一種抑制腫瘤生長、清除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊及其製備方法
2023-12-05 19:57:11 2
專利名稱：一種抑制腫瘤生長、清除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種保健軟骨膠囊，特別涉及一種用於抑制腫瘤生長，清除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊及其製備方法。
目前市場出售幾種抑制腫瘤生長的保健品，特別是鯊魚軟骨膠囊，如一種品牌為「海之寶」的鯊魚軟骨膠囊，由清華大學生命與工程研究院，清華大學天地科技發展有限公司聯合研製。該產品由鯊魚軟骨和地龍經加工成粉末製備而成。另一種品牌為鯊魚軟骨和硬脂酸鎂經加工成粉末配製而成。關於鯊魚軟骨膠囊抑制腫瘤的專利也有報導，如文獻1中國專利申請號961008613，名稱為「一種鯊魚軟骨膠囊及其製造工藝」的發明專利，該專利申請公開「一種鯊魚軟骨膠囊及其製造工藝，其特徵是膠囊中鯊魚軟骨含量為80％至100％，膠囊的製造工藝為(1)將軟骨從鯊魚體內取出；(2)將鯊魚軟骨進行粉碎；(3)將鯊魚軟骨殺菌後封在膠囊中，二次殺菌後包裝。
雖然鯊魚軟骨具有防癌抗癌作用，但是鯊魚軟骨資源短缺，相應價格也昂貴，不是公眾普遍可以承受的。另外鯊魚軟骨抑制腫瘤生長的途徑較單一，因此保健功能不夠高。
本發明的目的在於尋找一種原料來源豐富，且價格便宜，具有防癌和抗癌功能的動物軟骨；本發明的目的之二為了提高動物軟骨抗癌和防癌的效率和擴大抑制腫瘤的途徑；本發明的目的之三是為了提供一種製備方法簡單，原料價格便宜，工藝簡單，可進行工業化生產的方法，所製備的膠囊無化學甜味劑，無毒無害，從而提供一種動物軟骨粉、維生素或天然抗氧化劑製作的具有抑制腫瘤，清除自由基，抗脂質過氧化的動物軟骨膠囊及其製備方法。
本發明的目的是這樣實現的本發明提供一種抑制腫瘤生長，清除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊，主要填充物包括作為活性成分的動物軟骨粉，還包括藥用維生素，其中維生素添加量為填充物總重量0-30％，餘量為動物軟骨粉。還包括加入按填充物總重量計5-12％的天然藥物粉(均以重量百分比計算)；動物軟骨粉可以是豬、牛、羊、雞、鴨、陸生動物和禽類、鯊魚等軟骨製做的；維生素可以是維生素C、A、E；天然藥物粉可以是茶多酚、銀杏葉提取物、丹參粉。
本發明的一種抑制腫瘤生長，清除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊及其製備方法，包括下列步驟將洗乾淨的動物軟骨在低於20℃下乾燥，經乾燥後粉碎、研磨至小於60目的粉末，採用食品工業通用的紫外線殺菌消毒之後，與藥用維生素按總重量計含維生素0-30％，餘量為動物軟骨粉的比例稱料混合均勻，裝入醫用膠囊中再重複紫外殺菌消毒工藝，進行包裝。
本發明提供的配方之一是按每粒膠囊內的總填充物600mg計，添加總填充物重量0-30％的藥用維生素C，餘量為動物軟骨粉組成。
腫瘤的一個主要特徵是無限生長和到處轉移，這就需要大量營養，因此腫瘤的形成必須在其周圍首先形成大量血管，以供應其生長的營養。已有技術所述的鯊魚軟骨的一個重要功能是可以抑制血管的形成，但是抑制率低且價格貴。如果腫瘤周圍不能形成血管，就得不到其生長所需的營養，腫瘤生長就被抑制。體內需要氧自由基代謝平衡，只有氧自由基的產生和清除處於平衡時，身體才能保持健康。如果體內產生氧自由基過多或清除能力降低，體內就有多餘有害氧自由基，會引起細胞成分的損傷，細胞膜的脂質過氧化，酶的失活，蛋白質變性，DNA突變，導致疾病的發生，最明顯的是癌，心血管疾病和衰老的發生。這時就需要引入外加的抗氧化劑和自由基清除劑，幫助體內維持自由基代謝的平衡，防止這幾種嚴重疾病的發生。本發明利用在動物軟骨粉中再加入水溶性抗氧化劑維生素C製成複合膠囊，經實驗證明既具有清除自由基，抗脂質過氧化，又能抑制腫瘤生長具有保健功能。
經過用每組20隻小鼠作實驗發現，與對照組相比，餵食該膠囊可以抑制接種H22腫瘤生長，而且該膠囊能夠清除有害氧自由基，抑制脂質過氧化等作用，還具有抗衰老，抗心血管病功能。經科學實驗表明，在Fenton反應體系中，可有效清除反應活性最大的羥基自由基，清除該體系產生的羥基自由基的Ic50＝0.045％；該膠囊可有效清除黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系產生的超氧陰離子自由基，在該體系其清除超氧陰離子自由基的Ic50＝0.0050％；在卵磷脂和細胞膜體系中，該膠囊可以有效抑制細胞膜脂質過氧化產生的最終產物MDA的形成，其抑制MDA的Ic50＝0.40％；在小鼠接種H22實體瘤實驗中，除正常飲食外，每天餵食該膠囊130-270mg/kg，連續7天，與對照組相比可以抑制腫瘤生長26％。
本發明提供的配方2是按每粒膠囊內的總填充物600mg計，添加總填充物重量3-7％的藥用維生素E，餘量為動物軟骨粉組成。其中維生素E是一種脂溶性抗氧化劑，它與動物軟骨粉有抑制腫瘤生長的協同作用。
用每組20隻小鼠作實驗發現，與對照組相比，餵食該膠囊可以抑制接種H22腫瘤生長，而且該膠囊能夠清除有害氧自由基，抑制脂質過氧化等作用，還具有抗衰老，抗心血管病功能。經科學實驗表明，在卵磷脂和紅細胞膜體系中，該膠囊可以有效抑制細胞膜脂質過氧化產生的最終產物MDA的形成，其抑制MDA的Ic50＝0.30-0.35％；在小鼠接種H22實體瘤實驗中，除正常飲食外，每天餵食該配方的膠囊130-270mg/kg，連續7天，與對照組相比可以抑制腫瘤生長20-35％。
本發明提供配方3是按每粒膠囊內的總填充物600mg計，添加總填充物重量3-7％的藥用維生素E和15％-30％維生素C，餘量為動物軟骨粉組成。其中維生素E是一種脂溶性抗氧化劑，可以和維生素C協同抗氧化和清除自由基，進而與動物軟骨協同抑制腫瘤生長。
本發明提供的配方4在上述配方1中，再加入填充物總重量5-12％的茶多酚，餘量為動軟骨粉組成。
本發明提供的配方5是在上述配方3中，再加入填充物總重量5-12％的茶多酚，組成。以上兩個配方中使用了茶多酚，因為茶多酚是既可溶於水又可溶於有機溶劑的物質，可以和水溶性維生素C和脂溶性維生素E協同提高本發明的動物軟骨膠囊的保健功能，本發明提供的配方6在上述配方5中，再添加以填充物總重量0.5-1.5％的銀杏葉提取物組成。
本發明提供的配方7在上述配方3中，再添加以填充物總重量0.5-1.5％的銀杏葉提取物組成。
本發明提供的配方8是按每粒膠囊內的填充物總重量600mg計，添加總填充物重量5-12％的丹參粉和餘量為動軟骨粉組成。
用每組20隻小鼠作實驗方法同上，在Fenton反應體系中，該膠囊可有效清除反應活性最大的羥基自由基，清除該體系產生的羥基自由基的Ic50＝0.05-0.06％；該膠囊可有效清除黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系產生的超氧陰離子自由基，在該體系其清除超氧陰離子自由基的Ic50＝0.02-0.25％；在卵磷脂和紅細胞膜體系中，該膠囊可以有效抑制細胞膜脂質過氧化產生的最終產物MDA的形成，其抑制MDA的Ic50＝0.2-0.25％；在小鼠接種H22實體瘤實驗中，除正常飲食外，每天餵食該130-270mg/kg，連續7天，與對照組相比可以抑制腫瘤生長15-25％。另外，用阿黴素誘導小鼠引起心臟病，每天餵食該膠囊130-270mg/kg，可減少阿黴素對小鼠的毒性。可以看出增加了丹參粉後，不僅是含有活性成份動物軟骨粉具有抑制腫瘤作用，而增加丹參粉對心臟也有保護作用。
本發明提供的配方9在上述配方中，再添加總重量5-12％的丹參粉。配方6、7、8、9中增加天然藥物粉是為了進一步提高本發明的動物軟骨膠囊的保健功能，特別是對心臟的保健功能。
用每組20隻小鼠作實驗，實驗方法如上所述，實驗發現與對照組相比，餵食該膠囊可以抑制接種H22腫瘤生長，而且該膠囊能夠清除有害氧自由基，抑制脂質過氧化等作用，還具有抗衰老，抗心血管病功能。經科學實驗表明，在Fenton反應體系中，該膠囊可有效清除反應活性最大的羥基自由基，清除該體系產生的羥基自由基的Ic50＝0.018-0.019％；該膠囊可有效清除黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系產生的超氧陰離子自由基，在該體系其清除超氧陰離子自由基的Ic50＝0.0012-15％；在卵磷脂和紅細胞膜體系中，該膠囊可以有效抑制細胞膜脂質過氧化產生的最終產物MDA的形成，其抑制MDA的Ic50＝0.115-0.120％；在小鼠接種H22實體瘤實驗中，除正常飲食外，每天餵食該130-270mg/kg，連續7天，與對照組相比可以抑制腫瘤生長30-46％。另外，用阿黴素誘導小鼠引起心臟病，每天餵食該膠囊130-270mg/kg，可減少阿黴素對小鼠的毒性。可以看出增加了丹參粉後，不僅協同增效作用進一步增大，而且對心臟也有保護作用。
本發明的效果1.本發明的動物軟骨膠囊中主要添加動物軟骨粉，維生素和天然植物提取物，可以有效抑制腫瘤生長，其抑制率26-46％；2.本發明的動物軟骨膠囊能夠有效清除有害氧自由基，其消除羥基自由基的Ic50＝0.045-0.050％；其清除超氧陽離子自由基的Ic50＝0.0050-0.012％；3.本發明的動物軟骨膠囊可以有效抑制細胞膜脂質過氧化作用Ic50＝0.115-0.120％；4.本發明的動物軟骨膠囊可能還具有抗衰老抗心血管病功能；5.本發明的動物軟骨膠囊選用藥膳同源的天然食用動物軟骨粉，維生素和天然植物提取物為原料，各組分符合藥政法規定，利用各組分之間的協同作用，達到有效抑制腫瘤生長，清除有害自由基，防止脂質過氧化的作用；6.本發明無須煎煮，無苦澀感，服用方便，符合國家食品衛生法規定；7.本發明的膠囊，原料易得，價格便宜；8.本發明不含任何其它添加劑，對人體無害無毒；9.製備方法簡單，採用通常乾燥，粉碎，殺菌消毒工藝，易於工業化生產，本發明的用途1.本發明用於抑制腫瘤生長，適用劑量8-12粒/次，每日3次；2.本發明能夠有效清除人體內有害氧自由基；3.本發明可以有效抑制細胞膜脂質過氧化作用；4.本發明還具有預防心血管病的功能；圖1 AAA對Fenton體系產生的羥基自由基的清除作用；圖2 AAA對黃嘌呤氧化酶體系產生的超氧陰離子自由基的清除作用。
圖3 AAA對羥基自由基引起紅細胞膜脂質過氧化的保護作用。
說明書、圖和表中AAA代表本發明的動物軟骨粉保健膠囊。
實施例1配製按每粒膠囊100mg計，取豬軟骨粉+維生素C+維生素E+茶多酚+丹參粉+銀杏葉提取物＝67.5mg+13.5mg+6mg+6mg+6,3mg+0.7mg組成。其製備方法是將豬軟骨經清洗乾淨，放在烘箱內20℃烘乾，再用食品加工器粉碎，經研磨通過60目孔篩，把按上述比例稱好的料經通常食品工業用的紫外線消毒裝置照射消毒後，與醫用維生素、天然藥物粉混合均勻裝入醫用膠囊內，再重複紫外消毒一次包裝即可。
上述製備的複合豬軟骨膠囊對Fenton反應體系產生羥基自由基的清除作用羥基自由基是所有氧自由基中氧化性質最強的自由基，壽命極短(10-6)，反應性極強，它可以和細胞所有成分發生反應，引起細胞膜的脂質過氧化，酶的失活和蛋白質的變性，造成DAN突變。
本實驗採用Fenton反應體系產生羥基自由基，用自旋捕集ESR技術或化學發光法，檢測產生的羥基自由基，本發明動物軟骨膠囊可以有效清除在這一體系中產生的羥基自由基，其清除羥基自由基的Ic＝0.018％。
一、配製複合豬軟骨提取溶液1.本實施例配製的100mg/粒複合豬軟骨膠囊(67.5％豬軟骨粉，13.5％維生素C，6.0％維生素E，6％茶多酚，6.3％丹參粉，0.7％銀杏葉提取物)溶於1ml磷酸緩衝液，振蕩，離心，取上清液，作為實驗用。
2.H2O20.5％，自旋捕集劑DMPO(5，5』dimethyl-pyrroline-oxyl，SigmaChemCo.)0.4mol/L。
3.Fe(NH4)2SO4溶於pH5.0弱酸中。
二、複合豬軟骨膠囊對Fenton反應產生羥基自由基的清除作用用Fenton反應體系產生羥基自由基，用自旋捕集劑DMPO捕集產生的羥基自由基，用ESR或用化學發光技術測量產生的羥基自由基。在此體系中加入步驟一製做的複合豬軟骨提取液，測量複合豬軟骨膠囊對羥基自由基的清除作用。具體反應體系為1.10μlPBS+10μlH2O2+10μlFe2++10μlDMPO2.10μl(0.0035％)複合豬軟骨膠囊+10μlH2O2+10μlFe2++10μlDMPO3.10μl(0.035％)複合豬軟骨膠囊+10μlH2O2+10μlFe2++10μlDMPO4.10μl(0.35％)複合豬軟骨膠囊+10μlH2O2+10μlFe2++10μlDMPO5.10μl(3.5％)複合豬軟骨膠囊+10μlH2O2+10μlFe2++10μlDMPO利用下式計算清除率E=Ho-HxHo100%]]>這裡Ho和Hx分別為對照和實驗樣品自由基的濃度。
三、結果表1和圖1給出了複合豬軟骨膠囊對Fenton體系產生的羥基自由基的清除作用。
表1複合豬軟骨膠囊對Fenton體系產生的羥基自由基的清除作用濃度(％) OH(相對濃度) 清除率(％)0 840，860，720，800 00.017 553，600，500 31.6±5.070.17 258，300，350 62.4±4.71.7 100，96，9887.8±6.213.4 22，20，21 97.4±0.28由表1的數據和圖1的清除曲線可以看出複合豬軟骨膠囊可以有效清除Fenton體系產生的羥基自由基，其清除羥基自由基的IC50＝0.018％。實施例2製備方法及配方同實施的1相同，複合豬軟骨膠囊對黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶(X/XO)體系產生O2的清除作用複合豬軟骨膠囊對黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶(X/XO)體系產生O2-有清除作用，O2-是體內產生的第一個氧自由基，它可以直接和細胞成分反應，O2-也可以插入DNA引起細胞突變，產生細胞毒性和損傷。另外它還可以歧化生成H2O2，再經Fenton反應生成羥基自由基，引起細胞成分的損傷。本實驗採用X/XO體系產生O2-，用ESR技術或Luminol的化學發光法檢測產生O2-。複合豬軟骨膠囊可以有效清除這一體系產生的O2-，其清除O2-的Ic50＝0.0012％一、溶液配製1.100mg複合豬軟骨膠囊(67.5％豬軟骨粉，13.5％維生素C，6.0％維生素E，6％茶多酚，6.3％丹參粉，0.7％銀杏葉提取物)溶於1ml磷酸緩衝液，振蕩，離心，取上清液，作為實驗用。2.黃嘌呤50mg/l，黃嘌呤氧化酶35U/ml，自旋捕集劑DMPO0.4mol/L。
二、複合豬軟骨膠囊對黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系產生超氧陰離子自由基的清除作用用黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系產生超氧陰離子自由基，用DMPO捕集產生的超氧陰離子自由基，用ESR或化學發光技術測量產生的超氧陰離子自由基。在體系中加入複合豬軟骨膠囊提取液，測量複合豬軟骨膠囊對超氧陰離子自由基的清除作用。
具體反應體系為1.10μlPBS+10μlX+10μlXO++10μlDMPO2.10μl(0.0035％)複合豬軟骨膠囊+10μlX+10μlXO+10μlDMPO3.10μl(0.035％)複合豬軟骨膠囊+10μlX+10μlXO+10μlDMPO4.10μl(0.35％)複合豬軟骨膠囊+10μlX+10μlXO+10μlDMPO5.10μl(3.5％)複合豬軟骨膠囊+10μlX+10μlXO+10μlDMPO利用下式計算清除率E=Ho-HxHo100%]]>這裡Ho和Hx分別為對照組和實驗樣品自由基的濃度。
三、結果表2和圖2給出了複合豬軟骨膠囊對黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系產生的超氧陰離子自由基的清除作用。表2複合豬軟骨膠囊對黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系產生的超氧陰離子自由基的清除作用。濃度 O2-(相對濃度)清除率(％)0590，650，489，459 00.0018 355，400，415 28.7±4.70.01879，78，76 85.8±0.220.18 7.0，10，1198.3±0.311.8 1.8，2.1，2.0 99.6±0.05由表2的數據和圖2的清除曲線可以看出複合豬軟骨膠囊可以有效清除黃嘌呤/呤氧化酶體系產生的超氧陰離子自由基，其清除超氧陰離子自由基的IC50＝0.0012％。實施例3配製每粒複合豬軟骨膠囊100mg計，其中添充物為13.5％維生素C，6.0％維生素E，6％茶多酚，6.3％丹參粉，0.7％銀杏葉提取物，餘量為豬軟骨粉組成，該複合豬軟骨膠囊有抑制細胞膜脂質過氧化作用；製備方法與實施1相同。
紅細胞在血液中具有攜帶和運輸O2的作用，很容易引起氧自由基對機體的損傷，導致紅細胞膜脂質過氧化。細胞膜脂質過氧化最終產生細胞膜脂質斷裂形成醛類，典型的是丙二醛。利用TBA與MDA反應生成TBA反應物TBARS可以定量測定紅細胞膜脂質過氧化程度。本實驗採用Fenton反應引起紅細胞膜脂質過氧化，複合豬軟骨膠囊可以有效抑制該體系產生的TBARS。其抑制脂質過氧化的IC50＝0.115％，實驗如下一、溶液配製1.取上述配製的100mg複合豬軟骨膠囊(67.5％軟骨粉，13.5％維生素C，6.0％維生素E，6％茶多酚，6.3％丹參粉，0.7％銀杏葉提取物)溶於1ml磷酸緩衝液，振蕩，離心，取上清液，作為實驗用；2.紅細胞膜的提取，健康志願者獻血，肝素抗凝，離心沉澱收集紅細胞，用冷凍低滲溶液漲破紅細胞，高速離心沉澱紅細胞膜，用磷酸緩衝液洗滌後待用。
3.Fe(NH4)2SO4溶於pH5.0弱酸中；4.TBA0.65mg/ml；5.甲醇∶丁醇85∶15二、複合豬軟骨膠囊對紅細胞膜脂質過氧化的保護作用1.對照140μlPBS+20μlPBS+300μl紅細胞膜+50μlTBA+500μlHCl2.對照240μlPBS+20μlFe2++300μl紅細胞膜+50μlTBA+500μlHCl3.AAA40μl複合豬軟骨膠囊(0.0029％)+20μlFe2++300μl紅細胞膜+50μlTBA+500μlHCl4.AAA40μl複合豬軟骨膠囊(0.029％)+20μlFe2++300μl紅細胞膜+50μlTBA+500μlHCl5.AAA40μl複合豬軟骨膠囊(0.29％)+20μlFe2++300μl紅細胞膜+50μlTBA+500μlHCl6.AAA40μl複合豬軟骨膠囊(2.9％)+20μlFe2++300μl紅細胞膜+50μlTBA+500μlHCl以上樣品在95oC溫育40分鐘，冷卻到室溫後用甲醇丁醇抽提，有機相在532nm處測定光吸收，利用下式計算複合豬軟骨膠囊對紅細胞膜脂質過氧化的抑制率。E=Ho-HxHo100%]]>這裡Ho和Hx分別為對照和實驗樣品自由基的濃度。
三、結果表3和圖3給出了複合豬軟骨膠囊對羥基自由基引起紅細胞膜脂質過氧化的保護作用。
表3複合豬軟骨膠囊對羥基自由基引起紅細胞膜脂質過氧化的保護作用樣品 光吸收(532nm)抑制率(％)平均抑制率(％)對照21.0954
0.98461.00140 0複合豬軟骨膠囊(0.0029％)0.9533 8.40.918211.8 8.5±2.650.98565.3複合豬軟骨膠囊(0.029％)0.7793 25.10.785126.00.770225.0 25.4(0.45)複合豬軟骨膠囊(0.29％)0.500051.90.483853.50.463757.4 54.3(2.31)複合豬軟骨膠囊(2.9％)0.2605 75.00.527275.80.265674.5 75.1(0.54)由表3的數據和圖3的抑制曲線可以看出，本發明的複合豬軟骨膠囊可以有效抑制羥基自由基引起紅細胞膜的脂質過氧化，其IC50＝0.115％。實施例4複合豬軟骨膠囊對實驗小鼠實體瘤生長的抑制作用癌的發生和發展都有自由基的產生和參與，致癌和促癌作用都與自由基有密切關係。因此，自由基清除劑應對腫瘤有抑制作用。用軟骨和天然抗氧化劑科學配製而成的複合豬軟骨膠囊對腫瘤的生長具有明顯抑制作用。本實驗採用H22腹水癌細胞接種於小鼠腋下形成實體瘤。分成兩組，每組20隻小鼠，一組正常飲食，一組除正常飲食外，每天餵食複合豬軟骨膠囊270mg/kg，7天後將小鼠處死，分離瘤體，稱重，列於表8.由表中數據可以看出，複合豬軟骨膠囊可以抑制實體瘤生長37.45％左右。
一、溶液的配製675g複合豬軟骨膠囊(67.5％軟骨粉，13.5％維生素C，6.0％維生素E，6％茶多酚，6.3％丹參粉0.7％銀杏葉提取物)溶在20ml蒸餾水中，形成懸浮液。
二、H22腫瘤的接種0.2mlH22腹水癌細胞注射在小鼠腹腔，培養三天，將腹水取出，用生理鹽水稀釋。將稀釋的H22細胞0.2ml接種到40隻雄性小鼠(25g左右)腋下。隨機將小鼠分為兩組，每組20隻，一組每天灌注0.2ml步驟1配製的複合豬軟骨膠囊懸浮液，另一組灌注0.2ml蒸餾水。
三、H22實體瘤的檢測將餵食7天的小鼠處死，從腋下分離H22實體瘤，稱重。
四、結果1.對照小鼠組和餵食本實施例配製的複合豬軟骨膠囊小鼠腋下實體瘤的重量如表5所示，其對小鼠接種H22實體瘤生長的抑制作用由下式計算
表4本實施例的複合豬軟骨膠囊對H22實體瘤的抑制作用N 對照(g) 複合豬軟骨(g)1 2.22.02 2.21.83 2.01.54 2.01.45 2.01.46 1.81.37 1.81.38 1.71.291.6 1.210 1.5 1.011 1.4 0.912 1.4 0.813 1.3 0.714 1.2 0.615 1.2 0.516 1.2 0.417 1.1 0.418 1.1 0.419 1.0 0.320 1.0 0.31.55±0.40 0.97+0.501.55-0.971.55100%=37.5%]]>由以上結果可以看出，複合豬軟骨膠囊對接種H22腫瘤生長有明顯的抑制作用，抑制率為37.5％左右，經統計學處理，p＜0.05，有顯著差異。實施例5本發明的複合豬軟骨膠囊與鯊魚軟骨對實驗小鼠實體瘤生長的抑制作用的比較為了進一步比較豬複合軟骨膠囊和鯊魚軟骨對腫瘤的生長的抑制作用。本實驗採用H22腹水癌細胞接種於小鼠腋下形成實體瘤。隨機分成四組，每組15隻小鼠，一組正常飲食，一組除正常飲食外，每天餵食複合豬軟骨膠囊270mg/kg，另外兩組分別餵食270mg/kg鯊魚軟骨，7天後將小鼠處死，分離瘤體，稱重，列於表5.由表中數據可以看出，複合豬軟骨膠囊可以抑制實體瘤生長46.5％左右，鯊魚軟骨抑制13.9％左右。
一、溶液的配製675g複合豬軟骨膠囊(67.5％軟骨粉，13.5％維生素C，6.0％維生素E，6％茶多酚，6.3％丹參粉0.7銀杏葉提取物％)和鯊魚軟骨(美國超健康產品有限公司製備)分別溶在20ml蒸餾水中，形成懸浮液。再提供20ml蒸餾水。
二、H22腫瘤的接種0.2mlH22腹水癌細胞注射在小鼠腹腔，培養三天，將腹水取出，用生理鹽水稀釋。將稀釋的H22細胞0.2ml接種到45隻雄性小鼠(25g左右)腋下。隨機將小鼠分為四組，一組每天灌注0.2ml複合豬軟骨膠囊懸浮液，一組每天灌注0.2ml鯊魚軟骨懸浮液，另一組灌注0.2ml蒸餾水。
三、H22實體瘤的檢測將餵食7天的小鼠處死，從腋下分離H22實體瘤，稱重。
四、結果1.對照小鼠和餵食複合豬軟骨膠囊和鯊魚軟骨小鼠腋下實體瘤的重量如表5所示。複合豬軟骨膠囊和鯊魚軟骨對小鼠接種H22實體瘤生長的抑制作用由下式計算
表5本發明的複合豬軟骨膠囊和鯊魚軟骨對H22實體瘤抑制作用的比較N 對照(g) 複合豬軟骨膠囊(g) 美國鯊魚軟骨(g)l 0.88 0.18 0.302 1.04 0.18 0.553 0.62 0.60 0.554 0.89 0.45 1.575 0.68 0.56 0.696 0.78 0.25 0.417 1.56 0.28 0.328 0.64 0.49 0.869 0.48 0.60 1.2410 1.27 1.34 0.7111 1.02 0.35 0.9712 0.76 0.49 0.9313 0.96 0.35 0.6814 0.68 0.24 0.6615 0.69 0.560.86±0.070.460±080.740±.120.86-0.460.86100%=46%]]>0.86-0.740.86100%=13.9%]]>由以上結果可以看出，複合豬軟骨膠囊對接種H22腫瘤生長有明顯的抑制作用，抑制率為46％左右。鯊魚軟骨對H22腫瘤也有明顯抑制作用，抑制率分別為14％左右，經統計學處理，p＜0.05，有顯著差異。複合豬軟骨膠囊抑制腫瘤生長的能力大大超過鯊魚軟骨膠囊。實施例6本發明的複合豬軟骨膠囊對阿黴素引起小鼠心臟病的保護作用很多治療腫瘤的藥物都有副作用，阿黴素的副作用就是對心臟的損傷。本發明利用阿黴素建立心臟損傷模型，檢驗複合豬軟骨膠囊對心臟病的保護作用，但是，阿黴素損傷心肌的電鏡照片不明顯，實驗無法判斷對心臟病的保護作用。但本發明的複合豬軟骨膠囊除含有動物軟骨外，還含有多種天然抗氧化劑和治療心臟病的中藥成分，如銀杏葉提取物和丹參粉。本發明的複合豬軟骨膠囊應當對心臟病具有保護作用。因為實驗中發現，阿黴素組，小鼠死亡率為46％，複合豬軟骨膠囊組為零。
一、溶液的配製1.分別將阿黴素和675g複合豬軟骨膠囊(67.5％軟骨粉，13.5％維生素C，6.0％維生素E，6％茶多酚，6.3％丹參粉，0.7％銀杏葉提取物)溶在20ml蒸餾水中，形成懸浮液。
2.20ml蒸餾水。
二、阿黴素和豬軟骨膠囊的注射隨機將30隻小鼠分為二組，一組15隻每天腹腔注射0.2ml阿黴素，另一組15隻除每天注射注射0.2ml阿黴素外，每天灌注0.2ml複合豬軟骨膠囊懸浮液。10天以後，實驗結果發現，阿黴素組，小鼠死亡率為46％，複合豬軟骨膠囊組為零。實施例7按600mg/粒計，其配方為佔總填充物15％的維生素C和7％的維生素E，餘量為主要填充物豬軟骨粉，製備方法同實施例1用每組20小鼠作實驗發現，與對照組相比，餵食該膠囊可以抑制接種H22腫瘤生長，而且該膠囊能夠清除有害氧自由基，抑制脂質過氧化等作用，還具有抗衰老，抗心血管病功能。經科學實驗表明，在Fenton反應體系中，該膠囊可有效清除反應活性最大的羥基自由基，清除該體系產生的羥基自由基的Ic50＝0.020-25％；該膠囊可有效清除黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系產生的超氧陰離子自由基，在該體系其清除超氧陰離子自由基的Ic50＝0.0040-0.0045％；在卵磷脂和紅細胞膜體系中，該膠囊可以有效抑制細胞膜脂質過氧化產生的最終產物MDA的形成，其抑制MDA的Ic50＝0.30-0.35％；在小鼠接種H22實體瘤實驗中，除正常飲食外，每天餵食該膠囊130-270mg/kg，連續7天，與對照組相比可以抑制腫瘤生長20-35％。因為維生素E是脂溶性的，可以和維生素C協同抗氧化，進一步和軟骨協同抑制腫瘤生長。可以看出增加了維生素E後，具有協同增效作用。實施例8按實施例7的配方中再添加佔總填充物重量12％的茶多酚，25％維生素C、5％維生素E和餘量為動物軟骨粉(豬、牛、羊、鯊魚、雞、鴨均可)，做成600mg/粒保健膠囊，製備方法同實施例1用每組20隻小鼠作實驗方法同實施例1，實驗表明在Fenton反應體系中，該膠囊可有效清除反應活性最大的羥基自由基，清除該體系產生的羥基自由基的Ic50＝0.025-0.030％；該膠囊可有效清除黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系產生的超氧陰離子自由基，在該體系其清除超氧陰離子自由基的Ic50＝0.0022-0.0030％；在卵磷脂和紅細胞膜體系中，該膠囊可以有效抑制細胞膜脂質過氧化產生的最終產物MDA的形成，其抑制MDA的Ic50＝0.20％；在小鼠接種H22實體瘤實驗中，除正常飲食外，每天餵食該130-270mg/kg，連續7天，與對照組相比可以抑制腫瘤生長35-40％。因為茶多酚具有脂水雙溶性，可以和維生素E及維生素C協同抗氧化，可以看出增加了茶多酚後，協同增效作用更大。實施例9按實施例1的方法製做600mg/粒的本發明膠囊，其配比為佔總填充物重量30％維生素C，12％茶多酚，餘量為豬軟骨粉；用每組20隻小鼠作實驗方法同前，實驗表明在Fenton反應體系中，該膠囊可有效清除反應活性最大的羥基自由基，清除該體系產生的羥基自由基的Ic50＝0.02-0.025％；該膠囊可有效清除黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系產生的超氧陰離子自由基，在該體系其清除超氧陰離子自由基的Ic50＝0.002-0.0025％；在卵磷脂和紅細胞膜體系中，該膠囊可以有效抑制細胞膜脂質過氧化產生的最終產物MDA的形成，其抑制MDA的Ic50＝0.15-20％；在小鼠接種H22實體瘤實驗中，除正常飲食外，每天餵食該130-270mg/kg，連續7天，與對照組相比可以抑制腫瘤生長25-30％。因為茶多酚具有脂水雙溶性，可以和維生素E及維生素C協同抗氧化，可以看出增加了茶多酚後，協同增效作用更大。實施例10
按實施例1的方法製做600mg/粒的本發明膠囊，其配比為佔總填充物重量5％維生素C，12％維生素E，3％維生素A，0.5％茶多酚，1.5％銀杏葉提取物1.5％，和餘量為豬軟骨粉。
用每組20隻小鼠作實驗方法同前，實驗發現，與對照組相比，餵食該膠囊可以抑制接種H22腫瘤生長，而且該膠囊能夠清除有害氧自由基，抑制脂質過氧化等作用，還具有抗衰老，抗心血管病功能。經科學實驗表明，在Fenton反應體系中，該膠囊可有效清除反應活性最大的羥基自由基，清除該體系產生的羥基自由基的Ic50＝0.020-0.025％；該膠囊可有效清除黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系產生的超氧陰離子自由基，在該體系其清除超氧陰離子自由基的Ic50＝0.0015-0.020％；在卵磷脂和紅細胞膜體系中，該膠囊可以有效抑制細胞膜脂質過氧化產生的最終產物MDA的形成，其抑制MDA的Ic50＝0.12-0.15％；在小鼠接種H22實體瘤實驗中，除正常飲食外，每天餵食該膠囊130-270mg/kg，連續7天，與對照組相比可以抑制腫瘤生長20-25％。因為銀杏葉提取物活性成分也具有抗氧化和抗癌作用，可以看出增加了銀杏葉提取物後，與軟骨有協同增效作用。實施例11按實施例1的方法製做600mg/粒的本發明膠囊，其配比為；佔總填充物重量15％維生素C，3％維生素E，6％茶多酚，0.5％銀杏葉提取物1.5％，和餘量為豬軟骨粉。
用每組20隻小鼠作實驗方法同前，實驗表明，在Fenton反應體系中，該膠囊可有效清除反應活性最大的羥基自由基，清除該體系產生的羥基自由基的Ic50＝0.018-0.020％；該膠囊可有效清除黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系產生的超氧陰離子自由基，在該體系其清除超氧陰離子自由基的Ic50＝0.0012-0.015％；在卵磷脂和紅細胞膜體系中，該膠囊可以有效抑制細胞膜脂質過氧化產生的最終產物MDA的形成，其抑制MDA的Ic50＝0.115-0.12％；在小鼠接種H22實體瘤實驗中，除正常飲食外，每天餵食該膠囊130-270mg/kg，連續7天，與對照組相比可以抑制腫瘤生長30-44％。因為銀杏葉提取物活性成分也具有抗氧化和抗癌作用，可以看出增加了銀杏葉提取物後，協同增效作用進一步增大。
權利要求
1.一種抑制腫瘤生長、消除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊，其特徵在於主要填充物包括作為活性成分的動物軟骨粉，還包括藥用維生素；其中藥用維生素佔填充物總重量的0-30％，餘量為動物軟骨粉。
2.按權利要求1所述的抑制腫瘤生長、消除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊，其特徵在於還包括添加佔填充物總重量的5-12％的天然藥物粉。
3.按權利要求1、2所述的抑制腫瘤生長、消除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊，其特徵在於所述的動物軟骨，包括豬、牛、羊、雞、鴨、兔陸生和禽類的動物軟骨以及鯊魚軟骨。
4.按權利要求1所述的具有抑制腫瘤生長、消除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊，其特徵在於所述添加的藥用維生素佔填充物總重量的0-30％的維生素C。
5.按權利要求1、2所述的抑制腫瘤生長、消除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊，其特徵在於所述的添加藥用維生素佔填充物總重量的3-7％的維生素E。
6.按權利要求1、2所述的抑制腫瘤生長、消除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊，其特徵在於所述的添加藥用維生素佔填充物總重量的3-7％的維生素A。
7.按權利要求2所述的抑制腫瘤生長、消除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊，其特徵在於所述的添加天然藥物粉包括佔填充物總重量的的5-12％茶多酚。
8.按權利要求2所述的抑制腫瘤生長、消除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊，其特徵在於所述的添加天然藥物粉包括佔填充物總重量的0.5-1.5％的銀杏葉提取物。
9.按權利要求2所述的抑制腫瘤生長、消除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊，其特徵在於所述的添加天然藥物粉包括佔填充物總重量的5-12％的丹參粉。
10.一種製備權利要求1-9所述的抑制腫瘤生長、消除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊方法，包括依下列步驟進行(1)取清洗乾淨動物軟骨，在低於20℃下乾燥；(2)乾燥後的動物軟骨經通常粉碎方法粉碎成60目以下的粉末，經用食品加工業通用的紫外線殺菌消毒裝置進行消毒，之後，按裝入每粒膠囊中的填充物總重量的0-30％藥用維生素，餘量為動物軟骨粉的比例配料，經混合均勻裝入醫用膠囊；(3)把已裝好的醫用膠囊再重複紫外殺菌消毒包裝。
全文摘要
本發明涉及一種抑制腫瘤生長、消除自由基和抗脂質過氧化的動物軟骨保健膠囊及製法,本發明的保健膠囊主要填充物為動物軟骨粉,還包括添加藥用維生素,其中藥用維生素按總填充物重量0—30%添加,餘量為動物軟骨粉,還可以加入天然藥物粉,製備方法是將動物軟骨幹燥、粉碎、消毒、混合之後再消毒殺菌包裝,本發明的保健膠囊可抑制腫瘤生長,抗衰老,對心血管有保健功能。製備方法簡單,易於工業化生產。
文檔編號A61P3/02GK1259353SQ9910007
公開日2000年7月12日 申請日期1999年1月7日 優先權日1999年1月7日
發明者張春愛, 趙保路, 忻文娟, 侯京武 申請人:中國科學院生物物理研究所