一種靈芝孢子粉多糖及其製備方法
2023-12-08 18:02:11 1
一種靈芝孢子粉多糖及其製備方法
【專利摘要】本發明提供了一種靈芝孢子粉多糖及其製備方法,該靈芝孢子粉多糖是由如下方法製備得到的:靈芝孢子粉用無水乙醇提取,收集沉澱再用沸水提取,收集上清液;上清液減壓濃縮後進行醇沉,即得到靈芝孢子粉多糖。本發明得到的靈芝孢子粉多糖具有很好的保溼效果。
【專利說明】一種靈芝孢子粉多糖及其製備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及食用菌提取領域,具體的說涉及一種靈芝孢子粉多糖及其製備方法。
【背景技術】
[0002] 靈芝(Ganoderma lucidum)為多孔菌科靈芝屬真菌,是一種具有扶正固本的傳統 珍貴藥材。靈芝孢子粉是靈芝生長成熟期,從靈芝菌褶中彈射出來的極其微小的卵形生殖 細胞。隨著靈芝栽培技術的發展,靈芝孢子粉的產量越來越高,甚至超過子實體的產量。多 糖是孢子粉中的主要活性成分之一,近十幾年對靈芝孢子粉的功效也進行了大量的研究, 發現具有多種生物活性,如提1?機體免疫力,提1?機體耐缺氧能力,消除自由基,抑制腫瘤、 抗福射等。
【發明內容】
[0003] 本發明首先提供了一種靈芝孢子粉多糖的製備方法,該方法包括如下步驟:
[0004] 靈芝孢子粉用無水乙醇提取,收集沉澱再用沸水提取,收集上清液;上清液減壓濃 縮後進行醇沉,即得到靈芝孢子粉多糖。
[0005] 具體的說,本發明的一種靈芝孢子粉多糖的製備方法,包括如下步驟:
[0006] 1)靈芝孢子粉粗多糖的提取:靈芝孢子粉中加入8-12倍重量的無水乙醇中,煮沸 並保持微沸l_3h,離心收集沉澱;沉澱加入8-12倍重量的蒸餾水,煮沸並保持微沸l-3h,離 心,收集上清液;
[0007] 2)多糖粗提液的濃縮:上清液減壓濃縮至料液比(質量/體積)為1:0· 5-1. 5 ;
[0008] 3)乙醇沉澱:向濃縮液中加入無水乙醇,至乙醇與濃縮液體積比達到56% -57%, 室溫靜置1小時,離心,收集沉澱,加蒸餾水溶解凍幹,即得粗多糖。
[0009] 本發明還提供了由上述方法製備得到的靈芝孢子粉多糖。
[0010] 本發明製備得到的粗多糖得率約為1.5%,多糖含量達到79%以上,蛋白質含量 低。HPSEC-MALLS-RI分析顯示粗多糖主要有一個糖峰,單糖分析結果顯示粗多糖主要由葡 萄糖組成。製備得到的靈芝孢子粉多糖具有高的保溼活性,具體可用於保溼的化妝品類和 改善老年人體質的保健品類等。本發明的靈芝孢子粉多糖的製備方法是一種簡便、高效、成 本低、多糖得率及含量高、適合規模化生產的方法。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0011] 圖 1 HPSEC-MALLS-RI 分析圖譜
[0012] 圖2高效陰離子色譜檢測結果
[0013] 圖3保溼率測定效果(其GLW1代表實施1製備得到的靈芝孢子粉多糖;GLW2代 表實施2製備得到的靈芝孢子粉多糖;HyaluronateAcid代表透明質酸。)
【具體實施方式】:
[0014] 靈芝孢子粉來源:浙江龍泉基地的滬農靈芝1號採收的孢子粉。
[0015] 實施例1 :
[0016] 1、靈芝孢子粉多糖的提取:稱取200. 9g靈芝孢子粉,加入2000mL無水乙醇,加熱 至沸騰,保持微沸120分鐘,9700g離心20min。沉澱重複上述步驟,再提取1次,9700g離心 20min。沉澱加入2000mL蒸饋水,加熱至沸騰,保持微沸120分鐘,9700g離心20min,沉澱 重複上述步驟,再提取1次,9700g離心20min,合併上清液。
[0017] 2、多糖粗提液的濃縮:上清液濃縮至220mL。
[0018] 3、乙醇沉澱:向濃縮液中緩慢加入無水乙醇,邊加邊攪拌,至乙醇含量達到56%, 室溫靜置1小時,離心去除醇沉上清,收集沉澱,蒸餾水溶解後放入冷凍乾燥機中冷凍幹 燥,即得多糖幹品。
[0019] 製備所得多糖得率為1.51%,多糖含量為79. 79%。
[0020] 分析天平稱量多糖幹品的重量。按以下公式計算粗多糖得率。
[0021] /〇/Λ 多糖的重量§) infW 稱取樣品重量?)
[0022] 多糖含量的檢測:
[0023] 多糖含量測定:用苯酚一硫酸法測定,精密稱取本品5mg置2ml離心管中,加蒸餾 水lml,溶解後,離心。上清液稀釋50倍,精密吸取樣品1.0ml,置15ml試管中,分別加入苯 酚、硫酸試劑,充分反應後在490nm處測定吸光度值,以葡聚糖為標準品計算樣品的多糖含 量。本工藝所得靈芝破壁孢子粉多糖含量達到79%以上。
[0024] 實施例2 :
[0025] 1、靈芝孢子粉多糖的提取:稱取90. 17g靈芝孢子粉,加入900mL無水乙醇,加熱至 沸騰,保持微沸120分鐘,9700g離心20min。沉澱重複上述步驟,再提取1次,9700g離心 20min。沉澱加入2000mL蒸饋水,加熱至沸騰,保持微沸120分鐘,9700g離心20min,沉澱 重複上述步驟,再提取1次,9700g離心20min,合併上清液。
[0026] 2、多糖粗提液的濃縮:上清液濃縮至65mL。
[0027] 3、乙醇沉澱:向濃縮液中緩慢加入無水乙醇,邊加邊攪拌,至乙醇含量達到56%, 室溫靜置1小時,離心去除醇沉上清,收集沉澱,蒸餾水溶解後放入冷凍乾燥機中冷凍幹 燥,即得多糖幹品。
[0028] 製備所得多糖得率為1.56%,多糖含量為79.67%。
[0029] 實施例3
[0030] 1、樣品製備:稱取實施例2中多糖2mg,加入lmLHPLC流動相,充分溶解,13200r/ min離心15min,上清液經0. 25 μ m的水相微孔膜過濾後進行HPSEC-MALLS-RI分析。
[0031] 2、色譜分析條件:分析柱選日本東洋曹達TOSOH TSK PWXL6000和TSK PWXL3000 凝膠色譜柱串聯後分析,流動相為含〇· 〇5mol/L的NaH2P04和0· 15mol/L的NaN03溶液(pH =7,0.02%疊氮鈉),流速為0.5111171^11,色譜柱溫用柱溫箱恆定在351:;雷射檢測器光源 波長選用623. 8nm。多糖在溶液中的折光指數增量(dn/dc)按照0. 146mL/g計算。
[0032] 3、分子量計算:使用 Astra (version6. 1. 1,Wyatt Technology, Santa Barbara,CA)數據分析軟體對光散射數據進行採集和分析,計算分子量和其他多糖分子特 性。
[0033] HPSEC-MALLS-RI分析圖譜如圖1所示,實施例1的靈芝孢子粉多糖組分主要含有 1個大峰,這個峰的重均分子量7. 312X 105Da。
[0034] 實施例4:
[0035] 1、樣品製備:稱取實施2中的孢子粉多糖2mg加入帶蓋玻璃瓶,加入3mL 2mol/L 的三氟乙酸,110°C油浴4h,冷卻至室溫,50°C氮吹儀吹乾,再加甲醇吹乾,重複兩次至無酸 味,用2mL超純水衝洗玻璃瓶於離心管中,13200r/min離心lOmin,對上清液上高效陰離子 色譜(HPAEC)分析。
[0036] 2、色譜條件:Dionex 公司色譜柱 CarboPac?PA20 (3X 150nm);流動相 0· 8% NaOH 溶液(pH = 12);時間 30min ;柱溫 30°C ;流速 0· 45mL/min ;進樣量 25ul。
[0037] 經高效陰離子色譜檢測所得單糖組成如圖2所示。多糖組分由海藻糖、半乳糖、葡 萄糖和甘露糖四種單糖組成,其中葡萄糖所佔比例最高,百分摩爾比為94. 53%,而海藻糖、 半乳糖和甘露糖糖比例很低。
[0038] 實施例5 :
[0039] 體外保溼功效測定:通過測定物質的保溼效果來測定實施例1和實施例2的靈芝 破壁孢子粉多糖的保溼效果,以透明質酸為對照。將由飽和(nh 4)2so4水溶液作為相對溼度 (R.H.)為81%的乾燥器和由飽和K 2C03水溶液作為R.H. = 43%的乾燥器置於20°C恆溫環 境中,精確稱取1. 〇g各種提取物乾燥試樣置於直徑為3cm的結晶皿中,放在81 %的乾燥器 內,48h後吸溼後的試樣繼續放置43 %的乾燥器中24h,測定放置前後試樣的重量差,由式 (1)求出保溼率,H0為試樣含水重量,Hn為放置後試樣含水重量。
[0040] 保溼率(% ) = 100Hn/H0 (1)
[0041] 結果顯示實施例1和實施例2的靈芝破壁孢子粉多糖均具有較好的保溼效果。
【權利要求】
1. 一種靈芝孢子粉多糖的製備方法,該方法包括如下步驟: 靈芝孢子粉用無水乙醇提取,收集沉澱再用沸水提取,收集上清液;上清液減壓濃縮後 進行醇沉,即得到靈芝孢子粉多糖。
2. 根據權利要求1所述的一種靈芝孢子粉多糖的製備方法,包括如下步驟: 1) 靈芝孢子粉粗多糖的提取:靈芝孢子粉中加入8-12倍重量的無水乙醇中,煮沸並保 持微沸l_3h,離心收集沉澱;沉澱加入8-12倍重量的蒸餾水,煮沸並保持微沸l-3h,離心, 收集上清液; 2) 多糖粗提液的濃縮:上清液減壓濃縮至料液比為1 :0. 5-1. 5 ; 3) 乙醇沉澱:向濃縮液中加入無水乙醇,至乙醇與濃縮液體積比達到56% -57%,室溫 靜置1小時,離心,收集沉澱,加蒸餾水溶解凍幹,即得粗多糖。
3. 根據權利要求1或2的製備方法製備得到的靈芝孢子粉多糖。
【文檔編號】A61K8/73GK104193840SQ201410374769
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年7月31日 優先權日:2014年7月31日
【發明者】唐慶九, 於華崢, 張勁松, 劉豔芳, 周帥, 張忠, 唐傳紅 申請人:上海市農業科學院, 上海百信生物科技有限公司