一種伊立替康藥凍幹製劑、其製備方法及用途與流程

2023-10-23 14:42:27 4

本發明屬於藥物學和製劑學領域，涉及一種伊立替康藥凍幹製劑、其製備方法及用途。本發明還涉及用於製備該凍幹製劑的試劑組合和溶液。
背景技術：
：喜樹鹼是從珙桐科植物喜樹中分離的生物鹼，用於治療多種腫瘤。伊立替康是半合成喜樹鹼衍生物，是喜樹鹼類藥物中毒性最低，療效高的藥物，是用於治療轉移性結直腸癌一線藥物，也用於肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌和胰腺癌的治療。伊立替康的結構如下面的式i所示。鹽酸伊立替康的結構如下面的式ii所示。目前市面上的伊立替康製劑為鹽酸伊立替康注射液。但是，該注射液有一定的毒性，並且在療效和穩定性方面也需要進一步提高。技術實現要素：本發明人經過深入的研究和創造性的勞動，得到了一種試劑組合和溶液。進一步地，本發明人由該試劑組合或溶液製得了一種伊立替康凍幹製劑。本發明人驚奇地發現，該凍幹製劑毒性減少、療效增強、穩定性好。此外，本發明人還得到了製備該凍幹製劑的方法。由此提供了下述發明：本發明的一個方面涉及一種試劑組合，其包含：伊立替康叔丁醇溶液，和白蛋白水溶液，其中，伊立替康叔丁醇溶液的濃度為1－6mg/ml，例如2－4mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml或6mg/ml；伊立替康與白蛋白的質量比為小於或等於1：8，優選地，小於或等於1：10，伊立替康叔丁醇溶液與白蛋白水溶液的體積比為大於或等於1：3並且小於1：1。在本發明的一個實施方案中，所述的試劑組合，其特徵在於如下的(1)－(6)中的任意一項或者多項：(1)所述伊立替康叔丁醇溶液的濃度為3mg/ml；(2)所述白蛋白為牛血清白蛋白或人血清白蛋白；(3)所述白蛋白水溶液的濃度為10－50mg/ml，優選為20－25mg/ml；(4)伊立替康與白蛋白的質量比為(1：8)－(1：20)，優選為(1：10)－(1：15)，更優選為(1：10)－(1：13)；例如，1：10，1：10.8、1：11，1：12，1：13，1：14或1：15；(5)伊立替康叔丁醇溶液與白蛋白水溶液的體積比為1：(1.1－1.5)，例如，1：1.1，1：1.2，1：1.3，1：1.4或1：1.5；優選地，伊立替康叔丁醇溶液與白蛋白水溶液的體積比為1：1.3；(6)所述白蛋白水溶液還包含ph調節劑，優選地，所述ph調節劑選自碳酸氫鈉和磷酸氫二鈉；(7)所述白蛋白水溶液的ph值為5－9，優選為8－9。本發明的另一方面涉及一種溶液，其包含伊立替康、白蛋白、叔丁醇和水，其中，伊立替康的濃度為0.25－3mg/ml，伊立替康與白蛋白的質量比為小於或等於1：8，叔丁醇的體積分數為大於或等於25％，並且小於50％。在本發明的一個實施方案中，所述的溶液，其特徵在於如下的(1)－(6)項中的任意一項或者多項：(1)所述伊立替康的濃度為0.5－2.5mg/ml、0.75－2mg/ml或0.75－1.5mg/ml，例如0.75mg/ml、1.0mg/ml、1.1mg/ml、1.2mg/ml、1.25mg/ml、1.3mg/ml、1.4mg/ml、1.5mg/ml、1.6mg/ml、1.7mg/ml、1.75mg/ml、1.8mg/ml、1.9mg/ml或2mg/ml；(2)所述白蛋白為牛血清白蛋白或人血清白蛋白；(3)伊立替康與白蛋白的質量比為小於或等於1：10或者為(1：8)－(1：20)，優選為(1：10)－(1：15)，更優選為(1：10)－(1：13)；例如，1：10，1：10.8、1：11，1：12，1：13，1：14或1：15；(4)所述叔丁醇的體積分數為30％－48％、35％－48％或40％－48％，例如40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、4％7或48％；(5)所述溶液還包含ph調節劑，優選地，所述ph調節劑選自碳酸氫鈉和磷酸氫二鈉；(6)所述溶液的ph值為5－9，優選為8－9。本發明的另一方面涉及一種溶液，其通過如下步驟製得：將前面所述的伊立替康叔丁醇溶液加入到所述的白蛋白水溶液中；優選地，將所述的伊立替康叔丁醇溶液緩慢加入到所述的白蛋白水溶液中；優選地，所述加入在攪拌條件下進行；優選地，還包括前面步驟的產物進行除菌的步驟；優選地，通過0.22μm濾膜過濾除菌。伊立替康目前的藥用形式是鹽酸鹽，即鹽酸伊立替康注射液。鹽酸伊立替康雖然有很好的水溶性，但是幾乎不與白蛋白結合。伊立替康在水中很少溶解，本發明人發現，伊立替康能和白蛋白結合。本發明人發現，在叔丁醇和水作為溶劑時，叔丁醇的比例需要低於50％，如果叔丁醇體積分數高於50％，白蛋白會發生變性凝固；但是，如果叔丁醇比例過低，例如低於約25％，伊立替康會析出。因此，叔丁醇和水需要適宜的比例。本發明人發現，伊立替康在叔丁醇中溶解1－6mg/ml，最佳是3mg/ml。叔丁醇和水的比例為1:1.1－1.5，最佳為1:1.3。叔丁醇和水作溶劑，體系的ph為8－9為最佳，在此範圍內可避免白蛋白的變性凝固(表2－3)，優選加入碳酸氫鈉和/或磷酸氫二鈉。白蛋白的量是伊立替康鹼的8－20倍(w/w)，均有90％藥物的結合率。本發明的再一方面涉及一種製備伊立替康凍幹製劑的方法，包括將本發明任一項所述的溶液進行凍幹的步驟；優選地，在-30至-50℃的溫度下進行冷凍乾燥。本發明的再一方面涉及一種伊立替康凍幹製劑，其由本發明所述的製備方法製得。本發明的再一方面涉及一種伊立替康凍幹製劑，包括伊立替康和白蛋白，其中，伊立替康和白蛋白的質量比為小於或等於1：8，優選為小於或等於1：10或者為(1：8)－(1：20)，更優選為(1：10)－(1：15)，進一步優選為(1：10)－(1：13)；例如，1：10，1：10.8、1：11，1：12，1：13，1：14或1：15。在本發明的一個實施方案中，所述的伊立替康凍幹製劑，其中，所述白蛋白為牛血清白蛋白或人血清白蛋白。在本發明的一個實施方案中，所述的伊立替康凍幹製劑，其還包括一種或多種藥學上可接受的輔料；優選地，所述輔料包括ph調節劑；優選地，所述ph調節劑選自碳酸氫鈉和磷酸氫二鈉。10倍於伊立替康質量的白蛋白為優選。製劑經-30到-50c凍幹，樣品成淺黃色，經用生理鹽水或5％葡萄糖溶解後，成透明狀態，沒有微粒，可保持12小時穩定。經在小鼠實驗，毒性減少，抗瘤作用增強。在使用時，將凍乾粉加入注射用溶媒復溶，即可形成平均粒徑在150－250納米白蛋白微粒。本發明的再一方面涉及一種伊立替康注射液，其通過將本發明中任一項所述的伊立替康凍幹製劑以注射用葡萄糖溶液或生理鹽水稀釋製得。本發明的再一方面涉及本發明中任一項所述的試劑組合、本發明任一項所述的溶液、本發明中任一項所述的伊立替康凍幹製劑或者本發明的伊立替康注射液在製備治療和/或預防癌症的藥物中的用途；優選地，所述癌症選自直腸癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、肉瘤和胰腺癌中的一種或多種。本發明的再一方面涉及一種治療和或預防癌症的方法，包括基於有需求的受試者以有效量的本發明中任一項所述的伊立替康凍幹製劑或者本發明的伊立替康注射液的步驟；優選地，所述癌症選自直腸癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、肉瘤和胰腺癌中的一種或多種。根據本發明中任一項所述的試劑組合、溶液、伊立替康凍幹製劑或者伊立替康注射液，其用於治療和或預防癌症；優選地，所述癌症選自直腸癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、肉瘤和胰腺癌中的一種或多種。本發明中，術語「有效量」是指可在受試者中實現治療、預防、減輕和/或緩解本發明所述疾病或病症的劑量。術語「受試者」可以指患者或者其它接受本發明製劑以治療、預防、減輕和/或緩解本發明所述疾病或病症的動物，特別是哺乳動物，例如人、狗、猴、牛、馬等。術語「疾病和/或病症」是指所述受試者的一種身體狀態，該身體狀態與本發明所述疾病和/或病症有關。發明的有益效果本發明建立了伊立替康白蛋白的製劑工藝，本專利採用叔丁醇和水作為溶劑系統方法，將伊立替康溶解在該系統中，經冰凍乾燥技術製成伊立替康白蛋白凍乾粉，該製劑性質穩定，毒性減少，療效增強。具體實施方式下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用於說明本發明，而不應視為限定本發明的範圍。實施例中未註明具體條件者，按照常規條件或製造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未註明生產廠商者，均為可以通過市購獲得的常規產品。伊立替康(寧波天衡製藥有限公司)牛血清白蛋白(美國sigama公司)叔丁醇(國藥集團化學試劑公司)鹽酸伊立替康注射液(寧波天衡製藥有限公司)製備例1：凍幹製劑1的製備稱取伊立替康300mg，加入100ml叔丁醇，震動或微熱溶解，作為a相。稱取牛血清白蛋白3000mg，加入蒸餾水130ml溶解，加入0.5m磷酸氫二鈉1ml，混合均勻，作為b相。將a相緩慢加入到b相中，混合均勻，0.22μm膜過濾，得透明黃色溶液。將得到的溶液分裝到西林瓶中，每瓶裝4.3ml，在-30℃冷凍乾燥機凍幹48小時。得黃色凍乾粉，每瓶藥量5mg。另外，本發明人還在研究中發現，如果將b相加入到a相中(其它條件不變)，則會產生沉澱。製備例2：凍幹製劑2的製備稱取伊立替康300mg加入100ml叔丁醇，震動或微熱溶解，作為a相。稱取3000mg牛血清白蛋白，加入蒸餾水120ml溶解，加入0.5m碳酸氫鈉1ml，混合均勻，作為b相。將a相緩慢加入到b相中，混合均勻，0.22μm膜過濾，得透明黃色溶液。將得到的溶液分裝到西林瓶中，每瓶裝4.1ml，在-30℃冷凍乾燥機凍幹48小時。得黃色凍乾粉，每瓶藥量5mg。製備例3：凍幹製劑3的製備稱取伊立替康300mg加入100ml叔丁醇，震動或微熱溶解，作為a相。稱取3000mg人血清白蛋白，加入蒸餾水130ml溶解，加入0.5m磷酸二氫鈉1ml，混合均勻，作為b相。將a相緩慢加入到b相中，混合均勻，0.22μm膜過濾，得透明黃色溶液。將得到的溶液分裝到西林瓶中，每瓶裝4.3ml，在-30℃冷凍乾燥機凍幹48小時。得黃色凍乾粉，每瓶藥量5mg。實施例1：伊立替康在叔丁醇中的溶解實驗分別稱取伊立替康10mg、20mg、30mg、40mg、60mg，並分別加入到10ml叔丁醇中，觀察溶解情況。實驗結果如下面的表1所示。表1：伊立替康在叔丁醇中的溶解情況伊立替康叔丁醇濃度溶解情況10mg10ml1mg/ml室溫溶解20mg10ml2mg/ml室溫溶解30mg10ml3mg/ml室溫溶解40mg10ml4mg/ml加熱溶解60mg10ml6mg/ml加熱溶解結果表明，室溫下伊立替康在叔丁醇中的濃度可達3mg/ml。另外，考慮到避免白蛋白結構變化，操作優選在室溫條件進行。因此，優選的伊立替康叔丁醇溶液的濃度為3mg/ml。實施例2：體系配比和磷酸氫二鈉溶液的影響1.實驗方法在室溫下配製3mg/ml的伊立替康叔丁醇溶液。在室溫下配製2.5％(質量百分比)的牛血清白蛋白水溶液，加入0.1ml的0.5m磷酸氫二鈉溶液。將伊立替康叔丁醇溶液緩慢加入到牛血清白蛋白水溶液中，混合均勻，室溫下靜置。2.實驗結果如下面的表2和表3所示。表2：叔丁醇和水的比例研究表3：叔丁醇和水的比例及磷酸氫二鈉溶液的作用研究結果表明：1)叔丁醇可以使得白蛋白凝固，但在有一定量的水的情況下，可以避免叔丁醇對白蛋白的凝固作用。在不加磷酸氫二鈉溶液的情況下，對於叔丁醇10ml而言，水15ml或以上不會產生凝固反應。2)磷酸氫二鈉可以減輕叔丁醇對白蛋白的凝固作用。另外，本發明人還發現，磷酸氫二鈉與白蛋白溶液預先混合，比其它時機加入效果更好；此時白蛋白水溶液的ph約為8－9。實施例3：白蛋白結合率測定實驗1.實驗儀器和耗材液相色譜儀(安捷倫1200)分子截留管(美國millipore)2.實驗方法配製伊立替康叔丁醇溶液以及牛血清白蛋白水溶液，濃度見下面的表3。配製方法參考前面的製備例1中的相應步驟。將伊立替康叔丁醇溶液緩慢加入到牛血清白蛋白水溶液中，混合均勻，室溫下靜置，30分鐘後，利用分子截留管(截留分子量3000)把未結合的伊立替康分離出去。將不同樣品定量裝進分子截留管，在蒸餾水中浸泡10小時。未被白蛋白結合的伊立替康進入蒸餾水中，用液相色譜按常規進行含量測定，以c18為固定相，30％乙晴(0.06m/l三乙胺，0.05mol/l醋酸鈉，0.17mol/l醋酸)為流動相，紫外波長254nm。結合率＝(總藥量－未結合藥量)/總藥量×100％。2.實驗結果如下面的表4。表4：白蛋白結合率結果顯示，白蛋白是伊立替康的10.8倍質量為較佳用量，再提高白蛋白用量沒有明顯地提高結合率，只是明顯增加了白蛋白用量。因此，伊立替康與白蛋白的質量比可在1：(10－13)之間。實施例4：體內抗腫瘤實驗(1)1.實驗方法取腹水型s180小鼠腫瘤細胞(軍事醫學科學院藥理毒理中心提供)。腹水液用生理鹽水稀釋3倍，取0.2ml接種在昆明種鼠(軍事醫學科學院動物中心提供)右前肢皮下，每組8隻小鼠，一共6組(具體分組如下面的表4)。在接種後第2天開始尾靜脈注射給藥，所用藥物為製備例1方法製取，用生理鹽水稀釋，每天一次，連續3次(第2、3、4天)，同一組中每次給藥劑量相同，總劑量見下表。在治療後第8天實驗結束，取瘤稱重量。抑瘤率(％)＝(對照組－治療組)/對照組×100％。2.實驗結果結果如下面的表5所示。表5：伊立替康白蛋白的毒性和對小鼠腫瘤的抗瘤作用結果顯示：相同劑量，伊立替康白蛋白毒性低，如表4，b組和d組，劑量均為160mg/kg，體重下降分別為6.2％和2.3％(p<0.05)，抗瘤作用分別為57.1％和60.3％。但相同毒性的劑量，本發明製劑的抗瘤作用明顯增強，如b組和e組，鹽酸伊立替康160mg/kg(160mg是伊立替康的質量)，白蛋白伊立替康240mg/ml(240mg是伊立替康的質量)，體重下降分別為6.2％和5.9％，抗瘤作用分別為57.1％和75.5％(p<0.05)。可見，本發明的伊立替康白蛋白製劑比常規鹽酸鹽伊立替康毒性降低，抗瘤作用增強。實施例5：體內抗腫瘤實驗(2)1.實驗方法取生長良好的人腫瘤bgc823胃癌細胞(北京生命科學研究所提供)5×106接種在nu/nu裸鼠(維通利華實驗動物有限公司)右前肢皮下。在種植腫瘤後第8天，腫瘤生長到200mg左右，開始給藥(製備例1)，給藥方法同實施例4。2.實驗結果如下面的表6所示。表6：伊立替康白蛋白對人移植腫瘤bgc823胃癌的抗瘤作用結果表明，在毒性相同的情況下，本發明的伊立替康白蛋白製劑比鹽酸伊立替康注射液有明顯的增效作用(p<0.01)。實施例6：穩定性實驗所用樣品為製備例1－3製備的樣品。在樣品中分別加入5％葡萄糖溶液或生理鹽水，伊立替康濃度均為1mg/ml。觀察溶液的物理變化，在檢查燈光下觀察微粒產生的時間，如果產生微粒為藥物不穩定。實驗結果如下面的表7所示。表7：穩定性實驗結果結果表明，三種凍幹製劑的稀釋液的穩定性良好，均保持在8小時以上。儘管本發明的具體實施方式已經得到詳細的描述，本領域技術人員將會理解。根據已經公開的所有教導，可以對那些細節進行各種修改和替換，這些改變均在本發明的保護範圍之內。本發明的全部範圍由所附權利要求及其任何等同物給出。當前第1頁12