一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶及其製備方法

2023-11-11 06:51:02 2

一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶及其製備方法
【專利摘要】本發明公開了一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶及其製備方法，屬於酶製劑製備【技術領域】。所述乳仔豬專用酶由黑麴黴培養物、酸性木聚糖酶、纖維素酶、β-葡聚糖酶、澱粉酶、植酸酶、中草藥提取物、保護劑、激活劑科學復配而成，其中黑麴黴培養物中黑麴黴菌體在生長和發酵過程中能夠抑制致病性大腸桿菌的生長；抑制黃麴黴生長和繁殖、分解黃麴黴毒素；促進動物生長、調節胃腸道菌群平衡、提高整體免疫力，並且黑麴黴培養物發酵液粗酶液中含有蛋白酶、甘露聚糖酶、α-半乳糖酶、果膠酶多種酶活力，特別適合乳仔豬飼料的添加。
【專利說明】一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶及其製備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於酶製劑製備【技術領域】，具體是一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶及其製備方法。
【背景技術】
[0002]在飼料中添加酶製劑主要由以下4個理由:1.降解在動物飼料中存在的抗營養因子。這些物質不能被動物內源酶降解，從而幹擾動物的正常代謝，導致動物消化不良，生產性能下降。2.提高澱粉、蛋白質和礦物質的利用率。這些物質或者被富含纖維的細胞壁包圍，或者以某些不能被動物消化的結構形式存在(例如在植物飼料原料中，大量的磷以植酸磷的形式存在。)。3.在原料中降解某些特定的化學鍵。這些化學鍵不能被動物自身的酶所降解，加入外源酶以後可以釋放更多的營養物。4.由於幼齡動物自身消化系統還不成熟，內源酶不足添加外源酶可以提高飼料消化率，防止出現消化不良症狀。除了可以提高日糧的利用率以外，加酶還可以減少飼料原料之間的差異，提高飼料配方的精確性，同時還可以提高動物生長的整齊性，減少管理成本，提高經濟效益。使用酶製劑還可以保護環境。由於飼料的利用率提高了，相應的糞便排放量下降了。在效果比較明顯的情況下，糞便的排放量可以減少20%左右，豬糞中氮的排放下降15%左右，雞糞中氮的排放下降20%。對於植酸磷，可以大幅度減少磷對環境的汙染。
[0003]目前在飼料工業中應用的酶製劑主要有4大類:分別用來降解纖維素、蛋白質、澱粉和植酸。
[0004]纖維降解酶:對於單胃動物來說，消化的最大阻力是不能產生降解纖維的酶，在含有小麥、大麥、燕麥等組分的日糧中，很大一部分纖維是阿拉伯木聚糖和β—葡聚糖。水溶性的纖維能提高小腸內容物的粘度，阻礙養分的吸收，從而降低動物的生長性能。同時這種狀況還和一些由於消化不良引起的疾病有關。如豬的性慾減退、禽的黑趾症和小豬拉稀。由於品種、生長地點和氣候條件等因素的影響，大麥和小麥中纖維含量的變化很大，導致含有這些組分的日糧的營養價值差異很大。纖維降解酶、木聚糖酶和β—葡聚糖可以減少這些差異，提高動物的生長性能和整齊度。同時還可以減少某些消化不良的疾病。
[0005]蛋白降解酶:在動物日糧中蛋白質來自各種詞料原料，它們最終通過降解的氣基酸存積在瘦肉中。在單胃動物日糧中，添加蛋白酶(不同飼料原料蛋白質和品質和可利用性)除了能充分降解大部分儲蛋白質或儲藏蛋白質或為動物可利用的小分子肽外，還能夠通過降解抗營養因素而改善飼料營養價值。存積的效率差異很大。在植物蛋白源，如豆餅粉中存在著一些抗營養因子，如幾鞣質和胰蛋白酶抑制因子，可能會對小腸吸收表面造成損害，影響營養物的吸收。另外，幼齡動物不完善的消化體系是得植物蛋白(如豆餅粉)中的蛋白質不能得到很好的利用。
[0006]澱粉降解酶:許多營養學家認為玉米是飼料原料的"黃金標準"。絕大數營養學家認為玉米不存在消化不良性，消化率超過95%，但是最近Noy和Sklan研究表明(1994年)在理想狀態下，4-12日齡的肉雞日糧中，澱粉的消化率很少超過85%，添加澱粉酶可以使澱粉在小腸得到更多更快的降解。在仔豬斷奶期，由於營養、環境和免疫系統的變化，體重會下降。在日糧中添加澱粉酶和其他一些酶，可以增加動物內源消化酶分泌，進而改進營養的消化吸收，提高飼料轉化率和動物生長率。
[0007]植酸降解酶:對於所有的動物來說，磷對於骨骼的礦化、免疫、繁殖、生長都是至關重要的。豬和家禽單胃動物只能裡利用植物飼料中30-40%的磷，其餘60-70%的植酸磷事故無法利用的。在許多情況下，飼料日糧中必須補充無機磷來滿足動物生長的需要。飼料中一半以上的磷隨著糞便排放到環境中，汙染環境。添加植酸酶可以降解植酸，釋放植酸分子中的磷。這樣可以產生2個益處:1.減少了飼料中磷的添加量。2.減少了畜禽糞便對環境的憐汙染。
[0008]顯而易見:作為飼料酶種的四大主角，他們的作用機理和模式在很大程度決定或推動了動物飼料產業對於酶製劑技術的吸收運用。目前在肉雞料中添加酶的產出投入比例超過2: I。相對而言，在養豬業領域，酶製劑的使用情況就比較複雜，顯得不明朗。集約化程度低，涉及環節比較多，酶製劑的使用效果很難進行商業計算。儘管在20世紀50年代已經有了使用酶製劑的設想，但是直到20世紀80年代才開始懂得如何在飼料工業中發揮酶的力量。飼料穀物，如小麥和大麥都含有比較高的單胃動物不能利用的纖維。如果纖維能夠被降解，動物就能更好地利用營養物。在歐洲，大麥比較便宜，禽類營養學家和酶學家投入了大量精力研究了在含有大麥的肉雞日糧中添加β—葡聚糖酶以減少其負面影響的可能性。其結果被證明是成功的，並得到了一個黃金定律:大麥+β—葡聚糖酶=小麥。受到上述成功的鼓舞，小麥是第二個的研究對象。理論假設是:小麥+木聚糖酶=玉米。這一步的研究也獲得了成功。在20世紀90年代中期，酶在飼料工業得到了普遍認可。可以毫不誇張地說:1996年，在歐洲80%的肉雞料(粘性穀物為能量來源)中含有纖維降解酶。由此強化和加快飼料產業對新技術的應用。從全球範圍來看，大約65%的含有能產生粘性穀物的家禽飼料添加了纖維降解酶。而在豬飼料中的應用比例要低得多，接近10%。其主要原因是市場的結構比較複雜，市場呈多元化，甚至無法測算。從地理分布來看，使用纖維素降解酶的地區主要集中在粘性穀物作為主要能量飼料的產區，例如:歐洲、加拿大、澳大利亞和紐西蘭。另外，在美國、南美和亞太地區，使用情況取決於玉米和小麥之間的比價。從這個意義上講，歐洲是使用降解纖維素酶的核心細分市場。為了獲得全球的認可，飼用酶廠家必須大舉進軍以玉米一豆柏型日糧為主的北美和亞太地區。玉米一豆柏型日糧歷來被看作是"黃金標準"，儘管許多營養學家認為這些原料的變動性要比原來設想的變動性要大得多。現在，越來越多的證據表明這種黃金日糧也可以通過酶而改善其生產性能，儘管這類日糧與粗纖維或粘度相關的問題不嚴重。過去10年在研發玉米-豆柏第一代飼料酶上耗費很多，並於1996年開始成功應用，初期應用結果五花八門，但業界正開始變得越來越明白如何才能得心應手，加酶技術獲得最大經濟回報。據估算，該部分飼料酶市場份額為2千萬美元，實際在使用玉米-豆柏日糧的肉雞飼料只有5%為加酶飼料。1999/2000年一降低粘度和粗纖維為日糧的飼料酶市場價值超過I億美元。目前，植酸酶已經得到了全球的承認和應用。植酸酶的市場份額大約是每年5000萬美元，在全球約有8.0%左右的豬禽飼料添加植酸酶。除了經濟利益的原因外，還有一個因素是減少了糞中植酸磷的含量有利於保護環境。[0009]綜上所述，乳仔豬專用酶的應用有著其廣闊的市場空間和巨大的經濟價值，但乳仔豬專用酶的熱穩定性、安全性、復配全面性及作用效果的充分發揮仍是酶製劑生產廠家和廣大養殖戶共同關注的一個重要問題，製備更安全，更全面，酶作用效果更好的乳仔豬專用酶是本行業技術人員的共同責任和追求。

【發明內容】

[0010]本發明所解決的技術問題是以含強熱穩定性和PH穩定性的飼用複合酶的黑麴黴培養物為基礎，併科學復配中草藥提取物、保護劑、激活劑和其它食品級飼料酶，製得的飼料複合酶不但為飼養畜禽提供了安全、全面的消化酶，減輕消化負擔，提高原料利用率和生長率，有效保護環境，同時適量的激活劑可在同等條件下充分發揮酶製劑的效力，物盡其用，節約酶製劑添加量，中草藥提取物的科學復配既可延長複合酶製劑的保質期，又可提高飼養畜禽的免疫力，從而達到一酶多用的效果。
[0011]為了達到上述目的，本發明採用以下技術方案:
[0012]一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶，由以下重量份數的原料組成:
[0013]黑麴黴培養物40-60份，酸性木聚糖酶15-25份，纖維素酶15_25份，β -葡聚糖酶15-20份，澱粉酶15-20份，植酸酶10-15份，中草藥提取物10_15份，保護劑10_15份，激活劑10-15份。
[0014]所述酸性木聚糖酶、纖維素酶、β -葡聚糖酶、澱粉酶、植酸酶均為食品級酶製劑；
[0015]所述黑麴黴培養物中主要包括飼用酶和黑麴黴菌體。
[0016]所述黑麴黴培養物發酵液粗酶液中含有多種飼用酶，其中，蛋白酶活力6500-6700U/ml、甘露聚糖酶活力1500_1700U/ml、α -半乳糖酶活力1200_1300U/ml、果膠酶活力1000-1200U/ml。對發酵液粗酶液進行酶的熱穩定性試驗和pH穩定性試驗，試驗結果表明:在30-75°C，pH值2-7時各酶均有較高的酶活力，達到80%以上。
[0017]所述黑麴黴菌體在生長和發酵過程中能夠抑制致病性大腸桿菌的生長；抑制黃麴黴生長和繁殖、分解黃麴黴毒素；促進動物生長、調節胃腸道菌群平衡、提高整體免疫力。
[0018]所述黑麴黴培養物的製備方法如下:將保存完好的黑麴黴DM-18的斜面菌種經菌種活化和一級、二級、三級及種子罐液體種子逐級擴大培養得到液體種子，以6%接種量接入發酵罐，培養溫度28-30°C，攪拌速度200-700r/m，通風量(V/V)l:l-3，培養時間10_15h ；然後以1_2°C /h降溫速率緩慢降溫至10-15°C，恆溫培養15-20h ;繼續以1_2°C /h降溫速率緩慢降溫至2-5°C，此時，將液體種子以4%接種量追加接入發酵罐，恆溫培養20-30h ;最後以1-2°C /h升溫速率緩慢升溫至10-15°C，恆溫培養15-20h ;繼續以1_2°C /h升溫速率緩慢升溫至30-33°C，恆溫培養15-20h ;發酵液經離心分離得到黑麴黴溼菌體和離心液，離心液於10-20°C循環超濾濃縮去除水分得固形物含量20-40%濃縮液，濃縮液與黑麴黴溼菌體以質量比1-10:1均勻混合，然後經真空冷凍乾燥、超微粉碎得黑麴黴培養物。
[0019]所述斜面培養基組成為:乾酪素4g，磷酸氫二鉀2g，氯化鎂0.6g，氯化鉀0.Sg，硫酸亞鐵0.02g，葡萄糖20g，瓊脂20g,中草藥粉劑5-20g,蒸餾水lOOOmL，pH值5.8，121°C滅菌 20min。
[0020]所述中草藥粉劑的製備方法如下:
[0021]稱取黃芪20-30份；黨參10-18份；柴胡10-15份；黃芩10-15份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然後於容器中均勻混合併添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C~90°C保持2~4h，添加混合物料2-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至60°C~78°C保持3~4h，過濾；濾液真空濃縮後冷凍乾燥獲得中草藥粉劑。
[0022]所述乙醇和丙醇的質量比例為1:1-1.5。
[0023]所述一級、二級、三級種子培養基組成為:磷酸氫二鉀2g，氯化鎂0.6g，氯化鉀
0.8g,硫酸亞鐵0.02g,葡萄糖20g,中草藥粉劑15-25g,海藻糖10_30g,蒸懼水lOOOmL, pH值 5.5，121°C 滅菌 20min。
[0024]所述種子罐培養基組成為:玉米粉50_60g，豆粉15_25g，麩皮10_15g，魚粉10-15g，氯化鈣6-10g，氯化銨l_3g，磷酸氫二鈉l_2g，中草藥粉劑15_20g，海藻糖10_30g，純淨水 lOOOmL，pH 值 5-7，121°C滅菌 20min。
[0025]所述種子罐發酵液孢子濃度為?.0x108-8.0xlO8個/ml ；
[0026]所述發酵培養基組成為:玉米粉50_60g，豆粉15_25g，麩皮10_15g，魚粉10_15g，氯化鈣6-10g，氯化銨l_3g，磷酸氫二鈉l-2g，中草藥粉劑30-50g，海藻糖10_30g，純淨水lOOOmL, pH 值 5-7,121°C滅菌 20min。
[0027]所述補料培養基重量組成為:麥芽糊精20-30%，玉米粉10-20%，豆粉15_25%，魚粉
1.0-1.5%，氯化鈣0.6-1.0%，氯化銨0.1-0.3%，磷酸氫二鈉0.1-0.2%，中草藥粉劑5-10%,不足部分純淨水補足，pH值5-7，121-123°C滅菌30_40min。
[0028]所述中草藥提取物的製備方法為:分別將中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然後於容器中均勻混合併添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C~90°C保持2~4h，然後降溫至45-600C，加入混合酶製劑進行酶解，用乳酸調節pH值為5.5-6.8，酶解2_4h，最後添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至60°C~78°C保持3~4h，過濾；濾液減壓濃縮至固形物含量為20%以上，然後冷凍乾燥獲得中草藥提取物。
[0029]所述中草藥的重量份數組成為:沙棘20-30份，決明子20-30份，枸杞10_15份，山藥10-15份，北沙參5-10份，黃荊子5-10份，玉竹3-5份，薏米3_5份，大麥芽3_5份，桂花3-5份，黃芪3-5份；
[0030]混合酶添加量為混合物料總重量的5-10% ；
[0031]所述混合酶的重量份數組成為:內β-葡聚糖酶10-20份，外β-葡聚糖酶10-20份，β -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普魯蘭酶20-30份，β -澱粉酶10-15份，中性蛋白酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，超氧化物歧化酶5_10份，葡萄糖氧化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份；
[0032]所述保護劑由以下重量份數的原料組成:海藻糖20-30份，NaC120-30份，(NH4)2S0410-15 份，半胱氨酸 10-15 份。
[0033]所述激活劑是由如下質量份數的無機鹽均勻混合而成:氯化鋅30-40份，氯化鈣10-20份，硫酸鈉10-20份，氯化鎂5-10份。
[0034]本發明乳仔豬專用酶的製備方法:
[0035]將所述保護劑、中草藥提取物分別超微粉碎，確保粒度小於所述酸性木聚糖酶及其它原料，然後與黑麴黴培養物、酸性木聚糖酶、纖維素酶、β_葡聚糖酶、澱粉酶、植酸酶，均勻混合，最後加入激活劑，混合均勻後密封包裝即得成品乳仔豬專用酶。
[0036]所述乳仔豬專用酶適用於飼料加工廠和養殖場自配飼料，使用時應與飼料中的其它原料混合均勻，可事先將本發明與少量飼料混合均勻，再混合到大批飼料中，直接飼喂。建議每噸全價料添加量為:100-150g。
[0037]本發明的高產飼用複合酶的黑麴黴菌株具體為黑麴黴(Aspergillus niger)DM-18，是從湖南省津市市洋由鄉腐質土、稻草混合樣分離得到的野生菌HYX0022經經紫外誘變、紫外亞硝酸誘變、紫外線亞硝基胍複合誘變，然後對突變株逐級篩選淘汰，最後對優良菌株經發酵性能測試篩選得到產飼用複合酶的黑麴黴DM-18。該菌株已於2013年11月3日保藏於中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC，地址為:湖北省武漢市武昌區珞珈山武漢大學生命科學學院郵編:430072)，保藏號為CCTCC NO:M2013541，分類命名為黑麴黴(Aspergillus niger) DM-18。
[0038]本發明提供的高產飼用複合酶的黑麴黴DM-18具有以下微生物學特徵:
[0039]1、形態學特徵:
[0040]黑麴黴DM-18，生物學形態為包括分生孢子、胞梗、頂囊、產胞結構等幾部分。分生孢子頭球形至福射形，直徑150-450 μ m,分生孢子梗發生於基質。胞梗莖1000-3000(長度)X 12-20 (直徑)μ m，黃色或黃褐色，壁平滑；頂囊球形或近似球形，直徑35-50 μ m,表面全面可育；產胞結構雙層，梗基15-20(長度)X3-4.0(直徑)μπι，瓶梗6-8(長度)X 2-4 (直徑)μ m，分生孢子球形或近球形，較小，直徑3.5-5.0 μ m，褐色，壁粗糙。
[0041]2、培養學特徵:
[0042]黑麴黴DM-18在麥芽汁瓊脂培養基上生長迅速，280C 4天直徑65mm ;質地絲絨狀或稍帶絮狀；分生孢子結構大量，褐黑色，有少量滲出液；菌落反面略帶黃色。
[0043]3、生理生化特徵:
[0044]黑麴黴DM-18可在馬鈴薯、玉米粉、可溶性澱粉，糖蜜等上生長，最適PH值4.6，最適生長溫度28-34°C，最適產酶溫`度28-30°C。
[0045]黑麴黴DM-18的篩選技術路線為:原始菌株分離、篩選與鑑定一出發菌株一斜面培養一孢子懸液的製備一誘變處理一平板分離一初篩一復篩一再復篩一擴大實驗(發酵性能測定)。
[0046]有益效果:
[0047]1.本發明黑麴黴培養物中黑麴黴菌體在生長和發酵過程中能夠抑制致病性大腸桿菌的生長；抑制黃麴黴生長和繁殖、分解黃麴黴毒素；促進動物生長、調節胃腸道菌群平衡、提高整體免疫力，特別適合乳仔豬飼料的添加。
[0048]2.本發明中的黑麴黴培養物以高產飼用複合酶的菌株黑麴黴DM-18為出發菌株，並進行培養基優化和發酵工藝改進，採用梯度降溫和梯度升溫的發酵工藝，同時予以追加接種和適時補料，尤其是梯度降溫和梯度升溫的發酵工藝顯著提高了出發菌株的抗應激能力，致使菌種的產酶能力最大限度地顯現。並且本發明對培養基組成實施全程優化，添加了具有抗熱應激原作用的黃芩、柴胡，添加了具有調整和修復機體功能、增強機體的免疫功能、具有微生態調節功能的黃芪、黨參等，進一步增強了微生物在同一發酵環境下的機體功能性、傳代適應性和共同協作性，進而增強了微生物的代謝功能，使得本發明所產飼用復配酶活力高、耐受溫度較高、穩定性強、適於工業化生產。
[0049]3.本發明黑麴黴培養物發酵液粗酶液中含有多種酶活力，其中，蛋白酶活力6500-6700U/ml、甘露聚糖酶活力1500_1700U/ml、α -半乳糖酶活力1200_1300U/ml、果膠酶活力1000-1200U/ml。對發酵液粗酶液進行酶的熱穩定性試驗和pH穩定性試驗，試驗結果表明:在30-75°C，pH值2-7時各酶均有較高的酶活力，達到80%以上。本發明飼用複合酶熱穩定性和PH穩定性強，更加適合飼料工業加工工藝需求，加工後的飼料酶活損失低。
[0050]4.本發明乳仔豬專用酶中的保護劑採用多糖、無機鹽和胺基酸科學復配，有效減緩了復配原料的回潮；同時可增強復配酶的耐凍、耐熱性能，保持相同的酶活力，其耐熱溫度可提高20-30°C，耐冷凍溫度可降低10-15°C，有效防止了復配酶在運輸、保存和使用過程中酶活力的損失，延長了復配酶的保質期，達到同樣的酶活力，同類產品保質期可延長2-3 年。
[0051]5.本發明乳仔豬專用酶添加無機鹽作為激活劑，創造了酶催化作用的最佳條件，充分發揮了復配酶各酶組份的活力，徹底有效的分解了飼料中澱粉、蛋白質、纖維素、植酸等大分子物質，大大減輕了畜禽動物的消化負擔，提高了原料利用率和畜禽的生長率，同時有效防止了畜禽糞便造成的環境汙染，保護了飼養環境。
[0052]6.本發明乳仔豬專用酶添加的中草藥提取物既可延長復配原料的保質期，又可提高飼養畜禽的免疫力，有效防止畜禽流行性疾病的發生。
[0053]7.本發明乳仔豬專用酶中保護劑與酶製劑、激活劑與酶製劑、中草藥提取物與酶製劑的共同協同作用，使得復配酶的酶活力和效力最大限度的發揮，並相應的提高了飼料的利用率和動物的生長率，增強了動物的食慾和抗病能力，延長了復配酶的保質期和保護了環境。
【具體實施方式】
[0054]下面通過具體的實施方案敘述本發明。除非特別說明，本發明中所用的技術手段均為本領域技術人員所公知的方法。另外，實施方案應理解為說明性的，而非限制本發明的範圍，本發明的實質和範圍僅由權利要求書所限定。對於本領域技術人員而言，在不背離本發明實質和範圍的前提下，對這些實施方案中的物料成分和用量進行的各種改變或改動也屬於本發明的保護範圍。`
[0055]實施例1
[0056]一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶，由以下重量份數的原料組成:
[0057]黑麴黴培養物50份，酸性木聚糖酶20份，纖維素酶20份，β -葡聚糖酶17份，澱粉酶17份，植酸酶13份，中草藥提取物12份，保護劑13份，激活劑12份。
[0058]所述酸性木聚糖酶、纖維素酶、β -葡聚糖酶、澱粉酶、植酸酶均為食品級酶製劑；
[0059]所述黑麴黴培養物製備方法包括如下步驟:
[0060](I)菌種活化
[0061]將保存完好的黑麴黴DM-18的斜面菌種接種於斜面培養基，28°C培養36h進行菌種活化，如此活化2次；
[0062]所述斜面培養基組成為:乾酪素4g，磷酸氫二鉀2g，氯化鎂0.6g，氯化鉀0.Sg，硫酸亞鐵0.02g，葡萄糖20g，瓊脂20g,中草藥粉劑5g,蒸餾水lOOOmL, pH值5.8，121°C滅菌20min ；
[0063]所述中草藥粉劑的製備方法如下:
[0064]稱取黃芪20份；黨參10份；柴胡10份；黃芩10份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然後於容器中均勻混合併添加3倍重量的水，控制溫度70°C保持2h，添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至60°C保持3h，過濾；濾液真空濃縮後冷凍乾燥獲得中草藥粉劑。
[0065]所述乙醇和丙醇的質量比例為1:1。
[0066](2)液體種子擴大培養
[0067]①一級種子培養:將步驟(1)活化後的宇佐美麴黴斜面菌種以無菌水洗下孢子，接入500毫升搖瓶中，液體種子培養基裝量100毫升，28°C、80rpm搖床培養36h ；
[0068]②二級種子培養:將一級種子按照10%的接種量接入500毫升二級種子搖瓶中，培養條件與一級種子相同；
[0069]③三級種子培養:將二級種子以8%接種量接入5000毫升三級種子搖瓶中，液體培養基裝量1000毫升，28°C、80rpm搖床培養36h ；
[0070]④種子罐培養:將三級種子以8%接種量接入總容積為150L的一級種子罐，種子罐培養基裝量100L，控制pH值為5，培養溫度28°C，攪拌速度200rpm，通風量(V/V)1: 0.8，培養時間36h，溶解氧10%;
[0071]所述一級、二級、三級種子培養基組成為:磷酸氫二鉀2g，氯化鎂0.6g，氯化鉀0.8g,硫酸亞鐵0.02g,葡萄糖20g,中草藥粉劑15g,海藻糖IOg,蒸懼水lOOOmL, pH值5.5,121°C 滅菌 20min。
[0072]所述種子罐培養基組成為:玉米粉50_60g，豆粉15_25g，麩皮10_15g，魚粉10g，氯化鈣6g,氯化銨Ig,磷酸氫二鈉Ig,中草藥粉劑15g,海藻糖IOg,純淨水lOOOmL, pH值5,121°C 滅菌 20min。
[0073]所述種子罐發酵液孢子濃度為7.0xlO8個/ml ；
[0074](3)發酵罐發酵
[0075]將步驟(2)中種子罐液體種子以6%接種量接入發酵罐，培養溫度28°C，攪拌速度200r/m，通風量(V/V)l:l，培養時間IOh ;然後以1°C /h降溫速率緩慢降溫至10°C，恆溫培養15h ;繼續以1°C /h降溫速率緩慢降溫至2°C，此時，將步驟(2)中種子罐液體種子以4%接種量追加接入發酵罐，恆溫培養20h ;最後以1°C /h升溫速率緩慢升溫至10°C，恆溫培養15h ;繼續以1°C /h升溫速率緩慢升溫至30°C，恆溫培養15h ；
[0076]溶解氧控制:通過調整攪拌轉速及通風量，控制溶解氧15% ；
[0077]pH控制:通過補氨水或稀磷酸，控制發酵過程中pH值保持在5 ；
[0078]補料控制:當發酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時,開始添加補料培養基，補料量以維持發酵液還原糖含量為2mg/ml-5mg/ml ；
[0079]放罐標準:60%菌體衰老自溶，酶活力增長緩慢。
[0080]所述發酵培養基組成為:玉米粉50g，豆粉15g，麩皮10g，魚粉10g，氯化鈣6g，氯化銨lg，磷酸氫二鈉lg，中草藥粉劑30g，海藻糖10g，純淨水lOOOmL, pH值5，121°C滅菌20mino
[0081]所述補料培養基重量組成為:麥芽糊精20%，玉米粉10%，豆粉15%，魚粉1.0%，氯化鈣0.6%，氯化銨0.1%，磷酸氫二鈉0.1%，中草藥粉劑5%，不足部分純淨水補足，pH值5，121°C 滅菌 30min。
[0082](4)發酵液經離心分離得到黑麴黴溼菌體和離心液，離心液於15°C循環超濾濃縮去除水分得固形物含量30%濃縮液，濃縮液與黑麴黴溼菌體以質量比5:1均勻混合，然後經真空冷凍乾燥、超微粉碎得黑麴黴培養物。
[0083]上述製備方法中發酵液粗酶液中含有多種酶活力，其中，蛋白酶活力6500U/ml、甘露聚糖酶活力1500U/ml、α-半乳糖酶活力1200U/ml、果膠酶活力1000U/ml。
[0084]所述中草藥提取物的製備方法為:分別將中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然後於容器中均勻混合併添加5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，然後降溫至53°C，加入混合酶製劑進行酶解，用乳酸調節PH值為6.2，酶解3h，最後添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至69°C保持4h，過濾；濾液減壓濃縮至固形物含量為20%以上，然後冷凍乾燥獲得中草藥提取物。
[0085]所述中草藥的重量份數組成為:沙棘25份，決明子25份，枸杞17份，山藥13份，北沙參8份，黃荊子7份，玉竹4份，薏米4份，大麥芽4份，桂花4份，黃芪4份；
[0086]混合酶添加量為混合物料總重量的5-10% ；
[0087]所述混合酶的重量份數組成為:內β -葡聚糖酶15份,外β -葡聚糖酶15份，β -葡萄糖苷酶13份，木聚糖酶13份，戊聚糖酶13份，普魯蘭酶25份，β -澱粉酶12份，中性蛋白酶13份，酸性蛋白酶13份，超氧化物歧化酶7份，葡萄糖氧化酶7份，酸性磷酸酶7份；
[0088]所述保護劑由以下重量份數的原料組成:海藻糖25份，NaC125份，(NH4) 2S0413份，半胱氨酸12份。
[0089]所述激活劑是由如下質量組份的無機鹽均勻混合而成:氯化鋅35份，氯化鈣15份，硫酸鈉15份，氯化鎂7份。
[0090]本發明乳仔豬專用酶的製備方法:
[0091]將所述保護劑、中草藥`提取物分別超微粉碎，確保粒度小於所述酸性木聚糖酶及其它原料，然後與黑麴黴培養物、酸性木聚糖酶、纖維素酶、β_葡聚糖酶、澱粉酶、植酸酶，均勻混合，最後加入激活劑，混合均勻後密封包裝即得成品乳仔豬專用酶。
[0092]實施例2
[0093]一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶，由以下重量份數的原料組成:
[0094]飼用複合酶40份，酸性木聚糖酶15份，纖維素酶15份，β -葡聚糖酶15份，澱粉酶15份，植酸酶10份，中草藥提取物10份，保護劑10份，激活劑10份。
[0095]所述酸性木聚糖酶、纖維素酶、β -葡聚糖酶、澱粉酶、植酸酶均為食品級酶製劑；
[0096]所述黑麴黴培養物製備方法包括如下步驟:
[0097](I)菌種活化
[0098]將保存完好的黑麴黴DM-18的斜面菌種接種於斜面培養基，34°C培養48h進行菌種活化，如此活化4次；
[0099]所述斜面培養基組成為:乾酪素4g，磷酸氫二鉀2g，氯化鎂0.6g，氯化鉀0.Sg，硫酸亞鐵0.02g，葡萄糖20g，瓊脂20g，中草藥粉劑20g，蒸餾水lOOOmL，pH值5.8，121 °C滅菌20mino
[0100]所述中草藥粉劑的製備方法如下:
[0101]稱取黃芪30份；黨參18份；柴胡15份；黃芩15份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然後於容器中均勻混合併添加6倍重量的水，控制溫度90°C保持4h，添加混合物料3倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至78°C保持4h，過濾；濾液真空濃縮後冷凍乾燥獲得中草藥粉劑。
[0102]所述乙醇和丙醇的質量比例為1:1.5。
[0103](2)液體種子擴大培養
[0104]①一級種子培養:將步驟(1)活化後的斜面菌種以無菌水洗下孢子，接入500毫升搖瓶中，液體種子培養基裝量100毫升，34°c、120rpm搖床培養48h ；
[0105]②二級種子培養:將一級種子按照10%的接種量接入500毫升二級種子搖瓶中，培養條件與一級種子相同；
[0106]③三級種子培養:將二級種子以8%接種量接入5000毫升三級種子搖瓶中，液體培養基裝量1000毫升，340C、120rpm搖床培養48h ；
[0107]④種子罐培養:將三級種子以8%接種量接入總容積為150L的一級種子罐，種子罐培養基裝量100L，控制pH值為5-7，培養溫度30°C，攪拌速度400rpm，通風量(V/V) 1:1.2,培養時間48h，溶解氧20%;
[0108]所述一級、二級、三級種子培養基組成為:磷酸氫二鉀2g，氯化鎂0.6g，氯化鉀0.8g,硫酸亞鐵0.02g,葡萄糖20g,中草藥粉劑25g,海藻糖30g,蒸懼水lOOOmL, pH值5.5,121°C 滅菌 20min。
[0109]所述種子罐培養基組成為:玉米粉60g，豆粉25g，麩皮15g，魚粉15g，氯化鈣10g，氯化銨3g，磷酸氫二鈉2g，中草藥粉劑20g，海藻糖30g，純淨水lOOOmL，pH值7，121°C滅菌20mino
[0110]所述種子罐發酵液`孢子濃度為8.0xlO8個/ml ；
[0111](3)發酵罐發酵
[0112]將步驟(2)中種子罐液體種子以6%接種量接入發酵罐，培養溫度30°C，攪拌速度700r/m，通風量(V/V)l:3，培養時間15h ;然後以2V /h降溫速率緩慢降溫至15°C，恆溫培養20h ;繼續以2°C /h降溫速率緩慢降溫至5°C，此時，將步驟(2)中種子罐液體種子以4%接種量追加接入發酵罐，恆溫培養30h ;最後以2V /h升溫速率緩慢升溫至15°C，恆溫培養20h ;繼續以2V /h升溫速率緩慢升溫至34°C，恆溫培養20h ；
[0113]溶解氧控制:通過調整攪拌轉速及通風量，控制溶解氧30% ；
[0114]pH控制:通過補氨水或稀磷酸，控制發酵過程中pH值保持在6 ；
[0115]補料控制:當發酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時，開始添加補料培養基，補料量以維持發酵液還原糖含量為2mg/ml-5mg/ml ；
[0116]放罐標準:80%菌體衰老自溶，酶活力增長緩慢。
[0117]所述發酵培養基組成為:玉米粉60g，豆粉25g，麩皮15g，魚粉15g，氯化鈣10g，氯化銨3g，磷酸氫二鈉2g，中草藥粉劑50g，海藻糖30g，純淨水lOOOmL，pH值7，121°C滅菌20mino
[0118]所述補料培養基重量組成為:麥芽糊精30%，玉米粉20%，豆粉25%，魚粉1.5%，氯化鈣1.0%，氯化銨0.3%，磷酸氫二鈉0.2%，中草藥粉10%，不足部分純淨水補足，pH值7，123°C滅菌40min。
[0119](4)發酵液經離心分離得到黑麴黴溼菌體和離心液，離心液於10°C循環超濾濃縮去除水分得固形物含量20%濃縮液，濃縮液與黑麴黴溼菌體以質量比1:1均勻混合，然後經真空冷凍乾燥、超微粉碎得黑麴黴培養物。[0120]上述製備方法中發酵液粗酶液中含有多種酶活力，其中，蛋白酶活力6600U/ml、甘露聚糖酶活力1600U/ml、α-半乳糖酶活力1240U/ml、果膠酶活力1080U/ml。
[0121]所述中草藥提取物的製備方法為:分別將中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然後於容器中均勻混合併添加3倍重量的水，控制溫度70°C保持2h，然後降溫至45°C，加入混合酶製劑進行酶解，用乳酸調節pH值為5.5，酶解2h，最後添加混合物料0.5倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至60°C保持3h，過濾；濾液減壓濃縮至固形物含量為20%以上，然後冷凍乾燥獲得中草藥提取物。
[0122]所述中草藥的重量份數組成為:沙棘20份，決明子20份，枸杞10份，山藥10份，北沙參5份，黃荊子5份，玉竹3份，薏米3份，大麥芽3份，桂花3份，黃芪3份；
[0123]混合酶添加量為混合物料總重量的5% ；
[0124]所述混合酶的重量份數組成為:內β-葡聚糖酶10份，外β-葡聚糖酶10份，β -葡萄糖苷酶10份，木聚糖酶15份，戊聚糖酶15份，普魯蘭酶20份，β -澱粉酶10份，中性蛋白酶10份,酸性蛋白酶10份,超氧化物歧化酶5份,葡萄糖氧化酶5份,酸性磷酸酶5份；
[0125]所述保護劑由以下重量份數的原料組成:海藻糖20份，NaC120份，(NH4) 2S0410份，半胱氨酸10份。
[0126]所述激活劑是由如下質量組份的無機鹽均勻混合而成:氯化鋅30份，氯化鈣10份，硫酸鈉10份，氯化鎂5份。
[0127]本發明乳仔豬專用酶的製備方法如實施例1。
[0128]實施例3
[0129]一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶，由以下重量份數的原料組成:
[0130]飼用複合酶60份，酸性木聚糖酶25份，纖維素酶25份，β -葡聚糖酶20份，澱粉酶20份，植酸酶15份，中草藥提取物15份，保護劑15份，激活劑15份。
[0131]所述酸性木聚糖酶、纖維素酶、β -葡聚糖酶、澱粉酶、植酸酶均為食品級酶製劑；
[0132]所述黑麴黴培養物製備方法包括如下步驟:
[0133](I)菌種活化
[0134]將保存完好的黑麴黴DM-18的斜面菌種接種於斜面培養基，30°C培養42h進行菌種活化，如此活化3次；
[0135]所述斜面培養基組成為:乾酪素4g，磷酸氫二鉀2g，氯化鎂0.6g，氯化鉀0.Sg，硫酸亞鐵0.02g，葡萄糖20g，瓊脂20g，中草藥粉劑12g,蒸餾水lOOOmL，pH值5.8，121 °C滅菌20mino
[0136]所述中草藥粉劑的製備方法如下:
[0137]稱取黃芪25份；黨參15份；柴胡12份；黃芩12份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然後於容器中均勻混合併添加5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，添加混合物料3倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至70°C保持4h，過濾；濾液真空濃縮後冷凍乾燥獲得中草藥粉劑。
[0138]所述乙醇和丙醇的質量比例為1:1.2。
[0139](2)液體種子擴大培養
[0140]①一級種子培養:將步驟(1)活化後的斜面菌種以無菌水洗下孢子，接入500毫升搖瓶中，液體種子培養基裝量100毫升，30°c、IOOrpm搖床培養42h ；
[0141]②二級種子培養:將一級種子按照10%的接種量接入500毫升二級種子搖瓶中，培養條件與一級種子相同；
[0142]③三級種子培養:將二級種子以8%接種量接入5000毫升三級種子搖瓶中，液體培養基裝量1000毫升，300C、IOOrpm搖床培養42h ；
[0143]④種子罐培養:將三級種子以8%接種量接入總容積為150L的一級種子罐，種子罐培養基裝量100L，控制pH值為6，培養溫度30°C，攪拌速度300rpm，通風量(V/V)l:1,培養時間42h，溶解氧20%;
[0144]所述一級、二級、三級種子培養基組成為:磷酸氫二鉀2g，氯化鎂0.6g，氯化鉀
0.8g,硫酸亞鐵0.02g,葡萄糖20g,中草藥粉劑20g,海藻糖20g,蒸懼水lOOOmL, pH值5.5,121°C 滅菌 20min。
[0145]所述種子罐培養基組成為:玉米粉55g，豆粉20g，麩皮12g，魚粉12g，氯化鈣Sg，氯化銨2g，磷酸氫二鈉2g，中草藥粉劑18g，海藻糖20g，純淨水lOOOmL，pH值6，121°C滅菌20mino
[0146]所述種子罐發酵液孢子濃度為7.5xl08個/ml ；
[0147](3)發酵罐發酵
[0148]將步驟(2)中種子罐液體種子以6%接種量接入發酵罐，培養溫度30°C，攪拌速度350r/m，通風量(V/V)l:2，培養時間12h ;然後以2V /h降溫速率緩慢降溫至12°C，恆溫培養18h ;繼續以2°C /h降溫速率緩慢降溫至4°C，此時，將步驟(2)中種子罐液體種子以4%接種量追加接入發酵罐，恆溫培養25h ;最後以2V /h升溫速率緩慢升溫至12°C，恆溫培養18h ;繼續以2V /h升溫速率緩慢升溫至30°C，恆溫培養18h ；
[0149]溶解氧控制:通過調整攪拌轉速及通風量，控制溶解氧20% ；
[0150]pH控制:通過補氨水或稀磷酸，控制發酵過程中pH值保持在5.2 ；
[0151]補料控制:當發酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時，開始添加補料培養基，補料量以維持發酵液還原糖含量為2mg/ml-5mg/ml ；
[0152]放罐標準:70%菌體衰老自溶,酶活力增長緩慢。
[0153]所述發酵培養基組成為:玉米粉55g，豆粉20g，麩皮12g，魚粉12g，氯化鈣Sg，氯化銨2g，磷酸氫二鈉2g，中草藥粉劑40g，海藻糖20g，純淨水lOOOmL，pH值6，121°C滅菌20mino
[0154]所述補料培養基重量組成為:麥芽糊精25%，玉米粉15%，豆粉18%，魚粉1.2%，氯化鈣0.8%，氯化銨0.2%，磷酸氫二鈉0.2%，中草藥粉劑8%，不足部分純淨水補足，pH值6，123°C滅菌 40min。
[0155](4)發酵液經離心分離得到黑麴黴溼菌體和離心液，離心液於20°C循環超濾濃縮去除水分得固形物含量40%濃縮液，濃縮液與黑麴黴溼菌體以質量比10:1均勻混合，然後經真空冷凍乾燥、超微粉碎得黑麴黴培養物。
[0156]上述製備方法中發酵液粗酶液中含有多種酶活力，其中，蛋白酶活力6700U/ml、甘露聚糖酶活力1700U/ml、α-半乳糖酶活力1300U/ml、果膠酶活力1200U/ml。
[0157]所述中草藥提取物的製備方法為:分別將中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然後於容器中均勻混合併添加6倍重量的水，控制溫度90°C保持4h，然後降溫至60°C，加入混合酶製劑進行酶解，用乳酸調節PH值為6.8，酶解4h，最後添加混合物料3倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至78°C保持4h，過濾；濾液減壓濃縮至固形物含量為20%以上，然後冷凍乾燥獲得中草藥提取物。
[0158]所述中草藥的重量份數組成為:沙棘30份，決明子30份，枸杞15份，山藥15份，北沙參10份，黃荊子10份，玉竹5份，薏米5份，大麥芽5份，桂花5份，黃芪5份；
[0159]混合酶添加量為混合物料總重量的10%;
[0160]所述混合酶的重量份數組成為:內β-葡聚糖酶20份，外β-葡聚糖酶20份，β -葡萄糖苷酶15份，木聚糖酶20份，戊聚糖酶20份，普魯蘭酶30份，β -澱粉酶15份，中性蛋白酶15份，酸性蛋白酶15份，超氧化物歧化酶10份，葡萄糖氧化酶10份，酸性磷酸酶10份；
[0161]所述保護劑由以下重量份數的原料組成:海藻糖30份，NaC130份，(NH4) 2S0415份，半胱氨酸15份。
[0162]所述激活劑是由如下質量組份的無機鹽均勻混合而成:氯化鋅40份，氯化鈣20份，硫酸鈉20份，氯化鎂10份。
[0163]本發明乳仔豬專用酶的製備方法如實施例1。
[0164]實施例4飼用複合酶的熱穩定性分析
[0165]對飼用複合酶的熱穩定性進行了分析，將實施例3發酵液粗酶液分別置於30°C、40 V、45°C、50 V、55°C、60°C、65°C、70°C、75°C下，每隔10分鐘取樣測定飼用複合酶中各組成酶的酶活。30°C、40V、45°C、50°C下，60分鐘各組成酶酶活沒有下降。55°C、60°C與65°C下，30分鐘各組成酶酶活降到原有酶活的95%，60分鐘各組成酶酶活降到85%。70°C下，30分鐘各組成酶酶活降到原有酶活的90%，60分鐘各組成酶酶活降到85%。75°C下，30分鐘各組成酶酶活降到原有酶活的85%，60分鐘各組成酶酶活降到原有酶活的80%，與現有技術相比，同樣條件下達到同樣酶活耐受溫度平均提高了 5-10°C。
[0166]實施例5飼用複合酶的pH穩定性分析
[0167]對飼用複合酶酶的pH穩定性進行了分析，將實施例3發酵液粗酶液分別置於pH值2.0,2.5,3.5,4.5,5.5,6.0,6.5,7.0下，每隔10分鐘取樣測定飼用複合酶中各組成酶的酶活。粗酶液PH值5.5,6.0,6.5、7.0下，60分鐘各組成酶酶活沒有下降。pH值4.5、3.5下，30分鐘各組成酶酶活降到原有酶活的95%，60分鐘各組成酶酶活降到原有酶活的85%。pH值2.5下，30分鐘各組成酶酶活降到原有酶活的90%，60分鐘降到原有酶活的85%。pH值
2.0下，30分鐘各組成酶酶活降到原有酶活的85%，60分鐘降到原有酶活的80%，與現有技術相比，同樣條件下達到同樣酶活耐PH值較寬泛。
[0168]實施例6本發明實施例1乳仔豬專用酶在斷奶仔豬中的使用效果試驗
[0169]試驗方法:
[0170]試驗對象為湖南某一大型正規化養殖場平均體重為(7.16±0.15) kg的健康斷奶仔豬180頭，經統計分析體重差異不顯著。採用單因子隨機化設計，將180頭健康斷奶仔豬，按公母各半，分成3組(對照組1、對照組2和試驗組)，每組6個重複，每個重複10頭豬。試驗組飼料中每噸添加實施例1製得的本發明產品100g，對照組I飼料中每噸添加市售乳仔豬專用酶100g，對照組2不 添加本發明產品。連續飼餵30天，生長指標如表1
[0171]表1[0172]
【權利要求】
1.一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶，由以下重量份數的原料組成:黑麴黴培養物40-60份，酸性木聚糖酶15-25份，纖維素酶15-25份，β -葡聚糖酶15-20份，澱粉酶15-20份，植酸酶10-15份，中草藥提取物10-15份，保護劑10-15份，激活劑10_15份； 所述黑麴黴培養物的製備方法如下:將保存完好的黑麴黴DM-18的斜面菌種經菌種活化和一級、二級、三級及種子罐液體種子逐級擴大培養得到液體種子，以6%接種量接入發酵罐，培養溫度28-30°C，攪拌速度200-700r/m，通風量(V/V) 1:1-3,培養時間10_15h ;然後以1-2°C /h降溫速率緩慢降溫至10-15°C，恆溫培養15-20h ;繼續以1_2°C /h降溫速率緩慢降溫至2-5°C，此時，將液體種子以4%接種量追加接入發酵罐，恆溫培養20-30h ;最後以1_2°C /h升溫速率緩慢升溫至10-15°C，恆溫培養15-20h ;繼續以1_2°C /h升溫速率緩慢升溫至30-33°C，恆溫培養15-20h ;發酵液經離心分離得到黑麴黴溼菌體和離心液，離心液於10-20°C循環超濾濃縮去除水分得固形物含量20-40%濃縮液，濃縮液與黑麴黴溼菌體以質量比1-10:1均勻混合，然後經真空冷凍乾燥、超微粉碎得黑麴黴培養物； 所述黑麴黴DM-18已於2013年11月3日保藏於中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC NO:M2013541 ； 所述保護劑由以下重量份數的原料組成:海藻糖20-30份，NaC120-30份，(NH4) 2S0410-15 份，半胱氨酸 10-15 份； 所述激活劑是由如下質量份數的無機鹽均勻混合而成:氯化鋅30-40份，氯化鈣10-20份，硫酸鈉10-20份，氯化鎂5-10份。
2.根據權利要求1所述的一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶，其特徵在於，所述中草藥提取物的製備方法為:分別將中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然後於容器中均勻混合併添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C~90°C保持2~4h，然後降溫至45_60°C，加入混合物料總重量5-10%的混合酶製劑進行酶解，用乳酸調節pH值為5.5-6.8，酶解2_4h，最後添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至60°C~78°C保持3~4h，過濾；濾液減壓濃縮至固形物含量為20%以上，然後冷凍乾燥獲得中草藥提取物； 所述中草藥的重量份數組成為:沙棘20-30份，決明子20-30份，枸杞10-15份，山藥10-15份，北沙參5-10份，黃荊子5-10份，玉竹3-5份，薏米3_5份，大麥芽3_5份，桂花3_5份，黃芪3-5份； 所述混合酶的重量份數組成為:內β -葡聚糖酶10-20份，外β -葡聚糖酶10-20份，β -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普魯蘭酶20-30份，β -澱粉酶10-15份，中性蛋白酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，超氧化物歧化酶5_10份，葡萄糖氧化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份。
3.根據權利要求1所述的一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶，其特徵在於，製備黑麴黴培養物的斜面培養基組成為:乾酪素4g，磷酸氫二鉀2g，氯化鎂0.6g，氯化鉀0.Sg，硫酸亞鐵0.02g，葡萄糖20g，瓊脂20g,中草藥粉劑5-20g,蒸餾水1000mL，pH值5.8，121 °C滅菌20mino
4.根據權利要求1所述的一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶，其特徵在於，製備黑麴黴培養物的種子罐培養基組成為:玉米粉50-60g，豆粉15-25g，麩皮10-15g，魚粉10_15g，氯化鈣6-10g，氯化銨l_3g，磷酸氫二鈉l-2g，中草藥粉劑15-20g，海藻糖10_30g，純淨水1000mL, pH 值 5-7，121°C 滅菌 20min。
5.根據權利要求1所述的一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶，其特徵在於，製備黑麴黴培養物時種子罐發酵液孢子濃度為7.0x108-8.0xlO8個/ml。
6.根據權利要求1所述的一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶，其特徵在於，製備黑麴黴培養物的發酵培養基組成為:玉米粉50-60g，豆粉15-25g，麩皮10-15g，魚粉10_15g，氯化鈣6-10g，氯化銨l_3g，磷酸氫二鈉l-2g，中草藥粉劑30-50g，海藻糖10_30g，純淨水1000mL, pH 值 5-7,121°C滅菌 20min。
7.根據權利要求3-6任一所述的一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶，其特徵在於，所述中草藥粉劑的製備方法如下:稱取黃芪20-30份；黨參10-18份；柴胡10-15份；黃芩10-15份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然後於容器中均勻混合併添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C~90°C保持2~4h，添加混合物料2-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇的質量比為1:1-1.5，控制溫度至60V~78°C保持3~4h，過濾；濾液真空濃縮後冷凍乾燥獲得中草藥粉劑。
8.一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶的製備方法，其特徵在於，將保護劑、中草藥提取物分別超微粉碎，確保粒度小於所述酸性木聚糖酶及其它原料，然後與黑麴黴培養物、酸性木聚糖酶、纖維素酶、β -葡聚糖酶、澱粉酶、植酸酶均勻混合，最後加入激活劑，混合均勻後密封包裝即得成品乳仔豬專用酶。
9.根據權利要求8所述的一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶的製備方法，其特徵在於，所述乳仔豬專用酶由以下重量份數的原料組成:黑麴黴培養物40-60份，酸性木聚糖酶15-25份，纖維素酶15-25份，β -葡聚糖酶15-20份，澱粉酶15-20份，植酸酶10-15份，中草藥提取物10-15份，保護劑10-15份，激活劑10-15份； 所述黑麴黴培養物的製備方法如下:將保存完好的黑麴黴DM-18的斜面菌種經菌種活化和一級、二級、三級及種子罐液體種子逐級擴大培養得到液體種子，以6%接種量接入發酵罐，培養溫度28-30°C，攪拌速度200-700r/m，通風量(V/V) 1:1-3，培養時間10_15h ;然後以1-2°C /h降溫速率緩慢降溫至10-15°C，恆溫培養15-20h ;繼續以1_2°C /h降溫速率緩慢降溫至2-5°C，此時，將液體種子以4%接種量追加接入發酵罐，恆溫培養20-30h ;最後以1_2°C /h升溫速率緩慢升溫至10-15°C，恆溫培養15-20h ;繼續以1_2°C /h升溫速率緩慢升溫至30-33°C，恆溫培養15-20h ;發酵液經離心分離得到黑麴黴溼菌體和離心液，離心液於10-20°C循環超濾濃縮去除水分得固形物含量20-40%濃縮液，濃縮液與黑麴黴溼菌體以質量比1-10:1均勻混合，然後經真空冷凍乾燥、超微粉碎得黑麴黴培養物； 所述保護劑由以下重量份數的原料組成:海藻糖20-30份，NaC120-30份，(NH4) 2S0410-15 份，半胱氨酸 10-15 份； 所述激活劑是由如下質量組份的無機鹽均勻混合而成:氯化鋅30-40份，氯化鈣10-20份，硫酸鈉10-20份，氯化鎂5-10份。
10.根據權利要求9所述的一種含飼用複合酶的乳仔豬專用酶的製備方法，其特徵在於，所述含飼用複合酶的乳仔豬專用酶由以下重量份數的原料組成:黑麴黴培養物50份，酸性木聚糖酶20份，纖維素酶20份，β -葡聚糖酶17份，澱粉酶17份，植酸酶13份，中草藥提取物12份，保護劑13份，激活劑12份； 所述黑麴黴培養物製備方法包括如下步驟: (1)菌種活化將保存完好的黑麴黴DM-18的斜面菌種接種於斜面培養基，28°C培養36h進行菌種活化,如此活化2次； 所述斜面培養基組成為:乾酪素4g，磷酸氫二鉀2g，氯化鎂0.6g，氯化鉀0.Sg,硫酸亞鐵0.02g，葡萄糖20g，瓊脂20g，中草藥粉劑5g，蒸餾水1000mL, pH值5.8，121 °C滅菌.20min ； 所述中草藥粉劑的製備方法如下: 稱取黃芪20份；黨參10份；柴胡10份；黃芩10份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然後於容器中均勻混合併添加3倍重量的水，控制溫度70°C保持2h，添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至60°C保持3h，過濾；濾液真空濃縮後冷凍乾燥獲得中草藥粉劑； 所述乙醇和丙醇的質量比例為1:1; (2)液體種子擴大培養 ①一級種子培養:將步驟(1)活化後的宇佐美麴黴斜面菌種以無菌水洗下孢子，接入500毫升搖瓶中，液體種子培養基裝量100毫升，28°C、80rpm搖床培養36h ； ②二級種子培養:將一級種子按照10%的接種量接入500毫升二級種子搖瓶中，培養條件與一級種子相同； ③三級種子培養:將二級種子以8%接種量接入5000毫升三級種子搖瓶中，液體培養基裝量1000毫升，28°C、80rpm搖床培養36h ； ④種子罐培養:將三級種子以8%接種量接入總容積為150L的一級種子罐，種子罐培養基裝量100L，控制pH值為5，培養溫度28°C，攪拌速度200rpm，通風量(V/V)l: 0.8，培養時間36h,溶解氧10% ； 所述一級、二級、三級種子培養基組成為:磷酸氫二鉀2g，氯化鎂0.6g，氯化鉀0.Sg，硫酸亞鐵0.02g,葡萄糖20g,中草藥粉劑15g,海藻糖IOg,蒸懼水1000mL, pH值5.5,121。。滅菌20min ； 所述種子罐培養基組成為:玉米粉50-60g，豆粉15-25g，麩皮10-15g，魚粉10g，氯化鈣6g，氯化銨lg，磷酸氫二鈉lg，中草藥粉劑15g，海藻糖10g，純淨水lOOOmL，pH值5，121°C滅菌20min ； 所述種子罐發酵液孢子濃度為7.0xlO8個/ml ； (3)發酵罐發酵 將步驟(2)中種子罐液體種子以6%接種量接入發酵罐，培養溫度28°C，攪拌速度200r/m，通風量(V/V)l: 1，培養時間IOh ;然後以1°C /h降溫速率緩慢降溫至10°C，恆溫培養15h ；繼續以1°C /h降溫速率緩慢降溫至2°C，此時，將步驟(2)中種子罐液體種子以4%接種量追加接入發酵罐，恆溫培養20h ;最後以1°C /h升溫速率緩慢升溫至10°C，恆溫培養15h ;繼續以1°C /h升溫速率緩慢升溫至30°C，恆溫培養15h ； 溶解氧控制:通過調整攪拌轉速及通風量，控制溶解氧15% ； pH控制:通過補氨水或稀磷酸，控制發酵過程中pH值保持在5 ； 補料控制:當發酵液中的還原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml時,開始添加補料培養基,補料量以維持發酵液還原糖含量為2mg/ml-5mg/ml ； 放罐標準:60%菌體衰老自溶，酶活力增長緩慢；所述發酵培養基組成為:玉米粉50g，豆粉15g，麩皮10g，魚粉10g，氯化鈣6g，氯化銨lg，磷酸氫二鈉lg，中草藥粉劑30g，海藻糖10g，純淨水lOOOmL，pH值5，121 °C滅菌20min ；所述補料培養基重量組成為:麥芽糊精20%，玉米粉10%，豆粉15%，魚粉1.0%，氯化鈣.0.6%，氯化銨0.1%，磷酸氫二鈉0.1%，中草藥粉劑5%，不足部分純淨水補足，pH值5，121°C滅菌30min ； (4)發酵液經離心分離得到黑麴黴溼菌體和離心液，離心液於15°C循環超濾濃縮去除水分得固形物含量30%濃縮液，濃縮液與黑麴黴溼菌體以質量比5:1均勻混合，然後經真空冷凍乾燥、超微粉碎得黑麴黴培養物； 所述中草藥提取物的製備方法為:分別將中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然後於容器中均勻混合併添加5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，然後降溫至53°C，加入混合酶製劑進行酶解，用乳酸調節PH值為6.2，酶解3h，最後添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至69°C保持4h，過濾；濾液減壓濃縮至固形物含量為20%以上，然後冷凍乾燥獲得中草藥提取物； 所述中草藥的重量份數組成為:沙棘25份，決明子25份，枸杞17份，山藥13份，北沙參8份，黃荊子7份，玉竹4份，薏米4份，大麥芽4份，桂花4份，黃芪4份； 混合酶添加量為混合物料總重量的5-10% ；所述混合酶的重量份數組成為:內葡聚糖酶15份，外β-葡聚糖酶15份，β-葡萄糖苷酶13份，木聚糖酶13份，戊聚糖酶13份，普魯蘭酶25份，β -澱粉酶12份，中性蛋白酶13份，酸性蛋白酶13份，超氧化物歧化酶7份，葡萄糖氧化酶7份，酸性磷酸酶7份；所述保護劑由以下重量份數的原料組成:海藻糖25份，NaC125份，(NH4) 2S0413份，半胱氨酸12份； 所述激活劑是由如下質量組份的無機鹽均勻混`合而成:氯化鋅35份，氯化鈣15份，硫酸鈉15份，氯化鎂7份； 將所述保護劑、中草藥提取物分別超微粉碎，確保粒度小於所述酸性木聚糖酶及其它原料，然後與黑麴黴培養物、酸性木聚糖酶、纖維素酶、β_葡聚糖酶、澱粉酶、植酸酶，均勻混合，最後加入激活劑，混合均勻後密封包裝即得成品乳仔豬專用酶。
【文檔編號】C12N9/16GK103725661SQ201310736761
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年12月27日 優先權日:2013年12月27日
【發明者】張錦傑, 李貴駿, 劉文明, 封章平, 王永蘭 申請人:湖南鴻鷹生物科技有限公司