一種雞腿菇子實體多糖與呈味物質及其製備方法
2023-10-22 20:26:57 1
專利名稱：一種雞腿菇子實體多糖與呈味物質及其製備方法
技術領域：
本發明涉及食用菌提取及深加工領域，具體地涉及一種雞腿菇子實體多糖與呈味物質及其製備方法。
背景技術：
毛頭鬼傘[Coprinuscomatus (Mueller, ex Fr. ) S. F. Gray],俗稱雞腿燕、雞腿蘑，是一種食、藥用真菌，其肉質細嫩，鮮美可口，色香味俱全。藥用味甘滑，性平，有益脾胃，清心安神，治痔等功效。據文獻報導，毛頭鬼傘主要具有降血糖、降血脂、增強免疫、抗腫瘤、抑菌等作用。雞腿菇多糖作為雞腿菇中最重要的活性成分之一，具有多種生物活性和藥理作用，具有增強機體免疫、抗腫瘤、降血糖、降血脂、抗氧化等作用。
目前關於雞腿菇提取及深加工的研究，大多集中在雞腿菇多糖的提取、分離純化、結構及生物活性作用探討等方面，而對雞腿菇中香氣、鮮味等風味物質的研究較少，風味成分丟棄，造成雞腿菇原料利用率低、產品附加值低的現狀。
發明內容
本發明首先提供了一種雞腿菇子實體多糖與呈味物質，其是用如下方法製備得到的複合酶提取將雞腿菇子實體粉碎，按料液比1:15-1:20加入水，然後加入O. 5%-3. 0% (w/v)的複合酶，於50°C -60°C反應l_4h ;酶滅活，過濾得到濾渣和濾液I ;水提濾渣再按1:15-1:20添加水，於90-1201反應l_2h，過濾；收集濾液並與濾液I合併作為濾液2 ；醇沉將濾液2進行濃縮，然後添加無水乙醇，至乙醇的質量百分比濃度達到40-80%, 4-20°C下，靜置8-12h，離心，沉澱即為雞腿菇多糖；上清液回收乙醇，水相部分即為呈味物質。具體的說，本發明的雞腿菇子實體多糖與呈味物質，是用如下方法製備得到的①提取將雞腿菇子實體於50-60°C烘乾後粉碎過200目篩網，按料液比1:15-1:20加入蒸餾水充分浸泡20-30min，然後添加O. 5%_3. 0% (w/v)的複合酶，於500C -60°C反應l_4h，沸水滅酶活15-20min，過濾得到濾渣和濾液I ;②濾渣再按1:15-1:20添加蒸餾水，於1001反應l_2h，過濾，收集濾液並與濾液I合併作為濾液2 ； ③提取液濃縮將濾液2按照濃縮比1:3進行濃縮；④乙醇醇沉向上述濃縮液裡添加無水乙醇，至乙醇的質量百分比濃度達到40-80%，充分攪勻後於4-20°C，靜置8-12h，離心，沉澱用70%乙醇洗滌1_2次，即為雞腿菇多糖；上清液回收乙醇，水相部分即得雞腿菇中呈味物質；⑤乾燥將沉澱用5-10倍蒸餾水溶解後，水浴揮去殘留乙醇，冷凍乾燥即得雞腿菇粗多糖；呈味物質按料液比1:25濃縮備用。
其中所述的複合酶為風味酶、木瓜蛋白酶、纖維素酶三種酶的複合酶，三者複合的質量比例為1:1-2:1-9。本發明具體的說提供了一種雞腿菇子實體多糖，其是用如下方法製備得到的複合酶提取將雞腿菇子實體粉碎，按料液比1:15-1:20加入水，然後加入O. 5%-3. 0% (w/v)的複合酶，於50°C -60°C反應l_4h ;酶滅活，過濾得到濾渣和濾液I ;水提濾渣再按1:15-1:20添加水，於90-1201反應l_2h，過濾；收集濾液並與濾液I合併作為濾液2 ； 醇沉將濾液2進行濃縮，然後添加無水乙醇，至乙醇的質量百分比濃度達到40-80%, 4-20°C下，靜置8-12h，離心，沉澱即為雞腿菇多糖；其中所述的複合酶為風味酶、木瓜蛋白酶和纖維素酶的複合酶，三者質量比例為1:1-2:1-9。本發明還提供了一種雞腿菇子實體呈味物質，其是用如下方法製備得到的複合酶提取將雞腿菇子實體粉碎，按料液比1:15-1:20加入水，然後加入O. 5%-3. 0% (w/v)的複合酶，於50°C -60°C反應l_4h ;酶滅活，過濾得到濾渣和濾液I ;水提濾渣再按1:15-1:20添加水，於90-1201反應l_2h，過濾；收集濾液並與濾液I合併作為濾液2 ；醇沉將濾液2進行濃縮，然後添加無水乙醇，至乙醇的質量百分比濃度達到40-80%, 4-20°C下，靜置8-12h，離心，上清液回收乙醇，水相部分即為呈味物質；其中所述的複合酶為風味酶、木瓜蛋白酶和纖維素酶的複合酶，三者質量比例為1:1-2:1-9。其中所得到的呈味物質主要為游離胺基酸和可溶性固形物；其中可溶性固形物是指液體或流體食品中所有溶解於水的化合物的總稱。包括糖、酸、維生素、礦物質等，主要是指可溶性糖類，包括單糖、雙糖，多糖(除澱粉，纖維素、幾丁質、半纖維素不溶於水)，本實驗中主要用來衡量液體中可溶性糖的含量，因為可溶性糖及糖醇也是風味物質的一部分。其中的游離胺基酸的量可採用茚三酮比色法測定。其中的可溶性固形物可採用手持式數顯糖度計測定。本發明還提供了製備上述雞腿菇子實體多糖與呈味物質的方法，該方法為本發明首先提供了一種雞腿菇子實體多糖與呈味物質，其是用如下方法製備得到的複合酶提取將雞腿菇子實體粉碎，按料液比1:15-1:20加入水，然後加入O. 5%-3. 0% (w/v)的複合酶，於50°C -60°C反應l_4h ;酶滅活，過濾得到濾渣和濾液I ;水提濾渣再按1:15-1:20添加水，於90-1201反應l_2h，過濾；收集濾液並與濾液I合併作為濾液2 ；醇沉將濾液2進行濃縮，然後添加無水乙醇，至乙醇的質量百分比濃度達到40-80%，4-20°C下，靜置8-12h，離心，沉澱即為雞腿菇多糖；上清液回收乙醇，水相部分即為呈味物質。本發明製備的雞腿菇多糖提取物得率達7. 7%，游離胺基酸的量達34. 7mg/g，可溶性固形物1.8° Brix，實現了多糖和呈味物質的同時製備，提高了雞腿菇子實體原料的利用率，且製備的雞腿菇子實體多糖能夠顯著地刺激巨噬細胞產生NO活性。食用菌中含有豐富的胺基酸、呈味核苷酸等呈味物質，具有濃鬱的鮮香風味而且營養豐富、食用安全，作為新型保健食品調味料，具有調味增香的作用，適用於日式、西式和中式烹調的調味料，具有廣闊前景，因此此方法製備的呈味物質對於食用菌調味品的開發有極其重要的作用，同時也有利於提高食用菌的經濟效益。本方法從雞腿菇綜合利用的角度出發，同時製備雞腿菇多糖和呈味物質，有利於提高雞腿菇的利用率，提高其原料的附加值。
具體實施例方式本發明使用的雞腿菇子實體購於上海百信生物科技有限公司；本發明使用的風味酶購於諾維信(中國)生物技術有限公司； 本發明使用的木瓜蛋白酶購於Sigma-Aldrich公司(批號039kl451)；本發明使用的纖維素酶購於國藥集團化學試劑有限公司(批號F20110526)實施例I稱取雞腿菇乾粉2g於50mL錐形瓶中，按照料液比I :20加入蒸餾水，充分浸泡25min後，風味酶、木瓜蛋白酶和纖維素酶的複合酶添加量為O. 5% (W/V) (I: I: I )，50°C反應4h，酶解完畢後沸水浴滅酶活20min，離心過濾，收集濾液，按濃縮比1:3旋轉蒸發濃縮濾液，然後加無水乙醇至乙醇終濃度分別為40%、60%、70%，4°C靜置12h，4000rpm離心15min，沉澱用相應濃度乙醇洗滌2次，冷凍乾燥，測定粗多糖含量與得率。實驗結果40%、60%、70% 多糖含量分別為 89. 7%, 72. 2%, 59. 9% ;得率分別為 3. 1%、4· 6%、6. 8% ;游離胺基酸的量分別為39. 5,28. 3,32. 2mg/g ;可溶性固形物的量分別為I. 5、I. 2、1.3。Brix0其中的游離胺基酸的量可採用茚三酮比色法測定。其中的可溶性固形物可採用手持式數顯糖度計測定實施例2稱取雞腿菇乾粉2g於50mL錐形瓶中，按照料液比I :20加入蒸餾水，充分浸泡30min後，添加風味酶、木瓜蛋白酶和纖維素酶的複合酶進行酶解反應，置於一定溫度水浴反應一定時間，酶解完畢後沸水浴滅酶活15min，離心過濾，收集濾液，按濃縮比1:3旋轉蒸發濃縮濾液，然後加無水乙醇至乙醇終濃度為70%，4°C靜置8h，4000rpm離心15min，上清定容至50mL，測定可溶性固形物的量，然後再稀釋至合適濃度測定游離胺基酸的量，沉澱70%乙醇洗滌一次，冷凍乾燥，測定粗多糖得率。按O. 5% (W/V)量添加風味酶、木瓜蛋白酶和纖維素酶的複合酶，三種酶的質量比例為1: 1: 1，先50°c反應2h，沸水滅酶活後，過濾，收集濾液，濾渣按料液比1:15加蒸餾水，於100°C反應2h，4000rpm離心15min合併濾液。實驗結果游離胺基酸量為34. 7mg/g，可溶性固形物量在I. 7° Brix ;粗多糖得率為7. 7%。實施例3體外刺激巨噬細胞生成NO實驗本實施例中RAW264. 7骨髓巨噬細胞株，購自美國國家菌種保藏中心(ATCC numberTIB-71 )；本實施例中DMEM、RPMI1640購於GIBCO公司。供試樣品的配製精確稱取實例2製備的雞腿菇子實體粗多糖樣品於滅菌的印pendorf管中，用PBS緩衝液配置成濃度5mg/mL。充分溶解後以12000rpm/min離心30min,無菌條件下轉移至新的無菌印pendorf管中，將樣品稀釋成50、200、500 μ g/mL待用。陰性對照為PBS緩衝液，陽性對照為10 μ g/mL LPS溶液。小鼠RAW264. 7巨噬細胞的製備用DMEM培養基在37 °C、5%C02條件下傳代培養後，用O. 25%胰蛋白酶消化，混懸液300 X g離心3min後收集細胞，用無色RPMI1640培養基將細胞稀釋到一定濃度備用。巨噬細胞釋放NO活性的測定由於NO極不穩定，在體內很快生成亞硝酸基(N02—)和硝酸基(N03—)，故採用Griess法測定樣品中的N027N03—作為衡量NO水平的指標。(I)用亞硝酸鈉制標準曲線配成不同濃度的亞硝酸鈉溶液，濃度梯度為0、5、10、15、20、25、30、35、40μΜ共9個濃度梯度；取100μ L於96孔板，加入50 μ L Griess試劑，測定543nm吸光值，標準曲線每個濃度3個重複，繪製標準曲線。
(2) NO產量測定巨噬細胞的培養液消化完畢後用無色RPMI1640培養基(含10%胎牛血清、1%抗生素液體)將細胞稀釋至5 X 105/ml，每孔180 μ L加入96孔板，然後再加入20 μ L各濃度待測樣品和陰性(PBS)、陽性(LPS，10 μ g/mL)對照，於37°C、含5%的C02條件下培養48h後，取100 μ L培養上清於96孔板，加入50 μ L Griess試劑，顯色IOmin後，于波長543nm處測定吸光度，根據標準曲線計算相應的NO量。實驗結果雞腿菇子實體粗多糖在濃度50 μ g/mL時，刺激巨噬細胞產生NO的量(單位μ moL/5. OX IO5Cells)為23. 91 ;在濃度 200 μ g/mL 時，產生 NO 量為 42. 61 ;在濃度500 μ g/mL時，產生NO量為69. 68，陰性對照7. 89，陽性對照(濃度I μ g/mL) 63. 26，樣品組顯著高於陰性對照活性(P〈0. 05)，粗多糖在500 μ g/mL時活性高於陽性對照LPS，表現出良好的刺激巨噬細胞產生NO活性。
權利要求
1.一種雞腿菇子實體多糖與呈味物質，其特徵在於是用如下方法製備得到的 複合酶提取將雞腿菇子實體粉碎，按料液比1:15-1:20加入水，然後加入O. 5%-3. 0%(w/v)的複合酶，於50°C -60°C反應l_4h ;酶滅活，過濾得到濾渣和濾液I ; 水提濾渣再按1:15-1:20添加水，於90-1201反應l_2h，過濾；收集濾液並與濾液I合併作為濾液2 ； 醇沉將濾液2進行濃縮，然後添加無水乙醇，至乙醇的質量百分比濃度達到40-80%，4-20°C下，靜置8-12h，離心，沉澱即為雞腿菇多糖；上清液回收乙醇，水相部分即為呈味物質； 其中所述的複合酶為風味酶、木瓜蛋白酶和纖維素酶的複合酶，三者質量比例為
2.根據權利要求I所述的雞腿菇子實體多糖與呈味物質，其特徵在於是用如下方法製備得到的 ①提取將雞腿菇子實體於50-60°C烘乾後粉碎過200目篩網，按料液比1:15-1:20加入蒸餾水充分浸泡20-30min，然後添加O. 5%_3. 0%(w/v)的複合酶，於50°C _60°C反應l_4h，沸水滅酶活15-20min，過濾得到濾渣和濾液I ; ②濾渣再按1:15-1:20添加蒸餾水，於1001反應l_2h，過濾，收集濾液並與濾液I合併作為濾液2 ； ③提取液濃縮將濾液2按照濃縮比1:3進行濃縮； ④乙醇醇沉向上述濃縮液裡添加無水乙醇，至乙醇的質量百分比濃度達到40-80%，充分攪勻後於4-20°C，靜置8-12h，離心，沉澱用70%乙醇洗滌1_2次，即為雞腿菇多糖；上清液回收乙醇，水相部分即得雞腿菇中呈味物質； ⑤乾燥將沉澱用5-10倍蒸餾水溶解後，水浴揮去殘留乙醇，冷凍乾燥即得雞腿菇粗多糖；呈味物質按料液比1:25濃縮備用。
3.一種製備權利要求I或2中任一項所述雞腿菇子實體多糖與呈味物質的方法，其特徵在於該方法為 複合酶提取將雞腿菇子實體粉碎，按料液比1:15-1:20加入水，然後加入O. 5%-3. 0%(w/v)的複合酶，於50°C -60°C反應l_4h ;酶滅活，過濾得到濾渣和濾液I ; 水提濾渣再按1:15-1:20添加水，於90-1201反應l_2h，過濾；收集濾液並與濾液I合併作為濾液2 ； 醇沉將濾液2進行濃縮，然後添加無水乙醇，至乙醇的質量百分比濃度達到40-80%，4-20°C下，靜置8-12h，離心，沉澱即為雞腿菇多糖；上清液回收乙醇，水相部分即為呈味物質； 其中所述的複合酶為風味酶、木瓜蛋白酶和纖維素酶的複合酶，三者質量比例為
4.一種雞腿菇子實體多糖，其特徵在於是用如下方法製備得到的 複合酶提取將雞腿菇子實體粉碎，按料液比1:15-1:20加入水，然後加入O. 5%-3. 0%(w/v)的複合酶，於50°C -60°C反應l_4h ;酶滅活，過濾得到濾渣和濾液I ; 水提濾渣再按1:15-1:20添加水，於90-1201反應l_2h，過濾；收集濾液並與濾液I合併作為濾液2 ；醇沉將濾液2進行濃縮，然後添加無水乙醇，至乙醇的質量百分比濃度達到40-80%，4-20°C下，靜置8-12h，離心，沉澱即為雞腿菇多糖； 其中所述的複合酶為風味酶、木瓜蛋白酶和纖維素酶的複合酶，三者質量比例為
5.一種雞腿菇子實體呈味物質，其特徵在於是用如下方法製備得到的 複合酶提取將雞腿菇子實體粉碎，按料液比1:15-1:20加入水，然後加入O. 5%-3. 0%(w/v)的複合酶，於50°C -60°C反應l_4h ;酶滅活，過濾得到濾渣和濾液I ; 水提濾渣再按1:15-1:20添加水，於90-1201反應l_2h，過濾；收集濾液並與濾液I合併作為濾液2 ； 醇沉將濾液2進行濃縮，然後添加無水乙醇，至乙醇的質量百分比濃度達到40-80%，4-20°C下，靜置8-12h，離心，上清液回收乙醇，水相部分即為呈味物質； 其中所述的複合酶為風味酶、木瓜蛋白酶和纖維素酶的複合酶，三者質量比例為
全文摘要
本發明提供了一種雞腿菇子實體多糖與呈味物質及其製備方法，該多糖與呈味物質是通過複合酶提取、水提、醇沉的方法製備得到的。該方法實現了多糖和呈味物質的同時製備，提高了雞腿菇子實體原料的利用率，且製備的雞腿菇子實體多糖能夠顯著地刺激巨噬細胞產生NO活性。
文檔編號A23L1/221GK102860494SQ201210362978
公開日2013年1月9日 申請日期2012年9月25日 優先權日2012年9月25日
發明者吳迪, 楊焱, 顏夢秋, 張勁松, 谷鎮, 劉豔芳, 周帥, 馮娜 申請人:上海市農業科學院