檢測心腦疾病遺傳易感性的試劑盒的製作方法
2023-12-09 06:08:56
專利名稱：檢測心腦疾病遺傳易感性的試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明涉及分子生物學和醫學領域，更具體地說，本發明涉及一種檢測心腦疾病遺傳易感性的試劑盒， 通過對心腦疾病遺傳風險相關的基因進行檢測分析來評估個體心腦疾病遺傳易感性。
背景技術：
基因檢測分析技術已迅速成為預測人類疾病健康的重要工具。基因技術能將人類的健康狀態和生理病 症、遺傳突變的因素、疾病的傾向和狀態等關聯起來。DNA序列由於鹼基插入、缺失、錯配引發的遺傳因 子突變，以及個體DNA表達式的上下調節等都是和健康狀態及疾病的機理有關的生物信息。
例如，"老年性痴呆"是一種出現於老年期的持續性智能損害。遺傳基因是老年性痴呆的重要風險因 素，其中AP0E基因e4亞型與老年性痴呆患病風險密切相關。如果攜帶2個拷貝AP0E e4等位基因(e4/ e4)， 便屬於高風險人群。在沒有採取預防措施的情況下，65歲以下患老年性痴呆的可能性是60%到75%。而相 比之下，在AP0E基因e4等位基因檢測結果呈陰性的人群中，老年性痴呆的發病危險不足10%。被測試者 可以根據基因檢測結果，採取積極預防措施，使發病年齡至少可以推遲10年。
又如，研究顯示P0N1基因的Glnl92Arg多態性與冠心病嚴重性、冠狀動脈粥樣硬化進展程度、血脂 水平和降血脂藥物治療效果都有相關。通過檢測中國北方地區49例老年冠心病患者和38例健康老年對照 者的P0N1的Gln/ Argl92基因多態性，研究發現冠心病組與健康組比較各基因型分布差異具有顯著性意 義。B等位基因在冠心病組比例為0. 56，在健康組為0. 37,冠心病組的B等位基因比例明顯高於健康組。 B等位基因是中國北方地區冠心病發病的危險因素。說明P0N1基因Gln/Argl92遺傳多態性與中國北方地 區冠心病發病明顯相關。通過檢測P0N1基因的Gln/ Argl92遺傳多態性能夠得到被檢測者的冠心病易感 性，可以根據檢測結果儘早採取預防措施，減小發病的可能性。
再如，p53突變和DNA甲基化在一定程度上預示了直腸癌的病理存在，進行基因檢測可以在被測者身 體尚未顯現任何症狀的情況下發現早期直腸癌，及早採取措施進行治療，延長生命。ALDH2基因的rs671 多態性改變(G/A)缺陷導致機體對乙醛的代謝能力下降，引起飲酒的不適感，臉紅綜合症等，容易導致 酒精中毒。通過基因檢測分析可以預知個人是否會發生酒精中毒情況，可以進行提前預防。相對於已經發 生酒精中毒再進行補救，基因檢測可以更好地保障生命健康。同樣對於一些藥物的使用，基因檢測可以得 知個體對藥物藥效與毒副作用的敏感性，基因檢測的結果可以作為醫師用藥的參考。
發明內容
基於基因檢測分析技術可用來評估個體心腦疾病遺傳易感性的基礎上，本發明提供一種檢測心腦疾病 遺傳易感性的試劑盒。
本發明所述的試劑盒主要用於檢測與心腦疾病遺傳易感性相關的基因位點。通過檢測這些基因位點， 可得到被檢人心腦疾病遺傳易感性的情況，並向被檢人提供個體化健康指導報告。 該試劑盒包括
檢測ABCA1、 ACE、 ADIPOQ、 AGT、 AP0B、 AP0E、 AT1R、 CYP11B2、 EN0S、 LEP、 LPL、 MTHFR、 P0N1、 PPARG、 S0D3、 UCP2和VDR基因上18個SNP多態性基因型的特異性引物對及特異性螢光探針對；
螢光定量PCR反應組件(包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反應緩衝液、去離子水等)。
本試劑盒中所述的特異性引物對是指針對ABCA1、 ACE、 ADIP0Q、 AGT、 AP0B、 AP0E、 AT1R、 CYP11B2、 EN0S、 LEP、 LPL、 MTHFR、 P0N1、 PPARG、 S0D3、 UCP2和VDR基因上18個SNP位點而設計，能特異性擴增 出包含這些SNPs位點的DNA片段的引物對。設計這類引物對是本領域技術人員能夠輕易完成的。特異性 引物對可用常規的合成技術進行合成。
本試劑盒中所述的特異性螢光探針對是指針對ABCA1、 ACE、 ADIP0Q、 AGT、 AP0B、 AP0E、 AT1R、 CYP11B2、 EN0S、 LEP、 LPL、 MTHFR、 P0N1、 PPARG、 S0D3、 UCP2和VDR基因上18個SNP位點而設計，能通過螢光定 量PCR技術特異性檢測出這些SNPs位點基因型的Taqman探針對。設計這類探針是本領域技術人員能夠輕 易完成的。特異性螢光探針對可用常規的探針合成技術進行合成。所有可用於螢光定量PCR法檢測本發明中所述的18個SNPs位點的探針均在本發明範圍內。
具體實施例方式
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規 條件，或按照廠商所建議的條件。
實施例l.檢測試劑盒的使用 步驟l: DNA模板的抽取
用矽膠吸附法抽提口腔上皮細胞的基因組DNA。 步驟2:螢光定量PCR反應
使用檢測試劑盒，每個SNP位點分別進行一次獨立的螢光定量PCR反應，每個反應的體系為總體積 lOnl,包含濃度為20ng/pl的DNA模板2pl、 ljd 10 X螢光定量PCR反應緩衝液、0. 25mM dNTP混合 液、0.6jil 25mM MgCh溶液、0.025^1 (5units/nl) Taq DNA聚合酶、20-的引物每一條各0.225^1、 10pM的螢光探針每一條各0. 25^1 ，去離子水5. 325nl 。
在ABI9700型PCR擴增儀上進行反應，反應條件為50。C、 2分鐘，95°C、 IO分鐘，進行60個循環的 95°C、 30秒，60°C、 l分鐘。反應結束後在ABI7900型螢光定量PCR儀上讀取樣品螢光量。
步驟3: SNP基因型分析 '
熟悉螢光定量PCR技術的本領域技術人員能夠通過辨識螢光定量PCR儀上顯示的最終樣品螢光量，根 據不同序列探針的不同螢光信號的強弱即可確定所檢測的SNP位點的基因型。
實施例2.進行心腦疾病遺傳易感性檢測的服務 步驟l: DNA提取
由醫院檢驗科醫師指導被檢者使用口腔採樣拭進行口腔上皮細胞取樣，採用矽膠吸附法進行口腔上皮 細胞的DNA抽提。
步驟2:基因分型檢測
使用本發明提供的試劑盒，對被檢測者基因組DNA的ABCA1、 ACE、 ADIPOQ、 AGT、 APOB、 APOE、 AT1R、 CYP11B2、 ENOS、 LEP、 LPL、 MTHFR、 P0N1、 PPARG、 S0D3、 UCP2和VDR基因上18個SNP位點分別進行螢光 定量PCR檢測，確定這些SNP位點的基因型。
步驟3:心腦疾病遺傳易感性的分析
通過對被檢測者SNPs基因型的分析，出具心腦疾病遺傳易感性的分析報告單，並由醫師向被檢者詳 細說明和解讀心腦疾病遺傳易感性分析報告單。
權利要求
1.一種檢測心腦疾病遺傳易感性的試劑盒，其特徵在於包括同時檢測ABCA1、ACE、ADIPOQ、AGT、APOB、APOE、AT1R、CYP11B2、ENOS、LEP、LPL、MTHFR、PON1、PPARG、SOD3、UCP2和VDR基因上18個SNP多態性基因型的特異性引物對及特異性螢光探針對、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、螢光定量PCR反應緩衝液、去離子水。
2. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於所述的特異性引物對是指針對ABCA1、 ACE、 ADIP0Q、 AGT、 AP0B、 AP0E、 AT1R、 CYP11B2、 EN0S、 LEP、 LPL、 MTHFR、 P0N1、 PPARG、 S0D3、 UCP2和VDR基因上 18個SNP位點而設計，能特異性擴增出包含這18個SNPs位點的DNA片段的引物對。
3. 根據權利要求1所述的試劑盒,其特徵在於:所述的特異性螢光探針對是指針對ABCA1、ACE、ADIP0Q、 AGT、 AP0B、 APOE、 AT1R、 CYP11B2、 EN0S、 LEP、 LPL、 MTHFR、 P0N1、 PPARG、 SOD3、 UCP2禾卩VDR基因上 18個SNP位點而設計，能通過螢光定量PCR技術特異性檢測出這18個SNPs位點基因型的Taqman探針對。
全文摘要
本發明公開了一種檢測心腦疾病遺傳易感性的試劑盒。該試劑盒包括同時檢測ABCA1、ACE、ADIPOQ、AGT、APOB、APOE、AT1R、CYP11B2、ENOS、LEP、LPL、MTHFR、PON1、PPARG、SOD3、UCP2和VDR基因上18個SNP多態性基因型的特異性引物對及特異性螢光探針對、用於螢光定量PCR檢測的常規組件等。本發明的試劑盒通過同時檢測與心腦疾病遺傳易感性密切相關的18個單核苷酸多態性位點基因型來評估心腦疾病遺傳易感性。
文檔編號G01N21/00GK101354338SQ200710044280
公開日2009年1月28日 申請日期2007年7月27日 優先權日2007年7月27日
發明者馮哲民, 鄒祖燁 申請人:上海主健生物工程有限公司