一種中長期保藏菌種的方法
2023-10-22 19:00:57
專利名稱：一種中長期保藏菌種的方法
專利說明一種中長期保藏菌種的方法 本發明涉及一種菌種的保藏方法，尤其涉及一種食用菌菌種的中長期保藏方法。目前，普通使用的食用菌等菌種保藏方法主要是斜面保藏法、石蠟油保藏法和液氮保藏法。
斜面保藏法是在帶棉塞的玻璃試管內，用少於1/3管的無菌營養凝膠培養基擺斜面繁殖菌絲體，然後置於冰箱內4℃保存。由於(1)斜面凝膠培養基(如果不擺成斜面，菌絲體由於缺氧無法在凝膠內部生長)與空氣接觸面大，脫水較快，培養基在1年左右會幹縮；(2)棉塞容易吸水變潮，導致黴菌侵入培養基和汙染整個棉塞；(3)保藏溫度較低，部分菌株容易失活，所以保藏半年到一年就必須轉管(較少量菌絲體轉入新的試管斜面培養基)，對菌種保藏單位帶來龐大的工作量。(4)菌種轉管頻繁，菌絲體受外界溫度、光照影響較大，菌種變異頻率較高，給菌種生產銷售和使用帶來巨大風險。
石蠟油保藏法是將試管斜面的菌絲體浸入無菌石蠟油中，保藏期也可達到3-5年，但是(1)部分菌株常因缺氧而失活；(2)必須用試管架堅直擺放，批量保藏佔用空間較大；(3)棉塞或蠟封棉塞容易汙染黴菌；(4)操作過程較繁瑣。
液氮保藏法是將用甘油等防凍劑保護的菌絲體或食用菌孢子無菌密封在玻璃管內，置液氮中超低溫保存，保藏期可達5-10年。但是(1)保藏物前處理複雜，需要的設備、藥劑較多；(2)必須頻繁補充液氮，運行成本高；(3)容量有限，不利大批量菌種保藏；(4)保藏物只能供一次性使用，無法連續保藏。
上述各種保藏方法，都存在著各種缺陷，根據食用菌育種的規律，品種更新的周期約3-5年，期間無須轉管或只轉管一次是合適的，保藏期太長反而意義不大。只有少數模式種或育種價值大的菌株才需要永久保藏，保藏期太短則由於頻繁擾動和溫度、光照變化，時常出現操作汙染和菌種退化。對於菌種保藏和生產銷售的單位，迫切需要較低成本、容易操作、穩定可靠、保藏期達到3年以上的菌種保藏方法。針對上述保藏方法所存在的問題，本發明的目的是提供一種可操作性強、穩定可靠、成本低、庫容大的中長期菌種保藏方法。
本發明按以下步驟實現1、培養基配製培養基配製按小麥粒25-50％，木粉50-70％，營養添加劑0-5％，緩衝劑0.5-2％，瓊脂粉0.1-2％的比例混合，料水比1∶(0.95～1.20)。
2、由於材料透氣性較好，不影響菌絲向深部生長，可加大裝填量減少與空氣接觸面培養基裝入玻璃試管至2/3滿，稍壓實，加棉塞，高壓蒸汽128℃滅菌45-60分鐘，連容器搬入無菌室。
3、置換試管塞接種時將用升汞溶液消毒的高密度聚苯乙烯泡塑試管塞置換棉塞。
4、改進包裝與溫度控制用保險袋和保險盒雙重保護菌種，減少空氣交換和灰塵進入，防止試管表面吸潮，置於8±1℃恆溫冰箱冷藏，使菌種不易失活。
本發明利用糧食顆粒自身的營養和種皮天然的保水透氣性，確保長入內部的菌絲可長期存活；有細木粉(普通木屑空隙太大)填充空隙一方面可增加木質類養分，另一方面減慢水分的散失；加入適當比例的瓊脂粉可形成鬆散的凝膠，進一步保住水分而不影響通氣；與空氣接觸面只有試管內徑大小，加上特製的試管塞，可保持培養基3年失水率＜30％，具有成本低廉、操作簡單、穩定可靠、保藏期較長等特點。實施例1、培養基配製按小麥粒35％，木粉60％，腐殖酸營養添加劑3％，硫酸鈣(或碳酸鈣)緩衝劑1.5％，瓊脂粉0.5％的比例混合，然後與水混合，料水比為1∶1。
2、加大裝填量減少與空氣接觸面培養基裝入玻璃試管至2/3滿，稍壓實，加棉塞，高壓蒸汽128℃滅菌50分鐘，連容器搬入無菌室。
3、制試管塞接種時將用升汞溶液消毒的高密度聚苯乙烯泡塑試管塞置換棉塞。
4、改進包裝與溫度控制用保險袋和保險盒雙重保護菌種，減少空氣交換和灰塵進入，防止試管表面吸潮，置於8℃恆溫冰箱冷藏，使菌種不易失活。
權利要求
1.一種中長期菌種保藏方法，其特徵在於按下步驟實現(1)、培養基配製按小麥粒25-50％，木粉50-70％，營養添加劑0-5％，緩衝劑0.5-2％，瓊脂粉0.1-2％的比例混合，料水比1∶(0.95～1.20)；(2)、加大裝填量減少與空氣接觸面培養基裝入玻璃試管至2/3滿，稍壓實，加棉塞，高壓蒸汽128℃滅菌45-60分鐘，連容器搬入無菌室；(3)、置換管塞接種時將用升汞溶液消毒的高密度聚苯乙烯泡塑試管塞置換棉塞；(4)、改進包裝與溫度控制用保險袋和保險盒雙重保護菌種，減少空氣交換和灰塵進入，防止試管表面吸潮，置於8±1℃恆溫冰箱冷藏，使菌種不易失活。
2.權利要求1所述的中長期菌種保藏方法，其特徵在於營養添加劑為腐殖酸，緩衝劑為硫酸鈣或碳酸鈣。
3.權利要求1或2所述的中長期菌種保藏方法，其特徵在於小麥粒35％，木粉60％，營養添加劑3％，緩衝劑1.5％，瓊脂粉0.5％。
4.權利要求1或2所述的中長期菌種保藏方法，其特徵在於料水比為1∶1。
5.權利要求3所述的中長期菌種保藏方法，其特徵在於料水比為1∶1。
全文摘要
本發明涉及一種食用菌菌種的中長期保藏方法，通過配製培養基，利用糧食顆粒自身的營養和種皮天然的保水透氣性，確保長入內部的菌絲可長期存活；有細木粉填充空隙，一方面可增加木質類養分，另一方面減慢水分的散失；加入適當比例的瓊脂粉可形成鬆散的凝膠，進一步保住水分而不影響通氣；與空氣接觸面只有試管內徑大小，加上特製的試管塞的透氣保水性和防黴性，可保住培養基3年失水率＜30％，具有成本低廉、操作簡單、穩定可靠、保藏期較長等特點。
文檔編號C12N1/14GK1754957SQ20041005161
公開日2006年4月5日 申請日期2004年9月27日 優先權日2004年9月27日
發明者楊小兵 申請人:廣東省微生物研究所