一種測定靈芝孢子油中三萜類物質含量的方法
2023-11-12 02:23:47
專利名稱：一種測定靈芝孢子油中三萜類物質含量的方法
技術領域：
本發明涉及一種測定靈芝孢子油中三萜類物質含量的方法，具體來說涉及一種以香草醛為顯色劑，用比色法間接測定靈芝產品中三萜類物質含量的方法。
背景技術：
靈芝產品包括靈芝子實體，靈芝菌絲體，靈芝孢子粉和靈芝孢子油，其有效成分主要是三萜類物質。目前以香草醛為顯色劑，用比色法簡接測定靈芝產品中三萜類物質含量的方法有一些，例如於村等的方法(見參考文獻於村，俞莎，韓見龍等.靈芝類保健食品中三萜類化合物測定方法研究.浙江預防醫學，2006，18(8)74-75.)硫酸作用下以香草醛為顯色劑，用比色法間接測定靈芝產品中三萜類物質含量，靈芝孢子油中三萜類物質的提取採用氯仿回流，而且對照品和供試液都用氯仿定容，因氯仿有毒，可能對人體造成損害，且氯仿極易揮發，吸取供試液時，體積誤差很大，從而導致結果不準確。
發明內容
本發明的目的在於解決現有技術的缺陷，開發出一種新的測定靈芝孢子油中三萜類物質含量的方法。
我們在用乙醇並熱水浴加熱溶解提取出靈芝孢子油中三萜類物質，在高氯酸作用下，在冰醋酸中使之與香草醛顯色反應，以齊墩果酸為對照品，用比色法定量測定，方法穩定，復現性好，測定結果準確，從而實現了本發明的目的。
本發明的測定靈芝孢子油中三萜類物質含量的方法，是將靈芝孢子油中三萜類物質提取出來，然後以香草醛為顯色劑，用比色法測定其含量，其特徵在於所述的靈芝孢子油中三萜類物質的提取方法是靈芝孢子油用乙醇在60～70℃熱水浴加熱至溶解，得供試液。
靈芝孢子油中三萜類物質以香草醛為顯色劑的反應可以採用現有的方法，最好是採用香草醛冰醋酸-高氯酸溶液體系，該體系最好是準確稱取香草醛0.20g於棕色瓶中，加冰醋酸4.0mL，冷藏，加入高氯酸16.0mL，搖勻。
本發明比色測定方法可以採用現有的方法，最好以齊墩果酸為對照品，最大吸收波長為549nm；包括如下步驟精密吸取供試液於比色管中，水浴加熱揮幹溶劑，加入與供試液等體積的香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液，70℃水浴加熱15分鐘，取出冰水冷卻10分鐘，加冰醋酸5mL稀釋，搖勻；用紫外可見分光光度計在549nm處測吸光度值；以測得的吸光度值Y通過線性回歸方程算得試樣液中三萜的含量X。
本發明方法能檢測靈芝孢子油中三萜類物質的含量，反應特異性強，方法穩定，復現性好，方法靈敏度為0.0087/μg，最低檢出限為2μg，加標回收率98.15％。
圖1齊墩果酸與香草醛化合物的吸收曲線圖2齊墩果酸標準曲線圖3齊墩果酸含量與吸光度關係曲線具體實施方法以下實施例是對本發明的進一步說明，不是對本發明的限制。
以下實施例所採用的試劑均為分析純，儀器為UV755B紫外可見分光光度計，香草醛-冰醋酸高氯酸溶液準確稱取香草醛0.20g於棕色瓶中，加冰醋酸4.0mL，冷藏，加入高氯酸16.0mL，搖勻；空白對照條件加入香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液1mL於比色管中，70℃水浴加熱15分鐘，取出冰水冷卻10分鐘，加冰醋酸5mL稀釋。
實施例1最大吸收波長測定精密吸取齊墩果酸溶液液1mL於比色管中(同時做一空白)，水浴加熱揮幹溶劑，加入(香草醛-冰醋酸-高氯酸)溶液1.0mL，70℃水浴加熱15分鐘，取出冰水冷卻10分鐘，加冰醋酸5mL稀釋，搖勻，用紫外可見分光光度計在500～600nm範圍掃描，在549nm處測得最大吸光度值，吸收曲線見附圖1。
實施例2齊墩果酸標準曲線製備標準溶液配製精密稱取齊墩果酸對照品10mg，用乙醇溶解定容至100mL。
精密吸取標準溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mL於比色管中(同時做一空白)，水浴加熱揮幹溶劑，加入香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液1.0mL，70℃水浴加熱15分鐘，取出冰水冷卻10分鐘，加冰醋酸5mL稀釋，搖勻，用紫外可見分光光度計在549nm處測吸光度值Y，齊墩果酸標準曲線見附圖2，計算得線性回歸方程為Y＝8.6018X-0.0011及相關係數為R2＝0.9992。
實施例3靈芝孢子油樣品測定精密稱取靈芝孢子油1滴0.0302g，加入乙醇，搖動，60～70℃熱水浴加熱，同時搖動使其溶解，定容至50mL，得供試液。按實施例3測定，以測得的吸光度值Y通過線性回歸方程，用式(1)算得結果為質量分數14.6％。
精密吸取供試液1mL於比色管中，水浴加熱揮幹溶劑(同時做一空白)，加入香草醛冰醋酸高氯酸溶液1.0mL，70℃水浴加熱15分鐘，取出冰水冷卻10分鐘，加冰醋酸5mL稀釋，搖勻，用紫外可見分光光度計在549nm處測吸光度值。以測得的吸光度值Y(A)通過線性回歸方程，用下述式(1)算得試樣液中三萜的含量X，結果為質量分數0.56％。
X=xmV0V1000100]]>式(1)式(1)中
X為試樣中三萜類物質的含量，單位為g/100g；x為從標準曲線上算得的測定液中三萜的含量，單位為mg；m為試樣的質量，單位為g；V為供試液定容的體積，單位為mL；V0為取測定液的體積，單位為mL。
計算結果保留三位有效數字。
實施例4回收率試驗精密稱取孢子油1滴0.0340g，精密加入齊墩果酸(0.5mg/mL)8ml，加入乙醇，60～70℃熱水浴加熱，同時搖動使其溶解，定容至50mL，得供試液。
精密吸取供試液1.0mL於比色管中(同時做一空白)，水浴加熱揮幹溶劑，加入香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液1.0mL，70℃水浴加熱15分鐘，取出冰水冷卻10分鐘，加冰醋酸5mL稀釋、搖勻，用紫外可見分光光度計在549nm處測吸光度值Y，見表1。
表1 回收率試驗結果
實施例5線性範圍試驗精密吸取齊墩果酸對照品溶液2～300μg/mL於比色管中(同時做一空白)，水浴加熱揮幹溶劑，加入香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液1.0mL，70℃水浴加熱15分鐘，取出冰水冷卻10分鐘，加冰醋酸5mL稀釋，搖勻，用紫外可見分光光度計在549nm處測吸光度值Y，測定結果見附圖3。由圖3可知在1～200μg/mL範圍內線性關係良好。
實施例6靈敏度試驗一個方法的靈敏度是指該方法對單位濃度或單位量的待測物質的變化所引起的響應值變化的程度。因此，它可以用儀器的響應值或其他指示量與對應的待測物質的濃度或量之比來描述。
實際工作中，靈敏度通常以標準曲線的斜率表示。
由圖3計算的靈敏度即曲線的斜率為0.0087/μg。
實施例7檢出限試驗檢出限是指分析方法在適當的置信水平內，能從樣品中檢測出被測組分的最小量或最小濃度。即斷定樣品中被測組分的量或濃度確實高於空白中被測組分的最低量。
國際理論與應用化學聯合會(IUPAC)對檢出限的規定對於各種光學分析方法，可測量的最小分析響應值以下式表示XL＝Xb-K×sb式(2)式(2)中XL為最小響應值；Xb為多次測量空白值的平均值；sb為多次測量空白值的標準差；K為根據一定的置信水平確定的係數(一般當置信水平為95％，空白測量次數n＜20時，K＝3；置信水平95％，空白測定次數n＞20時，K＝4.65)。
式(3)式(3)中m為靈敏度(以標準曲線斜率代入)。
本發明香草醛比色法測定三萜的方法中，以水為參比，測量空白值10次，測量結果見表2。
表2 10次空白測定結果
多次測量空白值的標準差sb＝0.0058；
從實施例5～7以香草醛為顯色劑，齊墩果酸為對照品，比色法測定靈芝孢子油中三萜類物質含量的方法，具有靈敏度高、檢出限低、線性關係良好以及顯色穩定的優點。
權利要求
1.一種測定靈芝孢子油中三萜類物質含量的方法，是將靈芝孢子油中三萜類物質提取出來，然後以香草醛為顯色劑，用比色法測定其含量，其特徵在於所述的靈芝孢子油中三萜類物質的提取方法是靈芝孢子油用乙醇在60～70℃熱水浴加熱至溶解，得供試液。
2.根據權利要求1的一種測定靈芝孢子油中三萜類物質含量的方法，其特徵是比色測定以齊墩果酸為對照品，最大吸收波長為549nm。
3.根據權利要求1或2的一種測定靈芝孢子油中三萜類物質含量的方法，其特徵是比色測定方法包括如下步驟精密吸取供試液於比色管中，水浴加熱揮幹溶劑，加入與供試液等體積的香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液，70℃水浴加熱15分鐘，取出冰水冷卻10分鐘，加冰醋酸5mL稀釋，搖勻；用紫外可見分光光度計在549nm處測吸光度值；以測得的吸光度值Y通過線性回歸方程算得試樣液中三萜的含量。
全文摘要
本發明涉及一種測定靈芝孢子油中三萜類物質含量的方法，是將靈芝孢子油用乙醇在60～70℃熱水浴加熱至溶解，把靈芝孢子油中三萜類物質提取出來，然後在高氯酸作用下，在冰醋酸中使之與香草醛顯色反應，以齊墩果酸為對照品，用比色法在波長為549nm處測定其含量。本發明方法能檢測靈芝孢子油中三萜類物質的含量，反應特異性強，方法穩定，復現性好，方法靈敏度為0.0087/μg，最低檢出限為2μg，加標回收率為98.15％。
文檔編號G01N21/25GK101059430SQ20071002825
公開日2007年10月24日 申請日期2007年5月28日 優先權日2007年5月28日
發明者徐學平, 章衛民, 鍾韓, 陶美華 申請人:廣東省微生物研究所