一種生長基質及用其無性繁殖藥用植物重樓的方法與流程
2023-10-06 21:49:29
本發明屬於植物栽培領域，具體涉及一種生長基質及用其無性繁殖藥用植物重樓的方法。
背景技術：
：重樓是百合科(Liliaceae)重樓屬(ParisL.)植物的統稱，是多年生草本植物，多生於海拔600-3600m的林下陰溼處、溝谷邊或草叢中，在我國主要分布於雲南、四川等地。重樓味苦，性微寒，有小毒，以根莖入藥，其活性成分為總皂苷。常用於瘡瘍腫毒、毒蛇咬傷、乳腺炎、扁桃體炎、小兒驚風抽搐等病症的治療，是奪命丹、總皂苷片、雲南白藥、宮血寧以及其他製劑等中成藥的重要原料。從20世紀80年代開始，科研工作者便展開重樓有性和無性繁殖的研究，而「二次休眠」(第1年10月份至第3年5月份前後)的生理特性決定了重樓有性繁殖的局限性，自然條件下種子繁殖需經過兩冬一夏才能出土成苗，且從種植到收穫需要8-10年的時間，加之近年來重樓需求量的逐年增加導致了重樓野生種質資源的掠奪性破壞，因此，重樓的有性繁殖已無法滿足市場的需求。為了加強重樓資源的保護力度和解決重樓的供需矛盾，無性繁殖技術再次成為重樓資源可持續發展的焦點，且無性繁殖技術的研究主要集中在根莖切塊繁殖和組織培養兩個方面。技術實現要素：本發明的目的在於提供一種生長基質及用其無性繁殖藥用植物重樓的方法。本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：一種生長基質，由如下重量份的成分製備而成：園土，120-160份；高鈣粉煤灰，30-50份；鐵礬土，20-30份；凹凸棒石黏土，10-20份；腐植酸鈉，8-12份；水溶性鋅鹽，2-4份；水溶性鎂鹽，1-3份；水溶性鉀鹽，1-3份；水溶性銨鹽，1.5-2.5份；水，30-50份；番瀉葉提取物，6-10份；所述番瀉葉提取物的製備方法為：將番瀉葉用體積百分含量為70％-90％的乙醇溶液熱回流提取2-4次，合併提取液，減壓濃縮後噴霧乾燥即得。優選地，所述水溶性鋅鹽選用硫酸鋅、硝酸鋅中的一種或多種，所述水溶性鎂鹽選用硫酸鎂、硝酸鎂、氯化鎂中的一種或多種。優選地，所述水溶性鉀鹽選用硫酸鉀、硝酸鉀、氯化鉀中的一種或多種，水溶性銨鹽選用硫酸銨、硝酸銨、碳酸銨中的一種或多種。上述生長基質的製備方法，包括如下步驟：步驟A，將高鈣粉煤灰、鐵礬土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目；步驟B，將步驟A所得混合粉末與園土拌勻；步驟C，用水溶解腐植酸鈉、水溶性鋅鹽、水溶性鎂鹽、水溶性鉀鹽、水溶性銨鹽和番瀉葉提取物，攪拌均勻；步驟D，將步驟C所得水溶液均勻噴灑在步驟B所得混合固體上，邊翻動邊噴灑。一種使用上述生長基質無性繁殖藥用植物重樓的方法，包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導、叢生芽的增殖、生根培養、煉苗移栽，煉苗移栽使用上述生長基質。優選地，外植體選取重樓根莖帶頂芽的切段；消毒方法為：將外植體表面清洗乾淨，先用75％酒精消毒，再用0.1％氯化汞消毒兩次，吸乾即可。優選地，叢生芽的誘導方法為：將消毒後的外植體切成0.5cm大接入芽誘導培養基，芽誘導培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素2mg/LBA和0.4mg/LNAA；當無菌苗長至5-6釐米後，切取上部2-2.5釐米長頂芽莖段進行叢生芽的增殖。優選地，叢生芽的增殖方法為：將頂芽莖段接入芽增殖培養基，芽增殖培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素1mg/LBA和0.05mg/LNAA；當增殖的叢生芽長至3-4釐米後，將健壯的芽單切，並進行生根培養。優選地，生根培養方法為：將健壯的芽單切後接入生根培養基，生根培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素0.8mg/LNAA和75mg/L肌醇。優選地，煉苗移栽方法為：經生根培養基培養後，將發育良好，具有2-3片展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置於室溫下煉苗3-4天後取出小苗，用清水洗去根部培養基，在有70％-80％遮蔭度的大棚內，移栽到所述生長基質中，澆透水，並用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣30分鐘，噴水霧保持空氣溼度80％以上，10天後揭去薄膜，按常規管理。本發明的優點：本發明提供的生長基質及無性繁殖重樓的方法穩定高效，成活率高，且種苗的基礎總皂苷含量明顯升高，有利於生長出總皂苷含量豐富的藥用重樓。具體實施方式下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容。本領域的普通技術人員應當理解，對本發明技術方案的簡單修改或者等同替換不脫離本發明技術方案的實質和保護範圍。實施例1：藥用重樓的無性繁殖生長基質的製備：由如下重量份的成分製備而成：園土，140份；高鈣粉煤灰，40份；鐵礬土，25份；凹凸棒石黏土，15份；腐植酸鈉，10份；水溶性鋅鹽，3份；水溶性鎂鹽，2份；水溶性鉀鹽，2份；水溶性銨鹽，2份；水，40份；番瀉葉提取物，8份.所述番瀉葉提取物的製備方法為：將番瀉葉用體積百分含量為80％的乙醇溶液熱回流提取3次，合併提取液，減壓濃縮後噴霧乾燥即得。其中，所述水溶性鋅鹽選用硫酸鋅，也可以選用硝酸鋅，所述水溶性鎂鹽選用硫酸鎂，也可以選用硝酸鎂或氯化鎂；所述水溶性鉀鹽選用硫酸鉀，也可以選用硝酸鉀或氯化鉀，水溶性銨鹽選用硫酸銨，也可以選用硝酸銨或碳酸銨。製備方法包括如下步驟：步驟A，將高鈣粉煤灰、鐵礬土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目；步驟B，將步驟A所得混合粉末與園土拌勻；步驟C，用水溶解腐植酸鈉、水溶性鋅鹽、水溶性鎂鹽、水溶性鉀鹽、水溶性銨鹽和番瀉葉提取物，攪拌均勻；步驟D，將步驟C所得水溶液均勻噴灑在步驟B所得混合固體上，邊翻動邊噴灑。無性繁殖方法：包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導、叢生芽的增殖、生根培養、煉苗移栽，煉苗移栽使用上述生長基質。其中，外植體選取重樓根莖帶頂芽的切段；消毒方法為：將外植體表面清洗乾淨，先用75％酒精消毒，再用0.1％氯化汞消毒兩次，吸乾即可。其中，叢生芽的誘導方法為：將消毒後的外植體切成0.5cm大接入芽誘導培養基，芽誘導培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素2mg/LBA和0.4mg/LNAA；當無菌苗長至5-6釐米後，切取上部2-2.5釐米長頂芽莖段進行叢生芽的增殖。其中，叢生芽的增殖方法為：將頂芽莖段接入芽增殖培養基，芽增殖培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素1mg/LBA和0.05mg/LNAA；當增殖的叢生芽長至3-4釐米後，將健壯的芽單切，並進行生根培養。其中，生根培養方法為：將健壯的芽單切後接入生根培養基，生根培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素0.8mg/LNAA和75mg/L肌醇。其中，煉苗移栽方法為：經生根培養基培養後，將發育良好，具有2-3片展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置於室溫下煉苗3-4天後取出小苗，用清水洗去根部培養基，在有70％-80％遮蔭度的大棚內，移栽到所述生長基質中，澆透水，並用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣30分鐘，噴水霧保持空氣溼度80％以上，10天後揭去薄膜，按常規管理。實施例2：藥用重樓的無性繁殖生長基質的製備：由如下重量份的成分製備而成：園土，120份；高鈣粉煤灰，30份；鐵礬土，20份；凹凸棒石黏土，10份；腐植酸鈉，8份；水溶性鋅鹽，2份；水溶性鎂鹽，1份；水溶性鉀鹽，1份；水溶性銨鹽，1.5份；水，30份；番瀉葉提取物，6份。所述番瀉葉提取物的製備方法為：將番瀉葉用體積百分含量為70％的乙醇溶液熱回流提取4次，合併提取液，減壓濃縮後噴霧乾燥即得。其中，所述水溶性鋅鹽選用硫酸鋅，也可以選用硝酸鋅，所述水溶性鎂鹽選用硫酸鎂，也可以選用硝酸鎂或氯化鎂；所述水溶性鉀鹽選用硫酸鉀，也可以選用硝酸鉀或氯化鉀，水溶性銨鹽選用硫酸銨，也可以選用硝酸銨或碳酸銨。製備方法包括如下步驟：步驟A，將高鈣粉煤灰、鐵礬土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目；步驟B，將步驟A所得混合粉末與園土拌勻；步驟C，用水溶解腐植酸鈉、水溶性鋅鹽、水溶性鎂鹽、水溶性鉀鹽、水溶性銨鹽和番瀉葉提取物，攪拌均勻；步驟D，將步驟C所得水溶液均勻噴灑在步驟B所得混合固體上，邊翻動邊噴灑。無性繁殖方法：包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導、叢生芽的增殖、生根培養、煉苗移栽，煉苗移栽使用上述生長基質。其中，外植體選取重樓根莖帶頂芽的切段；消毒方法為：將外植體表面清洗乾淨，先用75％酒精消毒，再用0.1％氯化汞消毒兩次，吸乾即可。其中，叢生芽的誘導方法為：將消毒後的外植體切成0.5cm大接入芽誘導培養基，芽誘導培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素2mg/LBA和0.4mg/LNAA；當無菌苗長至5-6釐米後，切取上部2-2.5釐米長頂芽莖段進行叢生芽的增殖。其中，叢生芽的增殖方法為：將頂芽莖段接入芽增殖培養基，芽增殖培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素1mg/LBA和0.05mg/LNAA；當增殖的叢生芽長至3-4釐米後，將健壯的芽單切，並進行生根培養。其中，生根培養方法為：將健壯的芽單切後接入生根培養基，生根培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素0.8mg/LNAA和75mg/L肌醇。其中，煉苗移栽方法為：經生根培養基培養後，將發育良好，具有2-3片展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置於室溫下煉苗3-4天後取出小苗，用清水洗去根部培養基，在有70％-80％遮蔭度的大棚內，移栽到所述生長基質中，澆透水，並用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣30分鐘，噴水霧保持空氣溼度80％以上，10天後揭去薄膜，按常規管理。實施例3：藥用重樓的無性繁殖生長基質的製備：由如下重量份的成分製備而成：園土，160份；高鈣粉煤灰，50份；鐵礬土，30份；凹凸棒石黏土，20份；腐植酸鈉，12份；水溶性鋅鹽，4份；水溶性鎂鹽，3份；水溶性鉀鹽，3份；水溶性銨鹽，2.5份；水，50份；番瀉葉提取物，10份。所述番瀉葉提取物的製備方法為：將番瀉葉用體積百分含量為90％的乙醇溶液熱回流提取2次，合併提取液，減壓濃縮後噴霧乾燥即得。其中，所述水溶性鋅鹽選用硫酸鋅，也可以選用硝酸鋅，所述水溶性鎂鹽選用硫酸鎂，也可以選用硝酸鎂或氯化鎂；所述水溶性鉀鹽選用硫酸鉀，也可以選用硝酸鉀或氯化鉀，水溶性銨鹽選用硫酸銨，也可以選用硝酸銨或碳酸銨。製備方法包括如下步驟：步驟A，將高鈣粉煤灰、鐵礬土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目；步驟B，將步驟A所得混合粉末與園土拌勻；步驟C，用水溶解腐植酸鈉、水溶性鋅鹽、水溶性鎂鹽、水溶性鉀鹽、水溶性銨鹽和番瀉葉提取物，攪拌均勻；步驟D，將步驟C所得水溶液均勻噴灑在步驟B所得混合固體上，邊翻動邊噴灑。無性繁殖方法：包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導、叢生芽的增殖、生根培養、煉苗移栽，煉苗移栽使用上述生長基質。其中，外植體選取重樓根莖帶頂芽的切段；消毒方法為：將外植體表面清洗乾淨，先用75％酒精消毒，再用0.1％氯化汞消毒兩次，吸乾即可。其中，叢生芽的誘導方法為：將消毒後的外植體切成0.5cm大接入芽誘導培養基，芽誘導培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素2mg/LBA和0.4mg/LNAA；當無菌苗長至5-6釐米後，切取上部2-2.5釐米長頂芽莖段進行叢生芽的增殖。其中，叢生芽的增殖方法為：將頂芽莖段接入芽增殖培養基，芽增殖培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素1mg/LBA和0.05mg/LNAA；當增殖的叢生芽長至3-4釐米後，將健壯的芽單切，並進行生根培養。其中，生根培養方法為：將健壯的芽單切後接入生根培養基，生根培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素0.8mg/LNAA和75mg/L肌醇。其中，煉苗移栽方法為：經生根培養基培養後，將發育良好，具有2-3片展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置於室溫下煉苗3-4天後取出小苗，用清水洗去根部培養基，在有70％-80％遮蔭度的大棚內，移栽到所述生長基質中，澆透水，並用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣30分鐘，噴水霧保持空氣溼度80％以上，10天後揭去薄膜，按常規管理。對比實施例：生長基質的製備：由如下重量份的成分製備而成：園土，140份；高鈣粉煤灰，40份；鐵礬土，25份；凹凸棒石黏土，15份；腐植酸鈉，10份；水溶性鋅鹽，3份；水溶性鎂鹽，2份；水溶性鉀鹽，2份；水溶性銨鹽，2份；水，40份。其中，所述水溶性鋅鹽選用硫酸鋅，也可以選用硝酸鋅，所述水溶性鎂鹽選用硫酸鎂，也可以選用硝酸鎂或氯化鎂；所述水溶性鉀鹽選用硫酸鉀，也可以選用硝酸鉀或氯化鉀，水溶性銨鹽選用硫酸銨，也可以選用硝酸銨或碳酸銨。製備方法包括如下步驟：步驟A，將高鈣粉煤灰、鐵礬土和凹凸棒石黏土混合研磨至80-120目；步驟B，將步驟A所得混合粉末與園土拌勻；步驟C，用水溶解腐植酸鈉、水溶性鋅鹽、水溶性鎂鹽、水溶性鉀鹽和水溶性銨鹽，攪拌均勻；步驟D，將步驟C所得水溶液均勻噴灑在步驟B所得混合固體上，邊翻動邊噴灑。無性繁殖方法：包括外植體的選取、外植體的消毒、叢生芽的誘導、叢生芽的增殖、生根培養、煉苗移栽，煉苗移栽使用上述生長基質。其中，外植體選取重樓根莖帶頂芽的切段；消毒方法為：將外植體表面清洗乾淨，先用75％酒精消毒，再用0.1％氯化汞消毒兩次，吸乾即可。其中，叢生芽的誘導方法為：將消毒後的外植體切成0.5cm大接入芽誘導培養基，芽誘導培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素2mg/LBA和0.4mg/LNAA；當無菌苗長至5-6釐米後，切取上部2-2.5釐米長頂芽莖段進行叢生芽的增殖。其中，叢生芽的增殖方法為：將頂芽莖段接入芽增殖培養基，芽增殖培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素1mg/LBA和0.05mg/LNAA；當增殖的叢生芽長至3-4釐米後，將健壯的芽單切，並進行生根培養。其中，生根培養方法為：將健壯的芽單切後接入生根培養基，生根培養基以MS培養基為基礎培養基，附加5％蔗糖和1.2％瓊脂，調節pH至6.3；基礎培養基中還添加有激素0.8mg/LNAA和75mg/L肌醇。其中，煉苗移栽方法為：經生根培養基培養後，將發育良好，具有2-3片展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置於室溫下煉苗3-4天後取出小苗，用清水洗去根部培養基，在有70％-80％遮蔭度的大棚內，移栽到所述生長基質中，澆透水，並用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣30分鐘，噴水霧保持空氣溼度80％以上，10天後揭去薄膜，按常規管理。效果實施例：統計煉苗移栽10天後種苗成活率及總皂苷含量(地上部分，以薯蕷皂苷元對照品)。結果如下表：成活率總皂苷含量實施例1100％15.1％實施例2100％12.8％實施例3100％13.6％對比實施例91％3.9％上述結果表明，本發明提供的生長基質及無性繁殖重樓的方法穩定高效，成活率高，且種苗的基礎總皂苷含量明顯升高，有利於生長出總皂苷含量豐富的藥用重樓。本領域的普通技術人員應當理解，對本發明技術方案的簡單修改或者等同替換不脫離本發明技術方案的實質和保護範圍。當前第1頁1 2 3