一種短葉蘇木酚固體脂質納米粒的製備方法
2023-12-05 20:40:21
專利名稱：：一種短葉蘇木酚固體脂質納米粒的製備方法
技術領域：
：本發明涉及一種藥品及其製備方法，具體涉及一種短葉蘇木酚固體脂質納米粒的製備方法。
背景技術：
：大戟科葉下珠屬(Phyllanthus)植物在全世界有600餘種，自1982年印度學者Thyagarjan等發現珠子草(PhyllanthusniruriL.)在體外具有殺滅B肝病毒活性。葉下珠屬植物在我國有33種，陝西省葉下珠屬植物有兩種，即葉下珠(PhyllanthusurinariaL)和黃珠子草(P.simplexRetz.)，主要分布於陝南，黃珠子草又稱珍珠草、地珍珠等，最早收載於《生草藥性備要》中，具有平肝、清熱、利水、解毒之功效，用於治療腸炎、肝炎、尿路感染、無名腫痛等。目前人們己經從黃珠子草中分離出十幾個化合物，對這些化合物進行了結構鑑定及抗病毒作用的篩選，結果顯示，其所含的短葉蘇木酚(brevifolin，BF)有很好的抗病毒效果。短葉蘇木酚屬於沒食子酸型多酚類成分，有報導具有抗氧化及保肝作用。固體脂質納米粒(Solidlipidnanoparticles,SLN)是近年正在發展的一種新型毫微粒類給藥系統，以固態的天然或合成的類脂，如卵磷脂、三醯甘油等為載體，將藥物包裹於類脂核中製成粒徑約為501000nm的固體膠粒給藥體系，是一種極有發展前景的新型給藥系統的載體。藥物由於被包封於SLN的固體骨架中，其實現了生理相容性好、可控制藥物釋放及良好的耙向性，既具備聚合物納米粒物理穩定性高、藥物洩漏慢的優勢，又兼具了脂質體、乳劑的毒性低、能大規模生產的優點。由於在製備過程中I^T大規模生產的基礎，使SLN較聚合物納米粒更具有吸引力。
發明內容本發明的目的在於提供一種短葉蘇木酚固體脂質納米粒的製備方法。為達到上述目的，本發明採用的技術方案是首先取5060mg的硬脂酸、120130mg的卵磷脂和7080mg的短葉蘇木酚溶解於80120mL的無水乙醇中形成有機相溶液；然後將有機相溶液置於梨形瓶中，在35。C以2000轉/分鐘的轉速下旋轉蒸發，形成均勻的有機相薄膜；再取1020mL的甘油分散於2030mL的蒸餾水中在7080。C的恆溫磁力攪拌的下形成水相，將708(TC的水相溶液加入燒瓶中，攪拌23小時，使有機相薄膜中的脂質膜全部從瓶壁轉移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理510分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質納米粒混懸體系，過濾，即得。按照本發明的製備方法得到的短葉蘇木酚固體脂質納米粒不僅能增加短葉蘇木酚的溶解性、穩定性，而且更重要的是具有靶向性，從而減少用藥劑量，降低毒副作用，提高生物利用度。圖1是按本發明製備方法得到的短葉蘇木酚固體脂質納米粒電鏡掃描圖(X100000);圖2是本發明的短葉蘇木酚固體脂質納米粒累積釋放度百分率與時間關係(n-6)，其中橫坐標為累積釋放度，縱坐標為時間。具體實施例方式下面結合實施例對本發明進行詳細說明。實施例l，首先取50mg的硬脂酸、130mg的卵磷脂和70mg的短葉蘇木酚溶解於90mL的無水乙醇中形成有機相溶液；然後將有機相溶液置於梨形瓶中，在35'C以2000轉/分鐘的轉速下旋轉蒸發，形成均勻的有機相薄膜；再取18mL的甘油分散於30mL的蒸餾水中在75i:的恆溫磁力攪拌的下形成水相，將75'C的水相溶液加入燒瓶中，攪拌23小時，使有機相薄膜中的脂質膜全部從瓶壁轉移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理5IO分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質納米粒混懸體系，冷凍乾燥即得。實施例2，首先取52mg的硬脂酸、127mg的卵磷脂和75mg的短葉蘇木酚溶解於120mL的無水乙醇中形成有機相溶液；然後將有機相溶液置於梨形瓶中，在35'C以2000轉/分鐘的轉速下旋轉蒸發，形成均勻的有機相薄膜；再取15mL的甘油分散於26mL的蒸餾水中在72'C的恆溫磁力攪拌的下形成水相，將72'C的水相溶液加入燒瓶中，攪拌23小時，使有機相薄膜中的脂質膜全部從瓶壁轉移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理5IO分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質納米粒混懸體系，冷凍乾燥即得。實施例3，首先取55mg的硬脂酸、123mg的卵磷脂和80mg的短葉蘇木酚溶解於80mL的無水乙醇中形成有機相溶液；然後將有機相溶液置於梨形瓶中，在35-C以2000轉/分鐘的轉速下旋轉蒸發，形成均勻的有機相薄膜；再取lOmL的甘油分散於24mL的蒸餾水中在8(TC的恆溫磁力攪拌的下形成水相，將80'C的水相溶液加入燒瓶中，攪拌23小時，使有機相薄膜中的脂質膜全部從瓶壁轉移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理5IO分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質納米粒混懸體系，冷凍乾燥即得。實施例4，首先取58mg的硬脂酸、120mg的卵磷脂和73mg的短葉蘇木酚溶解於lOOmL的無水乙醇中形成有機相溶液；然後將有機相溶液置於梨形瓶中，在35'C以2000轉/分鐘的轉速下旋轉蒸發，形成均勻的有機相薄膜；再取20mL的甘油分散於28mL的蒸餾水中在78"C的恆溫磁力攪拌的下形成水相，將78"C的水相溶液加入燒瓶中，攪拌23小時，使有機相薄膜中的脂質膜全部從瓶壁轉移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理5io分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質納米粒混懸體系，冷凍乾燥即得。實施例5，首先取60mg的硬脂酸、125mg的卵磷脂和78mg的短葉蘇木酚溶解於llOmL的無水乙醇中形成有機相溶液；然後將有機相溶液置於梨形瓶中，在35-C以2000轉/分鐘的轉速下旋轉蒸發，形成均勻的有機相薄膜；再取13mL的甘油分散於20mL的蒸餾水中在7(TC的恆溫磁力攪拌的下形成水相，將7(TC的水相溶液加入燒瓶中，攪拌23小時，使有機相薄膜中的脂質膜全部從瓶壁轉移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理5IO分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質納米粒混懸體系，冷凍乾燥即得。一、製備方法篩選1、注入超聲法稱取硬脂酸50mg、卵磷脂120mg、短葉蘇木酚80mg溶解於80mL無水乙醇中，形成有機相溶液。量取15mL甘油分散於蒸餾水25mL中形成水相。將水相置於恆溫磁力攪拌器上，溫度為80'C，將有機相注入水相中，攪拌2小時，使成乳狀混懸液。超聲處理5分鐘，攪拌至室溫得SLN水分散體。2、本發明製備方法稱取硬脂酸50mg、卵磷脂120mg、短葉蘇木酚80mg溶解於80ml無水乙醇中形成有機相溶液。置於梨形瓶中，減壓旋轉蒸發，形成均勻的有機相薄膜。量取15mL甘油分散於25mL蒸餾水中形成水相。在恆溫磁力攪拌的條件下，將8(TC的水相溶液加入燒瓶中，攪拌2小時，使脂質膜全部從瓶壁轉移入水相，充分溶脹水和形成乳白色混懸液，超聲處理5分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質納米粒混懸體系。4"C保存備用。3、方法比較結果分別取注入超聲法和本發明製備方法得到的短葉蘇木酚固體脂質納米粒，對其有關性狀進行比較，結果表明，本發明的製備方法較好(見表1)。表1注入超聲法與本發明製備方法的結果比較Table1Comparisonofethyletheraffluxandfilmsupersound製備方法注入超聲法本發明的製備方法外觀乳白色混懸液乳白色混懸液穩定性易聚集、沉降較快不易沉降顯微觀察結果粒徑大，不均勻粒徑小，均勻~二、載體材料的選擇和分析根據研究報導，目前對固體脂質納米粒載體選擇分別採用硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、膽固醇等三種類型，其中多採用生理相容的高熔點脂質為骨架材料製備固體脂質納米粒，固體脂質納米粒在室溫下呈固態，既具備聚合物納米粒物理穩定性高，藥物洩漏小的優勢，又兼具了脂質體和乳劑的低毒性、能大規模生產的優點。結合短葉蘇木酚的藥物特性和表面活性劑的HLB值，本發明初步將製備短葉蘇木酚固體脂質納米粒的輔料選定為骨架材料為硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、膽固醇，表面活性劑為卵磷脂，輔助表面活性劑為甘油。通過預試驗分析確定，影響固體脂質納米粒形態、粒度分布及包封率的主要因素為載體用量(A)、主藥短葉蘇木酚用量(B)、乳化劑卵磷脂用量(C)，水相溶劑蒸餾水(D)用量四個因素，以包封率為考察指標，採用L9(34)正交表(見表2)設計實驗來優化製備工藝，對結果進行直觀和方差分析。表2因素與水平Table2FactorsandLevels水平因素tableseeoriginaldocumentpage81.膽固醇為載體的處方優化結果見表3。對表的結果進行直觀分析，包封率的影響因素大小為C〉A>B〉D，最優搭配為AAdDi。經方差分析(見表4)，C因素的影響有顯著性意義，而A、B、D因素對包封率無顯著性影響。考慮到包封率這一指標的重要性，故確定最優處方為AAdD"即膽固醇55mg、短葉蘇木酚75mg、卵磷脂125mg、蒸餾水100mL。表3膽固醇為載體正交試驗設計及結果Table2Orthogonaldesignandresultstableseeoriginaldocumentpage8tableseeoriginaldocumentpage92.單硬脂酸甘油酯為載體的處方優化結果見表5。表5單硬脂酸甘油酯為載體正交試驗設計及結果Table5Orthogonaldesignandresultstableseeoriginaldocumentpage9實驗號單硬脂酸甘短葉蘇木酚豆磷脂mg蒸餾水mL%tableseeoriginaldocumentpage9tableseeoriginaldocumentpage10對上表的結果進行直觀分析，包封率的影響因素大小為A>C>B>D，最優搭配為A&CA。經方差分析(見表6)，A、B、C、D因素對包封率無顯著性影響。考慮到包封率這一指標的重要性，故確定最優處方為A2B2CA，即單硬脂酸甘油酯55mg、短葉蘇木酚75mg、卵磷脂125mg、蒸餾水lOOmL。表6單硬脂酸甘油酯為載體方差分析表Table6VarianceAnalysistableseeoriginaldocumentpage103.硬脂酸為載體的處方優化結果見表7。表7硬脂酸為載體正交試驗設計及結果tableseeoriginaldocumentpage11對上表的結果進行直觀分析，包封率的影響因素大小為C〉A〉B〉D，最優搭配為A^CAo經方差分析(見表8)，A、C因素的影響有顯著性意義，而B、D因素對包封率無顯著性影響。考慮到包封率這一指標的重要性，故確定最優處方為A^CA,即硬脂酸55mg、卵磷脂125mg、短葉蘇木酚75mg、蒸餾水100mL。表8方差分析表Table4-38VarianceAnalysistableseeoriginaldocumentpage124.載體的選擇確定每種載體的最佳配方後，按照此配方分別製備短葉蘇木酚固體脂質納米粒，以包封率以及7天後包封率下降程度(穩定性)為考察指標，選擇最佳載體，數據見表9。表9包封率及7天後包封率數據表tableseeoriginaldocumentpage12綜合比較包封率、穩定性、正交實驗顯著性的因素，確定最佳載體為硬脂酸，最佳配方為硬脂酸55mg、卵磷脂125mg、短葉蘇木酚75mg、蒸餾水100mL。三、質量分析1.形態觀察取優化條件下製得的短葉蘇木酚固體脂質納米粒，取適量滴加在銅網上，用2%磷鎢酸負染，自然揮幹，使粒子在銅網上沉積，透射電鏡觀察形態並照相，短葉蘇木酚固體脂質納米粒大小均勻，呈球形或類球形(見圖1)，粒徑在40150nm之間。2.體外釋藥分析參見圖2，以磷酸鹽緩衝液(pH6.8)為溶出介質，採用動態透析法溶出測定進行體外釋藥特性研究。精密稱取2ml短葉蘇木酚固體脂質納米粒，分別放入處理過的透析袋中，透析袋兩端用線紮緊至不滲漏，精密量取溶出介質各50mL，分別放入100mL燒杯中，平行操作；將裝藥透析袋移入裝有溶出介質的燒杯中，保持漏槽狀態，密封杯口；將燒杯置於恆溫震蕩器內，設置溫度為37。C，水平震蕩頻率為140次/min於0.5，1，2，4，6，8，10，12，24和36h取樣，分別將燒杯內的溶出介質全部取出，再加入50mL新的同種介質繼續恆溫震蕩，考察體外釋放規律，將取出的溶出介質經0.45um的微孔濾膜過濾，取續濾液進高效液相色譜柱，按測定含藥量色譜條件測定製劑在不同溶出介質中的累積釋放度(Q)百分率，體外釋放曲線見圖2，短葉蘇木酚固體脂質納米粒中藥物的釋放表現為雙相模式，釋放後6h內存在突釋現象，接著釋放逐漸變慢，然後趨於平緩。權利要求1.一種短葉蘇木酚固體脂質納米粒的製備方法，其特徵在於1)首先取50～60mg的硬脂酸、120～130mg的卵磷脂和70～80mg的短葉蘇木酚溶解於80～120mL的無水乙醇中形成有機相溶液；2)然後將有機相溶液置於梨形瓶中，在35℃以2000轉/分鐘的轉速下旋轉蒸發，形成均勻的有機相薄膜；3)再取10～20mL的甘油分散於20～30mL的蒸餾水中在70～80℃的恆溫磁力攪拌的下形成水相，將70～80℃的水相溶液加入燒瓶中，攪拌2～3小時，使有機相薄膜中的脂質膜全部從瓶壁轉移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理5～10分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質納米粒混懸體系，冷凍乾燥即得。全文摘要一種短葉蘇木酚固體脂質納米粒的製備方法，首先取硬脂酸、卵磷脂和短葉蘇木酚溶解無水乙醇中形成有機相溶液；然後將有機相溶液置於梨形瓶中，旋轉蒸發，形成均勻的有機相薄膜；再取甘油分散於蒸餾水中在恆溫磁力的攪拌下形成水相，將水相溶液加入燒瓶中，攪拌使有機相薄膜中的脂質膜全部從瓶壁轉移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質納米粒混懸體系，冷凍乾燥即得。按照本發明的製備方法得到的短葉蘇木酚固體脂質納米粒不僅能增加短葉蘇木酚的溶解性、穩定性，而且更重要的是具有靶向性，從而減少用藥劑量，降低毒副作用，提高生物利用度。文檔編號A61P31/12GK101278897SQ20081001804公開日2008年10月8日申請日期2008年4月25日優先權日2008年4月25日發明者曾愛國,李維鳳,牛曉峰,賀浪衝申請人:西安交通大學