絲石竹皂苷元衍生物的製作方法

2023-10-05 23:57:49 1

本發明屬於醫藥
技術領域：
，具體涉及一種天然產物絲石竹皂苷元的衍生物或其藥學上可接受的鹽及其製備方法和應用。
背景技術：
：絲石竹皂苷元(gypsogenin)又名棉根皂苷元，化學名為3β-羥基-12-烯-23-醛基-28-羧酸(3β-hydroxy-23-oxoolean-12-en-28-oicacid)，分子式為c30h46o4，相對分子量為470.70，熔點為273-274℃。具有抗癌、抗菌、抗肥胖、抗糖尿病等藥理作用，具有良好的藥用前景與開發價值。絲石竹皂苷元的結構式：絲石竹皂苷元(gypsogenin)，由日本植物學家noborukutani，首次從絲石竹中分離得到，具有很強的抗癌活性。但絲石竹皂苷元具有分子量大、分子極性大、脂溶性低等特點，從而降低了它的生物利用度，近年來，有文獻報導對其結構進行修飾，所得衍生物具有顯著的抗hl-60、ht-29、caco-2、saos-2、mcf-7、hela等癌細胞的作用，且在生物利用方面得到了提高。但所報導衍生物大多為3位羥基醯化、28位羧基成酯，鮮有23位修飾的報導，且未見28位成醯胺的報導。故以絲石竹皂苷元為先導化合物，設計系列23位、28位衍生物為十分重要的課題。技術實現要素：本發明的目的在於提供一種絲石竹皂苷元的衍生物或其藥學上可接受的鹽，以具有多種生物活性的絲石竹皂苷元為先導化合物，設計系列23位成腙、28位成醯胺的化學衍生物。本發明的另一目的在於提供該絲石竹皂苷元的衍生物或其藥學上可接受的鹽的製備方法。本發明的另一目的在於提供該絲石竹皂苷元的衍生物或其藥學上可接受的鹽的用途。本發明是通過下述的技術方案來實現的：一種具有式(i)結構的絲石竹皂苷元衍生物或其藥學上可接受的鹽：其中r1為羥基或乙醯氧基，r2為醛基或2,4-二硝基苯肼基，r3為哌啶基、羧基、嗎啉基、n-甲基哌嗪基、n-乙基哌嗪基、二甲胺基、二乙胺基、二正丁胺基、甲氧基、乙氧基、正丁氧基。優選的，所述r1為羥基、r2為2,4-二硝基苯肼基、r3為羧基(化合物2)。化合物2的結構式如下：所述r1為乙醯氧基、r2為醛基，r3為哌啶基、嗎啉基、n-甲基哌嗪基、n-乙基哌嗪基、二甲胺基、二乙胺基、二正丁胺基、甲氧基、乙氧基、正丁氧基。這些化合物本發明中標記為化合物4a-4j。化合物4a-4j具體結構式如下:化合物結構式4ar3＝n(ch2)54br3＝n(ch2)4o4cr3＝n(ch2)4nch34dr3＝n(ch2)4nc2h54er3＝n(ch3)24fr3＝n(c2h5)24gr3＝n(c4h9)24hr3＝ooch34ir3＝ooc2h54jr3＝ooc4h9所述r1為羥基、r2為醛基時，r3為哌啶基、嗎啉基、n-甲基哌嗪基、n-乙基哌嗪基、二甲胺基、二乙胺基、二正丁胺基。這些化合物本發明中標記為化合物6a-6g。化合物6a-6g具體結構式如下:化合物結構式6ar3＝n(ch2)56br3＝n(ch2)4o6cr3＝n(ch2)4nch36dr3＝n(ch2)4nc2h56er3＝n(ch3)26fr3＝n(c2h5)26gr3＝n(c4h9)2所述r1為乙醯氧基、r2為2,4-二硝基苯肼基，r3為哌啶基、嗎啉基、n-甲基哌嗪基、n-乙基哌嗪基、二甲胺基、二乙胺基、二正丁胺基、甲氧基、乙氧基、正丁氧基。這些化合物本發明中標記為化合物7a-7j。化合物7a-7j具體結構式如下:化合物結構式7ar3＝n(ch2)57br3＝n(ch2)4o7cr3＝n(ch2)4nch37dr3＝n(ch2)4nc2h57er3＝n(ch3)27fr3＝n(c2h5)27gr3＝n(c4h9)27hr3＝ooch37ir3＝n(c2h5)27jr3＝n(c4h9)2上述的絲石竹皂苷元衍生物或其藥學上可接受的鹽的製備方法，包括如下步驟:絲石竹皂苷元和2,4-二硝基苯肼反應得3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-羧酸，即得化合物2。或者，上述的絲石竹皂苷元衍生物或其藥學上可接受的鹽的製備方法，包括如下步驟:絲石竹皂苷元和乙酸酐反應得3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸化合物；3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸化合物與草醯氯反應，再分別與相應的仲胺、伯醇反應得3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯胺類化合物4a-4g和3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸酯類化合物4h-4j。或者，上述的絲石竹皂苷元衍生物或其藥學上可接受的鹽的製備方法，包括如下步驟:(1)絲石竹皂苷元和乙酸酐反應得3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸化合物；3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸化合物與草醯氯反應，再分別與相應的仲胺、伯醇反應得3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯胺類化合物4a-4g；(2)3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸化合物3與2,4-二硝基苯肼反應得3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2，4-二硝基苯腙)-28-羧酸化合物5；(3)3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯胺類化合物4a-4g經naoh水溶液水解得3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯胺類化合物6a-6g。或者，上述的絲石竹皂苷元衍生物或其藥學上可接受的鹽的製備方法，包括如下步驟:(1)絲石竹皂苷元(化合物1)和乙酸酐反應得3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸化合物3；化合物3與草醯氯反應，再分別與相應的仲胺、伯醇反應得3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯胺類化合物4a-4g和3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸酯類化合物4h-4j；(2)3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸化合物3與2,4-二硝基苯肼反應得3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-羧酸化合物5；(3)3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯胺類化合物4a-4g經naoh水溶液水解得3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯胺類化合物6a-6g；(4)3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-羧酸化合物5與草醯氯反應，再分別與相應的仲胺、伯醇反應得3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-醯胺類化合物7a-7g和3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-羧酸酯類化合物7h-7j。上述的絲石竹皂苷元衍生物或其藥學上可接受的鹽在製備治療抗腫瘤藥物中的應用。本發明的有益效果在於：本發明對天然產物絲石竹皂苷元進行化學修飾，得到一系列絲石竹皂苷元結構類似物，經過藥理實驗表明，它們對人體結腸癌lovo細胞和肺癌a549細胞具有明顯的抑制作用，且優於母體化合物。具體實施方式下面結合具體實施例對本發明作更進一步的說明，以便本領域的技術人員更了解本發明，但並不因此限制本發明。(1)絲石竹皂苷元(化合物1)和2,4-二硝基苯肼反應得3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-羧酸化合物2。其中，r1為羥基、r2為2,4-二硝基苯肼基、r3為羧基時，為化合物2：(2)絲石竹皂苷元(化合物1)和乙酸酐反應得3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸化合物3；化合物3與草醯氯反應，再分別與相應的仲胺、伯醇反應得3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯胺類化合物4a-4g和3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸酯類化合物4h-4j。r1為乙醯氧基、r2為醛基時，為化合物4a-4j，其中，r3為哌啶基、嗎啉基、n-甲基哌嗪基、n-乙基哌嗪基、二甲胺基、二乙胺基、二正丁胺基、甲氧基、乙氧基、正丁氧基。(3)3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸化合物3與2,4-二硝基苯肼反應得3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-羧酸化合物5。r1為乙醯氧基、r2為2,4-二硝基苯肼基、r3為羧基時，為化合物5：(4)3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯胺類化合物4a-4g經naoh水溶液水解得3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯胺類化合物6a-6g。r1為羥基、r2為醛基時，為化合物6a-6g，r3為哌啶基、嗎啉基、n-甲基哌嗪基、n-乙基哌嗪基、二甲胺基、二乙胺基、二正丁胺基。(5)3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-羧酸化合物5與草醯氯反應，再分別與相應的仲胺、伯醇反應得3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-醯胺類化合物7a-7g和3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-羧酸酯類化合物7h-7j。r1為乙醯氧基、r2為2,4-二硝基苯肼基時，為化合物7a-7j，其中，r3為哌啶基、嗎啉基、n-甲基哌嗪基、n-乙基哌嗪基、二甲胺基、二乙胺基、二正丁胺基、甲氧基、乙氧基、正丁氧基。實施例1：3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-羧酸(化合物2)的製備：將絲石竹皂苷元(100mg,2.12×10-4mol)和2,4-二硝基苯肼(63mg,3.18×10-4mol)溶解於5ml冰醋酸中，於室溫條件下攪拌4h。tlc控制反應終點，反應結束後，加入20ml蒸餾水，再加入乙酸乙酯萃取(3×10ml)，萃取液水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓乾燥，得粗品化合物2。粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/甲醇＝100/2(v/v)，得黃色粉末狀固體107.35mg，產率77.9％；mp206-207.1℃；ir(kbr)νmax:3452,3302,3101,2941,2860,2853,1697,1618,1589,1519,1463,1425,1386,1332,1277,1216,1139,1075,958,920,832,712,646,580,526,454cm-1；lc/ms(esi-ms)顯示[m+na]+＝673.1提示化合物的分子量為650.37，分子組成為c36h50n4o7；1h-nmr(c5d5n,600mhz)δ:11.54(s,1h,-chnnh-),9.07(d,2.4hz,1h,phh-3),8.33(dd,9.6,2.4hz,1h,phh-5),8.06(d,9.6hz,1h,phh-6),7.90(s,1h,-chnnh-),5.52(brs,1h,12-h),3.96(dd,j＝11.40,5.40hz,1h,h-3),3.32(dd,j＝13.50,4.50hz,1h,h-18),1.51(s,1h,h-24),1.27(s,3h,h-27),1.03(s,3h,h-30),1.03(s,3h,h-26),0.98(s,3h,h-29),0.98(s,3h,h-25)；13c-nmr(c5d5n,150mhz)δ:180.19(c-28),163.13(c-23),145.55(ph-1),144.84(c-13),137.44(ph-4),129.79(ph-5),129.06(ph-2),123.84(ph-6),122.34(c-12),116.95(ph-3),74.99(c-3),51.50(c-4),49.29(c-9),48.32(c-5),46.66(c-17),46.49(c-19),42.20(c-14),42.02(c-18),40.05(c-8),38.64(c-1),36.74(c-10),36.74(c-21),34.22(c-22),33.30(c-29),33.16(c-20),32.75(c-7),30.98(c-15),28.31(c-2),27.15(c-11),26.17(c-27),23.81(c-16),23.77(c-30),20.59(c-6),17.42(c-26),15.94(c-25),11.77(c-24)。實施例2：n-[3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯]-哌啶(化合物4a)的製備：絲石竹皂苷元(94mg,2.0×10-4mol)和dmap(2.44mg,2.0×10-5mol)溶解於5ml吡啶中，於室溫下攪拌加入乙酸酐，tlc控制反應終點。24h後，反應結束，將反應液轉置冰水混合物中，有白色固體析出，乙酸乙酯萃取(3×10ml)，萃取液水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物3，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/丙酮＝100/1(v/v)，得純品化合物3。化合物3(40mg,7.8×10-5mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml,36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次，再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺，調ph至中性後，加入哌啶(4.0×10-2ml,4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物4a，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/丙酮＝100/0.5(v/v)，得白色固體粉末38.07mg，產率84.3％；mp117.2-118.1℃；ir(kbr)νmax:3435,3358,2937,2854,1735,1630,1465,1446,1371,1240,1028,1002,800,739,679,641,602,526,471cm-1；lc/ms(esi–ms)顯示[m+h]+＝580.5，提示化合物的分子量為579.43，分子組成為c37h57no4；1h-nmr(c5d5n,600mhz)δ:9.53(s,1h,h-23),5.44(brs,1h,12-h),5.24(dd,j＝11.10,5.70hz,1h，h-3),3.59(m,4h,-n(ch2)2-(ch2)3),3.42(dd,j＝14.70,3.90hz,1h,h-18),1.94(s,3h,ch3coo-),1.50(m,4h,-n(ch2)2-(ch2)2-ch2),1.31(m,2h,-n(ch2)4-ch2),1.27(s,1h,h-24),1.22(s,3h,h-27),0.98(s,3h,h-30),0.97(s,3h,h-26),0.92(s,3h,h-29),0.91(s,3h,h-25)；13c-nmr(c5d5n,150mhz)δ:204.79(c-23),174.45(c-28),170.19(ch3coo-),145.61(c-13),121.29(c-12),73.54(c-3),54.69(c-4),47.89(c-9),47.86(c-5),47.54(-n(ch2)2-(ch2)3),46.82(c-17),46.65(c-19),44.18(c-14),42.28(c-18),39.84(c-8),37.75(c-1),36.05(c-10),36.05(c-21),34.30(c-22),33.20(c-20),32.59(c-7),30.58(c-29),29.98(c-2),28.32(c-15),26.51(-n(ch2)2-(ch2)2-ch2),26.13(c-11),25.05(-n(ch2)4-ch2),24.19(c-16),23.64(c-30),22.81(c-27),20.83(ch3coo-)，20.83(c-6),17.20(c-26),15.57(c-25),9.78(c-24)。實施例3：n-[3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯]-嗎啉(化合物4b)的製備：化合物3(40mg,7.8×10-5mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml,2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次，再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺，調ph至中性後，加入嗎啉(3.52×10-2ml,4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物4b，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/丙酮＝100/0.5(v/v)，得純品化合物4b。實施例4：n-[3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯]-二甲胺(化合物4c)的製備：化合物3(40mg，7.8×10-5mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml,2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次，再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺，調ph至中性後，加入二甲基胺(1.8×10-2ml,4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物4c，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/丙酮＝100/0.5(v/v)，得得純品化合物4c。實施例5：n-[3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯]-二乙胺(化合物4d)的製備：化合物3(40mg，7.8×10-5mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次，再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺，調ph至中性後，加入二乙基胺(2.9×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物4d，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/丙酮＝100/0.5(v/v)，得得純品化合物4d。實施例6：n-[3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯]-二正丁胺(化合物4e)的製備：化合物3(40mg，7.8×10-5mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次，再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺，調ph至中性後，加入二正丁胺(5.2×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物4e，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/丙酮＝100/0.5(v/v)，得得純品化合物4e。實施例7：n-[3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯]-n-甲基哌嗪(化合物4f)的製備：化合物3(40mg，7.8×10-5mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次，再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺，調ph至中性後，加入n-甲基哌嗪(4.0×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物4f，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/丙酮＝100/1(v/v)，得得純品化合物4f。實施例8：n-[3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯]-n-乙基哌嗪(化合物4g)的製備：化合物3(40mg，7.8×10-5mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次，再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺，調ph至中性後，加入n-乙基哌嗪(4.6×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物4g，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/丙酮＝100/1(v/v)，得得純品化合物4g。實施例9：3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸甲酯(化合物4h)的製備：化合物3(40mg，7.8×10-5mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次，再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺，調ph至中性後，加入甲醇(1.3×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物4h，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/丙酮＝100/0.5(v/v)，得得純品化合物4h。實施例10：3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸乙酯(化合物4i)的製備：化合物3(40mg，7.8×10-5mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次，再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺，調ph至中性後，加入乙醇(1.85×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物4i，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/丙酮＝100/0.5(v/v)，得得純品化合物4i。實施例11：3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-羧酸正丁酯(化合物4j)的製備：化合物3(40mg，7.8×10-5mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次，再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺，調ph至中性後，加入正丁醇(3.0×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物4j，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/丙酮＝100/0.5(v/v)，得得純品化合物4j。實施例12：3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-羧酸(化合物5)的製備：將化合物3(100mg，1.95×10-4mol)和2,4-二硝基苯肼(60mg，3.03×10-4mol)溶解於5ml冰醋酸中，於室溫條件下攪拌4h。tlc控制反應終點，反應結束後，加入20ml蒸餾水，再加入乙酸乙酯萃取(3×10ml)，萃取液水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓乾燥，得粗品化合物5。粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/丙酮＝100/1(v/v)，得黃色粉末狀固體116.89mg，產率86.5％。mp230.2-231.3℃；ir(kbr)νmax:3295,3103,2930,2861,2853,1697,1618,1591,1520,1460,1428,1370,1333,1270,1241,1071,1026,945,920,832,739,613,515,449cm-1；lc/ms(esi-ms)顯示[m-h]-＝692.10，提示化合物的分子量為692.38，分子組成為c35h55no3；1h-nmr(cdcl3,600mhz)δ:11.00(s,1h,-chnnh-),9.12(d,2.4hz,1h,phh-3),8.30(dd,9.6,2.4hz,1h,phh-5),7.91(d,9.6hz,1h,phh-6),7.25(s,1h,-chnnh-),5.29(brs,1h,12-h),4.92(dd,j＝11.70,4.20hz,1h,h-3),2.83(dd,j＝14.10,4.50hz,1h,h-18),1.96(s,3h,ch3coo-),1.23(s,1h,h-24),1.16(s,3h,h-27),1.04(s,3h,h-30),0.93(s,3h,h-26),0.91(s,3h,h-29),0.77(s,3h,h-25)；13c-nmr(cdcl3,150mhz)δ:183.73(c-28),170.54(ch3coo-),158.58(c-23),145.12(ph-1),143.63(c-13),137.84(ph-4),129.97(ph-5),128.99(ph-2),123.53(ph-6),122.17(c-12),116.44(ph-3),76.00(c-3),52.06(c-4),47.80(c-9),47.26(c-5),46.52(c-17),45.78(c-19),41.65(c-14),40.98(c-18),39.60(c-8),37.84(c-1),36.55(c-10),33.75(c-22),33.05(c-20),32.41(c-7),32.22(c-21),30.68(c-29),29.70(c-2),27.63(c-15),25.94(c-30),23.56(c-27),22.95(c-11),22.78(c-16),21.21(ch3coo-),20.11(c-6),17.04(c-26),15.80(c-25),11.98(c-24)。實施例13：n-[3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯]-哌啶(化合物6a)的製備：化合物4a溶解於無水乙醇中，加入2mol/lnaoh水溶液，調ph10，於室溫下攪拌反應5h，tlc檢測反應終點。反應完成後，用1mol/lhcl水溶液調ph3-4，有機相無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得粗品化合物6a。粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/甲醇＝100/2(v/v)，得白色粉末狀固體116.89mg，產率86.5％；mp220.2–223.4℃；ir(kbr)νmax:3423,3178,2932,2851,2673,1728,1600,1479,1421,1364,1243,1134,1052,997,767,673,635,580,526,438cm-1；lc/ms(esi-ms)顯示[m+h]+＝538.4，提示化合物的分子量為537.42，分子組成為c35h55no3；1h-nmr(c5d5n,600mhz)δ:9.66(s,1h,h-23),6.44(brs,1h,12-h),5.43(dd,1h,j＝11.10,5.70hz,h-3),4.06(dd,j＝15.60,3.90hz,1h,h-18),3.59(m,4h,-n(ch2)2-(ch2)3),1.50(m,4h,-n(ch2)2-(ch2)2-ch2),1.40(s,1h,h-24),1.31(m,2h,-n(ch2)4-ch2),1.27(s,3h,h-27),0.98(s,3h,h-30),0.95(s,3h,h-26),0.95(s,3h,h-29),0.89(s,3h,h-25)；13c-nmr(c5d5n,150mhz)δ:207.43(c-23),174.49(c-28),145.64(c-13),121.51(c-12),71.73(c-3),56.39(c-4),48.15(c-9),47.84(c-5),47.59(-n(ch2)2-(ch2)3),46.87(c-17),46.69(c-19),44.27(c-14),42.33(c-18),39.95(c-8),38.54(c-1),36.27(c-10),36.27(c-21),34.34(c-22),33.24(c-20),32.82(c-7),30.63(c-2),30.04(c-29),28.39(c-15),27.13(c-11),26.55(-n(ch2)2-(ch2)2-ch2),26.16(-n(ch2)4-ch2),25.09(c-16),23.79(c-27),24.22(c-30),21.16(c-6),17.34(c-26),15.84(c-25),9.76(c-24)。實施例14：n-[3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯]-嗎啉(化合物6b)的製備：化合物4b溶解於無水乙醇中，加入2mol/lnaoh水溶液，調ph10，於室溫下攪拌反應5h，tlc檢測反應終點。反應完成後，用1mol/lhcl水溶液調ph3-4，有機相無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得粗品化合物6b。粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/甲醇＝100/2(v/v)，得純品化合物6b。實施例15：n-[3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯]-二甲胺(化合物6c)的製備：化合物4c溶解於無水乙醇中，加入2mol/lnaoh水溶液，調ph10，於室溫下攪拌反應5h，tlc檢測反應終點。反應完成後，用1mol/lhcl水溶液調ph3-4，有機相無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得粗品化合物6c。粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/甲醇＝100/2(v/v)，得純品化合物6c。實施例16：n-[3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯]-二乙胺(化合物6d)的製備：化合物4d溶解於無水乙醇中，加入2mol/lnaoh水溶液，調ph10，於室溫下攪拌反應5h，tlc檢測反應終點。反應完成後，用1mol/lhcl水溶液調ph3-4，有機相無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得粗品化合物6d。粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/甲醇＝100/2(v/v)，得純品化合物6d。實施例17：n-[3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯]-二正丁胺(化合物6e)的製備：化合物4e溶解於無水乙醇中，加入2mol/lnaoh水溶液，調ph10，於室溫下攪拌反應5h，tlc檢測反應終點。反應完成後，用1mol/lhcl水溶液調ph3-4，有機相無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得粗品化合物6e。粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/甲醇＝100/2(v/v)，得純品化合物6e。實施例18：n-[3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯]-n-甲基哌嗪(化合物6f)的製備：化合物4f溶解於無水乙醇中，加入2mol/lnaoh水溶液，調ph10，於室溫下攪拌反應5h，tlc檢測反應終點。反應完成後，用1mol/lhcl水溶液調ph3-4，有機相無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得粗品化合物6f。粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/甲醇＝100/3(v/v)，得純品化合物6f。實施例19：n-[3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-23-醛基-28-醯]-n-乙基哌嗪(化合物6g)的製備：化合物4g溶解於無水乙醇中，加入2mol/lnaoh水溶液，調ph10，於室溫下攪拌反應5h，tlc檢測反應終點。反應完成後，用1mol/lhcl水溶液調ph3-4，有機相無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得粗品化合物6g。粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為氯仿/甲醇＝100/3(v/v)，得純品化合物6g。實施例20：n-[3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-醯]-哌啶(化合物7a)的製備：化合物5(70mg，1.01×10-4mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次。再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺調ph至中性後，加入哌啶(4.0×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物7a，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯＝1/1(v/v)，得白色固體粉末70.13mg，產率92.4％；mp117.2-118.1℃；ir(kbr)νmax:3441,3283,3099,2928,2854,2036,1726,1618,1590,1520,1465,1423,1332,1308,1244,1136,1030,951,914,825,741,599,530,441cm-1；lc/ms(esi–ms)顯示[m+h]+＝760.6提示化合物的分子量759.46，分子組成為c43h61n5o7；1h-nmr(cdcl3，600mhz)δ:10.99(1h,s,-chnnh-),9.11(1h,d,2.4hz,phh-3),8.30(1h,dd,9.6,2.4hz,phh-5),7.90(1h,d,9.6hz,phh-6),7.25(1h,s,-chnnh-),5.28(1h,brs,12-h),4.90(1h,dd,j＝11.40,4.80hz,h-3),3.52-3.57(4h,m,-n(ch2)2(ch2)3),3.10(1h,dd,j＝14.10,4.50hz,h-18),1.94(3h,s,ch3coo-),1.46-1.51(4h,m,-n(ch2)2-(ch2)2-ch2),1.30-1.36(2h,m,-n(ch2)4-ch2),1.23(1h,s,h-24),1.16(3h,s,h-27),1.04(3h,s,h-30),0.93(3h,s,h-26),0.90(3h,s,h-29),0.78(3h,s,h-25)；13c-nmr(cdcl3,150mhz)δ:174.64(c-28),170.52(ch3coo-),158.78(c-23),145.15(ph-1),145.14(c-13),137.79(ph-4),129.99(ph-5),128.93(ph-2),123.50(ph-6),120.81(c-12),116.44(ph-3),76.06(c-3),53.44(-n(ch2)2-(ch2)3),52.20(c-4),48.02(c-17),47.34(c-9),47.30(c-5),46.56(c-19),43.66(c-14),41.92(c-18),39.44(c-8),37.86(c-1),36.59(c-10),36.59(c-21),34.09(c-22),33.09(c-20),32.49(c-7),30.40(c-29),29.70(c-2),28.01(c-15),26.16(c-30),22.84(c-11),24.10(-n(ch2)2-(ch2)2-ch2)，23.35(c-16),22.96(c-27),22.57(-n(ch2)4-ch2),21.21(ch3coo-),20.19(c-6),16.94(c-26),15.84(c-25),11.99(c-24)。實施例21：n-[3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-醯]-嗎啉(化合物7b)的製備：化合物5(70mg，1.01×10-4mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次。再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺調ph至中性後，加入嗎啉(3.52×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物7b，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯＝1/1(v/v)，得純品化合物7b。實施例22：n-[3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-醯]-二甲胺(化合物7c)的製備：化合物5(70mg，1.01×10-4mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次。再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺調ph至中性後，加入二甲胺(1.8×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物7c，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯＝1/1(v/v)，得純品化合物7c。實施例23：n-[3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-醯]-二乙胺(化合物7d)的製備：化合物5(70mg，1.01×10-4mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次。再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺調ph至中性後，加入二乙胺(2.9×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物7d，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯＝1/1(v/v)，得純品化合物7d。實施例24：n-[3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-醯]-二正丁胺(化合物7e)的製備：化合物5(70mg，1.01×10-4mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次。再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺調ph至中性後，加入二正丁胺(5.2×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物7e，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯＝1/1(v/v)，得純品化合物7e。實施例25：n-[3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-醯]-n-甲基哌嗪(化合物7f)的製備：化合物5(70mg，1.01×10-4mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次。再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺調ph至中性後，加入n-甲基哌嗪(4.0×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物7f，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯＝1/3(v/v)，得純品化合物7f。實施例26：n-[3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-醯]-n-乙基哌嗪(化合物7g)的製備：化合物5(70mg，1.01×10-4mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次。再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺調ph至中性後，加入n-乙基哌嗪(4.6×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物7g，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯＝1/3(v/v)，得純品化合物7g。實施例27：3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-羧酸甲酯(化合物7h)的製備：化合物5(70mg，1.01×10-4mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次。再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺調ph至中性後，加入甲醇(1.3×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物7h，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯＝1/1(v/v)，得純品化合物7h。實施例28：3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-羧酸乙酯(化合物7i)的製備：化合物5(70mg，1.01×10-4mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次。再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺調ph至中性後，加入乙醇(1.85×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物7i，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯＝1/1(v/v)，得純品化合物7i。實施例29：3β-乙醯氧基-齊墩果烷型-12-烯-23-(2,4-二硝基苯腙)-28-羧酸正丁酯(化合物7j)的製備：化合物5(70mg，1.01×10-4mol)溶於3ml乾燥二氯甲烷中，於室溫下攪拌加入草醯氯(2.0×10-1ml，2.36×10-3mol)，12h後，終止反應，減壓蒸乾溶劑，加入二氯甲烷溶解，蒸乾溶劑，重複操作三次。再加入二氯甲烷溶解，於室溫下攪拌依次加入三乙胺調ph至中性後，加入二正丁醇(3.0×10-2ml，4.04×10-4mol)，繼續攪拌8h，tlc控制反應終點。反應結束後，以2mol/l的鹽酸水溶液調ph3-4，加入飽和氯化鈉水溶液，有機相水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得粗品化合物7j，粗品經矽膠柱色譜純化，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯＝1/1(v/v)，得純品化合物7j。以順鉑為陽性對照物，採用mtt法對絲石竹皂苷元及所合成的化合物進行初步的體外抗腫瘤活性測試。研究表明所合成化合物對人體結腸癌lovo細胞和肺癌a549細胞具有明顯的抑制作用，且部分化合物優於母體化合物，化合物結構與體外實驗結果如表1和表2所示。表1目標化合物對lovo細胞的體外抗腫瘤活性註：a為化合物濃度在10-5mol/l時測得的抑制率；b為ic50表示半數有效抑制濃度。表2目標化合物對a549細胞的體外抗腫瘤活性註：a為化合物濃度在10-5mol/l時測得的抑制率；b為ic50表示半數有效抑制濃度。當前第1頁12