液體白陶土aptt試劑的製備方法
2023-12-08 22:29:46 1
專利名稱：液體白陶土aptt試劑的製備方法
技術領域：
本發明涉及臨床診斷試劑，具體涉及一種液體白陶土活化部分凝血活酶(APTT)試 劑的製備方法，該方法還包括APTT試劑的主要組成部分。
背景技術：
開展凝血實驗對臨床各科的疾病診斷具有重要意義，在血栓與止血檢測指標中，活化 部分凝血活酶時間(APTT)是檢測內源性凝血途徑凝血因子異常的一項很有價值的篩選 試驗，廣泛用於出血疾病的初篩診斷，肝素抗凝治療的監測，狼瘡抗凝因子的檢測，過篩 測定內源途徑凝血因子的缺陷，如因子VD、 VI、 IX、 XI、激肽釋放酶原(PK)、高分子量 激肽原(HMWK)以及纖維蛋白原等。
活化部分凝血活酶時間(APTT)原理是將待測血漿加入APTT試劑，37C混勻預溫一 定時間，在鈣離子參與下，激活內源性凝血系統，使纖維蛋白原轉變為不溶性纖維蛋白， 測定凝固所需的時間，即為待測血漿的活化部分凝血活酶時間。常用的激活劑有硅藻土(商 品名Celite)、白陶土、 二氧化矽微粒、鞣化酸(Ellagicacid)等。不同的部分凝血活酶、 不同的激活劑和不同的激活時間對各種凝血因子缺陷、對肝素和對狼瘡抗凝物質的敏感性 相差很大，如白陶土對凝血因子最敏感、鞣花酸對狼瘡抗凝物質敏感性最高。
APTT測定過程受多種因素的影響，其中試劑的質量是最關鍵因素。由於目前國內 APTT試劑大多為凍乾粉製劑，普遍存在產品質量不穩定、敏感性差的問題，致使檢測結 果不穩定，不同的臨床檢驗實驗室之間測得的結果難以比較，因此目前臨床實驗室所使用 的試劑絕大部分為進口產品，價格昂貴。另一方面，由於液體製劑在使用的過程中不需復 溶，不存在因所用水的質量或體積差異給測定結果造成的誤差，有利於測定標準化的實現， 因此成為APTT試劑的發展方向。
發明內容
(一)發明目的
本發明的目的是提供一種具有敏感性高、使用方便、實驗誤差小、穩定性強、兼容性 好的APTT試劑的製備方法，最終目的是將應用該方法製成的檢測試劑在臨床檢驗上廣泛 應用，使APTT檢驗實現標準化。20 (二) 發明的優勢
本發明採用白陶土為激活劑，製備新型液體白陶土 APTT檢測試劑，擴大了對凝血因子缺乏和抗凝物質篩選的範圍。液體試劑具有使用方便的優點，不需復溶，避免各實驗室使用蒸餾水不同、復溶體積不準確而造成的測定偏差；試劑穩定性強，開瓶後37'C能穩定30天以上；同時，該試劑兼容性強，可滿足使用不同型號血凝儀的檢測需要。
(三) 發明內容詳述
本發明的特徵在於由液體白陶土、磷脂、緩衝液和穩定劑製備而成。液體APTT試劑中各試劑的終濃度依次為0.1%白陶土， 0.2%磷月旨，20mMpH7.5Tris-HCI， 0.5%聚乙二醇，1%明膠，0.1%疊氮鈉。
具體實施例方式
實施例一液體白陶土 APTT試劑的製備
稱取l.Og白陶土溶於1000mL20mMpH7.5 Tris-HCI緩衝液中，攪拌30min，直到整個液體呈現均一白色懸濁液，然後加入2.0g磷脂，混合均勻，37。C保溫lh，最後按比例加入穩定劑(由0.5%聚乙二醇，1%明膠，0.1%疊氮鈉配製而成)，混勻，即為液體白陶土 APTT試劑。該試劑配製過程中，37'C保溫時間以及穩定劑的組成對該試劑的穩定性影響較大，白陶土的添加量則影響該試劑的敏感性。
製備液體白陶土 APTT試劑主要技術指標如下
1. 外觀液體白陶土 APTT試劑為白色懸濁液，檢測正常血漿活化部分凝血活酶時間值為24.6~36.8s。
2. 試劑重複性同一瓶試劑重複測定同一血漿樣品，所測結果變異係數小於5%。
3. 試劑批間差不同瓶試劑測定同一血漿樣品，所測結果變異係數小於8%。
4. 試劑穩定性在2" 8'C存放不少於18個月。實施例二液體白陶土 APTT試劑的穩定性檢測
本發明的穩定性檢測包括開封後穩定性、模擬運輸條件穩定性、未開封加速破壞試驗、長時穩定性試驗。
開封後穩定性實驗結果顯示，60天之內正常質控血漿測值在正常值範圍內，且變化不大，異常質控血漿偏差在5%以內，開封後置於25。C， 37。C條件下穩定30天以上。
高溫運輸條件下，10天之內正常質控血漿測值在正常值範圍內；異常質控血漿偏差在5%以內，與進口試劑相當。37。C加速破壞條件下，正常質控血漿測值在l個月保持基本穩定，處於正常值範圍； 異常質控血漿測值變化趨勢與正常質控血漿基本相同，因此在37'C加速破壞條件下，本 試劑可以穩定l個月，與進口試劑穩定性具有可比性。
表1 37'C加速破壞實驗長島-APTT穩定性檢測
37 。C IG存時間(天)正常質控血漿L-l(s)異常質控血漿L-l(s)
127.280.5
26.181.3
1025.777.7
1527.481.7
2027.586.6
2526.780.4
3027.180.4
在2-8'C條件下將該試劑貯存18個月，每隔一個月對該試劑做穩定性檢測，檢測儀器 為ACL200血凝儀，用與儀器配套的市售的APTT試劑做對照，所用血漿為太平洋公司的 正常質控血漿L-1，檢測結果如表2所示。
表2本發明液體APTT與市售APTT試劑在2-8。C穩定性比較
2-8 。C正常質控血漿L-l(s)5C存時間(月)市售APTT長島-APTT
127.827.6
228.829.0
328.027.8
429.527.9
28.429.1
627.129.1
729.427.9
829.728.2
929.327.9
1029.429.0
1128.627.6
1228.427.9
1328.728.3
1427.929.1
1528.428.8
1628.529.2
1729.129.3
1829.529.0
5表2表明，本發明所製備的液體白陶土 APTT試劑在2-8'C條件下將該試劑貯存18個月，APTT所檢測的質控血漿值均處於正常範圍內，試劑穩定性強，與市售APTT試劑的相關性良好。
綜上對以上各技術指標的考察結果證明，本發明方法生產的試劑操作簡單、使用方便、敏感性好，穩定性強，與國外APTT試劑具有可比性，適合臨床應用，可作為新一代標準化PT試劑替代進口試劑。
權利要求
1.一種液體白陶土活化部分凝血活酶(APTT)試劑的製備方法，其特徵在於它是由激活劑、磷脂、緩衝體系和穩定劑組成。
2. 按權利要求l所述方法，其特徵在於以白陶土為激活劑，最適濃度為0.1%。
3. 按權利要求l所述方法，其特徵在於磷脂最適濃度是0.2%。
4. 按權利要求1所述方法，其特徵在於緩衝液系由Tris-HCI組成，濃度為20~40mM，pH7.4~ pH8.0。
5. 按權利要求4所述方法，其特徵在於Tris-HCI緩衝液的最適濃度為20mM，最適pH為7.5。 ，
6. 按權利要求1所述方法，其特徵在於穩定劑由下述原料製成聚乙二醇0.4~1.0%，明膠0.8~1.5%，疊氮鈉0.1~0.5%。
7. 按權利要求6所述方法，其特徵在於穩定劑中聚乙二醇的最適添加量是0.5%。
8. 按權利要求6所述方法，其特徵在於穩定劑中明膠最適添加量為1%。
9. 按權利要求6所述方法，其特徵在於穩定劑中疊氮鈉最適添加量0.1%。
全文摘要
本發明涉及一種液體白陶土活化部分凝血活酶(APTT)試劑的製備方法。該試劑主要用於監測內源凝血系統諸凝血因子缺陷和相關抑制物的篩選試驗，也是當前用於凝血因子、肝素抗凝治療以及狼瘡抗凝物質檢測的主要手段。該方法以白陶土為激活劑，提高了對凝血因子的敏感性，新穎的穩定系統解決了液體狀態保持試劑穩定性的難題，具有敏感性高、使用方便、實驗誤差小、穩定性強、兼容性好、成本低等優點。
文檔編號G01N33/86GK101526538SQ20081008355
公開日2009年9月9日 申請日期2008年3月9日 優先權日2008年3月9日
發明者肖國偉 申請人:上海長島生物技術有限公司