氯桂丁胺的質量控制方法
2023-10-24 01:34:37 1
專利名稱：氯桂丁胺的質量控制方法
技術領域：
本發明涉及氯桂丁胺的質量控制方法，屬於藥品質量控制技術領域。
背景技術：
氯桂丁胺是一芳香基丙烯醯胺衍生物，是3，4- 二氯桂皮醯另丁胺的簡略名，其化學名稱為(IS, IR)-(E)-3-(3,4-二氯苯基)-N-(I-甲基丙基)-2_丙烯醯胺。該化合物屬於一種創新的桂皮醯胺類衍生物，動物試驗證明它具有較強的抗癲癇作用。如何快速、準確的控制氯桂丁胺的質量是需要解決的技術問題。本發明的發明目的是提供一種氯桂丁胺質量控制方法，該方法能夠快速、準確的檢測出氯桂丁胺產品的質量。本發明技術方案是一種氯桂丁胺的質量控制方法，其特徵在於該方法中包括氯桂丁胺的含量和有關物質的測定，方法為供試品溶液的製備取樣品約2. 5mg，精密稱定，置25ml量瓶，加甲醇溶液並稀釋至刻度，搖勻。該樣品每Iml含供試品IOOug,備用。對照品溶液的製備取對照品約2. 5mg,精密稱定，置25ml量瓶，加甲醇溶液並稀釋至刻度，搖勻。該樣品每Iml含對照品IOOug,備用。其中對照品製備取氯桂丁胺一次精製品350克，去離子水2500ml，濃氨水40ml。 加熱攪拌至氯桂丁胺為熔融狀態。回流10分鐘。靜置分層，降溫，氯桂丁胺固化。傾出上層水。加入去離子水1000ml，加熱攪拌回流10分鐘。靜置分層，降溫，氯桂丁胺固化。傾出上層水(以上操作的目的是去除少量存在的中間體3，4 二氯苯基丙烯酸)。加入80%乙醇 600ml，活性炭20克，加熱攪拌回流20分鐘，熱濾，濾液於10 15°C放置5 6小時自然結晶。過濾，用75%乙醇150ml洗滌結晶。濾幹，紅外乾燥至恆重。得氯桂丁胺二次精製品。氯桂丁胺二次精製品260克，80%乙醇440ml，加熱至回流。熱濾。濾液於10 15°C放置5 6小時自然結晶。過濾，結晶用75%乙醇IOOml洗滌。濾幹，紅外乾燥至恆重。得氯桂丁胺對照品。系統適用性用十八烷基矽烷鍵合矽膠做為填充劑，以醋酸鹽緩衝溶液-甲醇(20 : 80，體積比)為流動相；流速為每分鐘Iml ;檢測波長為276nm。理論板數按氯桂丁胺峰計算應不低於 2000。其中醋酸鹽緩衝溶液的製備醋酸I. 4g，加水980ml使溶解，加冰醋酸約2. 6ml，調節ρΗ4· 2±0· 1，補水至1000ml，搖勻。含量測定取供試品溶液20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取氯桂丁胺對照品溶液20ul，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。有關物質含量的測定對照品溶液稀釋為每Iml含氯桂丁胺O. 5ug。
照含量項下的方法試驗，取對照液20ul，注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分峰高約為滿量程的20%，再取供試溶液和稀釋後的對照溶液各20ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試溶液色譜圖中顯示的雜質峰，除溶劑峰外，各雜質峰面積的總和不得大於對照液主峰的面積(O. 5% )。本發明氯桂丁胺的質量控制方法，其特徵在於該方法中還包括殘留有機溶劑吡啶的測定，其方法是色譜條件與系統適用性以直徑為O. 25 O. 18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作為固定相，柱長I. 6m,內徑3. 2mm，柱溫170°C，進樣器溫度200°C，氫火焰離子化檢測溫度為200°C，內標物苯與吡啶的分離度不小於I. 5，理論板數按吡啶峰計算應不低於1000。內標溶液的製備精密量取苯適量，加二甲亞碸-水(3 7)混合溶劑溶解並稀釋成每Iml含IOug的溶液，搖勻，密閉保存，作為內標溶液。標準溶液的製備精密量取吡啶適量,加同一混合溶劑並稀釋成每Iml含IOug的溶液，搖勻，密閉保存，作為標準溶液。供試品溶液的製備精密稱取本品適量,加同一混合溶劑溶解並稀釋成每Iml含 50mg的溶液，作為供試品溶液。測定方法精密量取標準溶液和供試品溶液各1ml，分置於頂空進樣瓶中，並分別精密加入內標溶液1ml、同一混合溶劑1ml，混合。在60°C恆溫水浴中加熱30分鐘，用頂空進樣法進樣，同時進行空白試驗。供試品溶液所得的峰面積比不得大於由標準溶液所得峰面積比(O. 02% ) ο本發明氯桂丁胺的質量控制方法，其特徵在於還包括鑑別。本發明氯桂丁胺的質量控制方法，其特徵在於所述鑑別方法是取本品50克，置IOml試管，加lmol/L鹽酸羥胺的1，2_丙二醇溶液4ml，煮沸5分鐘，使溶液呈黃色，放置至室溫，加5%三氯化鐵溶液5 6滴，輕搖，放置片刻，顯紫紅色，加 1，2_丙二醇2ml，靜置，兩液界面的紫紅色更加明顯可辨。本發明氯桂丁胺的質量控制方法，其特徵在於所述鑑別方法是在含量項下記錄的色譜圖中供試品主峰的保留時間與對照品主峰的保留時間一致。本發明氯桂丁胺的質量控制方法，其特徵在於所述鑑別方法是本品的紅外吸收圖譜應與對照品的圖譜一致。本發明的有益效果是提供了一種氯桂丁胺的質量控制方法，該方法能在較短時間內快速準確的檢測氯桂丁胺的含量、有關物質和殘留溶劑的含量。實驗例I有關物質的分離(I)概況依申請號為201010179527. 7的中國專利，製備氯桂丁胺。由起始原料3，4_ 二氯苯甲醛製備中間體3，4- 二氯苯丙烯酸的perkin反應收率約為81% (按一次精製品計)， 二次精製品的含量約為99. 5%, HLPC檢測為單峰。用含量98 99%的中間體投入後一步反應，則前步反應的副產物引入最後產品的可能性甚小。由中間體3，4_ 二氯苯丙烯酸經過氯化反應和胺解反應製備氯桂丁胺的粗品收率約為82%。分離出氯桂丁胺後的母液濃縮、乾燥得深棕色殘渣(以下稱總殘渣)。總殘渣的量相當於氯桂丁胺的五分之一，每結晶出Ikg的氯桂丁胺，母液濃縮可得到200g的總殘渣。此總殘渣含有反應後的所有有關物質，氯桂丁胺中可能會含有的雜質或有關物質必定與總殘渣的組成直接相關。總殘渣經柱層析、薄層層析、高效液相色譜分析可以粗知其中約含70 80%的氯桂丁胺，15 20%的中間體3，4_ 二氯苯丙烯酸。其他組分則為氯化、胺解產物。(2)有關物質的分離中間體的分離取總殘渣50g，加入二氯甲烷150ml，水100ml。攪拌下加入40%氫氧化鈉溶液至 PH8. 5，攪拌10分鐘。靜置分層。水層加入濃鹽酸至pH2，有沉澱析出。過濾，用30ml水洗， 用50ml 二氯甲烷洗。乾燥，得白色粉末7. 57g。經用95%乙醇重結晶得到白色結晶6. 81g， 熔點226 227°C .薄層檢測為單一物質。經IR、HLPC檢測，此化合物至中間體3，4- 二氯苯丙烯酸(以下稱為雜質一)。氯桂丁胺的分離取總殘渣50g，加二氯甲烷150ml，水100ml。攪拌下加入40%氫氧化鈉溶液至 PH8.5，攪拌10分鐘。靜置分層。二氯甲烷層用水30ml洗，蒸餾除盡二氯甲烷。殘留物用 80%乙醇IOOml加熱溶解。15°C攪拌析出結晶，過濾，用70%乙醇30ml洗滌結晶，乾燥得微黃色結晶38. 98g。用80%乙醇脫色重結晶後得白色結晶。熔點104 106°C。薄層檢測為單一物質。經IR、HLPC檢測，確認此化合物為氯桂丁胺。弱極性雜質(雜質二與雜質三的分離)取總殘渣300g，用石油醚(bp60 90°C ) 1500ml分三次提取，合併提取液，除去大部分石油醚。冰箱放置過夜，有結晶析出。過濾，結晶用石油醚洗滌，得一淡黃色結晶3. Igo 用石油醚脫色重結晶得一白色結晶，熔點119 121°C，薄層檢測為單一物質。它在總殘渣中約佔I. 03%。經元素分析為一不含氮的有機物，核磁共振1H譜、13C譜、H-H譜相關譜證明為3，4_ 二氯苯丙烯酸甲酯(以下稱為雜質二)。用3，4- 二氯苯丙烯酸與甲醇反應合成的化合物，經元素分析、紅外光譜與雜質二相同，進一步確證了雜質二的結構。分離出雜質二後的母液部分濃縮，得少量黃棕色膏狀物，因其量甚微，柱層析分離未能得到單一物質，薄層層析時Rf值與雜質二接近，也屬於弱極性雜質(以下稱雜質三)薄層原點物質的分離取總殘渣50g，去除3，4- 二氯苯丙烯酸和氯桂丁胺後的各母液部分去除溶劑後合併，加入二氯甲烷100ml，水100ml，攪拌，靜置分層，二氯甲烷層去除溶劑至幹，所得深棕色殘留物用矽膠做柱層析，用大量乙酸乙酯充分洗脫，洗去氯桂丁胺和中間體，殘留物為強極性。在甲醇、乙醇中溶解度很大，改用甲醇洗脫，濃縮甲醇洗脫液至幹，得一深棕色物質，薄層檢測時，用正己烷-丙酮-冰醋酸溶劑系統展不開，留在原點(以下稱為雜質四)實驗例2有關物質的測定(I)色譜條件的選擇色譜條件色譜柱INERTSIL 0DS_35um 4. 6 X 250mm檢測波長276nm
流速lml/min流動相醋酸鹽緩衝溶液ρΗ4· 2 ±O. I-甲醇20 80流動相選擇試驗取氯桂丁胺對照品，精密稱定，加甲醇溶解並稀釋製成100ug/ml的供試液，取 20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖。試驗了以下幾種流動相，結果記錄在表I中。表I
名稱體積比保留時間，分鐘分離狀況氯桂丁胺3, 4-二氯苯丙烯酸甲醇-水80:208.88,8兩峰重疊75:25121270:302121乙腈-水80:207. 251.91兩峰雖能分開，但中間體峰的保留時間太短75:256.22. I70:305.482. 17甲醇-緩衝溶液80:208.76.3分離較好乙腈-緩衝溶液82:185. 204. 08分離較好實驗結果表明pH對3，4_ 二氯苯丙烯酸的分離影響較大，其在酸性條件下較穩定，用醋酸鹽緩衝溶液pH4.2±0. I代替水。兩個系統分離效果都不錯，醋酸鹽緩衝溶液 pH4.2±0. I-甲醇20 80系統，主峰尖銳對稱，保留時間適中，從分離效果和節省費用考慮，故選用醋酸鹽緩衝溶液(PH4. 2±0. I)-甲醇(20 : 80，體積比)作為流動相。醋酸鹽緩衝溶液配製法稱取醋酸銨I. 4g，加超純水950ml，攪拌使溶解，加冰醋酸約2. 6ml，調節ρΗ4. 2±0· 1，補水至IOOOml即得。(2)系統適應性試驗取氯桂丁胺、中間體3，4- 二氯苯丙烯酸適量，精密稱定，分別加甲醇溶解並稀釋成約100ug/ml的溶液,在上述色譜條件下,取20ul注入液相色譜儀,記錄色譜圖。理論板數以氯桂丁胺峰計為4456。氯桂丁胺及製備工藝可能引入的雜質(雜質一、二、三、四)及總殘渣，同上述操作，考察色譜條件及分離效果，均能得到較滿意的結果。保留時間分別為氯桂丁胺8. I分鐘，雜質一 4. 9分鐘，雜質二 11.6分鐘。破壞性試驗酸破壞取氯桂丁胺供試液(100ug/ml)3ml，加稀鹽酸2ml，置沸水浴中加熱2小時，用10%氫氧化鈉調節pH近中性，過濾。鹼破壞取氯桂丁胺供試液(100ug/ml) 3ml，加10%氫氧化鈉2ml，置沸水浴中加熱2小時，用稀鹽酸調節pH近中性，過濾。雙氧水破壞取氯桂丁胺供試液(100ug/ml) 3ml，加雙氧水1ml，放置I小時，過濾。強光照射強光4500Ix±500Ix照射20天的樣品，加甲醇製成100ug/ml的供試液。
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分別取上述已破壞的樣品20ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。酸鹼破壞的樣品在
8.3分鐘、5. I分鐘的峰，分別於氯桂丁胺、3，4-二氯苯丙烯酸的保留時間相吻合(由於更換了色譜柱，保留時間稍有變化)，可以認為本品經酸、鹼破壞後的分解產物即是中間體3， 4-二氯苯丙烯酸。強光照射的樣品，色譜峰變化不大。雙氧水破壞的樣品在2. 7分鐘有一個大峰，其它峰沒有明顯變化，說明對醯胺鍵沒有影響，主要是側鏈C = C雙鍵被氧化。試驗證明本品的各雜質峰在主峰保留時間的二倍以內，均能分離完全，且不幹擾主峰測定。測得的分離度，理論板數也符合要求，所設色譜條件可行。檢測限取雜質一 8. Ong/ml的供試液20ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測得檢測限為 O. 16ng0取雜質二 7. 7ng/ml的供試液20ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測得檢測限為
O.15ng。校正因子測定取氯桂丁胺對照品與雜質一、雜質二適量，精密稱定，分別加入甲醇溶解並稀釋製成約各含O. 5ug/ml的混合溶液，搖勻，取20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算校正因子。結果見表2。表2校正因子
權利要求
1.一種氯桂丁胺的質量控制方法，其特徵在於包括氯桂丁胺的含量和有關物質的測定。
2.權利要求I所述質量控制方法，其特徵在於氯桂丁胺含量的測定方法是供試品溶液的製備取樣品約2. 5mg，精密稱定，置25ml量瓶，加甲醇溶液並稀釋至刻度，搖勻，該樣品每Iml含供試品IOOug,備用；對照品溶液的製備取對照品約2. 5mg，精密稱定，置25ml量瓶，加甲醇溶液並稀釋至刻度，搖勻，該樣品每Iml含對照品IOOug,備用；其中對照品製備取氯桂丁胺一次精製品350克，去離子水2500ml，濃氨水40ml，加熱攪拌至氯桂丁胺為熔融狀態，回流10分鐘，靜置分層，降溫，氯桂丁胺固化。傾出上層水。 加入去離子水1000ml，加熱攪拌回流10分鐘，靜置分層，降溫，氯桂丁胺固化。傾出上層水 (以上操作的目的是去除少量存在的中間體3，4 二氯苯基丙烯酸)，加入80%乙醇600ml， 活性炭20克，加熱攪拌回流20分鐘，熱濾，濾液於10 15°C放置5 6小時自然結晶，過濾，用75%乙醇150ml洗滌結晶，濾幹，紅外乾燥至恆重。得氯桂丁胺二次精製品；氯桂丁胺二次精製品260克，80%乙醇440ml，加熱至回流，熱濾。濾液於10 15°C放置5 6小時自然結晶，過濾，結晶用75%乙醇IOOml洗滌，濾幹，紅外乾燥至恆重，得氯桂丁胺對照品。系統適用性用十八烷基矽烷鍵合矽膠做為填充劑，以醋酸鹽緩衝溶液-甲醇(20 : 80，體積比) 為流動相；流速為每分鐘Iml ;檢測波長為276nm，理論板數按氯桂丁胺峰計算應不低於 2000 ；其中醋酸鹽緩衝溶液的製備醋酸I. 4g，加水980ml使溶解，加冰醋酸約2. 6ml，調節 ρΗ4· 2±0· 1，補水至 1000ml，搖勻。含量測定取供試品溶液20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取氯桂丁胺對照品溶液20ul，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。
3.權利要求I所述質量控制方法，其特徵在於氯桂丁胺有關物質含量的測定方法是 對照品溶液稀釋為每Iml含氯桂丁胺O. 5ug ；照含量項下的方法試驗，取對照液20ul，注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分峰高約為滿量程的20%，再取供試溶液和稀釋後的對照溶液各20ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試溶液色譜圖中顯示的雜質峰，除溶劑峰外，各雜質峰面積的總和不得大於對照液主峰的面積(O. 5% )。
4.權利要求I所述質量控制方法，其特徵在於還包括殘留溶劑吡啶的測定。
5.權利要求4所述質量控制方法，其特徵在於該方法中殘留溶劑吡啶的測定方法是 色譜條件與系統適用性以直徑為O. 25 O. 18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作為固定相，柱長I. 6m,內徑3. 2mm,柱溫170°C，進樣器溫度200°C，氫火焰離子化檢測溫度為200°C，內標物苯與吡啶的分離度不小於I. 5，理論板數按吡啶峰計算應不低於 1000 ；內標溶液的製備精密量取苯適量，加二甲亞碸-水(3 7)混合溶劑溶解並稀釋成每 Iml含IOug的溶液，搖勻，密閉保存，作為內標溶液；標準溶液的製備精密量取吡啶適量，加同一混合溶劑並稀釋成每Iml含IOug的溶液，搖勻，密閉保存，作為標準溶液；供試品溶液的製備精密稱取本品適量，加同一混合溶劑溶解並稀釋成每Iml含50mg 的溶液，作為供試品溶液；測定方法精密量取標準溶液和供試品溶液各1ml，分置於頂空進樣瓶中，並分別精密加入內標溶液Iml、同一混合溶劑Iml，混合，在60°C恆溫水浴中加熱30分鐘，用頂空進樣法進樣，同時進行空白試驗，供試品溶液所得的峰面積比不得大於由標準溶液所得峰面積比 (O. 02% )。
6.權利要求I所述質量控制方法，其特徵在於還包括鑑別。
7.權利要求6所述質量控制方法，其特徵在於所述鑑別方法是取本品50克，置IOml試管，加lmol/L鹽酸羥胺的1，2_丙二醇溶液4ml，煮沸5分鐘， 使溶液呈黃色，放置至室溫，加5%三氯化鐵溶液5 6滴，輕搖，放置片刻，顯紫紅色，加I， 2-丙二醇2ml，靜置，兩液界面的紫紅色更加明顯可辨。
8.權利要求6所述質量控制方法，其特徵在於所述鑑別方法是在含量項下記錄的色譜圖中供試品主峰的保留時間與對照品主峰的保留時間一致。
9.權利要求6所述質量控制方法，其特徵在於所述鑑別方法是本品的紅外吸收圖譜應與對照品的圖譜一致。
全文摘要
本發明涉及氯桂丁胺的質量控制方法，屬於藥品質量控制技術領域。本發明通過一定的化學處理和條件探索，通過高效液相法對氯桂丁胺的有關物質、含量和殘留溶劑進行了分析，提供了一種氯桂丁胺質量控制方法，該方法能夠快速、準確的檢測出氯桂丁胺的含量。
文檔編號G01N30/02GK102590391SQ201210062100
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月2日 優先權日2012年3月2日
發明者於忠文, 林春, 高然 申請人:威海迪素製藥有限公司, 迪沙藥業集團山東迪沙藥業有限公司, 迪沙藥業集團有限公司