一種防治兔傳染性鼻炎病藥物緩釋劑及其製備方法

2023-11-01 04:18:02

專利名稱：一種防治兔傳染性鼻炎病藥物緩釋劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及家畜疫病防治技術領域，尤其涉及一種由波氏桿菌及巴氏桿菌感染引發的兔傳染性鼻炎病的防治藥物緩釋劑及其製備方法。
背景技術：
兔傳染性鼻炎病由巴氏桿菌、波氏桿菌混合引起，在幼兔期易與球蟲病混合感染，而成兔以後，則易與萄葡球菌混合感染。兔傳染性鼻炎是家兔經常發生的疾病之一，發病率可達20％～70％。引起應激反應的因素，可能有氣候寒冷、妊娠、併發症和實驗應激等。該病是規模化養殖場常見，又比較頭疼的一種細菌性傳染病；一般為散發或地方性流行，一年四季都有發生。該病的潛伏期不定，急性型的為數小時至2天，慢性型的為5～10天。
兔傳染性鼻炎病以漿液性、粘液性或粘液膿性鼻液為特徵。初期分泌物為漿液性的，較稀薄，隨著病情發展，漸變為漿液粘液性或粘液膿性，較濃稠，鼻黏膜充血、潮紅。由於患兔鼻腔發炎常出現打噴嚏，咳嗽、鼻塞性雜音等症狀，飼餵或運動時加劇。在病兔舍靜聽，常可聽到來自不同方向的噴嚏聲，有的病兔連續打幾次。由於炎症及分泌物刺激鼻黏膜，引起瘙癢，病兔常用兩前爪撓鼻端，滲出物使局部被毛溼潤並失去光澤，粘稠的分泌物黏結兔毛使之成團，並在鼻孔周圍形成結痂。部分兔呼吸受到影響，漸陷於進行性消瘦而造成死亡。由於病兔常抓擦鼻部，可將病菌帶到眼內、耳內或皮下，進而引起化性結膜炎、中耳炎等併發症；當細菌下行到下呼吸道時，可以引起肺炎、膿胸等。迅速致死的急性型以原發性鼻炎為特徵，隨後很快出現發熱症狀，部分鼻炎患兔可能轉為急性敗血症死亡。而粘液膿性分泌物的病兔很少見到自愈，且不易治療。懷孕後期的母兔常常因呼吸困難而死亡。
兔傳染性鼻炎病的傳染源主要是病兔的分泌物，排洩物，排出細菌，帶菌動物本身也是傳染源，若將病兔或帶菌兔引入兔群，平時不表現症狀，但當飼養管理和衛生條件不好，籠舍過分擁擠，氣候驟變，強烈刺激性氣體刺激，長途運輸及其他疾病等應激因素的作用，機體抵抗力降低而引發本病，發病率在60％以上，漸陷於進行性消瘦而造成死亡。特別是糞便的分解，產生大量的氨氣、硫化氫等有害氣體，刺激家兔鼻腔黏膜發炎而誘發本病。傳染性鼻炎主要發生在春秋兩季，這是由於這兩個季節氣溫不穩定、乾燥、寒冷容易誘發家兔患病。傳染性鼻炎的發病率以冬季最高，秋季和春季次之，夏季最低，但四季的差異不顯著。流粘液性或膿性鼻液，鼻炎長期不愈，呼吸加快，食欲不振，逐漸消瘦，病程數周至數月，即開始發生死亡，防治不及時，可造成全群覆滅。
兔傳染性鼻炎發病率因品種與年齡的不同而不同，其中，品種以肉兔最低，皮兔次之，毛兔最高，這主要是由遺傳因素造成的；而年齡，隨著月齡的增加發病率逐漸提高。該病主要可分成鼻炎型與支氣管肺炎型鼻炎型表現鼻黏膜潮紅，附有漿液性或粘液性分泌物質；支氣管肺炎型表現在支氣管內黏膜充血、出血，管腔內有粘液性或膿性分泌物，並在肺部有大小不等、數量不一的膿腫，有時在胸腔漿膜及肝、腎、睪丸等處也有膿腫；此外尚可見化膿性胸膜炎、心包炎。
長期以來，生產上治療兔傳染性鼻炎病的主要藥物與方法是抗生素或磺胺藥進行口服或注射。其中，抗生素類藥卡那黴素每千克體重10～30毫克，每日2次，連用3～4天，肌肉注射；青黴素40萬單位與鏈黴素500毫克聯合注射，或每千克體重用青黴素0.5～1萬單位，每日1次，連續5天肌肉注射；慶大黴素每次1～2萬單位，每日2次，連用3～4天，肌肉注射；氯黴素每千克體重10～25毫克，每日2次，連用3～4天，肌肉注射；鏈黴素每千克體重0.5～1萬單位，每日2次，連用3～4天，肌肉注射；磺胺類藥磺胺嘧啶每千克體重50～200毫克，每日2次，連用5天，肌肉注射；酞醯磺胺噻唑每千克體重200～300毫克，每日2次，連用5天，口服；磺胺甲嘧啶(SM1)片劑每片500毫克，內服，首次量每千克體重200毫克，維持量每千克體重100毫克，每12～24小時1次；磺胺喹噁啉，每噸飼料內加入225克，飼用。但由於抗生素及磺胺類藥的長期大量應用，一方面口服藥和普通針劑藥用量大，代謝快，防治成本高，又費工費時，而且僅有臨時治療作用(一般防治期僅有1～3天)，而無長期持續殺蟲效果，故在應用中需反覆多次或長期服用方能見效；另一方面，長期服用抗生素及磺胺類藥物，必然在兔體內蓄積，加速產生抗藥性，使療效逐步降低，人們食用也極不安全，效果很不理想。因此，養兔業迫切希望有一種長效的防治兔感染性鼻炎病的新型藥物。
據報導(健康網，公眾健康)，阿奇黴素是一種新型的半合成大環內酯類抗生素，該藥具有抗菌譜較廣，對某些細菌表現為快速殺菌作用，口服後吸收迅速、生物利用度高、體內分布廣泛、細胞內游離濃度高(在人體扁桃體、肺、前列腺等組織中濃度可達同期血濃度的10～100倍)，血消除半衰期長(為35～48小時)，不良反應輕、耐受性好等優點。在兒科，可用於治療多種細菌、支原體、衣原體引起的感染，如化膿性鏈球菌引起的急性咽炎、急性扁桃體炎；敏感細菌引起的鼻竇炎、中耳炎、急性支氣管炎；肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌以及肺炎支原體所致的肺炎；沙眼衣原體及非多種耐藥淋病奈瑟菌所致的尿道炎以及敏感細菌引起的皮膚軟組織感染等，效果較好。其不良反應主要是胃腸道反應，如腹痛、腹瀉(稀便)、上腹部不適、噁心、嘔吐等，但發生率明顯較紅黴素低，偶可出現輕至中度腹脹、頭昏、頭痛及發熱、皮疹、關節痛等過敏反應，少數患者可出現一時性中性粒細胞減少、血清轉氨酶升高。一般用量治療中耳炎、肺炎，按每日每千克體重5毫克計算，一日最大量不超過0.25克，頓服，首次劑量加倍；治療咽炎、扁桃體炎，按每日每千克體重12毫克計算，一日最大量不超過0.5克，頓服。又據報導(中國藥品交易網)，治療社區獲得性肺炎成人用量為每次0.4克，每天1次，至少連續用藥2天。繼之換用阿奇黴素口服製劑0.5克/天，7～10天為一療程，但未見有應用阿奇黴素防治兔鼻炎(波氏桿菌及巴氏桿菌)病的資料報導。為此，本發明人首先採用阿奇黴素以40mg/kg體重拌料口服給藥方式，飼餵5天，停10天，試驗2個月，觀察對兔波氏桿菌和巴氏桿菌作了預備性防治效果試驗，明確該藥對兔波氏桿菌和巴氏桿菌均有較好的治療效果；但也發現存在以下問題一是藥物拌料口服給藥方式對大批量飼養場來說雖然方便，但由於其中因兔患病而採食量減少，尤其病情嚴重的病兔甚至停止吃飼料，這就達不到進食有效劑量藥物的要求，也就難以達到治療效果；二是阿奇黴素藥效雖高，但其毒性也較大，因此，在同一飼養群體中經常出現，健康兔因採食量過大而引起中毒甚至死亡，而發病兔則因採食量過小而治療效果較差甚至無效；三是阿奇黴素常規劑型雖有較好的短期治療效果，但無長期持續殺菌效果，一旦停藥又易重複感染波氏桿菌及巴氏桿菌，而長期連續服用該藥，則又必然產生抗藥性的問題；同時，發明人在研製該藥物緩釋劑的過程中，遇到的難題是藥物包合率低，僅71％左右，及在應用試驗中效果不穩定等現象。

發明內容
本發明的目的是針對上述存在的問題，找到一種新的高效殺波氏桿菌及巴氏桿菌藥物，並利用β環糊精能提高藥物溶解性、降低毒性、緩慢釋放藥物，延長藥效等優點，進行優化配比，提供一種用量少，成本低，藥物釋放時間長，低毒，防治效果好，能同時防治兔波氏桿菌及巴氏桿菌或其中任何一種細菌的藥物緩釋劑產品；本發明的另一目的是提出該緩釋劑的製備方法。
本發明目的是通過下述技術方案予以實現一種防治兔傳染性鼻炎病藥物緩釋劑，以阿奇黴素與β環糊精為原料，按重量份1∶1～2配製而成。
所述藥物緩釋劑的優化配方為，阿奇黴素與β環糊精按重量份1∶1.5配製而成。
一種製備防治兔傳染性鼻炎病藥物緩釋劑的方法，按如下步驟進行(1)稱量後，將殺波氏桿菌及巴氏桿菌藥劑阿奇黴素與乙醇，按重量體積比為1克∶7～9毫升混合，攪拌至藥物完全溶解，備用；(2)將β環糊精與蒸餾水，按重量體積比為1克∶0.5～1.5毫升混合，研磨20～40分鐘成糊狀，備用；(3)將步驟(1)阿奇黴素溶液倒入步驟(2)糊狀β環糊精中，攪拌30～60分鐘，在30～40℃溫度下自然蒸發或真空乾燥，粉碎，80～90目過篩，成粉狀緩釋劑；(4)將步驟(3)粉狀緩釋劑分裝，封口即成粉狀緩釋劑產品；(5)將步驟(4)粉狀緩釋劑與生理鹽水按重量體積比為1.6～2.4克∶20毫升配製成緩釋針劑產品。
本發明的有益效果一是通過本方法將殺波氏桿菌及巴氏桿菌藥物阿奇黴素按適當比例包合到β環糊精糖苷鍵環狀結構中，形成超微囊狀包合物，藥物的包合率由以往的71％左右提高到99.7％；使該緩釋劑內能精確定量地包含有按設計要求的藥物含量指標；二是經試驗表明，該緩釋劑按0.5ml/kg體重劑量作皮下肌肉注射，在2個月內對波氏桿菌或巴氏桿菌及兩者混合感染者均有良好的治療與預防效果(見試驗例表1)，一般1～4天即見治療效果，其有效防治期長達2個月而無重複感染，節省防治藥費開支97.5％(按4個療程，每個療程為5天計)；三是該緩釋劑用藥量少，一次注射量(按其中含阿奇黴素20mg/kg體重計)僅是一天一次口服阿奇黴素(40mg/kg體重)用藥量的一半，故可降低阿奇黴素用藥成本97.5％(按1～4個療程，每個療程為5天計)。且緩釋劑安全性高，降低了阿奇黴素原劑型藥物的毒副作用，當注射阿奇黴素緩釋劑的藥量大於原口服藥量1倍時，兔仍無任何副反應(見試驗例表2)；四是使用方便，生產上易於推廣應用；五是促進兔生長，注射用藥後體重明顯增加，防治效果見試驗例表3。
具體實施例方式
通過以下實施例將對本發明作進一步的詳細說明，但這並不是對本發明的任何意義上的具體限止阿奇黴素浙江金華立信醫藥化工有限公司生產，含量99％；β環糊精陝西省禮泉化工有限實業公司生產；乙醇杭州大方化學試劑廠生產，含量100％。
實施例1(防治兔傳染性鼻炎病藥物緩釋劑製備方法1)(1)將粉狀殺波氏桿菌及巴氏桿菌藥劑阿奇黴素50克加入無水乙醇400毫升中，攪拌至藥物完全溶解成透明液體；(2)將粉狀β環糊精75克加入蒸餾水50毫升中，研磨20分鐘呈糊狀；(3)將阿奇黴素溶液倒入糊狀β環糊精中，攪拌30分鐘後，置30～40℃下直至乾燥，粉碎後，80～90目過篩，即成粉狀緩釋劑124.8克；(4)將粉狀緩釋劑按2克/每瓶分裝，封口即成粉狀緩釋劑產品。
(5)將每瓶粉狀緩釋劑加20ml生理鹽水，搖至藥物全部溼潤成懸浮液，即為緩釋劑針劑。
實施例2(防治兔傳染性鼻炎病藥物緩釋劑製備方法2)(1)將粉狀殺波氏桿菌及巴氏桿菌藥劑阿奇黴素50克加入無水乙醇350毫升中，攪拌至藥物完全溶解成透明液體；(2)將粉狀β環糊精50克加入蒸餾水25毫升中，研磨30分鐘呈糊狀；(3)將阿奇黴素溶液倒入糊狀β環糊精中，攪拌40分鐘後，置30～40℃下直至乾燥，粉碎後，80～90目過篩，即成粉狀緩釋劑99.8克；(4)將粉狀緩釋劑按1.6克/每瓶分裝，封口，即成粉狀緩釋劑產品；(5)將每瓶粉狀緩釋劑加20ml生理鹽水，搖至藥物全部溼潤成懸浮液，即為緩釋劑針劑。
實施例3(防治兔傳染性鼻炎病藥物緩釋劑製備方法3)(1)將粉狀殺波氏桿菌及巴氏桿菌藥劑阿奇黴素50克加入無水乙醇450毫升中，攪拌至藥物完全溶解成透明液體；(2)將粉狀β環糊精100克加入蒸餾水150毫升中，研磨40分鐘呈糊狀；(3)將阿奇黴素溶液倒入糊狀β環糊精中，攪拌60分鐘後，置30～40℃下直至乾燥，粉碎後，80～90目過篩，即成粉狀緩釋劑149.7克；(4)將粉狀緩釋劑按2.4克/每瓶分裝，封口，即成粉狀緩釋劑產品；(5)將每瓶粉狀緩釋劑加20ml生理鹽水，搖至藥物全部溼潤成懸浮液，即為緩釋劑針劑。
試驗例(緩釋劑與常規藥物防治兔傳染性鼻炎病藥效對比試驗)選擇由波氏桿菌及巴氏桿菌感染引起鼻炎，並伴有明顯臨床症狀的病兔(40～50日齡)30隻，隨機分成3組，每組10隻，分開單個飼養。分設為緩釋劑注射組採用實施例1、2或3所製備緩釋劑針劑按0.5ml/kg體重注射，其中所含阿奇黴素藥量為20mg/kg體重；口服組阿奇黴素用藥量為40mg/kg體重拌料，每個療程口服5天，每天飼餵2次，停10天；不用藥對照組。在試驗前(0天)及試驗中(2、6、10、20、30、40、50、60天)比較3組試驗兔防治效果，記錄試驗兔的鼻孔周圍被毛的溼潤程度；記錄試驗兔的鼻孔分泌物的性質、數量；記錄試驗兔的食慾情況和吃料的多少及精神狀況；記錄呼吸次數，試驗中如果有死亡的病兔立即解剖觀察病理變化。
細菌染色鏡檢將死兔的心血及肝臟、脾臟分別塗片作瑞氏染色後在顯微鏡下觀察可見有兩圓和周邊著色較深，中央著色較淺的短桿菌革蘭氏為陰性。
細菌培養將死兔的心血及肝臟、脾臟搗碎物分別接種於普通瓊脂，血液瓊脂，和普通肉湯培養基上在37度恆溫下培養，其結果是14～16小時在血液瓊脂培養基上生長出灰白色、光滑的圓形菌落，16～18小時後普通瓊脂培養基上長出灰白色，光滑溼的細小的菌落，16～18小時在普通肉湯培養基的試管底部有沉澱物，將這幾種培養基上的菌落和肉湯培養基的試管渾濁物分別塗片染色，在顯微鏡觀察到細菌形態與前者相同為支氣管波氏桿菌和巴氏桿菌。
藥效結果的判定觀察鼻孔周圍被毛的變化，鼻孔分泌物的性質和數量，食慾和精神狀態，呼吸次數和剖解變化為指標。症狀全部消除，無鼻液、無噴嚏、無咳嗽，無鼻黏膜炎症消失判為轉陰；症狀明顯減輕，幾乎無鼻液、無噴嚏、鼻黏膜炎症比治療前明顯減輕，判為好轉。症狀減輕不明顯，判為療效不明顯或無效。其結果見表1、表2、表3、表4。
由表1可見緩釋劑組注射後第2天重症兔部分被毛開始乾燥，乾燥的範圍逐漸增加；輕症兔完全乾燥。口服組第2天重症兔鼻孔周圍的被毛較溼，第6天部分被毛開始乾燥，乾燥的範圍逐漸增加；輕症兔部分被毛開始乾燥。康復的兔只基本乾燥或完全乾燥，外觀已與健康兔相同；不給藥的對照組在試驗中鼻孔周圍的被毛溼度逐漸增加，並且向周圍的被毛蔓延，並發生纏結。
表1鼻孔周圍被毛的變化

表2鼻孔分泌物的性質和變化情況

從表2看出，給藥組則由大量漿液性分泌物逐漸減少並完全消失；緩釋劑組分泌物減少較明顯，並且很快消失；口服組分泌物出現減少，但效果較慢，實驗結束，只有少數實驗兔的分泌物完全消失，仍有部分病兔有少量分泌物；不給藥組分泌物由漿液性變為黏液性嚴重者變為膿性。
表3治療效果觀察

由表3可知緩釋劑組全部轉陰，康復率達100％，其效果最好；口服組有9隻兔轉陰，康復率達90％；不用藥組未見兔好轉，康復率為0。
表4食慾和精神狀態變化情況

從表4看，沒有給藥前緩釋劑組、口服組及不用藥組的兔均食慾不佳，精神沉鬱。用緩釋劑注射後第2天，兔食慾精神逐漸變好，並變為正常，佔100％。口服組用藥第6天，兔食慾精神逐漸變好，並變為正常，佔100％。而不用藥組的兔一直食慾不佳，精神沉鬱，於第30～50天陸續死亡3隻兔。
剖解結果不用藥組有3隻兔死亡，剖解病變主要在呼吸系統，鼻腔內積有大量鼻滴，為漿液性，黏膜充血，氣管內有分泌物。肺有大片出血斑，部分出現壞死。肝有許多灰白色壞死小點。心、腎、膀胱等處均有充血或小點出血。
試驗結果表明緩釋劑防治兔鼻炎有良好的療效，可以使病兔康復，從而阻止疾病的傳播。
權利要求
1.一種防治兔傳染性鼻炎病藥物緩釋劑，其特徵在於以阿奇黴素與β環糊精為原料，按重量份1∶1～2配製而成。
2.按權利要求1所述的藥物緩釋劑，其特徵在於阿奇黴素與β環糊精按重量份1∶1.5配製而成。
3.一種製備權利要求1所述藥物緩釋劑的方法，其特徵在於按以下步驟進行(1)稱量後，將阿奇黴素與無水乙醇，按重量體積比為1克∶7～9毫升混合，攪拌至藥物完全溶解，備用；(2)將β環糊精與蒸餾水，按重量體積比為1克∶0.5～1.5毫升混合，研磨20～40分鐘成糊狀，備用；(3)將步驟(1)阿奇黴素溶液倒入步驟(2)糊狀β環糊精中，攪拌30～60分鐘，在30～40℃溫度下自然蒸發或真空乾燥，粉碎，80～90目過篩，成粉狀緩釋劑；(4)將步驟(3)粉狀緩釋劑分裝，封口即成粉狀緩釋劑產品；(5)將步驟(4)粉狀緩釋劑與生理鹽水按重量體積比為1.6～2.4克∶20毫升配製成緩釋針劑產品。
全文摘要
本發明公開了一種防治兔傳染性鼻炎病藥物緩釋劑及其製備方法，屬於家畜疫病防治技術領域。該劑以阿奇黴素與β環糊精為原料，按重量份1∶1～2配製而成；方法是先把阿奇黴素與無水乙醇按重量體積比為1克∶7～9毫升混合，攪拌，溶解；把β環糊精與蒸餾水按重量體積比為1克∶0.5～1.5毫升混合，研磨成糊狀；再把兩者相混、攪拌、包合、乾燥、粉碎，即成緩釋粉劑產品；應用時配成針劑。該劑具有用量少(按0.5ml/kg體重劑量注射)，成本低，治療見效快(1～4天)，防治時間長(二個月左右)，低毒，效果好等特點，能同時防治兔波氏桿菌和/或巴氏桿菌，可在兔傳染性鼻炎病的防治中推廣應用。
文檔編號A61P31/00GK1943587SQ20061005392
公開日2007年4月11日 申請日期2006年10月23日 優先權日2006年10月23日
發明者張雪娟, 項美華, 付媛, 盧福莊, 楊玉煥, 馮尚連, 程菊芬, 徐海風 申請人:浙江省農業科學院