一種食用菌複合多糖的製備工藝的製作方法

2023-10-21 03:04:12 4

專利名稱：一種食用菌複合多糖的製備工藝的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種食用菌複合多糖的製備工藝，尤其是涉及香菇、銀耳、猴頭菇複合多糖的製備工藝。
背景技術：
食用菌又稱食(藥)用菌，是一類具有較高食用及藥用價值的大型可食(藥)用真菌，我國常見的用於保健及預防疾病的食用菌種類主要有猴頭菇、香菇、灰樹花、銀耳、雞腿菇、黑木耳、北冬蟲夏草以及靈芝等二十多種，這類食用菌中富含生物活性物質，如多糖、多肽類、核苷類和三萜類等，經科學實驗證實這些生物活性物質具有抗氧化、抗腫瘤、降血脂、抗病毒、增強機體免疫和保護心腦血管等多種功能。 食用菌多糖是從食用菌子實體、菌絲體發酵液中分離出的一類活性多糖，多糖組分中以葡聚糖為主，以具有￠-1,3葡萄糖苷鍵結合的直鏈和￠-1,6葡萄糖苷鍵結合的支鏈構成為特殊的空間結構，具有廣泛的藥理活性，對於抗氧化、抗疲勞、延緩衰老、抗腫瘤、抗突變、抗風溼、抗輻射、抗菌消炎、降血脂、降血糖、防止心腦血管疾病的腦血栓、動脈粥樣硬化、糖尿病都是一種很好的免疫調節增強劑，在保護肝、腎功能，提高血液學指標等具有明顯作用。總之，食用菌多糖在增強機體免疫力、調節人體機能平衡、延緩衰老等方面起著重要作用，對免疫功能低下和多種免疫缺損疫病及各種中老年性疾病具有良好的輔助治療效果和保健功能。因此，食(藥)用菌越來越多的受到世界範圍的重視和研究，多糖還在國際上被稱為「生物反應調節物」(Biological Responce Modifier, BRM)。試驗發現，單味的食用菌多糖的生物活性往往是單一或側重於某一生物活性的，作用單一，且不持久。據文獻報導，一些食用菌多糖進行等量複合使用後，呈現出協同作用，具有更好的抗氧化作用，而對腫瘤細胞的生長抑制作用也更強，這對研發新藥和保健食品具有重要的指導意義。目前，食(藥)用真菌的多糖也正由單獨的應用研究，向多糖與不同分子量及不同分子結構多糖、細胞因子、腫瘤殺傷效應細胞、放療、化療的聯合應用研究轉變，向多糖之間的協同效應研究轉變。中國專利文獻CN1765935A(申請號200510017261.5)公開了一種分離香菇多糖及香菇菌多糖的新方法，中國專文獻CN101736055A(申請號200810162120.6)公開了一種黑木耳多糖的提取方法，以上多糖的製備工藝都是針對單一的多糖產品提出的，食用菌多糖單獨提取費時費工、且食用多糖活性不強。中國專利CN102093598A公開了 「一種複合食用菌多糖及其製備方法」其是選取香菇、黑木耳、靈芝和灰樹花乾子實體為原料，按1:2:2: I比列稱重混合後粉碎，加入蒸餾水混合均勻後依次進行微波提取、冷凝回流提取；渣、液分離；醇沉，醇沉後真空乾燥、粉碎，得複合食用菌多糖。但該法是採用微波法結合冷凝回流提取，該專利存在以下不足D步驟繁瑣，提取時間相對較長，費時費工，2)微波結合冷凝回流提取時間較長，微波輻射至一定程度，會破壞目標提取物的組份，製得的食用菌複合多糖活性極大降低。

發明內容
針對現有技術的不足，本發明提供一種省時省工的食用菌複合多糖的製備方法，該法製備的食用菌複合多糖活性強，自由基(O2、)清除率較單一提取多糖增加10%以上，功效高，製備工藝簡單、可操作性強。本發明的技術方案如下一種食用菌複合多糖的製備方法，步驟如下(I)選取香菇、銀耳、猴頭菇的子實體為原料，分別經過清洗、乾燥至含水量5 10wt%、粉碎過篩，製得食用菌粉末；將香菇、銀耳、猴頭菇的食用菌粉末按(I 2) (I 2) (I 2)的重量比混合均勻，得混合食用菌粉末；(2)將步驟(I)製得的混合食用菌粉末加入無水乙醚進行回流脫脂；無水乙醚與 混合食用菌粉末的重量比為2 4 I ；(3)回流脫脂後的混合食用菌粉末加入蒸餾水混合均勻，得混合物；所述混合食用菌粉末與蒸餾水的重量比為I : (10 40)。(4)將步驟(3)製得的混合物進行超聲水提，溫度為50 80°C，時間20 50min ；(5)經超聲水提後的混合物室溫下冷卻，過濾，得提取液與殘渣；(6)將步驟(5)製得的提取液加熱，製得提取液的濃縮液，所述濃縮液的體積為濃縮前提取液體積的1/3 1/4 ；(7)將步驟(6)製得的濃縮液與加入乙醇進行醇沉，靜置20_24h後進行離心，得沉澱物；所得的沉澱物用乙醇清洗I 3遍；(8)將步驟(7)得到的沉澱物真空乾燥，即得食用菌複合多糖。根據本發明優選的，所述步驟(I)中的香菇、銀耳、猴頭菇的子實體粉碎過40 120目篩。根據本發明優選的，所述步驟(I)中香菇、銀耳、猴頭菇的食用菌粉末按I : I : I的重量比混合。根據本發明優選的，步驟(2)中脫脂用無水乙醚與混合食用菌粉末的重量比為3 I。脫脂過程選用加入無水乙醚是為了使脂溶性物質溶解，使製得的食用菌複合多糖純
度更高。根據本發明優選的，步驟(4)中超聲水提的超聲波功率為200 600w。根據本發明優選的，步驟(7)中醇沉時所用乙醇的濃度為70 85wt%，所用乙醇的體積為濃縮液體積的4 5倍，靜置24小時後以轉速為4000r/min離心10 15min。根據本發明優選的，步驟(7)中洗滌的步驟如下向離心後所得的沉澱物中加入85wt%的乙醇混合、攪拌，攪拌均勻靜置2h，再進行離心。根據本發明優選的，步驟(8)中真空乾燥時的真空度-0. 095MPa，乾燥溫度20 40 °C，乾燥時間20h。本發明為了使食用菌複合多糖提取的含量更高、提取的更充分，進一步的，步驟
(5)過濾後得到的殘渣加入蒸餾水進行超聲水提，過濾後製得的提取液與步驟(5)過濾後得到的提取液合併。經分析檢測對比發現，採用本發明所述方法所製得的食用菌複合多糖活性較強，自由基(02_ )清除率較單一提取多糖增加10%以上。
與現有技術相比，本發明優良效果在於I、本發明所述方法提取的食用菌複合多糖自由基(02_ )清除率較單一提取多糖增加10%以上，食用菌複合多糖活性強。2、本發明所述的方法採用超聲波進行提取食用菌複合多糖，一方面縮短了提取時間，極大地提高提取效率，大大降低了提取成本，另一方面最大限度的保存了食用菌中的熱敏性成份多糖的活性。3、本發明採用脫脂、重複洗滌去除脂溶性物質、雜質，使製得的食用菌複合多糖純度更高。 4、本發明採用重複洗滌、重複超聲水提使食用菌複合多糖提取更充分，並增加複合多糖的提取率。5、本發明製備工藝簡單、可操作性強。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步說明，實施例中的％均為質量百分比，有特別說明時除外。實施例中所用原料均為市場購得。實施例I香菇、銀耳、猴頭菇食用菌複合多糖的製備方法，按以下步驟進行I、原料預處理將香菇、銀耳、猴頭菇子實體經過清洗、乾燥至含水量10%後，進行粉碎過60目篩，製得食用菌粉末；2、分別稱取香菇食用菌粉末100g，銀耳食用菌粉末100g，猴頭菇食用菌粉末100g，將三者混合均勻後加入無水乙醚進行回流脫脂，無水乙醚與混合食用菌粉末的重量比為3 : I ;3、超聲水提回流脫脂後的混合食用菌粉末與蒸餾水按I : 20的重量比混合，混合均勻後在50°C溫度條件下超聲水提20min，超聲波功率為400w ；4、過濾經超聲水提後的混合食用菌粉末與水的混合物室溫下冷卻，冷卻後進行過濾，得提取液與殘渣；5、再次超聲水提步驟4過濾後得到的殘渣再與蒸餾水進行混合，然後進行超聲水提、過濾，過濾後製得的提取液與步驟4過濾後得到的提取液合併；6、提取液濃縮將合併後的提取液80°C條件下加熱濃縮，製得提取液的濃縮液，濃縮液的體積為濃縮前提取液體積的1/4 ；7、將步驟6製得的濃縮液中加入75%乙醇混合、攪拌，乙醇的體積為濃縮液體積的5倍，攪拌均勻後靜置24h，然後以轉速為4000r/min離心15min，離心後得到沉澱物；8、洗滌將步驟7離心後所得的沉澱物中加入85%的乙醇混合、攪拌，攪拌均勻靜置2h後進行離心，離心後得到沉澱物；9、重複洗滌按步驟8重複洗滌3次；10、乾燥步驟9得到的沉澱物於真空度-0. 095MPa，溫度40°C乾燥20h，即得食用菌複合多糖，經檢測製得的食用菌複合多糖5. 9g。對比例I、香菇多糖香菇多糖的製備方法步驟如實施例I所述，不同之處在於取香菇子實體為原料經過清洗、乾燥、粉碎過篩，製得香菇粉末，香菇粉末稱取300g，所製得的香菇多糖用於實施例5的對比分析。對比例2、銀耳多糖銀耳多糖的製備方法步驟如實施例I所述，不同之處在於取銀耳子實體為原料經過清洗、乾燥、粉碎過篩，製得銀耳粉末，銀耳粉末稱取300g，所製得的銀耳多糖用於實施例5的對比分析。對比例3、猴頭菇多糖猴頭菇多糖的製備方法步驟如實施例I所述，不同之處在於取猴頭菇子實體為原料經過清洗、乾燥、粉碎過篩，製得猴頭菇粉末，猴頭菇粉末稱取300g，所製得的猴頭菇多糖用於實施例5的對比分析。實施例2 I、原料預處理將香菇、銀耳、猴頭菇子實體經過清洗、乾燥至含水量10%後，進行粉碎過80目篩，製得食用菌粉末，2、分別稱取香菇食用菌粉末100g，銀耳食用菌粉末100g，猴頭菇食用菌粉末100g，將三者混合均勻後加入無水乙醚進行回流脫脂，無水乙醚與混合食用菌粉末的重量比為3 1，3、超聲水提回流脫脂後的混合食用菌粉末與蒸餾水按I : 30的重量比混合，混合均勻後在50°C溫度條件下超聲水提30min，超聲波功率為300w，4、過濾經超聲水提後的混合食用菌粉末與水的混合物室溫下冷卻，冷卻後進行過濾，得提取液與殘渣；5、再次超聲水提步驟4過濾後得到的殘渣再與蒸餾水進行混合，然後進行超聲水提、過濾，過濾後製得的提取液與步驟4過濾後得到的提取液合併，6、提取液濃縮將合併後的提取液80°C條件下加熱濃縮，製得提取液的濃縮液，濃縮液的體積為濃縮前提取液體積的1/4 ；7、醇沉將步驟6製得的濃縮液中加入80%乙醇混合、攪拌，乙醇的體積為濃縮液體積的5倍，攪拌均勻後靜置24h，然後以轉速為4000r/min離心15min，離心後得到沉澱物；8、洗滌將步驟7離心後所得的沉澱物中加入85%的乙醇混合、攪拌，攪拌均勻靜置2h後進行離心，離心後得到沉澱物；9、重複洗滌按步驟8重複洗滌3次；10、乾燥步驟9得到的沉澱物於真空度-0. 095MPa，溫度40°C乾燥20h，即得食用菌複合多糖，經檢測製得的食用菌複合多糖7. 3g。實施例3I、原料預處理將香菇、銀耳、猴頭菇子實體經過清洗、乾燥至含水量5%後，進行粉碎過120目篩，製得食用菌粉末，2、分別稱取香菇食用菌粉末100g，銀耳食用菌粉末100g，猴頭菇食用菌粉末100g，將三者混合均勻後加入無水乙醚進行回流脫脂，無水乙醚與混合食用菌粉末的重量比為3 1，3、超聲水提回流脫脂後的混合食用菌粉末與蒸餾水按I : 40的重量比混合，混合均勻後在70°C溫度條件下超聲水提40min，超聲波功率為300w，
4、過濾經超聲水提後的混合食用菌粉末與水的混合物室溫下冷卻，冷卻後進行過濾，得提取液與殘渣；5、再次超聲水提步驟4過濾後得到的殘渣再與蒸餾水進行混合，然後進行超聲水提、過濾，過濾後製得的提取液與步驟4過濾後得到的提取液合併，6、提取液濃縮將合併後的提取液80°C條件下加熱濃縮，製得提取液的濃縮液，濃縮液的體積為濃縮前提取液體積的1/4 ；7、醇沉將步驟6製得的濃縮液中加入85%乙醇混合、攪拌，乙醇的體積為濃縮液體積的5倍，攪拌均勻後靜置24h，然後以轉速為4000r/min離心15min，離心後得到沉澱物；8、洗滌將步驟7離心後所得的沉澱物中加入85%的乙醇混合、攪拌，攪拌均勻靜置2h後進行離心，離心後得到沉澱物；9、重複洗滌按步驟8重複洗滌3次；10、乾燥步驟9得到的沉澱物於真空度-0. 095MPa，溫度40°C乾燥20h，即得食用菌複合多糖，經檢測製得的食用菌複合多糖7. 8g。實施例5、自由基(02_ )清除率/%的檢測分別稱取本發明實施例I中的食用菌複合多糖、對比例I中的香菇多糖、對比例2中的銀耳多糖、對比例3中的猴頭菇多糖加水配製成濃度0. 5mg/mL的食用菌複合多糖溶液、0. 5mg/mL的香菇多糖溶液、0. 5mg/mL的銀耳多糖溶液、0. 5mg/mL的猴頭菇多糖溶液；將以上配製好的0. 5mg/mL的食用菌複合多糖溶液、香菇多糖溶液、銀耳多糖溶液、猴頭菇多糖溶液各取2mL於具塞試管中，每支試管中加入50mmol/L的Tris-HCl緩衝溶液(pH8. 2) 2mL,混勻並於25°C水浴中預熱lOmin，後加入lOmmol/L的鄰苯三酚溶液0. 4mL,於25°C水浴中反應5min後，加入12mol/L的HCl溶液0. 2mL終止反應，然後於325nm處測定吸光度，按以下公式計算清除率，每組測定3次並取其平均值，測定的結果如下表I所示。S%= 1-(A3-A4)/(A1_A2)Al :不含有樣品的吸光度值；A2 :不含有樣品和鄰苯三酚的吸光度值；A3 :含有樣品的吸光度值；A4 :含有樣品，但是不含有鄰苯三酚的吸光度值。實驗結果列於表I中表I、自由基(02_ )清除率
權利要求
1.一種食用菌複合多糖的製備方法，步驟如下(1)選取香菇、銀耳、猴頭菇的子實體為原料，分別經過清洗、乾燥至含水量5 10wt%、粉碎過篩，製得食用菌粉末；將香菇、銀耳、猴頭菇的食用菌粉末按(I 2) (I 2) (I 2)的重量比混合均勻，得混合食用菌粉末；(2)將步驟(I)製得的混合食用菌粉末加入無水乙醚進行回流脫脂；無水乙醚與混合食用菌粉末的重量比為2 4 I ；(3)回流脫脂後的混合食用菌粉末加入蒸餾水混合均勻，得混合物；所述混合食用菌粉末與蒸餾水的重量比為I : (10 40)。(4)將步驟(3)製得的混合物進行超聲水提，溫度為50 80°C，時間20 50min；(5)經超聲水提後的混合物室溫下冷卻，過濾，得提取液與殘渣；(6)將步驟(5)製得的提取液加熱，製得提取液的濃縮液，所述濃縮液的體積為濃縮前提取液體積的1/3 1/4 ;(7)將步驟(6)製得的濃縮液與加入乙醇進行醇沉，靜置20-24h後進行離心，得沉澱物；所得的沉澱物用乙醇清洗I 3遍；(8)將步驟(7)得到的沉澱物真空乾燥，即得食用菌複合多糖。
2.根據權利要求I所述的食用菌複合多糖的製備方法，其特徵在於所述步驟(I)中的香菇、銀耳、猴頭菇的子實體粉碎過40 120目篩。
3.根據權利要求I所述的食用菌複合多糖的製備方法，其特徵在於所述步驟(I)中香菇、銀耳、猴頭菇的食用菌粉末按1:1:1的重量比混合。
4.根據權利要求I所述的食用菌複合多糖的製備方法，其特徵在於步驟(2)中脫脂用無水乙醚與混合食用菌粉末的重量比為3 I。
5.根據權利要求I所述的食用菌複合多糖的製備方法，其特徵在於步驟(4)中超聲水提的超聲波功率為200 600w。
6.根據權利要求I所述的食用菌複合多糖的製備方法，其特徵在於步驟(7)中醇沉時所用乙醇的濃度為70 85wt %，所用乙醇的體積為濃縮液體積的4 5倍，靜置24小時後以轉速為4000r/min離心10 15min。
7.根據權利要求I所述的食用菌複合多糖的製備方法，其特徵在於步驟(J)中洗滌的步驟如下向離心後所得的沉澱物中加入85wt%的乙醇混合、攪拌，攪拌均勻靜置2h，再進行離心。
8.根據權利要求I所述的食用菌複合多糖的製備方法，其特徵在於步驟(8)中真空乾燥時的真空度-0. 095MPa，乾燥溫度20 40°C，乾燥時間20h。
9.根據權利要求1-8所述的食用菌複合多糖的製備方法，其特徵在於步驟(5)過濾後得到的殘渣加入蒸餾水進行超聲水提，過濾後製得的提取液與步驟(5)過濾後得到的提取液合併。
全文摘要
本發明公開一種食用菌複合多糖的製備工藝，包括以下步驟將香菇、銀耳、猴頭菇的子實體為原料，分別經過清洗、乾燥至含水量5％～10％、粉碎過篩，製得食用菌粉末；將香菇、銀耳、猴頭菇的食用菌粉末按1∶1∶1的重量比進行混合，混合後的食用菌粉末經脫脂、超聲水提、過濾、再次超聲水提、濃縮、洗滌、乾燥後製得食用菌複合多糖，採用本發明製備的食用菌複合多糖活性強，自由基(O2-·)清除率較單一提取多糖增加10％以上，功效高，製備工藝簡單、可操作性強。
文檔編號C08L5/02GK102627789SQ20121009110
公開日2012年8月8日 申請日期2012年3月31日 優先權日2012年3月31日
發明者馮建華, 周萍, 孟曉峰, 安東, 李新勝, 王朝川 申請人:中華全國供銷合作總社濟南果品研究院