LycojaponicuminC在治療白血病藥物中的應用的製作方法

2023-10-11 15:47:54 2

Lycojaponicumin C在治療白血病藥物中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及Lycojaponicumin?C在製備治療白血病藥物中的應用，屬於醫藥領域。Lycojaponicumin?C在製備治療白血病藥物中的應用；Lycojaponicumin?C在製備抑制白血病細胞增殖藥物中的應用，Lycojaponicumin?C在製備誘導白血病細胞凋亡藥物中的應用。Lycojaponicumin?C通過抑制白血病細胞增殖和誘導白血病細胞凋亡，來對白血病進行治療。對於本發明涉及的Lycojaponicumin?C在製備治療白血病藥物中的用途屬於首次公開，由於骨架類型屬於全新的骨架類型，而且其對於白血病細胞的抑制活性強得意想不到。
【專利說明】Lycojapon i cumi n C在治療白血病藥物中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及Lycojaponicumin C的用途,尤其涉及Lyco japonicumin C在製備治療白血病藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]急性白血病是一類造血幹細胞異常的克隆性惡性疾病。其克隆中的白血病細胞失去進一步分化成熟的能力而停滯在細胞發育的不同階段。在骨髓和其他造血組織中白血病細胞大量增生積聚並浸潤其他器官和組織，同時使正常造血受抑制，臨床表現為貧血、出血、感染及各器官浸潤症狀。根據統計，白血病約佔腫瘤總發病率的3%左右，是兒童和青年中最常見的一種惡性腫瘤。白血病的發病率在世界各國中，歐洲和北美發病率最高，其死亡率為3.2-7.4/10萬人口。尋找能夠防治急性白血病的藥物顯得非常迫切。
[0003]本發明涉及的化合物Lycojaponicumin C是一個2012年發表(Wang, X.J.etal., 2012.Lycojaponicumins A-C, Three Alkaloids with an Unprecedented Skeletonfrom Lycopodium japonicum.0rganic Lettersl4 (10)，2614-2617.)的新骨架化合物，對於本發明涉及的在製備治療白血病藥物中的用途屬於首次公開，由於骨架類型屬於全新的骨架類型，而且其對於白血病細胞的細胞毒性和凋亡誘導的生物活性強得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實質性特點，同時用於白血病的防治顯然具有顯著的進步。

【發明內容】

[0004]本發明提供一種Lycojaponicumin C在製備治療白血病的藥物中的應用，以增加Lycojaponicumin C在藥物中的應用。
[0005]Lycojaponicumin C 在製備治療白血病的藥物中的應用。
[0006]Lycojaponicumin C通過抑制白血病細胞(HL-60細胞)增殖和誘導白血病細胞(HL-60細胞)凋亡，來對白血病進行治療。
[0007]所述化合物Lycojaponicumin C結構如式(I )所示:
[0008]H3°w
%

N

CH3
式(I)
[0009]本發明涉及的Lycojaponicumin C在製備治療白血病藥物中的用途屬於首次公開，而且由於骨架類型屬於全新的骨架類型，而且其對於白血病細胞的細胞毒性和凋亡誘導的生物活性強得意想不到，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實質性特點，同時用於白血病的防治顯然具有顯著的進步。
【具體實施方式】
[0010]本發明所涉及化合物Lycojaponicumin C的製備方法參見文獻(Wang, X.J.etal.，2012.Lycojaponicumins A-Cj Three Alkaloids with an Unprecedented Skeletonfrom Lycopodium japonicum.0rganicLettersl4(10)，2614-2617.)。
[0011]以下通過實施例對本發明作進一步詳細的說明，但本發明的保護範圍不受具體實施例的任何限制，而是由權利要求加以限定。
[0012]實施例1:本發明所涉及化合物Lycojaponicumin C片劑的製備:
[0013]取20克化合物Lycojaponicumin C，加入製備片劑的常規輔料180克，混勻，常規壓片機製成1000片。
[0014]實施例2:本發明所涉及化合物Lycojaponicumin C膠囊劑的製備:
[0015]取20克化合物Lycojaponicumin C,加入製備膠囊劑的常規輔料如澱粉180克,混勻，裝膠囊製成1000片。
[0016]下面通過藥效學實驗來進一步說明其藥物活性。
[0017]試驗例:Lyco japonicumin C抑制HL-60細胞增殖和誘導HL-60細胞凋亡
[0018]I材料和方法
[0019]1.1材料RPMI1640培養基購於Gibco公司；四甲基偶氮唑鹽(MTT)、羅丹明123為Sigma公司產品；Caspase_3, 9分光光度法檢測試劑盒購自南京凱基生物有限公司；其他化學試劑均為國產分析純。
[0020]1.2細胞培養人早幼粒細胞性白血病細胞株HL-60購於中科院上海細胞生物研究所，培養於含10%胎牛血清的RPMI1640培養液中，青黴素100kU/L，鏈黴素100mg/L，37°C，5%C02，飽和溼度培養箱內培養，取對數生長期細胞進行實驗。
[0021]L 3人外周血單個核細胞(PBMC)的分離
[0022]無菌採集健康供者靜脈血，肝素抗凝(每毫升全血加0.1ml的200U/ml肝素鈉溶液)，PBS等倍稀釋血液，1:4加入人淋巴細胞分離液，2000rpm離心20min，收集乳白層後用無血清RPM1-1640培養基1500rpml0min離心洗滌2次，獲得單個核細胞，臺盼藍拒染率大於95%，重懸於10%FCS的RPM1-1640培養基中備用。
[0023]1.4 Lycojaponicumin C 對 HL-60 細胞和人 PBMC 生長的影響
[0024]接種HL-60細胞和人PBMC與96孔板，每孔2 X IO4個細胞(IOOul )。37°C、5%C02條件下培養 24h 後，實驗組一次加 0.625、1.25,2.5,5.0,10.0ug/mL 的 Lyco japonicumin C，繼續分別培養24、48、72h後，終止培養，設只加培養液的對照組，每個劑量組設4個復孔。實驗結束前4h，每孔加入20ul MTT溶液(5g/L)，繼續孵育4h，終止培養，小心吸棄上清液，每孔加入150uL DMS0，震蕩lOmin，選擇570nm波長，在自動酶聯檢測儀上測定各孔吸光度(A)值，重複實驗3次，並計算其生長抑制率(Cl)。Cl=(陰性對照組A值-實驗組A值)/陰性對照組A值X 100%。
[0025]1.5流式細胞術測定細胞凋亡率
[0026]收集0、2.5、5.0、10.0ug/mL Lycojaponicumin C 處理 48h 的各組細胞，PBS 洗漆2次，加入預冷的70%乙醇於-20°C固定24h，離心洗滌後加入200uL PI染液，50ul RNA酶，4°C避光放置20min，1500rpm離心5min。調整細胞濃度為I X IO5個/ml~I X IO6個/ml，上流式細胞儀分析，激發光源為氬離子雷射，激發波長為488nm。
[0027]1.6統計學分析本實驗結果應用統計分析
[0028]軟體SPSS13.0處理，所有實驗結果採用x±s表示，組間比較採用單因素方差分析。
[0029]2 結果
[0030]2.1Lycojaponicumin C 對 HL-60 細胞及 PBMC 生長的影響
[0031]對照組HL-60 細胞生長活躍，經 0.625、1.25、2.5、5.0、10.0ug/mL 的Lycojaponicumin C處理72h後，HL-60細胞生長均不同程度的減慢，並呈濃度依賴性。在相同濃度下，培養72h Lycojaponicumin C對人PBMC幾乎無抑制作用，與HL-60細胞比較有顯著性差異(P〈0.05)(見表1)。
[0032]表1 Lycojaponicumin C 對 HL-60 細胞增殖的影響(x±s, n=4)
[0033]
Lycojaponicu增值抑制率/%
min C72h 72h (PBMC)

(ug/mL)
0.625丨 4.1 土2.1 0.0 土 0.0AA
1.2529.2 土 3.7** 0.5±0.2AA
2.5048.3 ±5.6*0 1.9 ±0.4「
5.0062.4 ±6.1，3.8±0.7aa
10.073.1±2.7**λ 8.1 ±0.5「
[0034]與24h 比較 *ρ〈0.05**ρ〈0.01 ;與 48h 比較 Λ ρ〈0.05 Δ Δ ρ〈0.01 ;與 72h 比較▲p〈0.05AAp<0.0l
[0035]2.2流式細胞術檢測HL-60細胞凋亡
[0036]HL-60細胞與不同濃度的Lycojaponicumin C作用48h後，經流式細胞儀分析，結果顯示G1期峰前均出現了代表細胞凋亡的亞二倍體峰，在一定濃度範圍內隨著LycojaponicuminC 濃度增升高,HL-60 細胞凋亡率升高，其中 10.0ug/mL LycojaponicuminC作用48h凋亡率達到(27.56±4.87)% (表2)。
[0037]表2 Lycojaponicumin C 作用 48h 後對 HL-60 細胞凋亡率的影響(x± s, n=3)
[0038]
組別劑量凋亡率
I ug/mL)%
陰性對照O0.52 ±0.11
LycojaponicuminC2.58.53 ± 1.98*
5.015.24 土 1.1 3**
10.023.55±2.87**
[0039]與陰性對照組比較*ρ〈(λ 05, **p<0.01
[0040]結論:Lycojaponicumin C能夠抑制白血病細胞(HL-60細胞)增殖和誘導白血病細胞(HL-60細胞)凋亡，因此，可以用來對白血病進行治療。
【權利要求】
1.Lycojaponicumin C在治療白血病藥物中的應用，所述化合物Lycojaponicumin C結構如式(I )所示:
【文檔編號】A61K31/438GK103463064SQ201310435482
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月23日 優先權日:2013年9月23日
【發明者】吳俊華, 黃蓉 申請人:南京廣康協生物醫藥技術有限公司