一種鐵皮石斛的快繁技術的製作方法
2023-10-06 21:50:09
本發明涉及醫藥生物
技術領域：
，尤其是涉及一種鐵皮石斛的快速繁技術。
背景技術：
：鐵皮石斛為蘭科（Orchidaceae）石斛屬（DendrobiumSw）植物，全世界蘭科約有500屬，15000多種；石斛屬是蘭科中最大的屬之一。中國蘭科約有150屬，1000種，莖圓柱形，高15～50cm，粗4～8mm。葉鞘帶肉質，矩圓狀披針形，長3～6.5cm，寬0.8～2cm，頂端略鉤。總狀花序生於具葉或無葉莖的中部，有花2～4朵；花淡黃綠色，稍有香氣；萼片長1.2～2cm；花瓣短於萼片，唇瓣卵狀披針形，長1.3～1.6cm寬7～9mm，先端漸尖或短漸尖，近上部中間有圓形紫色斑塊，近下部中間有黃色胼胝體。花期4～6月。表面黃色，基部稍有光澤，具縱紋，節上有花序柄痕及殘存葉鞘；葉鞘短於節間，常與節間上部留下環狀間隙，褐色，鞘口張開。質硬而脆，易折斷，斷面纖維狀。鮮品莖直徑3～6mm，表面黃綠色或黑綠色，葉鞘灰白色。氣微，嚼之有粘性。主要分布於秦嶺和長江流域以南省區；石斛屬植物大多數種類都集中分布在北緯15°30′～25°12′之間，且越向北延而種類則逐漸減少。中國鐵皮石斛主要分布於浙江、廣西、湖南、雲南、貴州等地。它是一種名貴的中藥材，是多年生草本植物，莖叢生，圓柱型，高10--30釐米，粗3—8毫米，在民間，被譽為「救命仙草」藥界的「大熊貓」。由於新鮮鐵皮石斛不宜保存，鮮藥由於其汁多鮮嫩，容易腐爛變質，特別是黴雨季節，更不易保存，因此在大多數中藥店和醫院中藥房中很少配有鮮類藥材，，鐵皮石斛加工後幹品稱鐵皮楓鬥，其藥效成分主要是石斛多糖、石斛鹼和總胺基酸等。能提高人體免疫能力，增強記憶力，補五臟虛勞，抗衰老，抑制腫瘤，改善糖尿病症狀，抗缺氧，對放化療以及夜生活、菸酒過度者有顯著效果。鐵皮石斛種子無胚乳，需與某些真菌共生才能萌發，自然繁殖率低，雖分布廣，但生境窄，加上長年無節制採掘，自然資源日漸枯竭，產量不能滿足目前市場需求。本發明的首要目的在於提供一種胚萌發率高、成活率好的鐵皮石斛的快速繁育技術。為了實現上述目的，本發明採用以下技術方案：一種鐵皮石斛的快速繁育技術方法，包括以下步驟：1.種子的誘導培養：去掉朔果乾枯部分，用自來水衝洗乾淨後，用70%酒精浸泡10-60，再用0.1%升汞消毒5-12min，最後用無菌水衝洗1-5次。在無菌條件下切開朔果，把種子播種於誘導培養基上。培養基加入椰油醯穀氨酸二鈉1-5g•Ｌ－１、蔗糖10-50g·Ｌ－１，瓊脂5-15g·Ｌ－１，PH4.5-5.5，蓋上瓶蓋,置於培養室內進行培養.1.壯苗及生根培養:將上述獲得的鐵皮石斛幼芽從組培瓶中取出，在無菌條件下移入增殖和壯苗培養基中，蓋上瓶蓋，置於培養室內進行培養；3.組培苗移栽:將鐵皮石斛幼苗經過常規煉苗處理後移栽於溫室大棚，移栽後按常規管理，溼度保持在70～90%，作為優選，上述步驟1中，種子用70%酒精浸泡20-50s，再用0.1%升汞消毒6-10min，最後用無菌水衝洗3-4次。作為優選，上述步驟1中，播種量為種子覆蓋培養基表面50％.作為優選，上述步驟1中，培養基加入椰油醯穀氨酸二鈉1-5g•Ｌ－１、蔗糖20-40g·Ｌ－１，瓊脂8-12g·Ｌ－１，馬鈴薯提取液100-300mg·Ｌ－１,PH4.8-5.2。作為優選，上述培養基為MS培養基、1/2MS培養基、B5培養基、LS培養基、N6培養基。作為優選，上述步驟2中，每瓶接8株鐵皮石斛幼芽，高0.3-0.6cm作為優選，上述培養條件為溫度26-28℃，光照強度1600-2000Ｌx。作為優選，上述步驟2中，鐵皮石斛幼苗為具有2-5條根，高2-3cm。作為優選，上述步驟3中，溫室大棚以木屑、泥炭土作為基質，且木屑：泥炭土為1:1-1:3。本發明具有以下有益效果：1.本發明在種子誘導培養，壯苗及生根培養，組培苗移栽過程中不會對周圍環境產生影響，是一種環境友好型的快速繁育技術。2.本發明克服了野生鐵皮石斛植株生長的質量低、增殖慢及長勢不一致等的問題，從而提高培養效率及減少生產成本。本發明具有技術工藝易操作、流程少、繁育快速等優點。具體實施方式下面通過具體實施例對本發明的技術方案作進一步的具體說明。應當理解，本發明的實施並不局限於下面的實施例，對本發明所做的任何形式上的變通或改變都將落入本發明保護範圍。實施例11.種子的誘導培養：去掉朔果乾枯部分，用自來水衝洗乾淨後，用70%酒精浸泡20-50s，再用0.1%升汞消毒6-10min，最後用無菌水衝洗3-4次。在無菌條件下切開朔果，把種子播種於誘導培養基上,以MS作為基本培養基,培養基加入椰油醯穀氨酸二鈉1-5g•Ｌ－１、蔗糖20-40g·Ｌ－１，瓊脂8-12g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl調pH4.8-5.2,在121℃高壓滅菌鍋滅菌25min；蓋上瓶蓋,置於培養室內進行培養.2.壯苗及生根培養:將上述獲得的鐵皮石斛幼芽從組培瓶中取出，在無菌條件下移入增殖和壯苗培養基中，蓋上瓶蓋，置於培養室內進行培養,溫度26-28℃，光照強度1600-2000Ｌｘ。3.組培苗移栽:將鐵皮石斛幼苗經過常規煉苗處理後移栽於溫室大棚，溫室大棚以木屑、泥炭土作為基質，且木屑：泥炭土為1:1-1:3，移栽後按常規管理，溼度保持在70～90%。實施例21.種子的誘導培養：去掉朔果乾枯部分，用自來水衝洗乾淨後，用70%酒精浸泡30s，再用0.1%升汞消毒7min，最後用無菌水衝洗3次。在無菌條件下切開朔果，把種子播種於誘導培養基上,以MS作為基本培養基,培養基加入椰油醯穀氨酸二鈉4g•Ｌ－１、蔗糖30g·Ｌ－１，瓊脂8g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl調pH4.8,在121℃高壓滅菌鍋滅菌25min；蓋上瓶蓋,置於培養室內進行培養.2.壯苗及生根培養:將上述獲得的鐵皮石斛幼芽從組培瓶中取出，在無菌條件下移入增殖和壯苗培養基中，蓋上瓶蓋，置於培養室內進行培養,溫度28℃，光照強度2000Ｌｘ。3.組培苗移栽:將鐵皮石斛幼苗經過常規煉苗處理後移栽於溫室大棚，溫室大棚以木屑、泥炭土作為基質，且木屑：泥炭土為1:1，移栽後按常規管理，溼度保持在70-90%。實施例31.種子的誘導培養：去掉朔果乾枯部分，用自來水衝洗乾淨後，用70%酒精浸泡40s，再用0.1%升汞消毒5min，最後用無菌水衝洗4次。在無菌條件下切開朔果，把種子播種於誘導培養基上,以MS作為基本培養基,培養基加入椰油醯穀氨酸二鈉3g•Ｌ－１、蔗糖20g·Ｌ－１，瓊脂12g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl調pH5.2,在121℃高壓滅菌鍋滅菌25min；蓋上瓶蓋,置於培養室內進行培養.油醯穀氨酸二鈉和蔗糖配伍能提高鐵皮石斛幼芽的成活率。2.壯苗及生根培養:將上述獲得的鐵皮石斛幼芽從組培瓶中取出，在無菌條件下移入增殖和壯苗培養基中，蓋上瓶蓋，置於培養室內進行培養,溫度27℃，光照強度1800Ｌｘ。組培苗移栽:將鐵皮石斛幼苗經過常規煉苗處理後移栽於溫室大棚，溫室大棚以木屑、泥炭土作為基質，且木屑：泥炭土為1:2移栽後按常規管理，溼度保持在70～90%。實施例41.種子的誘導培養：去掉朔果乾枯部分，用自來水衝洗乾淨後，用70%酒精浸泡30s，再用0.1%升汞消毒7min，最後用無菌水衝洗3次。在無菌條件下切開朔果，把種子播種於誘導培養基上,以MS作為基本培養基,培養基加入椰油醯穀氨酸二鈉1g•Ｌ－１、蔗糖30g·Ｌ－１，瓊脂8g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl調pH4.8,在121℃高壓滅菌鍋滅菌25min；蓋上瓶蓋,置於培養室內進行培養.2.壯苗及生根培養:將上述獲得的鐵皮石斛幼芽從組培瓶中取出，在無菌條件下移入增殖和壯苗培養基中，蓋上瓶蓋，置於培養室內進行培養,溫度28℃，光照強度2000Ｌｘ。3.組培苗移栽:將鐵皮石斛幼苗經過常規煉苗處理後移栽於溫室大棚，溫室大棚以木屑、泥炭土作為基質，且木屑：泥炭土為1:1移栽後按常規管理，溼度保持在70～90%，培養６個月後調查成活率、平均新芽數及大於３ｃｍ的平均新芽數。項目成活率平均新發芽數大於３ｃｍ的平均新芽數結果100%1.741.11由上表可知，該方案下，培養６個月的鐵皮石斛成活率為100%，平均新發芽數為1.74，大於3cm的平均發芽數為1.11。實施例51.種子的誘導培養：去掉朔果乾枯部分，用自來水衝洗乾淨後，用70%酒精浸泡40s，再用0.1%升汞消毒5min，最後用無菌水衝洗4次。在無菌條件下切開朔果，把種子播種於誘導培養基上,以MS作為基本培養基,培養基加入椰油醯穀氨酸二鈉1g•Ｌ－１、蔗糖20g·Ｌ－１，瓊脂12g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl調pH5.2,在121℃高壓滅菌鍋滅菌25min；蓋上瓶蓋,置於培養室內進行培養.2.壯苗及生根培養:將上述獲得的鐵皮石斛幼芽從組培瓶中取出，在無菌條件下移入增殖和壯苗培養基中，蓋上瓶蓋，置於培養室內進行培養,溫度27℃，光照強度1800Ｌx。組培苗移栽:將鐵皮石斛幼苗經過常規煉苗處理後移栽於溫室大棚，溫室大棚以木屑、泥炭土作為基質，且木屑：泥炭土為1:2移栽後按常規管理，溼度保持在70～90%。培養６個月後調查成活率、平均新芽數及大於３ｃｍ的平均新芽數。項目成活率平均新發芽數大於３ｃｍ的平均新芽數結果100%2.201.31由上表可知，該方案下，培養６個月的鐵皮石斛成活率為100%，平均新發芽數為2.20，大於3cm的平均發芽數為1.31。當然，上述說明並非對本發明的限制，本發明也並不限於上述舉例。本
技術領域：
的普通技術人員在本發明的實質範圍內，作出的變化、改型、添加或替換，也應屬於本發明的保護範圍。當前第1頁1 2 3