一種防治心腦腎血管疾病的藥物製劑的製作方法
2023-12-09 03:51:31
專利名稱:一種防治心腦腎血管疾病的藥物製劑的製作方法
技術領域:
本發明涉及一種以中草藥提取物為主要原料製成用於防治心腦腎血管疾病的藥物製劑,尤其是關於選擇作用清楚的中草藥活性成分按最佳的劑量比例配伍組方,是一種高效低毒天然抗氧化劑。
背景技術:
近年來研究發現,氧化應激和抗氧化機制的平衡失調導致人體內氧自由基(OFR)過剩與一些臨床常見的心腦血管疾病如冠心病、中風、心律失常、心肌梗塞、早老性痴呆、震顫麻痺症和腎組織病變如腎炎、急性腎、腎移植後排斥反應等的發生和損傷有密切關係。據統計,1982~2002年間全球上市1000多種小分子藥品中,55%系來自天然產物或其衍生物,其中6%直接為天然產物。另有報告世界暢銷的25種藥品中,12種為天然產物或其衍生物。我國50年代以來研究成功的新藥90%以上系與天然產物有關。由此可見創新藥物與天然產物的關係密不可分,顯示從天然產物研發創新藥物的潛能十分巨大。我國中醫已經有幾千年歷史了,這是一個巨大的天然抗氧化劑寶庫。很多實驗已經證明,天然抗氧化劑是許多中草藥的有效成分,包括現在已在臨床使用的茶多酚,銀杏葉提取物EGD761,田七,人參皂甙等。然而,在中藥抗氧化劑的研究中,發現要取得好的抗自由基損傷作用,不僅要掌握好劑量和適宜濃度,而且還需要多種抗氧化劑的協同和共濟作用,因為單一的清除劑的清除作用是遠遠不夠的。幾種天然抗氧化劑可以對不同種類自由基和自由基生成過程及損傷的不同環節起作用,同時有的還可提高體內自由基清除酶的活力,加強人體自身清除自由基的能力。目前我國開發的具有防治心腦腎血管疾病的中藥天然抗氧化劑包括提取的有效活性成分類,如銀杏葉提取物、丹參素等和傳統配伍方劑,如補陽還五湯、參芪合劑等。前者儘管有效,但靶點比較單一,後者雖為複方,但大多製劑粗糙,各組分(按現代醫學理論)所起作用不明確,生物利用度較低,藥效較差,要取得國際認可,還需進行拆方研究和劑型改進。目前國外更趨於應用現代提取工藝技術提取分離出對藥效作用顯著的成分後,再以現代醫藥學方法篩選配以複方使用,這樣效果更好,理化性狀和生物利用度也更高,這是發展趨勢。
發明內容
本發明的目的在於避免上述兩類藥物的缺陷,提供一種成本低、高效低毒的用以防治心腦腎血管疾病的中藥活性成分組方製劑,還可大大縮短現代中藥製劑的研發速度。
本發明的目的是通過如下措施來達到用綠茶、銀杏葉、田七莖葉、丹參根莖提取的活性成分茶多酚(TP)、銀杏提取物(Egb761)、三七總皂苷(PNS)、丹參素(DS),以抗氧化活性較強的TP為主藥(君),佐輔其他三成份,按重量比例15~50∶2.5~12.5∶5~15∶1~10組成複方製劑,各成分純度均為100%,若成分純度不同,配置時需折算成相應的含量。
本發明的生產工藝方法按以上重量組份比稱取原料(茶多酚、銀杏提取物、三七總皂苷、丹參素均可在醫藥市場買到),將其混勻,得幹藥粉。
以重量組份按1∶0.05~0.1的比例稱取幹藥粉、澱粉,用濃度為70%~90%的食用乙醇作潤溼劑制溼顆粒,在37℃左右乾燥,製成膠囊。
本發明的組方還可製成片劑等口服給藥製劑。
目前國內外研究均表明多靶點作用較單靶點療效增強,不良反應及耐藥性下降,如何氏治療AIDS的雞尾酒療法即是多靶點作用優越性的一個範例。現在臨床所用的天然抗氧化劑大多是單味藥製劑或提取的藥物單一活性成分,作用靶點不多;而參麥散、補陽還五湯、參芪合劑等傳統方劑,則多數成分複雜,每種成分的具體藥理作用不明確且工藝粗糙,生物利用度和藥效均不高。例如,臨床研究顯示抗動脈粥樣硬化天然藥物及其單體作用明確、安全性好,但往往作用較弱,藥物產生臨床療效時需較高劑量或靜脈給藥。西藥的化學實體為單一化合物,有特定的作用靶點,具有專一性、針對性,而無論是單味中藥或複方,它們的物質基礎是活性物質群,這些活性物質群按一定要求配伍組合,作用於多個靶點,經多途徑的整合而發揮作用,呈現多效性。本發明中的單味雖同是天然抗氧化劑,但所起的作用並不完全相同。茶多酚與氧作用而消耗密閉系統中殘留的氧,可與鐵離子絡合,抑制膽固醇的氧化,阻止食物中不飽和脂肪酸氧化。丹參素防止心肌線粒體H+-ATP酶的水解活性下降和線粒體的氧化磷酸化功能損傷,同時增加SOD及GSH-Px活性。Egb761具廣譜的自由基清除作用,可通過直接作用於自由基的生成位點、抑制促自由基產生的潛在催化劑同時穩定靶細胞膜,舒張血管,促進血液循環和對細胞氧、葡萄糖的輸送,增加細胞對缺氧和自由基的耐受。三七總皂苷糾正TXA2/PGI2比值失衡,改善腦循環。阿魏酸可提高GSH-Px及SOD活性,穩定靶細胞膜,保護線粒體結構和功能。這些具有不同抗氧化性能的物質混合在一起,抗氧化的整體效果自然要增強。另外,不同抗氧化劑共用時,自由基之間可能互相還原,使抗氧化劑再生。本發明避開了從傳統中醫理論組方入手所需進行繁瑣的拆方研究、成分不宜明確、耗時費力等弊端,根據不同的作用靶點以及單味藥的功能主治,選擇來源豐富、已確知藥效的天然藥物活性成分有機組方,使複方中多種活性成分以低於它們中某一單體的治療劑量進入人體,反覆作用於疾病的多個直接靶點(治標)和間接靶點(治本),從而提高療效,減輕毒副作用,大大縮短研發時間和費用。
以下為本發明的動物實驗結果根據預試,分別取TP、Egb761、PNS、DS各活性成分LD50的1/5為起始劑量,以1‰二甲基亞碸(DMSO)生理鹽水溶液作溶劑等比稀釋成一系列濃度,按表1、2所示加入各試劑,分別進行O2·清除率、·OH清除率的測定,並描繪各單味藥量效曲線。(體外試驗)表1 O2·清除率的測定
表2·OH清除率的測定
從量效曲線上選擇ED50、1/2ED50、1/4ED50作為各藥的高、中、低三個濃度。
採用Fe2+-H2O2脂質過氧化作用誘發體系,在預先泡酸處理的5ml玻璃離心管中依次加入正常大鼠大腦皮層10%組織勻漿0.2ml、0.16mM FeSO4(NH4)2、0.16mM H2O2、KH2PO4-NaOH緩衝液(pH7.4)後,按表3分別加入各濃度單味藥,將離心管置37C溫育30min後測定MDA(丙二醛)值。各管均重複兩次,同時做空白和標準對照。以「MDA抑制率%」作為評價指標,進行方差分析,確定複方配比;再根據各藥生物利用度和預試驗,最終確立大鼠體內試驗灌胃給予TPC的高、中、低三個劑量。
表3 L9(34)正交設計表
(注ATP BEgb761 CPNS DDS)
正交試驗及預試驗驗證得出A2B1C2D3為最佳組方。其中主藥TP佔複方總量的40%。
TPC急性毒性試驗精密稱取TP(純度98%,批號20031108)165mg,Egb761(總黃酮/總內酯=24/6,批號20030710)60mg,PNS(純度90%,批號20030911)90mg,DS(3%針用提取物,批號20030815)240mg(以上四藥均購自成都華高天然藥物有限公司)。以1‰二甲基亞碸(DMSO)生理鹽水溶液0.015ml作溶劑,加入20ml單蒸水充分混勻,即配成高劑量的複方製劑。中、低劑量組各藥物成分為高劑量組1/2、1/4用量,同上法配成。
考察組方急性口服毒性即可。採用「人用藥物註冊技術要求的國際協調會議(ICH)」推薦的最大耐受量試驗(MTD)方法。將小鼠隨機分為高、中、低劑量藥物組、溶媒對照組(1‰二甲基亞碸生理鹽水)和空白對照組,根據試驗所得出的最佳組方中各單味藥的量換算為成人劑量後的200倍、100倍、50倍,作為高、中、低劑量藥物組,每日給藥一次,連續7天。各組均無動物死亡。
耐缺氧試驗將小鼠隨機分為高、中、低劑量複方製劑、杏靈顆粒陽性對照、溶媒對照(1‰二甲基亞碸生理鹽水)、空白對照共六組,分組i.g.7d,每天一次。末次給藥後1h將各組小鼠分別放入含鈉石灰的缺氧瓶中,記錄各組小鼠死亡時間(即耐常壓密閉缺氧時間)並評價動物的耐缺氧能力。與空白和溶媒對照組相比,各用藥組小鼠耐缺氧能力明顯增強。
組方初步穩定性試驗採用HPLC法測定,以EGCG含量變化為指標。TPC溶液室溫下放置2h穩定。
複方製劑防治急性腦缺血再灌注損傷的實驗研究精密稱取TP(純度98%,批號20031108)330mg,Egb761(總黃酮/總內酯=24/6,批號20030710)120mg,PNS(純度90%,批號20030911)180mg,DS(3%針用提取物,批號20030815)480mg(以上四藥均購自成都華高天然藥物有限公司),以1‰二甲基亞碸(DMSO)生理鹽水溶液0.02ml作溶劑,加入20ml單蒸水充分混勻,即配成高劑量的複方製劑。中、低劑量組各藥物成分為高劑量組1/2、1/4用量,同上法配成。
雄性Wistar大鼠,隨機分為假手術、模型對照、複方製劑低、中、高劑量、XL陽性對照共6組,每組6隻,於術前7d,每天i.g.1次。其中複方製劑低、中、高劑量組分別按88、175、350mg.kg-1.d-1劑量給藥,陽性對照組給予20mg.kg-1.d-1XL,假手術和模型對照組給予同體積1‰DMSO生理鹽水。第7d最後一次於缺血前60min給藥,術後清醒再按各分組劑量給藥一次。大鼠局灶性腦缺血再灌注模型(MCAO模型)24h後,取腦組織檢測。結果示複方製劑各劑量組均能使腦缺血大鼠的神經行為明顯改善,腦組織含水量、腦梗塞面積下降並呈劑量依賴性;多項生化指標測定表明高劑量組效果最明顯,與模型組相比,腦組織勻漿中的MDA、LA、ROS、NOS含量分別下降46.71%、59.39%、48.45%、65.19%,SOD、GSH、Ca2+-ATPase含量分別增加76.65%、82.93%、94.91%,對ADP誘導的血小板聚集抑制率為58.91%;此外,複方製劑可下調缺血大腦皮層ICAM-1和iNOS表達。病理切片顯示與模型組比較,複方製劑三個劑量組神經元細胞的胞體腫脹、核固縮、核溶解程度明顯減輕。其中,高劑量組效果最明顯,可見神經元結構較清晰、周圍間隙縮小;胞體輕度腫脹,核膜完整,核仁清晰;壞死和凋亡細胞明顯減少。
複方製劑防治急性腎缺血再灌注損傷的實驗研究Wista大鼠,雌雄各半,分組及給藥方法同前,只是將陽性對照藥換成腎復康膠囊,給藥量為600mg.kg-1.d-1。腎缺血再灌24h後右眼球取血,處死大鼠,開腹取出雙側腎臟。實驗結果表明複方製劑各劑量組均可降低Scr和Bun,減少腎組織勻漿MDA、ROS、NO含量,增加SOD活性並呈劑量依賴性。其中高劑量組效果最明顯,與模型組相比,分別使Scr和Bun降低27.06%、39.19%;腎組織MDA、ROS、NO含量分別下降34.77%、39.37%、40.21%;SOD活性增加47.38%。病理切片顯示與模型組相比,用藥後腎小管管腔較狹窄、管壁較厚,少數腎小管上皮細胞腫脹。其中以高劑量組損傷最輕細胞腫脹、核固縮、核深染等現象明顯減輕,蛋白管型減少,少數腎間質血管輕微擴張充血。
動物實驗已證明本發明是有效的防治心腦腎血管疾病的新複方製劑。試驗結果表明心腦腎康能使腦缺血大鼠的神經行為明顯改善,腦組織含水量、腦梗塞面積下降。多項生化指標測定表明與模型組相比,腦組織勻漿中的MDA、LA、ROS、NOS含量分別下降46.71%、59.39%、48.45%、65.19%,SOD、GSH、Ca2+-ATPase含量分別增加76.65%、82.93%、94.91%,對ADP誘導的血小板聚集抑制率為58.91%;此外,可下調缺血大腦皮層ICAM-1和iNOS表達。病理切片顯示與模型組比較,神經元細胞的胞體腫脹、核固縮、核溶解程度明顯減輕。神經元結構較清晰、周圍間隙縮小;胞體輕度腫脹,核膜完整,核仁清晰;壞死和凋亡細胞明顯減少。心腦腎康可降低Scr和Bun,減少腎組織勻漿MDA、ROS、NO含量,增力SOD活性。與模型組相比,分別使Scr和Bun降低27.06%、39.19%;腎組織MDA、ROS、NO含量分別下降34.77%、39.37%、40.21%;SOD活性增加47.38%。病理切片顯示與模型組相比,用藥後腎小管管腔較狹窄、管壁較厚,少數腎小管上皮細胞腫脹。細胞腫脹、核固縮、核深染等現象明顯減輕,蛋白管型減少,少數腎間質血管輕微擴張充血。
本發明各成分清楚,藥理作用明確;藥源充足、價格便宜;多靶點、多層次作用;製劑工藝較簡單;藥效確切。
具體實施例方式
實施例1以重量組份計算按15∶2.5∶5∶1比例取茶多酚(TP,純度98%)153g,銀杏提取物(Egb761,總黃酮/總內酯=24/6)25g,三七總皂苷(PNS,純度90%)56g,丹參素(DS,3%針用提取物)333g(以上四藥均購自成都華高天然藥物有限公司)混勻(各成分用量均按純度比例折算),得幹藥粉。以重量組份計算按1∶0.05的比例稱取幹藥粉500g、澱粉25g混勻,用濃度為70%的食用乙醇4ml作為潤溼劑製成溼顆粒,在37℃左右乾燥,製成1000粒膠囊,檢驗合格,分裝,即得心腦腎康膠囊成品。
用法與用量口服,每次2~4粒,一日3次。
貯藏密封,置陰涼乾燥處。
實施例2
以重量組份計算按50∶12.5∶15∶10比例取茶多酚(TP,純度98%)102g,銀杏提取物(Egb761,總黃酮/總內酯=24/6)25g,三七總皂苷(PNS,純度90%)33g,丹參素(DS,3%針用提取物)667g(以上四藥均購自成都華高天然藥物有限公司)混勻(各成分用量均按純度比例折算),得幹藥粉。以重量組份計算按1∶0.1比例取幹藥粉500g、澱粉50g混勻,用濃度為90%的食用乙醇6ml作為潤溼劑製成溼顆粒,在37℃左右乾燥,製成1060粒膠囊,檢驗合格,分裝,即得心腦腎康膠囊成品。
用法與用量口服,每次2~4粒,一日3次。
貯藏密封,置陰涼乾燥處。
權利要求
1.一種防治心腦腎血管疾病的藥物製劑,其特徵是取茶多酚TP∶銀杏提取物Egb761∶三七總皂苷PNS∶丹參素DS按15~50∶2.5~12.5∶5~15∶1~10的重量比例配伍製成。
全文摘要
本發明提供了一種用綠茶、銀杏葉、田七莖葉、丹參根莖、當歸提取的活性成分茶多酚(TP)、銀杏提取物(Egb761)、三七總皂苷(PNS)、丹參素(DS),以抗氧化活性較強的TP為主藥(君),佐輔其他三成份,按重量比例15~50∶2.5~12.5∶5~15∶1~10組成的複方製劑,該藥物製劑各成分清楚,藥理作用明確;藥源充足、價格便宜;多靶點、多層次作用;製劑工藝較簡單;藥效確切。本發明是有效的防治心腦腎血管疾病的新複方製劑。
文檔編號A61K31/192GK1850129SQ20061001847
公開日2006年10月25日 申請日期2006年3月3日 優先權日2006年3月3日
發明者梁鋼 申請人:廣西醫科大學