絡石藤的三萜皂苷類總提取物及其製備方法和用途的製作方法
2023-11-12 05:33:07 1
專利名稱：絡石藤的三萜皂苷類總提取物及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及從天然植物中提取的總皂苷類化合物，特別是從絡石藤中提取的J 皂苷類化合物及其製備方法和提取物的用途。萜
背景技術：
絡石藤為夾竹桃科植物絡石藤的乾燥帶葉藤莖，它具有祛風通絡、涼血消腫之功， 主治風溼熱痺、筋脈拘攣、腰膝酸痛等症。絡石藤所含成份十分複雜，包括有木脂素類、黃酮 類、三萜皂苷類、紫羅蘭酮衍生物，還有酚、醇類和生物鹼等化合物。據有關文獻報導，從白 酒草、九節龍、走馬胎、山茶種子、西洋參莖葉等各種天然植物中提取的三萜皂苷類化合物 分別具有抗腫瘤、降血糖降血脂、保護胃黏膜等功效。但目前，尚未見有從絡石藤中提取的 三萜總皂苷類化合物及其提取方法及用途的報導。
發明內容
本發明的目的之一，是提供一種以絡石藤為原料製備的三萜皂苷類總提取物產 品；本發明的目的之二，是提供一種以絡石藤為原料製備三萜皂苷類總提取物的工藝方法； 本發明的目的之三是提供三萜皂苷類總提取物產品的用途。實現本發明的技術方案為本發明的絡石藤的三萜皂苷類總提取物，主要組成為下列七種三萜皂苷絡石皂 苷B-1、絡石皂苷D-1、絡石皂苷E-1、絡石皂苷F、奎諾酸3 β -O-D-吡喃葡萄糖苷、奎諾酸 3 β -O-D-吡喃葡萄糖苷27-0- β -D-吡喃葡萄糖酯和金雞勒酸3 β -O-D-吡喃葡萄糖苷 27-0-β-D-吡喃葡萄糖酯，其分子結構通式如下
HOH2C 免H2OH
24 23
R = glc絡石皂苷B-I
■ J 6
HOH2C ^--OR2
24 O
R1 = glc ;R2 = H 絡石皂苷 D-I
R1 = H5R2 = glc 絡石皂苷F
4
葡萄糖苷R = glc 絡石皂苷 E-I 本發明的絡石藤的三萜皂苷類總提取物的製備方法，包括下列工藝步驟①，浸提可溶物將絡石藤原料粉碎成細粉，加溶劑浸泡，使其溶出可溶物；②，提取浸膏取上述浸泡液進行加熱回流脫除其中有機溶劑，然後濃縮成浸膏；③，分離出浸膏中的三萜皂苷類總提取物用蒸餾水溶解浸膏為浸膏液，加入非極 性有機溶劑萃取去非三萜皂苷類化合物，於是浸膏液中餘留下三萜皂苷類總提取物；④，三萜皂苷類粗提液將上述分離去了萃取液的餘液進行加熱回流，脫除部分夾 帶的非極性有機溶劑，並加入適量的水使儘可能溶解，靜置放冷，過濾去渣；⑤，純化上述濾液通過大孔吸附樹脂柱吸附三萜皂苷類化合物，然後用溶劑洗脫 下大孔吸附樹脂柱上的三萜皂苷類化合物，將洗脫液去除溶劑後加適量蒸餾水溶解，爾後 經聚醯胺樹脂柱吸附除去其中微量的酚類、酸類、醌類、黃酮類等富含酚羥基的化合物，餘 液經加熱乾燥即得純度較高的三萜皂苷類總提取物產品；或者上述濾液先通過聚醯胺樹脂 柱吸附處理，再經大孔吸附樹脂柱吸附處理。上述工藝方法中作為優選，用於浸提的溶劑是水或體積百分比濃度為30 95%的乙醇或甲醇溶液。作為優選，所述乙醇或甲醇的體積百分比濃度為55 85%。作為優選，浸提在20 30°C溫度下，浸提時間為24 72小時。
R = glc 金雞勒酸3 β -O-D-吡喃 27-0-β-D-吡喃葡萄糖酯
作為優選，用於萃取的非極性有機溶劑是氯仿或石油醚、苯、二甲苯。作為優選，用於純化的大孔吸附樹脂柱是型號為DlOl或AB-8、HP-20系列的大孔 吸附樹脂柱。作為優選，用於純化的聚醯胺樹脂是聚醯胺-6或聚醯胺-66。上述工藝方法的原理是先將絡石藤粉碎、浸泡，破壞其中蛋白質、多糖等大分子結構，使其分解為小分子 結構的化合物；然後用溶劑浸提出包括木脂素苷、苷元、黃酮類、三萜皂苷類、紫羅蘭酮衍生 物、其它酚、醇類、生物鹼等化合物的混合物成浸膏；對浸膏加蒸餾水溶解，根據三萜皂苷類 在親脂性有機溶劑中溶解度小的特性，採用非極性有機溶劑萃取浸膏溶解液中的非三萜皂 苷類成份，而使三萜皂苷類留於水溶液中而達到初步分離的目的；然後將皂苷水溶液脫去 剩餘有機溶劑，上大孔吸附樹脂柱，利用大孔吸附樹脂的吸附性和分子篩相結合的原理，根 據欲分離的三萜皂苷類依其分子體積的大小及吸附力的強弱，選擇一定規格的大孔吸附樹 脂進行吸附分離，然後以適當的溶劑將三萜皂苷類從樹脂上洗脫下來，並將洗脫液中的溶 劑除去；加蒸餾水溶解後上聚醯胺樹脂柱，利用聚醯胺可與酚類、酸類、醌類、黃酮類等富含 酚羥基的化合物形成氫鍵而吸附的原理，使溶液中可能存在的黃酮類苷元吸附在聚醯胺樹 脂柱上，餘下即得純度較高的三萜皂苷類總提取物。本發明的絡石藤的三萜皂苷類總提取物的用途，是用於製備抗炎、抗疲勞製劑。本發明的有益效果是從天然植物絡石藤中提取了純度較高的三萜皂苷類產品，為進一步研究三萜皂苷 類的藥理作用，或配製有關藥物製劑提供了優質原料產品；同時為從絡石藤中提取三萜皂 苷類總提取物提供了一種適於工業化生產的工藝方法，它工藝簡單、穩定、可靠，操作方便， 生產成本較低，特別是採用了溶劑萃取法、大孔樹脂吸附法一步步分離純化，從而大大提高 了產品收得率和產品中有效成份的總含量。
具體實施例方式實施例1①，浸提可溶物取絡石藤中藥材lOOOg，粉碎過60目篩，加入蒸餾水2000ml，於 20-30°C下，浸泡48小時；②，提取浸膏將浸泡液在95°C下加熱4小時，靜置過濾去渣、減壓濃縮，得密度為 1. 195 的浸膏 352g ；③，分離出浸膏中的三萜皂苷類總提取物先用蒸餾水加熱超聲溶解浸膏，並加入 浸膏液2倍體積量的氯仿進行萃取，然後分離氯仿萃取層與水溶層；④，三萜皂苷類粗提液取上述水溶層進行加熱回流，脫除部分夾帶的氯仿，再加 入適量的水使其中可溶物儘可能溶解，靜置放冷，過濾去渣得濾液；⑤，純化將上述濾液緩慢加入D-101型大孔吸附樹脂柱，洗脫液反覆上柱4遍，經 薄層檢識無對應點，表明充分吸附；依次用3倍濾液量的蒸餾水和體積百分比濃度為10%、 20%、95%的乙醇作梯度洗脫，但僅收集體積百分比濃度為20%的乙醇洗脫液，加熱回流至 無醇味；加入適量蒸餾水溶解後緩慢加入聚醯胺_6樹脂柱，充分吸附後，依次用蒸餾水、體 積百分比濃度為95%的乙醇洗脫，合併收集蒸餾水洗脫液，加熱乾燥，得呈疏鬆狀總提取物22. 05g，經分析檢測，總提取物中的絡石皂苷B-1、絡石皂苷D-1、絡石皂苷E-1、絡石皂苷F、 奎諾酸3 β -O-D-吡喃葡萄糖苷、奎諾酸3 β -O-D-吡喃葡萄糖苷27-0- β -D-吡喃葡萄糖 酯和金雞勒酸3 β -O-D-吡喃葡萄糖苷27-0- β -D-吡喃葡萄糖酯7種三萜皂苷總含量為 16. 56g，純度達 75. 10%。實施例2①，浸提可溶物取絡石藤中藥材lOOOg，粉碎過60目篩，加入藥材量3倍的體積 百分比濃度為55%的乙醇，於20-30°C下，浸泡72小時；②，提取浸膏將浸泡液進行加熱回流脫除乙醇，靜置過濾去渣、減壓濃縮，得密度 為1. 201的浸膏315g ；③，分離出浸膏中的三萜皂苷類總提取物先用蒸餾水加熱超聲溶解浸膏，並加入 浸膏液3倍量的石油醚進行萃取，然後分離石油醚萃取層與水溶層；④，三萜皂苷類粗提液取上述水濾層進行加熱回流，脫除部分夾帶的石油醚，再 加入適量的水使其中可溶物儘可能溶解，靜置放冷，過濾去渣得濾液；⑤，純化將上述濾液緩慢加入AB-8型大孔吸附樹脂柱，洗脫液反覆上柱4遍，經 薄層檢識無對應點，表明充分吸附；依次用5倍濾液量的蒸餾水、體積百分比濃度為10%、 20%、95%的乙醇作梯度洗脫，但僅收集體積百分比濃度為20%的乙醇洗脫液，加熱回流至 無醇味；加入適量蒸餾水溶解後緩慢加入聚醯胺-66樹脂柱，充分吸附後，依次用蒸餾水、 體積百分比濃度為95%的乙醇洗脫，合併收集蒸餾水洗脫液，加熱乾燥，得呈疏鬆狀總提取 物25. 03g，經分析檢測，總提取物中的絡石皂苷B-1、絡石皂苷D-1、絡石皂苷E-1、絡石皂苷 F、奎諾酸3 β -O-D-吡喃葡萄糖苷、奎諾酸3 β -O-D-吡喃葡萄糖苷27-0- β -D-吡喃葡萄糖 酯和金雞勒酸3 β -O-D-吡喃葡萄糖苷27-0-β -D-吡喃葡萄糖酯7種三萜皂苷總含量為 18. 77g，純度達 75. 00%。實施例3①，浸提可溶物取絡石藤中藥材lOOOg，粉碎過60目篩，加入藥材量4倍的體積 百分比濃度為65%的乙醇，於20-30°C下，浸泡36小時；②，提取浸膏將浸泡液進行加熱回流脫除乙醇，靜置過濾去渣、減壓濃縮，得密度 為1. 190的浸膏298g ；③，分離出浸膏中的三萜皂苷類總提取物先用蒸餾水加熱超聲溶解浸膏，並加入 浸膏液6倍量的氯仿進行萃取，然後分離氯仿萃取層與水溶層；④，三萜皂苷類粗提液取上述水溶層進行加熱回流，脫除部分夾帶的氯仿，再加 入適量的水使其中可溶物儘可能溶解，靜置放冷，過濾去渣得濾液；⑤，純化將上述濾液緩慢加入HP-20型大孔吸附樹脂柱，洗脫液反覆上柱4遍，經 薄層檢識無對應點，表明充分吸附；依次用7倍濾液量的蒸餾水、體積百分比濃度為10%、 20%、95%的乙醇作梯度洗脫，但僅收集體積百分比濃度為20%的乙醇洗脫液，加熱回流至 無醇味；加入適量蒸餾水溶解後緩慢加入聚醯胺_6樹脂柱，充分吸附後，依次用蒸餾水、體 積百分比濃度為95%的乙醇洗脫，合併收集蒸餾水洗脫液，加熱乾燥，得呈疏鬆狀總提取物 30. 15g，經分析檢測，總提取物中的絡石皂苷B-1、絡石皂苷D-1、絡石皂苷E-1、絡石皂苷F、 奎諾酸3 β -0-D-吡喃葡萄糖苷、奎諾酸3 β -0-D-吡喃葡萄糖苷27-0- β -D-吡喃葡萄糖 酯和金雞勒酸3 β -0-D-吡喃葡萄糖苷27-0- β -D-吡喃葡萄糖酯7種三萜皂苷總含量為23. 52g，純度達 78. 10%。實施例4①，浸提可溶物取絡石藤中藥材lOOOg，粉碎過60目篩，加入藥材量6倍的體積 百分比濃度為75%的甲醇，於20-30°C下，浸泡24小時；②，提取浸膏將浸泡液進行加熱回流脫除乙醇，靜置過濾去渣、減壓濃縮，得密度 為1. 205的浸膏319g ；③，分離出浸膏中的三萜皂苷類總提取物先用蒸餾水加熱超聲溶解浸膏，並加入 浸膏液4倍量的苯進行萃取，然後分離苯萃取層與水溶層；④，三萜皂苷類粗提液取上述水溶層進行加熱回流，脫除部分夾帶的苯，再加入 適量的水使其中可溶物儘可能溶解，靜置放冷，過濾去渣得濾液；⑤，純化將上述濾液緩慢加入聚醯胺-66樹脂柱，洗脫液反覆上柱4遍，經薄層檢 識無對應點，表明充分吸附；依次用8倍濾液量的蒸餾水、體積百分比濃度為95%的乙醇洗 脫，收集蒸餾水洗脫液；將蒸餾水洗脫液緩慢加入HP-20型大孔吸附樹脂柱，充分吸附後， 依次用水、體積百分比濃度為10%、20%、95%的乙醇作梯度洗脫，僅收集體積百分比濃度 為20%的乙醇洗脫液，加熱乾燥，得呈疏鬆狀總提取物28. 26g，經分析檢測，總提取物中的 絡石皂苷B-1、絡石皂苷D-1、絡石皂苷E-1、絡石皂苷F、奎諾酸3 β -O-D-吡喃葡萄糖苷、奎 諾酸3 β -O-D-吡喃葡萄糖苷27-0- β -D-吡喃葡萄糖酯和金雞勒酸3 β -O-D-吡喃葡萄糖 苷27-0-β -D-吡喃葡萄糖酯7種三萜皂苷總含量為21. 74g，純度達76. 93%實施例5①，浸提可溶物取絡石藤中藥材lOOOg，粉碎過60目篩，加入藥材量7倍的體積 百分比濃度為85 %的乙醇，於20-30V下，浸泡24小時；②，提取浸膏將浸泡液進行加熱回流脫除乙醇，靜置過濾去渣、減壓濃縮，得密度 為1. 193的浸膏301g ；③，分離出浸膏中的三萜皂苷類總提取物先用蒸餾水加熱超聲溶解浸膏，並加入 浸膏液5倍量的二甲苯進行萃取，然後分離二甲苯萃取層與水溶層；④，三萜皂苷類粗提液取上述水溶層進行加熱回流，脫除部分夾帶的二甲苯，再 加入適量的水使其中可溶物儘可能溶解，靜置放冷，過濾去渣得濾液；⑤，純化將上述濾液緩慢加入聚醯胺_6樹脂柱，洗脫液反覆上柱4遍，經薄層檢 識無對應點，表明充分吸附；依次用8倍濾液量的蒸餾水、體積百分比濃度為95%的乙醇洗 脫，收集蒸餾水洗脫液；將蒸餾水洗脫液緩慢加入AB-8型大孔吸附樹脂柱，充分吸附後，依 次用水、體積百分比濃度為10%、20%、95%的乙醇作梯度洗脫，僅收集體積百分比濃度為 20%的乙醇洗脫液，加熱乾燥，得呈疏鬆狀總提取物26. 37g，經分析檢測，總提取物中的絡 石皂苷B-l、絡石皂苷D-l、絡石皂苷E-l、絡石皂苷F、奎諾酸3β-0-D-吡喃葡萄糖苷、奎諾 酸3 β -0-D-吡喃葡萄糖苷27-0- β -D-吡喃葡萄糖酯和金雞勒酸3 β -0-D-吡喃葡萄糖苷 27-0-β-D-吡喃葡萄糖酯7種三萜皂苷總含量為20. 10g，純度達76. 22%本發明對製得的絡石藤總皂苷進行了抗炎和抗疲勞試驗，表明其具有一定的抗炎 作用和明顯的抗疲勞作用。具體試驗方法如下一、抗炎以蛋清致大鼠足趾腫脹和二甲苯致小鼠耳廓腫脹為模型，以大鼠足趾腫脹度和腫脹率、小鼠耳廓腫脹度和腫脹率為指標進行了實驗。結果表明，絡石藤總皂苷提取 物中劑量能明顯降低二甲苯致小鼠耳廓腫脹度，各劑量均能顯著降低耳廓腫脹率。附表1 提取物對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(χ士S) 注與陰性組相比:*P< 0. 05,**P < 0.01二、抗疲勞以小鼠負重力竭遊泳訓練為模型，以體重、負重遊泳時間、抓力、低溫 遊泳時間及定量負荷運動後全血乳酸、血尿素氮及丙二醛含量為指標進行試驗。結果表明， 絡石藤總皂苷提取物能延長小鼠負重力竭遊泳時間、低溫遊泳時間、飢餓24h遊泳時間，增 強小鼠抓力，降低定量負荷後全血LD及血漿MDA、BUN含量。附表2 給藥1-10天小鼠常溫負重遊泳時間(χ士s，25士2°C，η = 12) 注與模型組相比*Ρ< 0. 05,**Ρ < 0.01附表3 提取物對小鼠低溫遊泳時間的影響(χ士s，4士 1°C，η = 12)
注與正常組相比ΔΡ<0. 05，δδΡ<0.01 ；與模型組相比* 附表4 提取物對小鼠抓力的影響(χ士 s，η = 12)P < 0. 05, **Ρ < 0. 01 注與正常組相比ΔΡ<0.05，ΔΔΡ< 0.01 ；與模型組相比*P < 0. 05，**P < 0. 01附表5 提取物對小鼠定量負荷運動後血漿BUN含量的影響(χ士 s，η彡10) 注與正常組相比ΔΡ<0.05，ΔΔΡ< 0.01 ；與模型組相比*P < 0. 05，**P < 0. 01附表6 提取物對小鼠定量負荷運動後全血LD含量的影響(χ士 s，η彡11) 注與正常組相比ΔΡ<0.05，ΔΔΡ< 0.01 ；與模型組相比*P < 0. 05，**P < 0. 01附表7 提取物對小鼠定量負荷運動後血漿MDA含量的影響(χ士 s，η ^ 9) 注與正常組相比ΔΡ<0.05，ΔΔΡ< 0.01 ；與模型組相比*P < 0. 05，**P < 0. 01上述試驗結果表明，絡石藤總皂苷提取物有一定的抗炎作用和明顯的抗疲勞作用。
權利要求
一種絡石藤的三萜皂苷類總提取物，其特徵在於主要組成為下列七種三萜皂苷絡石皂苷B 1、絡石皂苷D 1、絡石皂苷E 1、絡石皂苷F、奎諾酸3β O D 吡喃葡萄糖苷、奎諾酸3β O D 吡喃葡萄糖苷27 O β D 吡喃葡萄糖酯和金雞勒酸3β O D 吡喃葡萄糖苷27 O β D 吡喃葡萄糖酯，其分子結構通式如下 R1＝glc；R2＝H 絡石皂苷D 1R＝glc絡石皂苷B 1 R1＝H；R2＝glc 絡石皂苷F R＝glc 金雞勒酸3β O D 吡喃葡萄糖苷R＝glc 絡石皂苷E 127 O β D 吡喃葡萄糖酯 FSA00000218231700011.tif,FSA00000218231700012.tif,20101024578461000011.tif
2.按權利要求1所述的絡石藤的三萜皂苷類總提取物，其特徵在於所述七種三萜皂苷 在總提取物中的含量彡75%。
3.—種如權利要求1所述的絡石藤的三萜皂苷類總提取物的製備方法，其特徵在於它 包括下列工藝步驟①，浸提可溶物將絡石藤原料粉碎成細粉，加溶劑浸泡，使其溶出可溶物；②，提取浸膏取上述浸泡液進行加熱回流脫除其中有機溶劑，然後濃縮成浸膏；③，分離出浸膏中的三萜皂苷類總提取物用蒸餾水溶解浸膏為浸膏液，加入非極性有 機溶劑萃取去非三萜皂苷類化合物，於是浸膏液中餘留下三萜皂苷類總提取物；④，三萜皂苷類粗提液將上述分離去了萃取液的餘液進行加熱回流，脫除部分夾帶的 非極性有機溶劑，並加入適量的水使儘可能溶解，靜置放冷，過濾去渣；⑤，純化上述濾液通過大孔吸附樹脂柱吸附三萜皂苷類化合物，然後用溶劑洗脫下 大孔吸附樹脂柱上的三萜皂苷類化合物，將洗脫液去除溶劑後加適量蒸餾水溶解，爾後經 聚醯胺樹脂柱吸附除去其中微量的酚類、酸類、醌類、黃酮類等富含酚羥基的化合物，餘液 經加熱乾燥即得純度較高的三萜皂苷類總提取物產品；或者上述濾液先通過聚醯胺樹脂柱 吸附處理，再經大孔吸附樹脂柱吸附處理。
4.按權利要求3所述的絡石藤的三萜皂苷類總提取物的製備方法，其特徵在於用於浸 提的溶劑是水或體積百分比濃度為30 95%的乙醇或甲醇溶液。
5.按權利要求4所述的絡石藤的三萜皂苷類總提取物的製備方法，其特徵在於所述乙 醇或甲醇的體積百分比濃度為55 85%。
6.按權利要求3所述的絡石藤的三萜皂苷類總提取物的製備方法，其特徵在於浸提在 20 30°C溫度下，浸提時間為24 72小時。
7.按權利要求3所述的絡石藤的三萜皂苷類總提取物的製備方法，其特徵在於用於萃 取的非極性有機溶劑是氯仿或石油醚、苯、二甲苯。
8.按權利要求3所述的絡石藤的三萜皂苷類總提取物的製備方法，其特徵在於用於純 化的大孔吸附樹脂柱是型號為DlOl或AB-8、HP-20系列的大孔吸附樹脂柱。
9.按權利要求3所述的絡石藤的三萜皂苷類總提取物的製備方法，其特徵在於用於純 化的聚醯胺樹脂是聚醯胺_6或聚醯胺-66。
10.一種如權利要求1所述的絡石藤的三萜皂苷類總提取物的用途，其特徵在於用於 製備抗炎、抗疲勞製劑。
全文摘要
絡石藤的三萜皂苷類總提取物及其製備方法和用途，其三萜皂苷類總提取物包括絡石皂苷B-1、絡石皂苷D-1、絡石皂苷E-1、絡石皂苷F、奎諾酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷、奎諾酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯、金雞勒酸3β-O-D-吡喃葡萄糖苷27-O-β-D-吡喃葡萄糖酯等7種三萜皂苷，該7種三萜皂苷在總提取物中的含量≥75％；本總提取物的用途是用於製備抗炎、抗疲勞製劑；從絡石藤中提取三萜皂苷類總提取物的工藝方法包括浸泡、提取浸膏、兩相萃取法製取三萜皂苷類粗品和樹脂吸附提純等步驟。本發明成功地為從天然植物絡石藤中提取三萜皂苷類總提取物提供了一種適於工業化生產的工藝方法和醫藥用途。
文檔編號A61K31/7024GK101926811SQ20101024578
公開日2010年12月29日 申請日期2010年8月2日 優先權日2010年8月2日
發明者孔飛飛, 譚興起, 鄭巍, 郭良君, 陸萍 申請人:中國人民解放軍第九八醫院