡黃色無定型粉末，鹽酸-鎂粉及Molish反應均呈陽性，AlCl3反應呈黃綠色螢光。UV(MeOH)λmax(nm)283，326sh；IRυmax(KBr，cm-1)3396，2926，1647，1578，1520，1446，1390，1367，1340，1300，1271，1234，1176，1090，1078，1047，1032，893，854，827；高分辨質譜給出分子離子峰ESI-MS(m/z)635.158399([M+Na]+，計算值635.1578)，分子式C27H32O16；1HNMR(DMSO-d6，500MHz)δ12.05(1H，d，J＝5.0Hz，OH)，9.16(1H，br s，OH)，7.11(1H，br s，H-2′)，6.92(1H，d，J＝8.3Hz，H-5′)，6.79(1H，d，J＝8.3Hz，H-6′)，6.17(1H，d，J＝2.0Hz，H-8)，6.13(1H，d，J＝2.0Hz，H-6)，5.49(1H，dd，J＝13.0，2.6Hz，H-2)，4.96(1H，dd，J＝13.0，7.80Hz，H-1″)，3.79(3H，s，OCH3)，3.66(1H，d，J＝11.4Hz，H-6″ax)，3.20-3.46(4H，m，H-2″，H-3″，H-4″，H-5″)，3.14(1H，m，Htrans-3)，2.76(1H，dd，J＝17.1，2.6Hz，Hcis-3)；13CNMR(DMSO-d6，125MHz)數據見表1；基於以上數據確定化合物2的化學結構及其名稱為聖草素-7，4』-雙-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(eriodictyol 7，4′-di-O-β-D-glucopyranoside)。
上述化合物1和化合物2的高分辨質譜(ESI-MS)、氫譜(1HNMR)及碳譜(13CNMR)特徵分別如附圖1～附圖6所示。
表1.化合物1和化合物2的氫譜和碳譜特徵
上述兩個新黃酮苷類化合物主要從高等植物中分離製備，其中優選的是種子植物，或者是桑寄生科(Loranthaceae)槲寄生屬(Viscum L.)植物。有關桑寄生科及槲寄生屬的科學定義和範疇，參見《中國高等植物科屬詞典》(修訂版)(候寬昭編，北京科學出版社，1984.12)及中國植物志第24卷(北京科學出版社，1986)。用於製備這兩個新黃酮苷類化合物的植物材料一般為這些植物的莖枝和葉。
本發明提出的黃酮苷類化合物的製備方法，具體步驟為(1)高等植物原料以4-15倍質量的水或10-100wt％的含水乙醇、甲醇或丙酮溶劑提取；(2)提取液回收溶劑後濃縮至稠浸膏；(3)上述獲得的稠浸膏依次用醚類、酯類、氯仿、正丁醇有機溶劑萃取，合併正丁醇萃取部分；或者將所獲得的稠浸膏用水充分攪拌稀釋後，採用非極性或弱極性大孔吸附樹脂，進行吸附，然後依次用水、20-50wt％的含水乙醇洗脫，收集洗脫液濃縮至幹；(4)將上述正丁醇萃取部分或收集大孔吸附樹脂30-50wt％洗脫液濃縮至幹的產物經柱層析分離即可。
具體實施時，上述稠浸膏萃取時可以3-10倍體積的水將稠浸膏充分攪拌稀釋，然後用有機溶劑萃取。根據實踐結果，每次萃取有機溶劑的用量可為水體積的百分之一至二分之一，萃取2-5次即可獲得良好效果。
大孔吸附樹脂法同樣先以上述量的水將稠浸膏充分攪拌稀釋，然後過濾得澄清液，將澄清液通過適當體積的非極性或弱極性大孔吸附樹脂，如D101等，待全部澄清液通過柱床之後，依次用3-5倍柱床體積的水、20wt％-50wt％的含水乙醇洗脫。
本發明的兩個化合物主要存在於30-50wt％的洗脫流份中。可採用矽膠柱層析、SephadexLH20柱層析或ODS柱層析方法進一步分離化合物1、化合物2。依據兩個化合物分子極性大小，該領域技術人員即可從柱層析產物中分別獲得化合物1、化合物2。
實驗結果表明當採用矽膠柱層析時，洗脫劑可採用氯仿-甲醇-水系統進行梯度洗脫；當採用Sephadex LH20柱層析時，洗脫劑可採用甲醇-水或乙醇-水系統洗脫；當採用ODS柱層析時，洗脫劑可採用甲醇-水或乙睛-水系統洗脫。
本發明中，植物原料的高等植物是種子植物。
本發明中，植物原料的高等植物是桑寄生科種子植物。
本發明中，桑寄生科植物是槲寄生屬植物。
本發明中，提取時加熱30-95℃回流1-3小時，提取1-3次，合併提取液。
本發明中，提取液是含水乙醇。
本發明中，提取液濃縮成稠浸膏的比重為1.02-1.10。
本發明中，稠浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇溶劑萃取。
本發明中，採用大孔吸附樹脂吸附後，依次用水、20wt％、30wt％、40wt％、50wt％的含水乙醇洗脫，收集30-50wt％洗脫液即為產物。
本發明中，層析分離採用矽膠柱層析、SephadexLH20柱層析或ODS柱層析。
本發明所述的新的黃酮苷類化合物的用途可作為藥物組合物的應用，效果令人滿意。
本發明的化合物具有良好的抗炎、抗氧化、激素樣作用。從高等植物中分離提取方法簡便，原料來源廣泛，成本不高。本發明產物與中藥、西藥等藥物製成組合藥物，具有誘人的應用前景。
圖1為化合物1的高分辨質譜圖。
圖2為化合物1的氫譜(1HNMR)圖。
圖3為化合物1的碳譜(13CNMR)圖。
圖4為化合物2的高分辨質譜圖。
圖5為化合物2的氫譜(1HNMR)圖。
圖6為化合物2的碳譜(13CNMR)圖。
圖7為本發明實施例1的提取分離流程圖。
具體實施例方式
以下以具體實施例更具體地說明本發明實施例1.化合物1和化合物2的分離製備植物材料桑寄生科槲寄生屬植物槲寄生(Viscus coloratum(Kom.)Nakai)乾燥帶葉莖枝。
分離製備方法槲寄生帶葉莖枝2.0kg，用95％乙醇20L回流提取兩次，每次2小時，合併提取液，回收乙醇並濃縮至無醇味，加入水調節至4.0L，抽濾，澄清液通過D101大孔吸附樹脂柱(1.0Kg)，依次用4-5L的水、20％、40％的含水乙醇洗脫，收集40％洗脫部分，濃縮至幹。將40％乙醇洗脫部位分次用Sephadex LH20反覆分離，即得化合物1，2。提取分離流程圖如附圖7。
實施例2.化合物1及化合物2對羥基自由基及超氧陰離子自由基的清除作用1.儀器與材料1.1儀器UV-260型分光光度計(Shimadzu)，電子天平(Sartorius)，PHB-3型酸度計(Sanxin)，ER200D-SRC型電子順磁共振儀，ER4111-VT變溫裝置(Bruker)。
1.2試劑黃嘌呤(X)、黃嘌呤氧化酶(XO)、5，5-二甲基-1-吡咯啉-N-氮化物(DMPO)和茶多酚(EGCG)購自美國Sigma公司，氯化硝基四氮唑藍(NBT)等試劑均為國產分析純。
實驗所用的化合物1和化合物2均為發明人自製，其化學結構經氫譜、碳譜、紫外光譜和紅外光譜確定無誤，HPLC法測定純度在95％以上。
2.實驗方法2.1比色法(Fenton反應)檢測仙茅苷對·OH清除作用Fenton反應是產生羥基自由基最常用的反應，是利用Fe2+被H2O2氧化生成Fe3+、OH-和·OH。反應所產生的·OH可以與水楊酸反應生成2，3-二羥基苯甲酸，在510nm處有最大吸收。測定方法根據賈之慎等人的方法進行。
2.2比色法(X/XO反應)檢測仙茅苷對O2-的清除作用利用黃嘌呤(X)與黃嘌呤氧化酶(XO)反應產生超氧陰離子自由基，該自由基可與NBT反應形成藍色，於560nm處測定吸收度。
2.3自由基清除率的計算自由基的抑制率％＝[(A空白-A樣品)/A空白]×100％。
IC50值通過線性回歸得到。
3.實驗結果見表1。說明化合物1及化合物2對羥基自由基及超氧陰離子自由基均有顯著的清除作用，其作用效果(IC50)均優於陽性對照藥茶多酚(EGCG)。
表1.化合物1和化合物2對羥基自由基及超氧陰離子自由基的清除作用
權利要求
1.黃酮苷類化合物，其特徵在於，分別為二氫黃酮類苷元高聖草素英文名為homoeriodictyol、聖草素英文名為eriodictyol的7，4』-雙葡萄糖苷，其化學結構式如下 1R＝OCH3高聖草素2R＝OH 聖草素，上述結構特徵分別命名為高聖草素-7，4』-雙-O-β-D-葡萄糖苷即homoeriodictyol 7，4′-di-O-β-D-glucopyranoside，1及聖草素-7，4』-雙-O-β-D-葡萄糖苷即eriodictyol 7，4′-di-O-β-D-glucopyranoside，2。
2.一種如權利要求1所述黃酮苷類化合物的製備方法，其特徵在於(1)高等植物原料以4-15倍質量的水或10-100wt％的含水乙醇、甲醇或丙酮溶劑提取；(2)提取液回收溶劑後濃縮至稠浸膏；(3)所獲得的稠浸膏依次用醚類、酯類、氯仿、正丁醇有機溶劑萃取，合併正丁醇萃取部分，或者將所獲得的稠浸膏用水充分攪拌稀釋後，採用非極性或弱極性大孔吸附樹脂，進行吸附，然後依次用水、20-50wt％的含水乙醇洗脫，收集洗脫液濃縮至幹；(4)將上述正丁醇萃取部分或收集大孔吸附樹脂30-50wt％洗脫液濃縮至幹的產物經柱層析分離即可。
3.如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，植物原料的高等植物是種子植物。
4.如權利要求3所述的製備方法，其特徵在於，植物原料的高等植物是桑寄生科種子植物。
5.如權利要求4所述的製備方法，其特徵在於，桑寄生科植物是槲寄生屬植物。
6.如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，提取時加熱30-95℃回流1-3小時，提取1-3次，合併提取液。
7.如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，提取液是含水乙醇。
8.如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，提取液濃縮成稠浸膏的比重為1.02-1.10。
9.如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，稠浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇溶劑萃取。
10.如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，採用大孔吸附樹脂吸附後，依次用水、20wt％、30wt％、40wt％、50wt％的含水乙醇洗脫，收集30-50wt％洗脫液即為產物。
11.如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，柱層析分離採用矽膠柱層析、SephadexLH20柱層析或ODS柱層析。
12.如權利要求1或2所述的黃酮苷類化合物的用途是作為藥物組合物的應用。
全文摘要
本發明涉及從植物中獲得的新黃酮苷類化合物及分離製備該化合物的方法。本發明的黃酮苷類化合物分別為高聖草素－7，4』－雙－O－β－D－葡萄糖苷(homoeriodictyol 7，4′－di－O－β－D－glucopyranoside)及聖草素－7，4』－雙－O－β－D－葡萄糖苷(eriodictyol 7，4′－di－O－β－D－glucopyranoside)。該類化合物主要從高等植物中分離獲得，其中主要是種子植物、尤其是桑寄生科槲寄生屬植物。通過水、乙醇、甲醇或丙酮的提取，然後濃縮、萃取、樹脂吸附、柱層析等步驟，即可從高等植物中分離獲得本發明的二個新黃酮苷類化合物。該類化合物組成藥物，是一種具有抗炎、抗氧化、激素樣作用等多種生理活性的有效藥物。
文檔編號C07H17/07GK1699393SQ20051002662
公開日2005年11月23日 申請日期2005年6月9日 優先權日2005年6月9日
發明者周銅水, 姚輝, 陳道峰, 陳家寬 申請人:復旦大學