-甲基腺苷的化學脫甲基方法
2023-10-11 11:34:34
-甲基腺苷的化學脫甲基方法
【專利摘要】本發明涉及用化學方法特異性的使RNA中N6-甲基腺苷脫甲基化，具體方法如下：雙氧水和碳酸氫銨在水相中反應生成過氧碳酸HCO4-，之後N6-甲基腺苷N6位上的N原子作為親核試劑進攻HCO4-，經歷N6-過氧甲基胞嘧啶（oxm6A），N6-羥甲基胞嘧啶（hm6A）和N6-醛基胞嘧啶（f6A）的中間產物後，最終脫甲基生成腺苷。
【專利說明】RNA中N6-甲基腺苷的化學脫甲基方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及RNA中N6-甲基腺苷的化學脫甲基方法，屬於化學生物學領域。
【背景技術】
[0002]N6-甲基腺苷是真核生物mRNA中最豐富的化學修飾，也存在於tRNA，rRNA，InRNA 中，自上世紀70年代最初發現以來，目前在哺乳動物植物、蒼蠅、減數分裂的酵母和在細胞 核增殖的病毒中都發現了m6A的存在。在細胞mRNA中，m6A佔所有腺苷的0. 1%到0. 4%， 一條mRNA上大約有3-5個m6A位點，由於N6位的一個甲基不能改變它的Watson-Crick鹼 基配對的性質，因此不能依靠逆轉錄的方法來檢測m6A，這限制了m6A的功能研究。最近，研 究發現FTO和AlkBH5可以作為m6A的脫甲基化酶，證明了m6A的甲基化是一個動態的過程， 揭示了哺乳動物中一種新的調節機制，這種可逆的甲基化現象可能影響基因的表達。其次， 免疫沉澱法結合二代測序技術為m6A功能的研究提供了可能。這些研究為m6A修飾在生物 體內的功能研究提供了的幫助。
【發明內容】
[0003] 本發明所要解決的技術問題是在於提供一種有效的化學方法使N6-甲基腺苷脫甲 基。
[0004]N6-甲基腺苷是上世紀七十年代發現並在最近成為研究的熱門，目前已證實了其 在生物體內的甲基化是動態的過程，但目前發現的脫甲基化都是酶促反應，並沒有有效的 化學方法氧化N6-甲基腺苷。據文獻報導，碳酸氫銨活化的過氧化氫氧化試劑是簡單經濟 的製備三級胺氮-氧化合物的方法，因此我們想利用此方法氧化N6-甲基腺苷成為硝酮結 構，但實際反應後發現，最終產物並不是硝酮結構的氧化物，而是脫甲基產物，在此化學反 應中我們又發現並證實了一個新的中間產物N6-過氧甲基腺苷（Oxm6A)。反應式如下：
[0006] 中間產物結構式如下：
【權利要求】
1. 一種N6-甲基腺苷的化學脫甲基方法，其特徵在於，以N6-甲基腺苷、碳酸氫銨及雙 氧水為原料，以水作溶劑在37°C下反應4h，HPLC分離得到白色固體，為N 6-腺苷。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，2mM N6-甲基腺苷與1M碳酸氫銨及200mM 雙氧水反應，以水作溶劑在37°C下反應24h，HPLC分離得到白色固體，為脫甲基腺苷。
【文檔編號】C07H1/00GK104262434SQ201410586145
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月28日 優先權日:2014年10月28日
【發明者】周翔, 吳晉軍, 翁小成 申請人:武漢大學